细胞外基质重塑在大鼠慢性阻塞性肺病模型气流阻塞中的作用

目的制备大鼠慢性阻塞性肺病(COPD)模型,探讨气道细胞外基质(ECM)重塑的病理特点及其在气流阻塞中的作用,以及不同干预因素的影响.方法熏香烟加气管注小量内毒素法建立大鼠COPD模型,观察气道重塑的病理特点,测定肺功能及血气,气道各层横截面积,支气管肺组织匀浆羟脯氨酸(Hy)含量;粘膜下成纤维细胞(Fb)、淋巴细胞及肺泡巨噬细胞计数;放免法测定血清中透明质酸、层粘连素含量.观察蛋白激酶C抑制剂H7,氧自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和转化生长因子(TGF)-β单抗干预对大鼠模型气道重塑的影响.结果所建模型的病理及病理生理学改变基本符合人类COPD特点,Ⅰ型胶原为主的ECM气道壁过度沉积;小支气管上皮层、平滑肌层截面积较对照组显著增大,三个干预组上述指标较模型组显著降低;模型组粘膜下Fb、淋巴细胞及肺泡巨噬细胞数较对照组显著增高,Fb功能活跃.NAC组及TGF-β单抗组Fb、三个干预组淋巴细胞及肺泡巨噬细胞数较模型组显著降低;模型组Hy含量较对照组显著增高,且分别与FEV0.3/FVC%呈显著负相关、与吸气及呼气阻力呈显著正相关,粘膜下Fb与Hy含量呈显著正相关,H7组Hy含量显著高于模型组,NAC组和TGF-β单抗组较模型组显著降低;血清层粘连素及透明质酸含量较对照组显著增高.结论气道壁以Ⅰ型胶原为主的ECM过度沉积及Fb增生活跃是COPD气道重塑的主要病理改变之一;清除氧自由基和拮抗TGF-β均可减轻气道ECM重塑,抑制PKC不能减少气道壁胶原的沉积.     

环磷酰胺致小鼠骨质疏松及何首乌的防治作用

目的观察环磷酰胺对小白鼠骨质量的影响,建立骨质疏松模型,并探讨何首乌与葡萄糖酸钙的防治作用.方法模型组用环磷酰胺按每天20mg/kg灌胃给予小白鼠,连续15 d,造成以骨丢失为主的骨质疏松模型;预防组分别用何首乌5g/kg和葡萄糖酸钙1g/kg灌胃给药,每天1次,连续15 d,另设生理盐水正常对照组.各组实验结束后用原子吸收分光光度法和羟脯氨酸法测定该模型小鼠股骨的骨钙及骨羟脯氨酸含量.同时观察对照组和用药组的胸腺、肝、脾重量并进行比较.结果环磷酰胺模型组与正常对照组比较,小鼠的胸腺萎缩,胸腺重量下降51.7%(P＜0.05);骨钙总含量下降33.6%(P＜0.01);骨羟脯氨酸总含量下降33.2%(P＜0.01).何首乌可使环磷酰胺小鼠的胸腺萎缩受到抑制,胸腺重量增加53.1%(P＜0.05);骨钙总含量增加62.8%(P＜0.001);骨羟脯氨酸总含量增加63.8%(P＜0.001).葡萄糖酸钙也可使环磷酰胺小鼠胸腺萎缩受到抑制,胸腺重量增加99.3%(P＜0.01);骨钙总含量增加47.4%(P＜0.01);但对骨羟脯氨酸总含量没有显著影响,与正常对照组相比,骨羟脯氨酸总含量下降40.2%(P＜0.001).结论环磷酰胺每天按20 mg/kg灌胃给予小白鼠,连续15 d可造成小白鼠骨质疏松的病理模型,其特征为小白鼠骨钙及骨羟脯氨酸含量减少和胸腺萎缩.何首乌对此模型有明显的防治作用.葡萄糖酸钙也有阻止骨钙丢失和胸腺萎缩的作用,但不能阻止骨羟脯氨酸的减少.     

