052荧光原位杂交快速鉴定血培养中的微生物

败血症是威胁人类生命的一种病症 ,需迅速给予适当的治疗。连续监测血培养系统测定有细菌生长后通常需 1或 2天才能进行种鉴定。ＰＣＲ和杂交法是通过扩增和检测微生物的ＤＮＡ或ＲＮＡ来鉴定标本中的细菌或霉菌。然而 ,ＰＣＲ法耗时 ,花费昂贵。而以ｒＲＮＡ为靶进行荧光标记的寡核苷酸原位杂交是检测和鉴定病原菌的一种实用、快速方法。本文的目的是评价荧光原位杂交 (ＦＩＳＨ)在鉴定血培养标本中生长的微生物的可行性、灵敏度以及特异性。本研究所用的探针是合成的针对细菌的 16ｓｒＲＮＡ和真菌的18ｓｒＲＮＡ靶位点的寡核苷酸探针 ,5…     

血培养细菌的快速鉴别

C~(14)自动血培养系统(BACTEC)为一方便快速血培养方法,但仅限于对革兰氏染色细菌的鉴别,最终需再次培养。作者报告一种血培养的快速细菌鉴别法。方法:以无菌试管取8～10ml 血培养液,100xg离心10分钟,取上清液再以1400xg 离心10分钟,试管底可见白色小颗粒,把此颗粒以0.5ml 生理盐水稀释成混悬液,以待鉴定。先观察革兰氏染色形态,然后按如下进行鉴定:1.凝固酶阴性和阳性葡萄球     

荧光原位杂交法快速鉴定血培养阳性葡萄球菌的临床应用

目的 快速鉴定血培养中的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS),结合临床快速判定是否为污染菌。方法 采用荧光原位杂交法鉴定血培养中的金黄色葡萄球菌和CoNS,杂交结果若为CoNS,根据临床资料进行判断,并与文献推荐的污染判断法进行结果比较。结果 探针的特异性经由标准菌株和临床分离菌株证实。金黄色葡萄球菌探针的特异性和敏感性均为100％,CoNS探针的特异性和敏感性分别为100％和95．5％。179株CoNS中117株判断为污染菌,污染率为68％,与文献推荐的污染判断方法一致。结论 荧光原位杂交法适用于血培养中的金黄色葡萄球菌和CoNS的快速鉴定,以排除CoNS污染。     

荧光原位杂交法快速鉴定血培养阳性葡萄球菌的临床应用

目的快速鉴定血培养中的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS),结合临床快速判定是否为污染菌。方法采用荧光原位杂交法鉴定血培养中的金黄色葡萄球菌和CoNS,杂交结果若为CoNS,根据临床资料进行判断,并与文献推荐的污染判断法进行结果比较。结果探针的特异性经由标准菌株和临床分离菌株证实。金黄色葡萄球菌探针的特异性和敏感性均为100%,GoNS探针的特异性和敏感性分别为100%和95.5%。179株CoNS中117株判断为污染菌,污染率为68%,与文献推荐的污染判断方法一致。结论荧光原位杂交法适用于血培养中的金黄色葡萄球菌和CoNS的快速鉴定,以排除CoNS污染。     

用生物素标记幽门螺旋菌寡核苷酸探针及应用

幽门螺旋菌(Helicobacter pylori,HP)与慢性胃炎、消化性溃疡的关系密切.对HP 感染的实验室诊断,除细菌培养外也建立了多克隆或单克隆抗体的间接免疫荧光试验,快速尿素酶试验等.为了从     

荧光原位杂交法快速鉴定血培养中白念珠菌的方法学评价

目的：评价荧光原位杂交法(FISH)快速鉴定血培养中阳性的白念珠菌的应用价值。方法：当BacT／ALERT报警后。涂片革兰染色，若发现念珠菌，与针对白念珠菌的特异性探针杂交，同时将分离菌转种沙保罗培养基，比较2种方法的鉴定结果。结果：探针的特异性经15株标准菌株证实，分离到的36株念珠菌中，杂交法在3h内可全部得到鉴定结果，与培养法比较，杂交法的特异性和敏感性均为100％．结论：使用FISH可直接快速鉴定报警阳性血培养中的白念珠菌，结果可靠。     

阳性报警时间法快速鉴定血培养中的葡萄球菌

金黄色葡萄球菌引起的脓毒血症是最为严重的全身感染性疾病,同时也是脓毒血症的常见病原菌之一。目前虽有多种快速检测血培养中金黄色葡萄球菌的方法,如聚合酶链反应、肽核酸探针法、试管凝固酶法等,但这些快速方法还需至少1—2h的报告时间。     

