洛伐他汀对ADPKD成纤维细胞Ⅰ型胶原α1基因启动子活性的影响

目的观察洛伐他汀对人常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）肾间质成纤维细胞细胞外基质（ECM）表达及Ⅰ型胶原（COLⅠ）α1基因启动子活性的影响。方法用不同浓度的洛伐他汀和香叶基香叶基焦磷酸（GGPP）处理培养的ADPKD肾间质成纤维细胞,24或48h后,用放免法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原,ELⅠSA法检测α1（Ⅰ）胶原基因启动子活性。结果ADPKD肾间质成纤维细胞经1～50μmol／L洛伐他汀处理48h后,Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原分泌受到明显抑制,呈剂量依赖性关系;抑制COLⅠα1基因启动子活性。GGPP能明显逆转洛伐他汀的上述作用。但洛伐他汀对Ⅲ型前胶原分泌无任何作用。结论洛伐他汀可能通过干预甲羟戊酸途径,降低COLⅠα1基因启动子活性,从而减少ECM合成。     

Cyr61在常染色体显性多囊肾病患者肾组织中的表达及其意义

目的 观察富含半胱氨酸61蛋白(Cyr 61)在正常人和常染色体显性多囊肾病(ADPKD)患者肾组织中的不同表达,探讨其在多囊肾病的发病中的作用。方法 采用免疫组化及Western印迹方法分析ADPKD患者肾囊肿组织中Cyr 61的细胞定位及其在体液和细胞中的表达含量。应用荧光定量PCR技术检测Cyr61、Ⅰ型、Ⅳ型胶原(Col Ⅰ、Ⅳ)和层粘连蛋白(LN)的基因表达。结果 Cvr61在正常肾小管上皮细胞中有微弱表达。ADPKD患者肾组织中Cyr61含量明显增高,主要在囊肿衬里上皮细胞和残存的正常肾小管上皮细胞中表达。多囊肾组织中Cyr61与Col Ⅰ、ColⅣ、LN的mRNA表达都明显增高,且ColⅣ明显高于Col Ⅰ。正常人尿液未检测到Cyr61,而ADPKD尿液中可检测到Cyr61,其血清中Cyr61水平约为尿液的2倍。结论 Cyr61在ADPKD囊肿组织过度表达,可能通过促进细胞外基质成分改变参与ADPKD囊肿形成和发展。     

丹参酮ⅡA对肾成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的研究丹参酮ⅡA（TSN）对结缔组织生长因子（CTGF）诱导肾间质成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,探讨TSN抗肾纤维化的可能机制。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株NRK／49F,分别以2．5、5．0、10ng／ml CTGF刺激细胞;或先用不同浓度（10^-6、10^-5、10^-4mol／L）TSN预处理再以5ng／ml CTGF刺激细胞。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞培养液中Ⅰ、Ⅳ型胶原含量。结果CTGF在一定范围内以剂量依赖方式诱导NRK／49F细胞增殖及胶原合成。不同浓度TSN预处理的作用强度有所不同：10^-6mol／LTSN预处理后,细胞增殖和Ⅰ、Ⅳ型胶原合成几乎不受影响;10^-5和10^-4mol／LTSN预处理后,细胞增殖率分别降低31．82％、40．91％,Ⅰ型胶原含量下降36．10％、54．13％,Ⅳ型胶原含量下降29．73％、49．15％。结论TSN抗肾纤维化作用可能与其抑制CTGF诱导的肾间质成纤维细胞增殖和细胞外基质（ECM）的合成有关。     

常染色体显性遗传型多囊肾病肾组织中细胞外基质和多囊蛋白-1的表达

目的：研究常染色体显性遗传型多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）肾组织中细胞外基质和多囊蛋白－１的表达及与囊肿发生的关系。方法采用标准ＥｎＶｉｓｉｏｎ免疫组织化学方法,分别检测了多囊蛋白－１,纤连蛋白、层连蛋白、Ⅰ型胶原和Ⅳ型胶原在正常肾组织、胎肾组织和多囊肾组织中的分布和量的变化。结果在ＡＤＰＫＤ囊肿肾组织中,这４种细胞外基质表达均明显增强,同时可见基底膜明显不规则增厚。纤维蛋白,层连蛋白和Ⅳ型胶原位于囊肿的     

