自主研制志贺氏菌显色培养基的应用效果评价

目的探讨自主研制的志贺氏菌显色培养基的应用效果。方法采用30株标准菌株及50份自然样品检测试验,比对自主研制的志贺氏菌显色培养基、梅里埃（R＆F）志贺氏菌显色培养基、木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐培养基（XLD培养基）和麦康凯琼脂培养基的选择性。结果自主研制的志贺氏菌显色培养基能有效分离志贺氏菌属菌株,50份自然样品的检出率与R＆F志贺氏菌显色培养基相同,均达到10%。结论自主研制的志贺氏菌显色培养基与R＆F志贺氏菌显色培养基在特异性及检出率达到一致。     

志贺氏菌实验室检测的漏检和误诊因素分析

志贺氏菌属细菌 (简称志贺氏菌 )是人类感染的常见病原菌之一 ,其健康人群检出率为 1%～ 2 % 〔1〕,腹泻病为 2 0 %左右〔2〕,有的地区高达 30 %以上〔3〕,严重危害人民的身心健康。近年来我们从常规检测、外来菌株鉴定和文献资料发现 ,某些因素影响试验结果 ,从而导致菌株的漏检和误判。现就有关因素综合分析如下。1　志贺氏菌与大肠杆菌表型特征的相似性志贺氏菌与肠杆菌科某些属 (种 )表型特征的相似性是引起漏检和误诊的重要因素。现已查明 ,志贺氏菌与大肠埃希氏菌 (简称大肠杆菌 )不仅生化特性近似 ,而且抗原密切相关 ,特别是与低活性…     

志贺菌检测技术研究进展

志贺菌引起的细菌性痢疾是目前全球面临的健康问题,该菌属包括4个种:痢疾志贺菌、福氏志贺菌、鲍氏志贺菌以及宋内氏志贺菌,引起的临床症状有:腹泻、痢疾性黏液脓血便、痉挛性腹痛以及里急后重等,甚至危及生命〔1-3〕。该菌属多见于热带、亚热带地区,流行地区主要在发展中国家的印度、泰国、越南等;而发达国家较少见,其感染发病的患者50%是前往发展中国家的旅行患者〔4〕。因此,目前志贺菌研究工作大多在东南亚和南亚的一些国家和地区开展〔1,5〕。以下就志贺菌检测技术的研究进展作一综述。志贺菌被发现至今已有百余年历史,随着微生物实验…     

志贺氏菌的RAPD鉴定研究

目的：建立水或食品中志贺氏菌的快速鉴定方法，方法：首先采用特异性PCR技术对细菌进行初步检测，以确定其是否为志贺氏菌；然后采用随机引物扩增DNA多态性（RAPD）技术对志贺氏菌再进行鉴定，结果：志贺氏菌特异性引物（ipaH引物）扩增阳性的细菌经RAPD技术进行基因水平的分型，发现相同种的志贺氏菌株产生了基本相同的条带模式，不同种的菌株，甚至同一种菌的不同型间的条带模式也存在一定差异，结果经实际分离样品的验证。结论：RAPD技术可用于水或食品中志贺氏菌的鉴定。     

三种分离志贺氏菌属培养基单独和联合应用的效果比较

志贺氏菌属有多种选择性培养基 ,为提高志贺氏菌的检出率 ,我室于 1999年对沙门氏菌属志贺氏菌属琼脂 (ＳＳ) ,ＨｅＲｔｏｅｎ肠道菌琼脂 (ＨＥ)和伊红美兰琼脂 (ＥＭＢ)三种培养基进行了临床应用效果的比较 ,现报告如下。1　标本来源和方法将门诊腹泻病人粪便标本 2 10份分别同时接种于ＳＳ、ＨＥ和ＥＭＢ培养基平板上 ,36℃过夜培养 ,从每个平板上挑取 3～ 5个可疑菌落 ,分别转种克氏双糖 ,取可疑菌落做血清学鉴定。2　结果与分析　　表 1　 2 10份标本在三种培养基上检出志贺氏菌情况培养基 志贺氏菌检出阳性数 %ＳＳ/ＥＭＢ/ＨＥ联合 49…     

深圳市食品、公共场所从业人员志贺氏菌属带菌情况分析

目的 了解深圳市食品、公共场所从业人员志贺氏菌属的带菌情况。方法 按国标肠道致病菌中志贺氏菌的检验方法。结果 在志贺氏菌属A、B、C、D的4个菌群中，以B群为最高；血清型分属22个血清型，其中以福氏志贺氏3a血清型最高(83／411)。结论 应加强对食品、公共场所从业人员健康检查，加强菌痢的防治工作。     

志贺氏菌属感染若干方面的研究进展

由志贺氏菌属感染引志的细菌性痢疾目前仍然是临床上最常见和感染性腹泻，近来还发现志贺氏菌属能感染其它组织，随着分子生物学研究的进展，有成志贺氏菌属感染的某些方面较为引起人们的注意，本文就近年来有关志贺氏菌属的侵袭力，分子生物学检测，对喹诺酮类药物的耐药现状及志贺氏菌属感染相关性疾病的研究进展作了综述。     

