曲古菌素A对甲状腺癌细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A体外抑制甲状腺癌细胞增殖、诱导凋亡的作用。 方法 采用磺酰罗丹明B染色分析法、Hoechst33342/PI双染荧光显微镜检测及PI单染流式细胞仪分析等技术检测曲古菌素A对不同甲状腺癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。 结果 不同浓度的曲古菌素A处理48h,能明显抑制甲状腺癌细胞的增殖,并且随着药物浓度的增加抑制率也增大,各组间及与对照组相比差异均具有 统计学意义（F=35.67, P＜0.01）;双染后镜下观察显示曲古菌素A使甲状腺癌细胞呈明显的凋亡状态,流式细胞仪分析则表明诱导后滤泡状甲状腺癌细胞凋亡峰(Sub G1)比值升高,与对照组比较其差异有统计学意义（t=6.225, P＜0.01）。 结论 曲古菌素A能显著抑制甲状腺癌细胞体外的增殖及诱导甲状腺癌细胞的凋亡,其作用呈浓度和时间依赖性。     

曲古菌素A和硼替佐米诱导卵巢癌细胞凋亡的协同作用

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A与蛋白酶体抑制剂硼替佐米单独及联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3存活率和凋亡率的影响。初步探讨两种药物联合应用对诱导SKOV3细胞凋亡具有的协同作用。 方法曲古菌素A、硼替佐米单独或者联合应用于卵巢癌细胞后,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性,并计算细胞存活率,Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测相关蛋白表达水平。通过检测Caspases-3的活性及其底物多聚ADP核糖聚合酶（PARP）的表达水平进一步说明不同用药组诱导细胞凋亡的情况。 结果联合用药组诱导的细胞凋亡率和单独用药组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。几种凋亡相关蛋白Bcl-2、Mcl-1和Bcl-X_L, 在联合用药组的表达显著低于单独用药组。 在相同的时间点,联合用药组Caspase-3的活性和单独用药组比较,差异有统计学意义（P<0.001）。结论：低剂量的曲古菌素A和硼替佐米联合作用人卵巢癌细胞系能诱导凋亡,并且这种作用远远强于相同剂量单独用药引起的凋亡。这两种药物的联合应用可能成为人卵巢癌化疗中的新方案。     

曲古菌素A对HDAC1在K562细胞中表达的影响

目的研究表明组蛋白去乙酰化酶1(histonedeacetylase,HDAC1)在多种肿瘤中高表达,曲古菌素A(TSA)可以抑制肿瘤细胞的生长。本实验研究HDAC1在K562细胞的表达及TSA对其增殖的影响。方法100~400nmol/L的TSA分别处理K562细胞6~48h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)比色检测K562细胞的生长活性;应用流式细胞仪法观察细胞凋亡。采用RT-PCR和蛋白印迹法(Westernblot)方法检测K562细胞在(24h)不同浓度(50~500nmlo/L)HDAC1mRNA和蛋白的表达以及TSA对其作用。结果TSA可显著抑制K562细胞的生长,可呈时间及剂量依赖性抑制K562细胞的增殖,抑制率为23.15%~76.63%。流式细胞仪检测Raji细胞,凋亡率为10.32%~60.16%。HDAC1的mRNAA值的半定量表达以及蛋白表达明显增强(P<0.05),但随着浓度的增加而表达下调,呈剂量依赖性下调。结论TSA对K562细胞具有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,抑制HDAC1的表达可能是其重要作用机制之一。     

曲古菌素A对胃癌细胞系BGC-823组蛋白H4乙酰化水平及细胞凋亡的作用

[目的]探讨组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂曲古菌素A（TSA）对胃癌细胞系BGC-823中组蛋白H4乙酰化水平及细胞凋亡的影响。[方法]免疫细胞化学法检测TSA干预前后胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达，流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率。[结果]TSA干预后胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达水平明显升高，乙酰化组蛋白H4阳性细胞数从1．38±1．02上升至31．6±1．02，与未干预相比两者表达有显著性差异（P〈0．01），流式细胞仪分析显示G2期细胞增多，从0．01％上升至19．17％，细胞凋亡率增加到29．9％。[结论]TSA可促进胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达，诱导BGC-823细胞凋亡。     

曲古菌素A诱导前列腺癌DU-145细胞有丝分裂的灾变

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor,HDACi）曲古菌素（trichostatina A,TSA）对前列腺癌DU145细胞有丝分裂的影响,探讨HDACi杀伤肿瘤细胞的新机制。方法：将前列腺癌DC-145细胞分成不加药对照组和不同剂量（100、200、300、400nmol/L）TSA加药组,药物作用一定时间后,MTT法检测TSA对DU145细胞的杀伤效应,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态的变化,流式细胞术分析细胞周期的改变,免疫荧光染色观察DU145细胞异常的有丝分裂现象,Western blotting检测TSA处理对DU145细胞某些调控蛋白表达的影响。结果：TSA处理诱导DU145细胞发生有丝分裂,TSA处理24h后多核细胞数目由0.24%增加至1.21%。细胞周期计数结果显示,TSA处理后有丝分裂各期细胞比例发生明显改变,表现为有丝分裂前中期细胞所占比例增加,后末期细胞所占比例减少。免疫荧光染色显示,细胞出现多极纺锤体、染色体分离滞后等异常有丝分裂现象。TSA作用于DU145细胞后,能明显抑制Survivin蛋白的表达,增强细胞骨架蛋白Tubulin的乙酰化,并诱导P21蛋白高表达。结论：TSA能够诱使DU145细胞发生有丝分裂灾变,其机制可能与TSA降低Survivin蛋白的表达以及增强微管蛋白的乙酰化有关。     