糖尿病性勃起功能障碍大鼠中低睾酮水平对阴茎海绵体平滑肌的影响

目的 观察糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠的睾酮水平变化对其阴茎海绵体平滑肌组织和超微结构的影响.方法 将3个月龄雄性Wistar大鼠20只随机等分为两组:正常对照组和DMED组,行放射免疫法测定其血清睾酮浓度和masson染色观察阴茎海绵体平滑肌(CCSM)密度以及通过透射电镜观察海绵体平滑肌细胞的超微结构.结果 DMED组大鼠的血清睾酮水平(17.445 ±2.540) nmol/L较正常组(338.457±63.802) nmol/L明显下降(P＜0.01);同时DMED组大鼠CCSM密度(5.640±0.597)％较正常对照组(19.890±1.957)％亦明显减少(P＜0.01),透射电镜下还观察到DMED组大鼠阴茎CSMC的核浆比增大,高尔基复合体明显肥大以及线粒体水肿.结论 睾酮水平下降可能导致DMED大鼠阴茎海绵体平滑肌发生病理变化.     

IGF-1基因治疗提高老龄大鼠阴茎海绵体平滑肌密度的研究

目的 观察阴茎海绵体内注射胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)基因能否提高老年性大鼠阴茎勃起功能及其对阴茎海绵体平滑肌密度的影响,以探讨IGF-1基因治疗ED的机制.方法 4月龄SD雄性大鼠(青年组)10只;24月龄SD雄性大鼠(老龄组)20只,随机分为2组:PBS对照组、100 μg IGF-1质粒注射组.每组10只注射后8周行电刺激检测大鼠阴茎海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP),分析比较IGF-1基因治疗的效果,Masson,s三色染色图文定量分析阴茎海绵体平滑肌在海绵体组织中含量的变化.结果 电刺激发现老龄组较青年组ICP/MAP和总ICP明显降低(P＜0.05).IGF-1基因治疗8周后,100 μg IGF-1质粒注射组较PBS对照组ICP/MAP和total ICP均明显提高(P＜0.05);阴茎海绵体平滑肌的含量在老龄组较青年组明显降低(P＜ 0.05);与PBS对照组比较,100μg IGF-1质粒注射组能够明显提高阴茎海绵体平滑肌的含量(P＜0.05).结论 I GF-1基因治疗能够改善老龄大鼠的勃起功能,其作用机制之一可能是通过提高阴茎海绵体平滑肌的含量.     

黄芪注射液改善肾间质纤维化的作用机制研究

目的:观察黄芪注射液对肾间质纤维化的改善作用并探讨其机制.方法:以单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型为研究对象.将36只SD大鼠随机分为对照组、UUO模型组和黄芪注射液治疗组.治疗组每日给予黄芪注射液(5 ml·kg-1·d-1)腹腔注射,术前1天始至术后第9天止.术后第10天取术侧肾脏组织.HE、PAS和苦味酸-天狼星红染色,观察肾小管间质病理改变、肾皮质相对间质容积和相对胶原含量的变化.免疫组织化学方法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原在肾间质中的表达.免疫印迹方法检测热休克蛋白47(heat shock protein 47,HSP47)在肾脏中的表达.结果:UUO大鼠模型组和治疗组均出现明显的肾间质纤维化病理改变,但治疗组病变程度相对较轻.肾皮质相对间质容积和相对胶原含量于模型组及治疗组明显高于对照组(P＜0.01),但治疗组明显低于模型组(P＜0.01).免疫组化染色显示:TGF-β1、α-SMA和Ⅰ型胶原表达于模型组和治疗组均明显高于对照组(P＜0.05),但治疗组较模型组有明显减少(P＜0.05).免疫印迹方法显示:HSP47蛋白表达于模型组和治疗组明显高于对照组(P＜0.05),但治疗组较模型组有明显减少(P＜0.05).结论:黄芪注射液对大鼠肾间质纤维化具有明显的改善作用,这种作用部分是通过抑制TGF-β1表达,阻止肾小管上皮细胞转分化,减少胶原合成实现的.     

