苦参素诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的实验研究

目的探讨苦参素对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法用不同浓度苦参素处理HO8910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变;以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果随着药物浓度的升高,作用时间的延长,苦参素对HO8910细胞的生长抑制率逐渐增高;在苦参素作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,出现凋亡小体。细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变,亚G1峰出现,S+G2～M期细胞所占比例组明显增高。结论苦参素能诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞增殖。     

三氧化二砷诱导肺癌上皮细胞株凋亡

采用碘化丙啶和FITC-TUNEL标记法,经流式细胞认错和透射电镜观察As2O3对肺癌A549细胞株的凋亡诱导作用和形态学变化。结果发现1及2.5μmol/L As2O3对肺癌A549细胞株24h的凋亡诱导率为22.80%及30.15%,48h的凋亡诱导率为41.75%及60.04%,72h的凋亡诱导率为56.38%及73.30%,均分别高于相应时间点的5-FU的作用;透射电镜下见细胞体积缩小,核膜完整,核染色质聚集于核膜边缘的典型凋亡细胞。结果表明,As2O3能够诱导肺癌A549细胞株的凋亡。     

三氧化二砷诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡的细胞生物学研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3)对结肠癌LoVo细胞体外生长的影响,方法：选用不同剂量As2O3处理LoVo细胞后,通过光镜,电镜,MTT法,AO／EB荧光染色法和流式细胞术研究AsO3对LoVo细胞生长的影响,结果：As2O3具有抑制Lo-Vo细胞生长和其凋亡的作用,这种作用主要在低浓度（0．5－2．0μmol/L)产生,而在高浓度（5．0－10．0μmol/L)可引起细胞死亡,结论：As2O3有明显抑制LoVo细胞生长的作用,并诱导细胞凋亡,其作用机制尚不清楚。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的在体外实验中,探讨三氧化二砷(As2O3)诱导卵巢癌细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法采用TUNEL染色法,定性、定量地研究As2O3与卵巢癌细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果As2O3在体外能诱导卵巢癌细胞发生凋亡,下调bcl-2的表达,增强bax的表达。结论诱导卵巢癌细胞发生凋亡是As2O3抗卵巢癌作用的机制之一,As2O3可能通过下调bcl-2的表达及增强bax的表达诱导卵巢癌细胞发生凋亡。     

三氧化二砷诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化

目的： 研究三氧化二砷（As₂O₃）诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化特点。方法: 以As₂O₃诱导Jurkat细胞凋亡为模型，利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死，DiOC₆(3)/PI染色流式细胞术检测线粒体膜电势（△ψm），壬基酚丫啶橙(NAO)/PI染色流式细胞术检测线粒体质量，利用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)染色流式细胞术检测细胞内活性氧的变化。 结果: 在4×10^-6mol/L As₂O₃诱导下，Jurkat细胞在48 h凋亡比率为(18.98±1.40)%， 对照组为(5.17±0.80)%，组间差异显著（P<0.01）；As₂O₃组坏死比率为(8.56±0.70)%，对照组为(1.53±0.55)%，组间差异显著（P<0.01）。As₂O₃组在48 h时点的线粒体膜电势低于对照组（P<0.05）， 线粒体膜电势下降的Jurkat细胞比率分别为（23.07±3.62)%和（6.63±1.46)%。 同时Jurkat细胞As₂O₃组线粒体质量显著低于对照组（P<0.01），线粒体质量下降的细胞比率分别为（25.90±1.80)%和（6.37±1.04)%。As₂O₃组自由基产生明显高于对照组（P<0.01）， DCFDA平均荧光强度分别为24.41±0.75和17.06±0.48。结论: As₂O₃诱导Jurkat细胞凋亡过程中，线粒体膜电势和质量均下降，细胞内氧自由基水平升高。     