良性前列腺增生组织细胞外基质的研究

利用组织化学和免疫组织化学的方法系统地观察了细胞外基质成分Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和纤维粘连蛋白在正常前列腺和良性前列腺增生组织中的分布情况。结合计算机辅助图像分析方法对其表达量进行定量分析。结果表明，Ⅰ、Ⅲ型胶原主要分布于前列腺组织的间质部分，纤维粘连蛋白（ＦＮ）和Ⅳ型胶原除呈线状分布于基底膜外，间质中亦可见较多的ＦＮ和Ⅳ型胶原的表达。Ⅳ型胶原和ＦＮ在正常前列腺组织中的相对含量分别为０．１０１±０．０３１和０．０８６±０．０２７，它们在ＢＰＨ组织中的相对含量则分别为０．１６５±０．０３４和０．１１０±０．０２２，两组之间有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。     

肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠HGF调节的作用

目的:观察中药复方肾衰泄浊汤对肾间质纤维化小鼠肾组织肝细胞生长因子(HGF)蛋白表达的调节及其抗肾间质纤维化的机制。方法:将60只小鼠随机分为:假手术组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组、苯那普利组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,术后7d观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化检测肾组织HGF、TGF-β1、MMP-9蛋白,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN的表达。结果:中药高剂量组和苯那普利组较模型组小鼠肾组织HGF、MMP-9蛋白表达均增强,TGF-β1蛋白表达减弱,而Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、FN生成减少,两组无统计学差异,而HGF表达与TGF-β1表达呈明显负相关性。结论:肾衰泄浊汤可能是通过诱导HGF表达,抑制TGF-β1表达,促使肾组织分泌更多MMP-9,抑制Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及FN等ECM的过度沉积,加强肾保护作用,对抗肾间质纤维化。     

和解聚散方对单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠细胞外基质表达的影响

目的:研究和解聚散方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)表达的影响.方法:...     

转化生长因子β1诱导肾间质成纤维细胞表型转化及其对结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 研究转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）诱导大鼠正常肾间质成纤维细胞（NRK-49F）表型转化过程中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因表达的变化.方法 以不同浓度的TGF-β1（0、0.5、1、2、5、10 ng/ml）刺激NRK-49F细胞,分别应用MTT比色法、Western Blot、Northern Blot方法,检测TGF-β1刺激后肾间质成纤维细胞的增殖、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRAN的表达、细胞表型标志物α-SMA mRNA及蛋白质表达、CTGFmRNA的表达变化.结果 1 ng/ml浓度以上TGF-β1能显著促进NRK-49F细胞增殖,上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平,诱导肌成纤维细胞表型标志α-SMA mRNA及蛋白质的表达,显著上调CTGF mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.05）;以上效应均呈浓度依赖性.同时CTGF mRNA表达水平的增高与细胞表型转化的程度相一致.结论 TGF β1能诱导肾间质成纤维细胞发生表型转化,并促进了细胞增殖及细胞外基质的合成;该效应与TGF β1显著上调CTGF的基因表达一致.     

氧化苦参碱通过TGF-β-Smad信号通路调控人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及功能

目的 研究氧化苦参碱(OM)对人增生性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖、α平滑肌肌动蛋白(α-SM-Actin),Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响,以及对Smad3和Smad7蛋白表达量的影响,探讨OM对HS成纤维细胞抑制作用的可能机制.方法 体外常规培养HS成纤维细胞,CCK-8检测不同浓度OM对细胞增殖的抑制情况;real-time PCR检测α-SM-Actin、Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达;Western blotting检测Smad3和Smad7蛋白量的改变.结果 OM干预后成纤维细胞增殖明显受抑制,抑制率呈现OM浓度依赖性.OM浓度为400 mg/L时,抑制率为53.44%;Ⅰ、Ⅲ型胶原及α-SM-Actin的mRNA相对表达量均明显低于无OM干预组细胞;Smad3蛋白表达下降了48.16%,而Smad7蛋白表达量增加了55.24%.结论 OM作用于HS成纤维细胞可产生抑制效应,其部分机制是通过TGF-β-Smad信号通路的负性调节,实现对细胞的胶原合成及收缩功能的抑制.     

