细菌基因盒—整合子系统研究进展

细菌基因盒一整合子系统是新的可移动基因元件，介导耐药基因在染色体，质粒及转座子之间移动，从而导致细菌耐药性的传播，对基因盒－整合子系统的来源，结构及细菌耐药性表达等几方面的研究进展进行讨论，介绍分子杂交和PCR技术检测基因盒－整合子系统的方法，阐明基因盒的移动机制不仅对细菌耐药性传播有意义，且易介导细菌多重耐药性。     

细菌耐药机制与临床治疗对策

由于广谱抗菌药的滥用以及细菌间耐药基因的转导，细菌对常用抗菌药物耐药的发展成为人类健康事业面临的严重问题之一。细菌主要通过产生灭活酶或钝化酶，改变抗菌药物作用靶位，改变细菌细胞壁的通透性、主动外排作用以及形成细菌生物被膜而对抗菌药物耐药，这些耐药机制不是相互孤立存在的，两个或更多种不同的机制相互作用决定一种细菌对一种抗菌药物的耐药水平。本文介绍了临床常见致病菌对各类抗菌药物主要的耐药机制及耐药基因，并总结了针对常见细菌耐药的合理用药及相关防治对策，以期为临床常见致病菌耐药提供解决方案。     

PCR及限制性酶切技术检测急性髓细胞白血病H-ras基因点突变

为了解急性髓细胞白血病(AML)H-ras基因点突变的情况,应用聚合酶链反应(PCR)和限制性酶切图谱分析技术,对55例初诊AML患者进行了检测,发现16例(29.1％)存在H-ras基因点突变,此突变与AML的发生及其某些临床指标有一定关系。H—ras基因突变可望成为AML诊断分型、指导治疗及判断预后的一项有价值的指标。     

整合子与铜绿假单胞菌多重耐药性研究进展

铜绿假单胞菌（PA）多重耐药性是临床抗感染治疗的难点，以往的研究多注重PA的天然耐药机制，如外膜渗透性降低及泵出机制。近年来，在PA中发现了多种β-内酰胺酶，如广谱酶中的PSE-1。SHV-1．超广谱酶中的VEB-1。对碳青霉烯类抗生紊（如亚胺培南）耐受的金属β-内酰胺酶。但上述研究只局限于细菌的单一耐药机制。不能解释为什么没有接触过抗生素的病原菌也会出现对抗生紊的多重耐药。基因盒一整合子系统是细菌基因组中可移动的基因克隆和表达单位，能携带位点特异性重组系统组分，形成多种基因的组合、排列，对细菌及质粒基因组的进化具有重要意义。并且通常涉及到抗生素的耐药基因。与细菌产生多重耐药和耐药基因的水平传播密切相关。目前发现，细菌整合子携带的耐药基因有70余种，整合子作为一个移动遗传元件，通过质粒、转座子在细菌同种或不同种属间进行基因水平转移。使细菌的耐药性在病原菌中广泛传播。整合子结构是国际上研究细菌多重耐药机制、监测细菌耐药性播散趋势的热点。     

AP-PCR法对沙门菌第一类整合子鉴定指纹图谱分析

目的在研究沙门菌携带的第一类整合子基因结构的基础上，对第一类整合子的阳性菌株进行基因指纹图谱分析。方法任意引物聚合酶链反应（AP-PCR）方法对两种不同血清型、整合子阴性与整合子阳性菌株研究基因指纹图谱，利用遗传距离矩阵，采用非加权配对法（UPGMA法）做遗传分析的树状图，进行指纹图谱分析。结果在最佳AP-PCR方法的反应条件下，可以将第一类整合子阴性、第一类整合子阳性菌株进行鉴定，同时对两种不同的血清型也可以加以区分，得到5个基因型。结论AP-PCR可以作为第一类整合子阳性菌株及其相关血清型进行尝试性的鉴定方法，对研究整合子介导细菌耐药机制的特性具有重要意义。     

耐万古霉素肠球菌耐药机制的研究进展

自20世纪80年代后期发现第一株耐万古霉素肠球菌(VRE)以来，糖肽耐药性肠球菌的数量不断增多，甚至出现了其耐药性向其他细菌转移的严重现象。VRE耐万古霉素机制的分子生物学研究表明，VRE对万古霉素的耐药性多数是由位于染色体或质粒上的耐药基因簇引起的。根据对万古霉素和替考拉宁的耐药水平及耐药基因簇的差异，可将糖肽耐药性肠球菌分为VanA，VanB，VanC，VanD，VanE和VanG等6种基因型。本文将着重介绍VRE耐万古霉素的分子生物学机制，以及目前对VRE感染的治疗策略。     

应用随机扩增多态性DNA技术分型肺炎克雷白菌

目的对肺炎克雷白菌进行随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型。方法以优化的随机引物及反应体系对临床分离的199株肺炎克雷白菌进行RAPD分析并绘制基因分型指纹图谱。结果199株临床分离肺炎克雷白菌共得RAPD型158种。结论本研究为肺炎克雷白菌医院感染的分子流行病学分析提供了重要的参考依据。     