三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡的氧化还原调节

三氧化二砷 (As2 O3 )治疗急性早幼粒细胞白血病及实体肿瘤的主要作用机制为诱导细胞凋亡。活性氧(ROS)被认为是细胞凋亡的信号传导分子之一。细胞内氧化还原调节可决定细胞的生存状态。肿瘤细胞对As2 O3的敏感性与其自身的ROS和谷胱甘肽水平相关。小剂量维生素C亦具有促氧化作用 ,可增加体内ROS水平 ,提高肿瘤细胞对As2 O3 的敏感性     

氯通道在三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氯通道在三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)诱导人鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞经As_2O_3作用24及48 h的凋亡率;应用膜片钳技术记录As_2O_3激活的细胞膜电流,并分析其电流特性;采用流式细胞术检测氯通道阻断剂DIDS对As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡的抑制作用。结果:(1)5μmol/L As_2O_3能够时间依赖性地诱导的CNE-2Z细胞凋亡;(2)CNE-2Z细胞外灌流含5μmol/L As_2O_3的等渗溶液能够激活一个具有外向整流特征的电流,激活的电流无明显的时间及电压依赖性失活,翻转电位接近氯平衡电位;(3)As_2O_3激活的电流能够被氯通道阻断剂DIDS和NPPB完全抑制,细胞外灌流47%的高渗溶液能够完全抑制As_2O_3激活的电流;(4)氯通道阻断剂DIDS能够抑制As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡。结论:As_2O_3可以激活CNE-2Z细胞的容积敏感性氯通道。氯通道在As_2O_3诱导的CNE-2Z凋亡中发挥重要作用。     

飞燕草素调节Numb/Notch信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡

目的 探讨飞燕草素调节Numb/Notch信号通路诱导卵巢癌细胞A2780凋亡的作用机制。方法 使用顺铂（500μmoL/mL）和低剂量（500μmoL/mL）、高剂量（1000μmoL/mL）飞燕草素处理卵巢癌细胞A2780,同时设立卵巢癌细胞A2780对照组,各组设6个平行样,培养72 h后。实验结束后,采用CCK-8试剂盒测定各组细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell法测定细胞侵袭水平,划痕实验检测细胞迁移水平,实时荧光定量（RT-qPCR）及蛋白印记法（West-blot）检测细胞Numb、Notch1 m RNA和蛋白表达水平。结果 与A2780细胞组比较,顺铂组、飞燕草素低、高剂量组A值、存活率、穿膜数、迁移距离、Notch1 m RNA和蛋白表达降低（P<0.05）;与顺铂组比较,飞燕草素低剂量组A值、存活率、穿膜数、迁移距离、Notch1 m RNA和蛋白表达升高（P<0.05）,高剂量组A值、存活率、穿膜数、迁移距离、Notch1 m RNA和蛋白表达无明显变化（P>0.05）;与飞燕草素低剂量组比较,飞燕草素高剂量组A值、存活率...     

藏红花素诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的体外实验

目的 探讨藏红花素(crocin)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡及其作用机制.方法 MTT法分析藏红花素对卵巢癌HO-8910细胞增殖的影响;流式细胞仪检测藏红花素作用于卵巢癌HO-8910细胞后,细胞周期分布及凋亡率的改变;Western印迹法检测p53、Fas/APO-1和Caspase-3蛋白的表达.结果 MTT实验分析显示,藏红花素明显抑制卵巢癌HO-8910细胞生长;流式细胞仪检测结果显示,藏红花素作用于卵巢癌HO-8910细胞后,G0/G1期细胞数比例及细胞凋亡率升高.Western印迹法检测结果显示,p53和Fas/APO-1蛋白表达水平明显增加,Caspase-3活性增强.结论 藏红花素能明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的生长,使其被阻滞于G0/G1期,并可能通过上调p53、Fas/APO-1蛋白表达水平,进而激活Caspase-3调控的凋亡途径,从而促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡.     