尿Ⅳ型胶原浓度与IgA肾病肾组织损害的关系

目的:观察IgA肾病(IgAN)患者尿Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)浓度及其与肾组织Col-Ⅳ表达和肾脏病理之间的关系,以期寻找一种能反映IgAN肾损害的非创伤性临床检测指标.方法:ELISA法测定IgAN患者血、尿Col-Ⅳ浓度;免疫组化法检测肾组织Col-Ⅳ表达;应用计算机病理图像分析系统对肾小球基质基底膜面密度、小球细胞个数及肾小管间质病变程度进行半定量分析,观察尿Col-Ⅳ浓度与IgAN患者肾组织Col-Ⅳ表达及肾病理损伤的关系.结果:IgAN患者尿Col-Ⅳ浓度、肾组织Col-Ⅳ表达较健康人明显增高,尤其是增生硬化和间质纤维化显著者更为明显;尿Col-Ⅳ浓度与肾组织Col-Ⅳ表达、肾小球基质基底膜面密度、小管间质损害显著正相关,且在轻度细胞外基质积聚和小管间质损害时,尿Col-Ⅳ浓度即增高;与小球内细胞个数呈负相关,而与肾小球系膜区、毛细血管襻区免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和C3沉积的量和沉积范围无关,与血Col-Ⅳ水平无显著相关.结论:IgAN患者尿Col-Ⅳ浓度明显增高,尿Col-Ⅳ水平可作为监测IgAN患者早期肾硬化的一项指标.     

保肾片对系膜细胞机械性伸展诱导的增殖因子和细胞外基质成分的影响

目的：在肾小球硬化的进展中，肾小球内压升高是一种主要的启动因子，小球内压升高能增加系膜细胞的伸展强度。本研究探讨培养的大鼠系膜细胞中，机械性伸展对TGF－β和细胞外基质成分mRNA表达的影响，以及中药保肾片的抑制作用。方法：用机械性伸展装置刺激培养的肾系膜细胞，并在培养液中加入喂服中药保肾片大鼠的血清，用Northern blot分析TGF－β1、3及I型、Ⅳ型胶原mRNA的表达。结果：机械性伸展以时间依赖性方式刺激TGF－β1和TGF－β3的mRNA表达，同时也发现机械性伸展能诱导系膜细胞外基质的主要成分I型、Ⅳ型胶原及纤维结合素的mRNA表达亢进，中药保肾片对系膜细胞机械性伸展诱导的细胞增殖因子TGF－β1和细胞外基质主要成分I型、Ⅳ型胶原的mRNA表达具有明显的抑制作用。结果：机械性伸展刺激能够诱导产生TGF－β1、3及I型、Ⅳ型胶原mRNA表达。中药保肾片延缓慢性肾衰竭的作用机理与抑制细胞增殖因子和细胞外基质成分mRNA的表达有关。     

肾络宁对IgA肾病大鼠肾间质损害影响的实验研究

目的:探讨中药复方肾络宁对IgAN大鼠肾间质病变的影响.方法:通过口服并定时尾静脉注射牛血清白蛋白后葡萄球菌肠毒素感染复制IgA肾病模型,同时给予肾络宁治疗,观察血尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白定量、尿NAG酶的变化,利用原位分子杂交和免疫组织化学的方法,结合计算机病理图像分析,观察肾络宁对肾间质Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶(MMP-1)和组织型金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)基因及蛋白表达的影响.结果:(1)肾络宁组的血尿素氮、血肌酐、尿蛋白、尿NAG含量与模型组相比明显降低.(2)图像分析表明模型组肾间质Ⅲ型胶原、TIMP-1表达均较正常组增高,肾络宁组上述指标表达低于模型组;模型组MMP-1表达较正常组升高,肾络宁组较模型组升高更为明显.结论:肾络宁能改善肾功能,延缓IgAN模型大鼠肾间质纤维化的发生,这可能与其抑制肾间质Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达及提高MMP-1表达有关.     