46,XX男性综合征分子遗传学机制研究进展

46,XX男性综合征是一种罕见的性分化异常疾病,在新生儿中的发生率约为1/20 000。此类患者大多为正常男性表型,多在婚后多年不育就诊过程中发现。从分子生物学角度,根据SRY基因的存在与否可将46,XX男性综合征分为SRY阳性和SRY阴性两型;前者的产生多与其父亲减数分裂过程中SRY基因的易位相关,而后者的发生机制目前尚不明确。笔者就46,XX男性的分子分型及潜在的分子遗传学机制进行文献回顾和分析。     

分子生物学技术在伤寒流行病学研究中的应用

伤寒和副伤寒 (以下统称为伤寒 )是发展中国家常见的肠道传染病 ,这些地区基础卫生设施落后 ,人们的卫生保健意识 ,卫生习惯较差 ,伤寒已成为严重公共卫生问题。传统的伤寒流行病学研究方法 ,主要通过对伤寒病原菌的形态学、血清学和生化反应特性等表型特征进行研究 ,在病原菌分型上主要有血清学分型、噬菌体分型、耐药谱分型等 ,通过这些特征结合流行病学资料综合分析 ,这种研究方式有很大的局限性[1 ] 。近年 ,随着分子生物学技术在流行病研究中的广泛应用 ,伤寒的分子流行病学研究也得到迅猛发展 ,主要是对伤寒沙门氏菌进行分子和基因水…     

福建东南沿海某战区医院MRSA感染特点及基因多态性分型研究

目的了解福建东南沿海某战区医院MRSA感染特点及基因多态性分型情况,为制定院内MRSA感染的防治策略提供分子生物学依据。方法采用头孢西丁试纸片法初步鉴定MRSA菌株,聚合酶链反应(PCR)技术检测Mec A基因,最终鉴定临床送检标本所检测出的MRSA菌株,并通过随机引物DNA扩增技术(RAPD)对所检测的MRSA菌株进行基因分型研究。结果经PCR对Mec A基因检测,从临床标本及医护人员身上共分离出42株MRSA菌株。采用随机引物DNA扩增技术(RAPD)对细菌进行基因分型,根据同源性分析,42株临床菌株共可以分为12型。其中Ⅰ型共7株,Ⅱ型共2株,Ⅲ型共4株,Ⅳ型共4株,Ⅴ型共7株,Ⅵ、Ⅶ及Ⅷ各1株,Ⅸ型共8株,Ⅹ型共2株,Ⅺ型共3株,Ⅻ型共2株。结论本院MRSA菌株存在相似度大小不同的遗传距离,医院内存在交叉感染可能。     

2006年细菌对抗菌药物耐药机制研究进展回顾

细菌对抗菌药物的耐药性机制是生物医药研究的重要领域。2006年抗菌药物耐药机制研究在多方面有重要的发现，如对细菌药物主动外排泵的药物转运结构机制的深入了解及发现新的药物泵或新的泵调控表达机制，发现了喹诺酮类药物修饰酶、质粒介导的喹诺酮耐药性在世界范围内的出现，对金葡菌耐药机制的进一步认识与发现新型抗多重耐药革兰阳性球菌的platen．simycin，鲍曼不动杆菌基因多重耐药岛的发现，新型β-内酰胺酶的继续出现以及超广谱β-内酰胺酶开始从食用动物或宠物分离的细菌中证实。本文还讨论了2006年中国细菌耐药机制研究的一些重要结果。这些研究成果继续提示细菌对不同抗菌药物的多种耐药保护机制及细菌本身基因结构的多样性与可移动性使其能进化产生新的耐药机制以适应抗菌药物的作用。严谨合理地应用抗菌药物以最大限度地减少细菌耐药性发生及传播和延长抗菌药物的疗效周期是人类所面临的长期挑战。     

感染致病菌耐药与临床治疗对策

细菌对常用抗菌药物的耐药成为人类健康事业面临的严重问题之一。细菌可通过产生灭活酶或钝化酶，改变抗茵药物作用靶位，改变细菌细胞壁的通透性、主动外排作用以及形成细菌生物被膜而对抗菌药物耐药。本文介绍了临床常见致病菌对各类抗菌药物的主要耐药机制及耐药基因，并总结了针对常见细菌耐药的合理用药及相关防治对策，以期为临床常见致病菌耐药提供解决方案。     

临床分离铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物的耐药机制

目的研究临床分离的铜绿假单胞菌对碳青酶烯类抗菌药物的耐药机制。方法测定临床分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南、美洛培南、帕尼培南、头孢他啶、环丙沙星、米诺环素的体外抗菌活性；从中选取不同耐药表型菌株8株，以标准株PAOI为对照，凝胶电泳分析外膜蛋白；用荧光定量RT-PCR测定细菌主动外排系统结构mexA、mexC和mexE的表达，并对其调控基因进行测序。结果3株细菌金属酶测定阳性；敏感菌株与PAOI外膜蛋白图谱相似，耐药菌株尤其是对亚胺培南耐药株OprD2量减少或消失；随着细菌耐药性增强，主动外排系统表达逐渐增加。5株细菌发现mexR，nfxB突变。结论外膜蛋白D2缺失、主动外排系统表达增加、产生碳青霉烯酶是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药的主要机制；但细菌对不同药物耐药机制存在一定差异。     