曲古菌素A诱导前列腺癌DU 145细胞有丝分裂的灾变

目的: 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)曲古菌素(trichostatina A, TSA)对前列腺癌DU145细胞有丝分裂的影响，探讨HDACi杀伤肿瘤细胞的新机制。方法:将前列腺癌DC145细胞分成不加药对照组和不同剂量（100、200、300、400 nmol/L）TSA加药     

曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用及分子机制

目的：观察曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用。方法：采用不同浓度曲古菌素A（75、150、300、600ng/ml）分别处理人结肠癌HCT-116细胞,CCK8法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达。结果：曲古菌素A（75、150、300、600ng/ml）组的细胞抑制率在24h、48h、72h分别为（11.88±1.7、24.17±1.40、37.32±1.85）%、（21.00±1.45、31.22±2.10、54.94±1.71）%、（37.69±2.67、43.86±3.20、71.93±5.79）%和（51.90±2.60、61.80±4.90、87.93±5.39）%,不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率均明显高于对照组（P〈0.05）,不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率比较也有统计学差异（P〈0.05）。不同浓度的曲古菌素A作用48h后细胞以G0期居多,细胞阻滞在G0/G1→S期。不同浓度的曲古菌素A作用细胞48h后,凋亡率分别为（4.6±0.55）%、（37.06±7.89）%、（65.53±5.55）%、（75.93±3.28）%,各曲古菌素A组细胞凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）。蛋白免疫印迹法显示曲古菌素A可下调CyclinD1表达、上调DMTF1表达。结论：曲古菌素A可明显抑制结肠癌HCT-116细胞增殖,其机制可能与调控细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡等有关。     

曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用及分子机制

目的:观察曲古菌素A对人结肠癌HCT-116细胞的作用。方法:采用不同浓度曲古菌素A(75、150、300、600ng/ml)分别处理人结肠癌HCT-116细胞,CCK8法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达。结果:曲古菌素A(75、150、300、600ng/ml)组的细胞抑制率在24h、48h、72h分别为(11.88±1.7、24.17±1.40、37.32±1.85)%、(21.00±1.45、31.22±2.10、54.94±1.71)%、(37.69±2.67、43.86±3.20、71.93±5.79)%和(51.90±2.60、61.80±4.90、87.93±5.39)%,不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率均明显高于对照组(P<0.05),不同浓度的曲古菌素A组细胞抑制率比较也有统计学差异(P<0.05)。不同浓度的曲古菌素A作用48h后细胞以G0期居多,细胞阻滞在G0/G1→S期。不同浓度的曲古菌素A作用细胞48h后,凋亡率分别为(4.6±0.55)%、(37.06±7.89)%、(65.53±5.55)%、(75.93±3.28)%,各曲古菌素A组细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。蛋白免疫印迹法显示曲古菌素A可下调CyclinD1表达、上调DMTF1表达。结论:曲古菌素A可明显抑制结肠癌HCT-116细胞增殖,其机制可能与调控细胞周期相关基因CyclinD1和DMTF1的表达、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡等有关。     

反义survivin基因对786-O细胞的体外作用及其对表阿霉素诱导细胞凋亡作用的观察

的研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）转染对肾透明细胞癌786-O细胞的survivin蛋白表达、细胞凋亡、增殖的影响,及其对表阿霉素诱导细胞凋亡的作用。方法设计并合成特异性靶向survivjn的ASODN及正义寡核苷酸（SODN）,将其转入786-O细胞。设空白对照组、脂质体对照组、SODN组和600nmol／L ASODN组,处理24h后收获各组细胞。透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数。结果ASODN组的细胞呈典型凋亡的形态学改变,而对照组细胞生长良好;ASODN组细胞survivin表达减弱,凋亡指数明显升高（P〈0．05）;转染ASODN 24h后,表阿霉素诱导786-O细胞凋亡的作用明显增强。结论survivin ASODN能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786-O细胞凋亡,抑制786-O细胞增殖,并增强表阿霉素诱导的细胞凋亡。     

常规化疗药物诱导卵巢癌OVCAR-3细胞凋亡特点的分析

目的：观察抗卵巢癌药物顺铂、紫杉醇和阿霉素对卵巢癌细胞系ＯＶＣＡＲ－３体外生长和生存的影响并分析由它们所致的细胞死亡性质。方法：采用细胞形态学观察、细胞动力学检测及ＤＮＡ片段化分析等细胞和分子生物学方法,研究化疗药物对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用。结果：上述药物在抑制ＯＶＣＡＲ－３细胞生长的同时可不同程度地诱导细胞凋亡。其中,紫杉醇诱导细胞凋亡的能力最强;较低剂量紫杉醇（１０＾－８Ｍ）和顺铂（２μｇ／     