3-MA对三氧化二砷诱导Jurkat细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对三氧化二砷(As2O3)诱导急性T细胞白血病系Jurkat细胞系Jurkat细胞凋亡的影响及机制。方法:XTT法检测三氧化二砷(As2O3)对急性T细胞白血病细胞系Jurkat细胞的增殖抑制作用。电镜下观察不同浓度As2O3作用Jurkat细胞24 h后细胞形态。免疫印迹和流式细胞术检测微管相关蛋白1轻链3B(LC-3B)蛋白的表达变化。AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测3-MA对AS2O3诱导急性T细胞白血病系Jurkat细胞凋亡的影响。结果:As2O3可以抑制急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞的生长,这种作用呈剂量和时间依赖性。2.5、5、10μmol/L AS2O3作用Jurkat细胞24 h后在电镜下可观察到自噬、凋亡、坏死的不同形态,并且自噬体数目不断增多。5μmol/L As2O3处理Jurkat细胞0、24、48 h后,LC-3B的平均荧光强度相对倍数分别(3.1±0.2)倍、(4.6±0.31)倍、(34.2±4.5)倍,组间相比,差异有统计学意义(P<0.05),与生长抑制率一样呈现时间依赖性增强;免疫印迹也显示As2O3处理24 h和48 h后,LC-3B的蛋白表达逐渐增强;相对于As2O3组(33.4±9.1)%的生长抑制率,3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合As2O3处理细胞后,48 h的生长抑制率为(60.6±8.3)%,差异明显,而LC-3B的表达明显降低。联合应用自噬抑制剂3-MA后Jurkat细胞的凋亡率(44.96±3.60)%,与单用As2O3组(2.94±0.26)%相比明显增加,差异有统计学意义。结论:自噬抑制剂3-MA可以增加As2O3引起的急性T细胞白血病细胞系Jurkat细胞的凋亡细胞百分数,其作用机制与诱导凋亡及抑制自噬密切相关。     

HE4基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞HO8910生长侵袭的影响

目的探讨卵巢癌基因HE4对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法构建针对HE4基因的PcDNA3．1／HE4载体．脂质体法介导PcDNA3．1／HE4载体转染人浆液性卵巢癌细胞系HO8910,WESTERN—BLOT检测转染前后细胞内HE4蛋白的表达效果。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、平板克隆形成实验观察HE4基因对细胞增殖能力的影响,经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化。结果Western-blot结果显示PcDNA3．1／HE4载体成功转染HO8910细胞并显著提高该细胞HE4基因的表达,细胞增殖能力较前无明显变化,侵袭能力明显下降。结论通过增强HE4基因表达,可降低其侵袭能力,有望成为卵巢癌基因治疗的新的候选基因。     

三氧化二砷对大肠癌细胞的生长抑制作用

目的观察三氧化二砷（ＡＳ_２Ｏ_３）对大肠癌细胞株ＳＷ６２０的生长抑制作用并初步探讨其机制．方法大肠癌细胞株ＳＷ６２０用不同浓度ＡＳ_２Ｏ_３处理．①ＭＴＴ法观察不同浓度ＡＳ_２Ｏ_３作用不同时间后对ＳＷ６２０细胞生长的影响；②增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）单抗ＬＳＡＢ免疫组化染色－流式细胞仪检测 ＰＣＮＡ阳性细胞百分比．结果①ＡＳ_２Ｏ_３明显抑制大肠癌细胞株ＳＷ６２０细胞增殖，其作用随ＡＳ_２Ｏ_３浓度增加和作用时间延长而增加；②随ＡＳ_２Ｏ_３浓度增加，ＰＣＮＡ阳性细胞百分比逐渐下降（ｐ＜０． ０５）结论二氧化二砷可明显抑制大肠癌细胞株 ＳＷ６２０的生长，调控 ＤＮＡ合成及细胞增殖的 ＰＣＮＡ蛋白合成降低可能是 ＡＳ_２Ｏ_３的作用机制之一．     

全反式维甲酸对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及作用途径.方法:在人乳腺癌细胞株MCF-7培养基中加入一定浓度ATRA和PKC-δ的专一抑制剂rottlerin(RO)并分组,通过SubG1assay by FACS、琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA ladder来观察ATRA对MCF-7的影响.结果:在浓度为5μM的ATRA作用下,MCF-7的凋亡率显著高于其它各组(P＜0.01),并可观察到明显梯状DNA.结论:ATRA能够诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但受PKC-δ的专一抑制剂RO的抑制.     