FHIT基因在肺癌中缺失的研究

目的 探讨肺癌发生的分子生物学机制。方法 采用逆转录-巢式聚合酶链反应(reverse-tape polymerasechain reaction)的方法对42例肺癌及10例正常肺组织中的 FHIT(Fragile histidine triad)基因的缺失情况进行检测。结果66.7％(28/42)肺癌组织中检测到FHIT基因的缺失,而正常组织中未检测到FHIT基因的缺失,二者差别有显著意义(P<0.01)。FHIT基因的缺失与肺癌的不同病理分型、分化程度、临床分期无关。与吸烟有一定的相关性。结论(1)FHIT基因的缺失在肺癌的发生中起一定的作用。(2)可能是肺癌组织中的频发及早期事件。(3)可能是烟草致癌物的靶基因。     

SOS应答对质粒介导的qnr耐药基因表达调控机制的研究进展

SOS应答是普遍存在于细菌中的一种低保真度的DNA修复方式。当细菌DNA受损时，大量的DNA单链堆积，SOS应答启动并诱导远距离基因表达参与DNA修复。此修复过程缺失了DNA复制的校正功能，因此SOS应答会大大增加细菌的基因突变频率从而使细菌能够更快的适应不利环境。另一方面，随着细菌耐药的日益严峻，qnr基因家族成为质粒介导的喹诺酮耐药(plasmid-mediated quinolone resistanc PMQR)研究热点。有报道发现细菌的SOS应答会对菌株的qnr耐药水平造成明显的差异性，完整的SOS应答能够使菌株MIC成倍增加。由此可以怀疑SOS应答对qnr基因的表达存在相应的调控机制，但是相关机制尚未阐明。基于此本文就SOS应答机制和qnr耐药机制二者之间的关系进行试探性的综述。     

大肠艾希菌的随机扩增多态性DNA基因分型及应用

目的对大肠艾希菌(E.coli)进行随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型并应用于医院感染的判断。方法以优化的随机引物、反应体系和扩增条件对临床分离的161株E﹒coli进行RAPD基因分型并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱,同时对E.coli的医院内感染及个体感染的连续性进行了观察与分析。结果161株临床分离E.coli共得RAPD120型;E.coli的医院内感染确实存在。结论RAPD可将E.coli分为120型并有效应用于E.coli医院内感染的判断。     

PICU临床产ESBLs菌耐药特征及基因型分布的研究

目的 对产广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌进行初步基因分型,了解产ESBLs细菌的耐药基因的型别分布和耐药特征变化情况.方法 收集分离鉴定菌株,通过K-B法药敏实验初筛以确认产ES-BLs菌株,并对ESBLs基因进行初步分型.结果 分离到产ESBLs细菌93株,其中肺炎克雷伯菌为48株,大肠埃希菌为45株,产ESBLs细菌对青霉素类、氨曲南及头孢菌素类耐药率约为51.1％～100％,对美罗培南耐药为4.4％.对2010年检测到的产ESBLs菌株43株进行初步基因分型,PCR初步分型结果表明:43株ESBLs茵检测到CTX、SHV及TEM三种基因型;主要为CTX-M型占27.9％,包括CTX-M-14和CTX-M-3,其次为SHV型占25.6％,TEM型占9.3％.结论 产ESBLs细菌耐药率明显增高,且具有多重耐药的特点;产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯茵基因分型以CTX-M-14为主、其次为SHV型.     

白血病的MICM分型

随着现代医学检验技术的不断进步，白血病分型已由过去的形态学分型手段逐渐增加了免疫学、细胞遗传学及分子生物学的鉴定技术，使白血病分型的准确性大大提高。     

随机扩增多态性DNA技术分型大肠埃希菌

目的：对大肠埃希菌(E．coli)进行随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型并应用于医院感染的判断。方法：以优化的随机引物、反应体系和扩增条件对临床分离的161株E．coli进行RAPD法基因分型并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱。同时对E．coli的医院内感染进行了观察与分析。结果：161株临床分离E．coli共得RAPD型120种；E．coli的医院内感染确实存在。结论：RAPD法可将E．coli分型120种并有效应用于E．coli医院内感染的判断。     

应用形态学、核型、免疫学和分子生物学方法联合检测急性髓细胞性白血病M_(2b)的研究

对20例急性髓细胞性白血病（AML）M2b亚型进行了形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学方法（MICM）的联合检测。结果显示，形态学分型确诊率为90％（18／20），免疫学分析示80％（16／20）有髓系抗原表达，具有其典型特征者为40％（8／20）。染色体异常t（8；21）检出率为95％（19／20），采用RTPCR技术检测全部病例均显示AWL1－ETO融合基因阳性，提示在MICM联合诊断中，融合基因检测对AML－M2b的诊断，治疗及微小残留病监测有重要意义。