RNA干扰survivin对口腔表皮样癌细胞株 KB生长的抑制作用

 摘要：目的探讨RNA干扰技术沉默survivin基因对口腔表皮样癌细胞株KB增殖和凋亡的影响。方法化学合 成靶向survivin基因的小干扰RNA片段（siRNA）,脂质体法转染KB细胞。通过RT-PCR、蛋白印迹法分别检 测survivin mRNA和蛋白表达变化,流式细胞仪检测细胞生长周期和凋亡,MTT法检测转染后KB细胞增殖情 况。结果siRNA可以有效地降低KB细胞survivin mRNA和蛋白的表达;转染后KB细胞阻滞于G2/M期,凋亡增 加,增殖受抑制。结论应用RNA干扰技术沉默survivin 在KB细胞中的表达可以有效抑制该细胞增殖、促进 癌细胞凋亡,将survivin作为口腔癌基因治疗的靶点,通过RNA干扰技术对口腔癌进行基因治疗具有一定 的可行性。     

卵巢癌组织中clusterin蛋白表达和细胞凋亡检测

目的：探讨clusterin蛋白在卵巢癌中的表达及其与细胞凋亡的关系和临床意义。方法：制作86例卵巢癌的组织芯片,分别应用免疫组织化学和TUNEL方法,检测卵巢癌中clusterin蛋白表达及细胞凋亡情况,结合临床病理学资料,分析其临床意义。结果：在组织芯片中,73例卵巢癌成功进行了免疫组化和TUNEL染色,其中38例（52%）出现clusterin蛋白的过度表达,在不同临床分期的卵巢癌中,clusterin蛋白表达有显著性差异（P〈0.05）,clus-terin蛋白过度表达多见于临床晚期（Ⅱ期及以上）的卵巢癌。另外,clusterin过度表达的肿瘤多呈现低的细胞凋亡指数（apoptoticindex,AI）,而clusterin正常表达的肿瘤,则大多数表现为高AI值（P〈0.05）。结论：clusterin蛋白在卵巢癌中过度表达与肿瘤的临床分期密切正相关,与肿瘤细胞凋亡显著负相关。     

拓扑替康诱导卵巢癌COC1/ DDP 细胞凋亡的分子机制初步探讨

  目的 探讨拓扑替康(TPT)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤和诱导凋亡活性及其作用机制。方法 MTT比色法与软琼脂克隆形成测定TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤效应；TUNEL法和流式细胞仪研究TPT对靶细胞的凋亡诱导作用；Western blot检测TPT对COC1／DDP细胞内bcl-2、bax和caspase-3基因表达的影响以及caspase-3活性的改变。结果 TPT对COC1／DDP细胞有明显细胞毒性作用，不仅有剂量依赖性，也存在明显的时间依赖性；COC1／DDP细胞在TPT作用后出现特征性凋亡形态特征，且凋亡率由8．54％上升为23．16％(P<0．05)。TPT不影响COC1／DDP细胞内bcl-2蛋白表达，却明显增加19ax蛋白和caspase-3蛋白表达，并提高caspase-3活性。结论 TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP有明显的杀伤和促凋亡作用，其机制可能依赖于细胞内bax蛋白表达增高和caspase-3的活化。     

粉防已碱对人卵巢癌细胞株A2780增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞增殖与凋亡的影响，初步探讨粉防已碱对卵巢癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用MTT试验观察粉防已碱对A2780细胞的增殖抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳检测粉防已碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用，通过流式细胞术观察粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞周期的影响以及诱导凋亡的作用，以免疫印迹检测粉防已碱对p53、p21及Bax表达水平的影响。结果：MTT试验显示粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞增殖有抑制作用，其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点，琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明粉防已碱可诱导A2780细胞凋亡，并引起G0／G1期阻滞，免疫印迹检测显示粉防已碱上调p53、p21及Bax蛋白表达。结论：粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞增殖的抑制效应具有时间及浓度依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与上调p53、p21及Bax蛋白表达有关。     

索拉非尼对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的探讨索拉非尼对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响。方法采用MTT法,检测不同浓度索拉非尼(1.5、3.0、6.0、12.0、24.0μmol/L)作用人卵巢癌SKOV-3细胞24、48、72 h的抑制率;Hoechst染色法观察药物处理后细胞凋亡情况;应用索拉非尼与紫杉醇不同给药方式作用于SKOV-3细胞,流式细胞仪检测药物处理后细胞周期和凋亡率变化。结果索拉非尼对SKOV-3细胞增殖具有明显抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且呈剂量和时间依赖性;索拉非尼主要使SKOV-3细胞周期阻滞在S期,与紫杉醇联合给药后S期及G2/M期均有延长,且凋亡率较高(P<0.05)。结论索拉非尼对SKOV-3细胞增殖有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,紫杉醇序于索拉非尼给药时细胞凋亡率更高。