褪黑素抗氧化治疗糖尿病大鼠阴茎勃起功能障碍的研究

目的 观察褪黑素对糖尿病大鼠阴茎勃起功能的影响,探讨氧化应激在糖尿病性勃起功能障碍发病机制中的作用.方法 一次性腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、褪黑素(MT)治疗组以及对照组.8周后通过电刺激各组大鼠勃起神经来检测海绵体内压,评价勃起功能;采用硫代芭比妥酸法检测阴茎海绵体组织中丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测超氧化物氧化酶(SOD)活性;免疫组化染色半定量分析各组大鼠阴茎海绵体中平滑肌及内皮的含量.结果 与正常对照组相比,阴茎海绵体组织中MDA含量显著增加(P＜0.01),SOD活性降低(P＜0.05),最大海绵体内压(ICP)亦显著降低(P＜0.05);与糖尿病组相比,MT组大鼠海绵体MDA含量明显降低(P＜0.05),其SOD活性和ICP显著升高(P＜0.05);且其海绵体平滑肌及海绵窦内皮细胞含量明显提高.结论 MT可通过改善组织中氧化应激水平,促进阴茎海绵体平滑肌和内皮组织修复,提高勃起功能;抗氧化治疗可能为糖尿病性勃起功能障碍的防治提供新的策略.     

盐酸戊乙奎醚对百草枯致大鼠急性肺损伤的保护作用研究

目的 探讨盐酸戊乙奎醚(penequinine hydrochloride,PHC)对百草枯(paraquat,PQ)所致大鼠急性肺损伤(acutelung injury,ALI)的保护作用及其可能的机制.方法 雄性SD大鼠54只随机分为对照组(n=6)、PQ组(n=24)和PHC组(n=24),后两组均再分6、24、48、72 h四个亚组(n=6).PQ组和PHC组大鼠腹腔注射PQ(25 mg/kg),对照组腹腔注射等容的生理盐水;PHC组在PQ注射后2 h再腹腔注射PHC(0.3 mg/kg),PQ组腹腔注射等容的生理盐水.用ELISA法分别测定各时间点各组大鼠血浆和支气管肺泡灌洗液(bronehoalveolar,BALF)中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutadc,SOD)的含量;测定肺组织湿/干重比(W/D);光镜下观察肺组织结构变化;并采用免疫组化方法测定大鼠肺组织核因子-κ(NF-κB)p65的表达.结果 与对照组比较,PQ组各时间点血浆及BALF中MDA水平明显升高(P＜0.01)、血浆中SOD水平明显下降(P＜0.05);BALF中SOD水平6、24 h时下降(P＜0.05),但48 h后升高(P＜0.01);PHC组与PQ组比较,血浆和BALP中MDA含量明显下降(P＜0.05),SOD含量明显升高(P＜0.05);光镜下观察:PHC组各组肺组织病理变化较PQ组减轻;PHC组肺组织W/D值及NF-κB P65的表达较PQ组明显下降(P＜0.05).结论 PHC对PQ中毒所致的大鼠ALI具有保护作用.     