高糖对系膜细胞诱生型一氧化氮合酶表达及细胞外基质合成的影响

目的:探讨高糖对体外培养的系膜细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的调节作用及NO合成的变化,以及上述变化对细胞外基质(ECM)合成的影响.方法:利用脂多糖(LPS)诱导系膜细胞表达iNOS,观察5.6、10、25、40 mmol/L不同糖浓度,在0、4、24、48 h不同时间点培养的系膜细胞iNOS mRNA表达的变化及培养上清中NO、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白含量的变化,以相同渗透压的甘露醇为对照组.细胞增殖测定采用MTT法,iNOS表达采用RT-PCR的方法,NO的检测采用硝酸还原法,Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的测定采用ELISA法.结果:高糖抑制系膜细胞增殖;LPS刺激后系膜细胞可表达iNOS;高糖浓度时iNOS mRNA表达增加,呈浓度和时间依赖性,相同渗透压的甘露醇无类似作用(P<0.01);随着糖浓度的升高和时间延长,实验组上清中NO含量增加,Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白含量增加.结论:高糖可上调系膜细胞iNOS mRNA的表达和促进NO、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的合成.     

AcSDKP对人真皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对人真皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法：人真皮成纤维细胞的原代培养及鉴定后,给予不同浓度AcSDKP（10-7,10-8,10-9,10-10,10-11mol/L）的干预,设立空白对照组。WST-8法检测人真皮成纤维细胞增殖;RT-PCR技术检测人真皮成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：与空白对照组相比,10-10mol/LAcSDKP抑制人真皮成纤维细胞增殖作用最强;10-8mol/L和10-9mol/LAcSDKP对Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的抑制作用最显著。结论：本实验发现AcSDKP能够抑制人真皮成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,有望为病理性瘢痕的防治提供新方法。     

复方鳖甲软肝片方对TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的：观察中药“复方鳖甲软肝片方”对TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞（NRK-49F）增殖及分泌细胞外基质的影响。方法：以2 ng/ml hTGF -β1诱导 NRK -49F 细胞,并以软肝片方大、中、小剂量（分别以7g/kg、3.5 g/kg、1.75 g/kg）药物血清进行干预,分别应用MTT法、ELISA、免疫细胞化学方法,观察肾间质成纤维细胞增殖、细胞上清FN浓度及ColⅠ、ColⅢ的表达。结果：软肝方含药血清对hTGF-β1诱导的细胞增殖无影响;但大、中剂量软肝方能不同程度地降低FN的分泌及ColⅠ、ColⅢ的表达,软肝方大剂量组作用最强（P〈0.01）。结论：复方鳖甲软肝片方在一定程度上抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞ColⅠ或ColⅢ的表达,大剂量软肝方作用最强。     

高糖对肾小管上皮细胞胶原分泌和PAI-1合成的影响以及黄芪调控作用

目的：体外研究高糖刺激肾小管上皮细胞时PAI-1和细胞外主要基质成分Ⅳ型胶原的表达,以及黄芪延缓糖尿病肾病与其的相关性。方法：将小鼠肾小管上皮细胞培养于不同浓度葡萄糖中,不同时间段采用RT—PCR方法检测PAI-1 mRNA转录水平,Westhern blot检测蛋白的表达,ELISA方法检测Ⅳ型胶原的合成。随即用黄芪药物血清刺激细胞,观察二者的表达情况。结果：高浓度葡萄糖培养的细胞PAI-1表达升高,并呈现剂量时间依赖性。说明PAI-1表达与高糖作用存在相关性。同时高糖诱导Ⅳ型胶原的合成增加。黄芪含药血清可以显著抑制细胞表达PAI-1和Ⅳ型胶原。结论：高糖可诱导PAI-1表达,抑制细胞外基质成分降解。黄芪通过抑制Ⅳ型胶原的产生,降低细胞外基质的合成,起到抗纤维化作用,从而延缓糖尿病肾病的进展。     