血培养和脑脊液细菌抗原的快速识别

对败血症或脑膜炎患者需要快速细菌学报告,以便迅即给予适当的抗微生物治疗.曾用放射测量法、阻抗测量法、或红外技术在血培养中快速检测细菌生长,如并用涂片革兰氏染色,将可很快证实细菌的存在.假如不需等待生长而能确定细菌,则能作更正确的临床指导,这可根据检测抗原的免疫学方法表达此目的,如对流免疫电泳(CIE),用产生蛋白A的葡萄球菌的协同凝集(COA)和胶乳颗粒凝集法.但上述方法缺乏检测脑膜炎双球菌B组的有效试剂,作者对用外包单价或多价抗体的胶乳颗粒凝集系统以检测儿童血培养和脑脊液(CSF)的细菌抗原进行评价.标本来自疑为细菌性败血症或脑膜炎和不明原因的高烧儿童,用已知抗原悬液作为阳性对照,和     

用于快速检测血小板浓缩物中细菌污染物的抗生素标记探针和微量荧光计:初步报告

背景 大约2,000份血小板中有1份被细菌污染。多数情况下污染物为革兰氏阳性皮肤腐生物(如葡萄球菌sp.或芽胞杆菌sp.)。作者使用能与革兰氏阳性细胞结合的荧光素标记探针对快速诊断革兰氏阳性污染物这一新的方法进行了研究。研究设计和方法 将两个表皮葡萄球菌菌落接种于当天采集的血小板袋子中。在保存期间每天定量培养及用荧光素共轭万古霉素探针在微量荧光计上进行半自动筛检实验。另外将连续的细菌加入消毒过的血小板中,梯度范围在10~1～10~8CFUs/mL。结果 所有≥10~5CFUs/mL的细菌污染样品均能被检出。消毒样品无反应。整个操作步骤需三个吸液和观察步骤,耗时不到1小时。结论:该研究的初步结果表明该方法是较有希望的方法。使用其它细菌和抗生素的进一步研究正在进行。     

Digoxigenin—11—dUTP标记寡核苷酸探针及化学发光检测

非放射性标记探针的应用，对于推广基因分析技术有重要意义。本文介绍一种新颖，简单，快速，灵敏的非放射性遗传变异分析技术－Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ标记寡核苷酸探针，并用化学发光法检测。表明此标记方法可以满足基因分析的需要。     

对流免疫电泳作血分离培养的快速鉴定

本文描述了用对流免疫电泳(CIE)检测血培养中细菌抗原的方法,及其对303例血培养阳性标本的试验结果。材料:抗血清——革兰氏阳性球菌用肺炎球菌R抗血清,革兰氏阴性杆菌用肺炎杆菌抗血清,革兰氏阴性球菌用脑膜炎双球菌抗血清,抗葡萄球菌磷壁酸抗体效价为1∶32以上的人抗血清。参考用磷壁酸抗原系从金黄色葡萄球菌培养物获得。所有血培养阳性细菌均经革兰氏染色镜检,需氧和厌氧培养     

全自动细菌鉴定仪直接鉴定血培养阳性标本的临床应用

目的探讨全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定和药敏试验的临床应用价值及其与常规法（转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏试验）的符合率。方法将血培养阳性标本的培养液混匀于专用接种水中,接种于专用鉴定板上直接上机做细菌鉴定和药敏试验,并与转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏结果进行比较。结果86例血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机鉴定结果差异无统计学意义（P〈0．01）,血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机的药敏试验结果符合率大于95．5％。而直接法比常规法约提前24h。结论对血培养阳性标本进行直接鉴定及药敏试验缩短了检验时间,为菌血症的治疗争取了时间,且与常规法的实验结果符合率高。     

质谱技术直接鉴定报阳血培养细菌可行性分析

目的探讨质谱技术直接鉴定报阳血培养中细菌种类的可行性。方法收集非重复报阳血培养瓶443个,采用质谱技术直接鉴定其中的细菌。同时采用全自动细菌鉴定仪鉴定转种后纯培养菌落。以全自动细菌鉴定仪的鉴定结果为金标准,比较质谱技术直接鉴定细菌种类的准确性。结果 443个血培养瓶中,排除7瓶假阳性瓶,质谱技术鉴定细菌的准确性以革兰阴性菌最高(92.8%),其次是革兰阳性菌(81.9%),鉴定真菌、厌氧菌的准确性分别84.2%、66.7%,少见菌鉴定准确性较低(57.1%)。结论质谱技术能够快速、准确地直接鉴定出报阳血培养中的常见细菌,可为临床合理使用抗菌药物提供依据。     