Characterization of the CA125 Antigen Secreted from a Newly Established Human Ovarian Cancer Cell Line (SHIN-3)

A cell line (designated SHIN 3) was established from a 56-year old Japanese woman diagnosed as having serous cystadenocarcinoma of the ovary. SHIN 3 produced the tumor marker, CA125. When samples were subjected to one dimensional gel electrophoresis followed by immunoblotting with anti CA125 antibody, antigen binding appeared in the low-molecular mass fraction around 50 KDa as well as in the high molecular-mass fraction (more than 200 KDa). Subsequent resolution of this lower molecular-mass component by two dimensional gel electrophoresis gave rise to bands of 49 KDa near an isoelectric point of 7.3. Treatment of the CA125 antigen with 10 mM periodic acid resulted in no loss of activity. However, reduction and alkylation in 6 M guanidine HCI or treatment at 100 C for 20 min resulted in complete loss of activity. Treatment with various glycosidases did not inhibit activity, whereas digestion with proteases (except for papain) produced complete loss of activity, suggesting that the CA125 antigenic determinant is composed of con-formationally dependent peptides.     

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。     

Downregulation of AKT and MDM2, Melatonin Induces Apoptosis in AGS and MGC803 Cells

Melatonin, a neurohormone secreted by the pineal gland, has a variety of biological functions, such as circadian rhythms regulation, anti-oxidative activity, immunomodulatory effects, and anittumor, etc. At present, its antitumor effect has attracted people's attention due to its extensive tissue distribution, good tissue compatibility, and low toxic and side effects. In the gastrointestinal tract, there is high level of melatonin and many studies showed melatonin has effects of anti-gastric cancer. In this experiment, human gastric cancer cell lines AGS and MGC803 were used to investigate the intracellular molecular mechanism of melatonin against gastric cancer. After AGS and MGC803 have been treated with melatonin, the changes of cell morphology and cellular structure were observed under electron microscope. Flow cytometer and apoptosis detection kits were used to analyze the effect of apoptosis on AGS and MGC803. The alterations of apoptosis-related proteins Caspase 9, Caspase 3, and upstream regulators AKT, MDM2 including expression, phosphorylation, and activation were detected to analyze the intracellular molecular mechanism of melatonin inhibiting gastric cancer. In AGS and MGC803 cells with melatonin exposure, cleaved Caspase 9 was upregulated and Caspase 3 was activated; moreover, MDM2 and AKT expression and phosphorylation were downregulated. Melatonin promoted apoptosis of AGS and MGC803 cells by the downregulation of AKT and MDM2. Anat Rec, 302:1544–1551, 2019. © 2019 American Association for Anatomy     

Silencing SATB1 Inhibits the Malignant Phenotype and Increases Sensitivity of Human Osteosarcoma U2OS Cells to Arsenic Trioxide