益肾胶囊对糖尿病肾病肾组织SOCS3及Col-Ⅰ、Ⅳ表达的影响

目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织SOCS-3、Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响,探讨益肾胶囊延缓糖尿病肾病肾纤维化的机制。方法:36只健康雄性Wistar大鼠,通过尾静脉单次注射链脲佐菌素(60 mg/kg),制造糖尿病大鼠模型,后随机分为DN模型组、益肾胶囊组、氯沙坦钾组,各12只,益肾胶囊组每只灌胃益肾胶囊(625 mg.kg-1.d-1),氯沙坦组每只灌胃氯沙坦钾片(30 mg.kg-1.d-1),另取12只健康大鼠作为正常对照组。正常对照组及模型组每日给予等量蒸馏水。12周后测定各组大鼠体重、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮;采用HE、Masson和PAS染色观察肾组织病理变化,采用免疫组化法检测肾组织中SOCS-3、Ⅰ、Ⅳ型胶原表达水平。结果:实验12周末,与正常组比较,模型组大鼠病理改变较明显,24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮明显上升(P<0.05),肾组织中SOCS-3、Ⅰ、Ⅳ型胶原表达明显上调。与模型组比较,治疗组大鼠病理改变减轻,24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮水平明显降低(P<0.05);肾组织中SOCS-3表达显著上调,Ⅰ、Ⅳ型胶原表达显著抑制(P<0.05)。结论:益肾胶囊可能通过上调SOCS-3表达,抑制Ⅰ、Ⅳ型胶原的表达,从而减轻了DN大鼠肾小球硬化和肾小管间质纤维化的程度,延缓糖尿病肾病的进展。     

糖肾汤对大鼠肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的:研究糖肾汤对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞外基质的影响.方法:在体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中,加入糖肾汤含药血清进行干预,用酶联免疫吸附法检测培养上清中纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量.结果:高糖可刺激肾小球系膜细胞分泌LN,糖肾汤对此无对抗影响;但能抑制高糖环境下肾小球系膜细胞高分泌Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的作用,且有一定的量效依赖关系,优于开搏通对照组.结论:糖肾汤能抑制高糖环境下肾小球系膜细胞高分泌Ⅳ型胶原,纤维连接蛋白的作用,具有一定的量效依赖关系.     

宽叶缬草对高胆固醇血症大鼠肾脏保护作用的探讨

目的 :探讨宽叶缬草在脂质肾损害中的保护作用和可能机制。方法 :用含 4 %胆固醇和 1%胆酸钠的高脂饲料饲喂大鼠建立高脂模型 ,观察宽叶缬草对大鼠血脂、尿蛋白和肾功能的影响 ,以及对肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质增生、α -SMA表达、Ⅳ型胶原表达的影响。结果 :宽叶缬草有降低总胆固醇、低密度脂蛋白和尿蛋白的作用 (P <0 .0 1) ,肾病理和免疫组化证实宽叶缬草在降脂和降低尿蛋白同时 ,能减轻肾小球系膜病变和细胞外基质产生 ,降低肾小球α -SMA和Ⅳ型胶原表达。结论 :宽叶缬草的肾保护作用可能与降脂基础上的肾小球系膜细胞表型转化的抑制有关     

舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的研究

目的:肾间质成纤维细胞增殖是肾间质纤维化的重要启动机制之一,本研究将探讨舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的影响及其调控机制。方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F),舒拉明以不同浓度(0,10,50,100μmol/L)处理细胞,观察细胞数目变化,显微镜拍照,MTT方法检测细胞活性变化,免疫印迹技术检测细胞周期蛋白Cyclin D1和P27的变化。结果:研究发现,舒拉明以剂量依赖性效应抑制细胞生长;MTT方法检测发现随着舒拉明剂量的加大,显著下调细胞增殖活性;通过检测细胞周期正向调控蛋白(Cyclin D1)和细胞周期负向调控蛋白(P27),证实舒拉明可剂量依赖性效应抑制Cyclin D1表达,增强细胞周期负向调控蛋白P27表达。结论:舒拉明可在体外以剂量依赖性效应抑制肾间质成纤维细胞增殖,可能与其调控细胞周期蛋白表达有关。