优化差速离心法在血培养报警瓶MALDI-TOF MS细菌鉴定中的应用

目的评价用于血培养报警瓶基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorptionionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)细菌直接鉴定的前处理方法。方法建立优化差速离心法流程。收集首都医科大学附属北京同仁医院2015年10月至12月外周血培养报警标本100例(均为单一菌),以转种培养后菌落MALDI-TOF MS鉴定为金标准,对比差速离心法优化前后、BRUKER SEPSITYPER试剂盒(简称试剂盒法)鉴定结果,评价优化差速离心法的准确率。收集2016年1月至10月外周血及体液培养报警标本516例(经革兰染色确认为细菌),对优化差速离心法进行大样本应用研究。结果优化的差速离心法、试剂盒法及优化前的差速离心法鉴定准确率分别为97%、94%及92%,差异无统计学意义;优化的差速离心法鉴定分值2.0的例数则多于其他两种方法,与优化前相比差异具有统计学意义(χ~2=3.916,P=0.048)。516例样本单一菌486例,混合菌30例。优化的差速离心法鉴定准确率为92.2%(476/516)。外周血及其他体液样本鉴定准确率分别为96.5%(179/289)、86.8%(197/227),差异有统计学意义(χ~2=16.92,P0.01)。单一菌鉴定准确率为97.1%(472/486),其中革兰阳性球菌和阴性杆菌分别为96.9%、99.1%,均明显高于阳性杆菌(55.6%),差异有统计学意义(χ~2=25.329,P0.01;χ~2=48.526,P0.01)。混合菌鉴定准确率为13.3%(4/30)。体液样本混合菌比例为11%(25/227),显著高于外周血[1.7%(5/289),χ~2=20.008,P0.01]。结论优化差速离心法鉴定率高、成本低、易操作,优于试剂盒法,对单一细菌MALDI-TOF MS血培养报警直接鉴定更具临床应用价值。     

非同位素寡核苷酸探针在亲子鉴定中的应用

非同位素寡核苷酸探针在亲子鉴定中的应用１０００８８北京市红十字血液中心志宏单小燕张志欣袁庆珍李伟熊那ＤＮＡ指纹技术是利用小卫星ＤＮＡ探针（多位点探针）检测人基因组高可变区串联重复序列的限制酶长度片段多态性。由于用于分析的遗传标记所包含的遗传信息均蕴藏...     

阳性血培养中阴性杆菌快速鉴定方法探讨

目的：结合荧光原位杂交法和直接VITEK法，快速鉴定阳性血培养中的阴性杆菌。方法：当BacT／ALERT3D120报警后，涂片革兰氏染色，若发现阴性杆菌，首先与大肠杆菌特异性的探针杂交，结果阳性者可直接报告为大肠杆菌；结果阴性者，将阳性血培养标本中的细菌离心后制成混悬液，采用VITEK直接法鉴定。所有菌株同时按标准法分纯后，采用VITEK标准法鉴定，比较两法的鉴定结果。结果：分离到的86株阴性杆菌中，在6h内可鉴定94％的细菌，90％为正确鉴定。结论：结合荧光原位杂交法和直接VITEK法，可在一天时间内报告鉴定阴性杆菌结果，并可将其鉴定至种的水平，有助于病人的早期选用抗生素。     

全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定及药敏试验比较

目的探讨全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定及药敏试验的临床应用价值和与常规法(转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏试验)的符合率。方法将血培养阳性标本的培养液混匀于专用接种水中,再接种于专用鉴定扳上直接上机做细菌鉴定和药敏试验,并与转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏结果进行比较。结果74份血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机鉴定结果符合率达94.4%以上,血培养阳性的标本直接上机与转种菌落上机的药敏试验结果符合率>95%。而直接法比常规法提前了近24h。结论对血培养阳性标本进行直接鉴定及药敏试验缩短了检验时间,为菌血症的治疗争取了时间,而且与常规法的实验结果符合率高。     

应用聚合酶链反应-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变

目的应用聚合酶链反应(PCR)-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变，建立一种新的分子药敏试验方法。方法以传统药敏试验、PCR-单链构象多态性和PCR-直接测序方法为对照，对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、ITS和embB的寡核苷酸探针，通过反向斑点杂交检测78株结核菌临床分离株PCR产物。结果18株结核菌药物敏感株的4种耐药基因均为野生型。60株结核菌耐药分离株中，59株为耐RFP株，rpoB基因突变率为93．2％，最常见的突变位点为531位和526位密码子，33株为耐SM株，rpsL基因突变率为75．8％，均为43位密码子AAD AGG突变，ITS基因突变率为9．1％，均为513位A→C突变，rpsL和ITS基因总突变率为84．8％；43株为耐EMB株，embB基因突变率为58．1％，均为306位密码子突变。结论应用PCR一寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变，检测其耐药性。     

吡咯烷酮芳胺酶在细菌快速鉴定中的应用

吡咯烷酮芳胺酶(Pyrrolidonyl β aminopeptidase，PYR)最初用于肠球菌的鉴定，应用含底物的液体培养基，24-48h观察结果。其后经过改进，以吡咯烷酮8萘胺为底物制成纸片，涂加菌落后，细菌的酶将底物水解，释出8萘胺，与对二甲氨基肉桂醛(Pimethylaminoeinnamaldehyde)呈色。国外已有商品纸片供应。也有的将底物加在专用棉签上，用以涂取菌落，