In a previous study, we found that the global genome organizer Special AT-rich binding protein 1 (SATB1) is highly expressed in mesenchymal-derived human osteosarcoma U2OS cells and that the knock-down of SATB1 results in the inhibition of cell proliferation. The present study was aimed at investigating the effect of silencing SATB1 on cell migration, invasion, apoptosis and resistance to the chemotherapeutic drug arsenic trioxide. Cell migration and invasion were detected by wound-healing assays and trans-well invasion assays, respectively. Cell apoptosis was analyzed by an in situ Cell Death Detection POD Kit, based on terminal deoxynucleotydyl transferase mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) staining and mRNAs were analyzed by real time qRT-PCR. We found that cell migration and invasion were inhibited and that the proportion of apoptotic cells and sensitivities to the chemotherapeutic drug arsenic trioxide were enhanced by knockdown of SATB1 in U2OS cells. Furthermore, mRNA of ABCC1 and ABCG2 were decreased strikingly after SATB1 silencing. It was concluded that the elevated expression of SATB1 in U2OS cells contributes to maintenance of the malignant phenotype and resistance to chemotherapeutic drugs ATO, suggesting that silencing SATB1 in the cells might improve the effects of arsenic trioxides in the treatment of osteosarcoma in which SATB1 is over-expressed and that ABCC1 and ABCG2 were involved in SATB1 mediated resistance of U2OS cells to ATO.     

miR-502-3p 通过靶向结合 CBL 抑制卵巢癌增殖并诱导凋亡

目的 探究微小 RNA 502-3p (micro RNA 502-3p, miR-502-3p) 通过靶向结合 Casitas B 细胞淋巴 瘤 (Casitas B-cell lymphoma, CBL) 参与卵巢癌增殖和凋亡的机制。 方法 下载 GSE66957、 GSE119056、 TCGA_ OV 卵巢癌相关数据矩阵, 分析 miR-502-3p、 CBL 与卵巢癌的关系; 构建过表达 miR-502-3p、 CBL 的 SKOV3 和 HO8910 细胞系, 分别采用细胞计数试剂盒 ( cell counting kit 8, CCK-8)、 克隆形成实验、 流 式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况; 通过荷瘤裸鼠实验, 观察过表达 CBL 对肿瘤生长的影响; 验证 miR502-3p 与 CBL 的靶向关系。 结果 生物信息学分析显示, 卵巢癌组织中 CBL 水平高于癌旁组织, miR-502- 3p 水平低于癌旁组织, CBL 水平与患者预后、 细胞增殖基因表达有关 (P< 0. 05)。 miR-502-3p 与 CBL 存在 靶向关系, 与 Vector 组比较, CBL 组肿瘤的体积及重量增加 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, miR-502-3p 组 SKOV3、 HO8910 细胞中 CBL 蛋白表达、 细胞活力、 克隆数降低, 细胞凋亡率升高 (P< 0. 05), 但 CBL 可逆转上述细胞变化。 结论 miR-502-3p 可通过靶向下调 CBL 抑制卵巢癌细胞的增殖, 并诱导其凋亡。     

三氧化二砷对急性早幼粒细胞白血病细胞分泌细胞因子的影响与意义

为了探讨细胞因子在三氧化二砷诱发APL细胞白细胞升高的作用 ,首先按照FAB细胞形态学和细胞遗传学标准选择APL患者。常规Ficoll密度梯度法分离骨髓和PBMC ,体外培养 1h去除贴壁细胞。体外IL 1β、IL 6、IL 8、TNF α和G CSF分泌水平采用ELISA方法进行测定 ,NBT还原实验用以检测APL细胞分化状态。直接细胞计数法和MTT法观察细胞增殖变化。研究结果证实体外 10 6M或体内以 10mg/d三氧化二砷治疗 96h后 ,APL细胞分泌IL 1β和G CSF平均水平升高 (P <0 0 5 ) ,IL 6和IL 8水平降低 (P <0 0 5 ) ,TNF α水平无明显变化 (P >0 0 5 )。进一步分析结果表明 ,体外APL细胞的增值比率与IL 1β或G CSF分泌升高比率呈现正相关 ,检测到IL 1β或G CSF患者的细胞数量增加比率高于未检测到IL 1β或G CSF组 ,说明IL 1β或G CSF分泌增加在三氧化二砷诱导后的APL细胞增殖中起着一定作用