基质金属蛋白酶对大鼠慢性阻塞性肺病模型气道细胞外基质重塑的作用及影响因素

目的研究基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMP-1)在慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型气道细胞外基质重塑中的作用及N-乙酰半胱氨酸(NAC)、蛋白激酶C抑制剂H7及转移生长因子(TGF-β)单抗干预的影响.方法Wistar大鼠随机分为(1)对照组;(2)COPD模型组,采用熏香烟加气管注小量内毒素法复制COPD模型;(3)NAC干预组(NAC组);(4)H7干预组(H7组);(5)TGF-β单抗干预组.观察各组病理形态学改变;生化法测定支气管肺组织羟脯氨酸含量;免疫组化法和RT-PCR法测支气管肺组织MMP-9、2及TIMP-1,以及TGF-βⅠ、Ⅱ受体的表达;SDA-PAGE明胶酶谱学测定支气管肺组织MMPs酶活性.结果模型组气道壁以Ⅰ型胶原为主的细胞外基质及羟脯氨酸含量较对照组显著增多,NAC组及TGF-β单抗组较模型组显著减少,H7组羟脯氨酸含量较模型组显著增多.模型组MMP-9、2及TIMP-1,以及TGF-βⅠ、Ⅱ受体在气道上皮、肺泡巨噬细胞、肺血管内皮细胞等细胞中蛋白和(或)mRNA表达显著增强,72 kdMMP-2及92 kdMMP-9酶原活性显著增高,三个干预组MMP-2、9及TIMP-1的蛋白及mRNA表达较模型组显著减弱,72 kdMMP-2及92 kdMMP-9酶原活性显著减低,三个干预组TGF-βⅠ、Ⅱ受体亦较模型组有不同程度减弱.结论以Ⅰ型胶原为主的细胞外基质显著增生是COPD气道重塑的重要病理改变.COPD气道细胞外基质降解及合成代谢异常活跃与气道细胞外基质重塑密切相关;NAC可对MMP-9/TIMP-1的失衡起调节作用,其表达及功能在一定程度上依赖PKC信号传导途径.抑制TGF-β传导通路可能使胶原等细胞外基质降解及合成减少.     

珍石烧伤膏对wistar大鼠深Ⅱ°烧伤创面愈合影响的研究

目的:通过动物实验观察珍石烧伤膏促进创面愈合情况,探究珍石烧伤膏治疗烧伤的作用机制及为指导临床治疗提供实验依据.方法:将78只wistar大鼠随机分为模型组(72只)及正常对照组(6只),模型组背部行深Ⅱ °烧伤后分3组:A组为同体对照,右侧创面涂珍石烧伤膏,左侧对照创面直接用凡士林油纱覆盖包扎.B组背部创面全部涂珍石烧伤膏.C组凡士林油纱覆盖.观察每组创面愈合程度、创面组织病理学变化、胶原的变化和羟脯氨酸含量.结果:珍石组大鼠不同时间点的创面愈合率均高于对照组(P＜0.05),愈合时间明显缩短(P＜0.05),愈合创面上皮化程度好于对照组,胶原分布规律,羟脯氨酸含量明显高于对照组.结论:珍石烧伤膏通过促进上皮细胞生长,刺激羟脯氨酸表达,调节胶原合成,减少瘢痕形成等机制促进伤口愈合.     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠精索静脉曲张生精细胞Caspase-3酶及bcl-2基因的影响

目的 探讨精索静脉曲张大鼠睾丸组织中一氧化氮(NO)与生精细胞凋亡之间的关系并研究其机制.方法 实验分3组:对照组(假手术组)、曲张组(精索静脉曲张组)和药物组,每组10只大鼠.(45±5)d的SD雄性大鼠复制左侧曲张模型.药物组为术后8周起腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),剂量:50mg/lg·d-1),每组10只大鼠.术后10周用流式细胞仪检测睾丸生精细胞凋亡,分光光度法检测Caspase3活性,用硝酸还原酶法测定睾丸组织NO含量和NOS活性.逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2基因mRNA的表达.结果 与对照组对应侧相比较,曲张组大鼠双侧睾丸组织NO含量增加,NOS活性显著升高(P＜0.01),流式细胞仪枪测生精细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著升高(P＜0.01),bcl.2基因mRNA表达明显减少(P＜0.01).药物组较曲张组大鼠对应侧睾丸组织NO含量、生精细胞凋亡显著减少(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著降低(P＜0.01),bcl-2基因mRNA表达明显增加(P＜0.01).结论 精索静脉曲张明显诱导大鼠睾丸组织生精细胞凋亡.其机制可能与NO含量增加,NOS活性升高,生精细胞中Caspase-3酶的活性升高及bcl-2基因表达下调有关.L-NAME对曲张大鼠乍殖细胞有保护作用.曲张对睾丸的影响是是双侧性的.