1999年徐州市志贺氏菌属细菌检测结果分析

志贺氏菌属中的细菌 ,是引起人类细菌性痢疾的致病菌 ,细菌性痢疾是夏秋季主要的腹泻传染病。 1999年 6～ 7月 ,我们对腹泻患者的粪便 ,采用数种培养基 ,进行多种肠道致病菌分离培养时 ,检出志贺氏菌属细菌 80株 ,对其进行了血清学分群分型鉴定 ,结果报告如下 :1　材料和方法1.1　菌株来源　标本来源于徐州市市所辖丰县、铜山县农村急性腹泻病人粪便 ,置于 Cary- Blair运送培养基内 ,直接分离于SS琼脂平板 ,然后挑选可疑菌落 ,接种于 KIA琼脂斜面。根据其反应性状 ,疑似者按 GB4789.5 - 94《食品卫生检验方法 (微生物部分 )》中志贺氏菌…     

一起志贺及沙门菌混合感染引起的食物中毒

目的经卫生学检测,确定该起食物中毒的食品及菌属。方法对患者食用的食物及腹泻物按食品卫生检验方法（微生物学部分）操作程序检测[1,2]。结果食品及呕吐物中分离出福氏志贺及鼠伤寒沙门两种细菌。结论本起食物中毒是因食用被志贺菌及沙门菌污染的食物而引起的。     

志贺氏菌属与埃希氏菌属单管鉴别培养基的研究

利用细菌的生长特性,应用国产材料研制的柠檬酸盐、甘露醇琼脂培养基,用于志贺氏菌属与埃希氏菌属的鉴别,接种标准菌株和临床菌株201株的试验结果表明,志贺氏菌属在该培养基上不生长,埃希氏菌生长并呈现黄色,其它肠杆菌依其对甘露醇和柠檬酸盐利用的不同而出现不同的结果。该培养基组成合理,性能特异、稳定,结果易读。有助于提高细菌鉴定工作的效率和质量,具有很好的实用性。     

应用LAMP同时快速检测沙门菌和志贺菌的效果评价

目的探讨环介导等温扩增（LAMP）方法同时快速检测沙门菌和志贺菌的应用价值。方法通过通用增菌培养,应用LAMP方法和分离培养法分别对76份食堂从业人员粪便标本进行沙门菌和志贺菌检测。结果LAMP方法检出1份标本沙门菌阳性,阳性率为1．32％;分离培养法检出1份都柏林沙门菌,阳性率为1．32％;2种方法的检测结果一致。LAMP方法可在3h内检出沙门菌、志贺菌,而分离培养法需要3-5d,鼠伤寒沙门菌LAMP方法的灵敏度为170CFU／ml,福氏志贺菌LAMP方法的灵敏度为190CFU／ml,与常见的食源性致病菌均无交叉反应。结论与分离培养法相比,LAMP方法特异性高,灵敏度高,不需要特殊仪器,能够在简易的实验条件下,快速、简便地同时检测沙门菌和志贺菌,LAMP方法适用于基层疾病控制实验室开展沙门菌和志贺菌的快速筛查检测。     

志贺菌中成簇的规律间隔短回文重复序列的 相关基因检测

摘要:目的　建立检测志贺菌CRISPR相关基因的斑点杂交方法。方法　分别采用PCR 法制备地高辛标记DNA 探针和人工合成的寡核苷酸探针,与志贺菌CRISPR相关基因进行斑点杂交。结果　设计出志贺菌CRISPR的相关基因探针;实现了志贺菌CRISPR系统的探针制备及杂交方法的建立。结论　斑点杂交可以快速大量检测志贺菌CRISPR的相关基因。     

志贺菌依赖解旋酶DNA恒温扩增技术建立

目的 利用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA),建立一种快速检测志贺菌(Shigella)的新方法。方法 根据志贺菌的ipaH基因序列设计特异性引物,优化反应体系和反应条件;并对方法进行特异性和灵敏度评价。结果 对21株实验菌株检测,3株志贺菌均为阳性,其余18株非志贺菌均为阴性,灵敏度为5.1×103cfu/mL,与普通PCR方法检测结果相当。结论 HDA法检测志贺菌具有特异、灵敏及仪器要求低等特点,具有广阔的应用前景。     

志贺菌环介导等温扩增检测方法建立

目的 建立志贺菌环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法 针对志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)特征性保守序列设计1套4条引物,应用LAMP技术对21株志贺菌和非志贺菌进行特异性检测以确定其特异性;使用LAMP和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对ipaH基因重组质粒倍比稀释液进行检测以确定其灵敏度;使用重组质粒计算其初始拷贝数与反应时间之间的线性关系以评估定量检测的可能性。结果 荧光定量LAMP扩增曲线图显示,LAMP技术可以在1 h内获得结果;有较好的特异性,与其他17种食源性致病菌无交叉反应;LAMP检测技术的灵敏度高出经典PCR技术10倍以上,检测限达到200拷贝/μL;平均变异系数<5%;反应时间与模板初始浓度有良好的线性关系(R²=0.985 5)。结论 志贺菌环介导等温扩增检测体系是一种快速、灵敏、特异的核酸筛查方法,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

多重PCR检测食品中的金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌

目的建立一种能同时检测食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的多重PCR检测方法。方法采用7.5%NaCl肉汤对食品样品中的金黄色葡萄球菌进行增菌,同时采用GN增菌剂对食品样品中的志贺菌和沙门菌进行增菌。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、志贺菌的ipaH基因、沙门菌的invA基因设计引物,通过多重聚合酶链反应(PCR)反应对食品样品中上述三种病原菌的目标基因进行扩增,同时对反应体系进行优化。结果特异性实验表明本方法的特异性良好。对污染金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的牛奶样品进行检测,检出限为1cfu/ml。结论本实验建立的多重PCR检测方法适用于食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的快速检测,具有快速、简便、灵敏的特点。     

食品中志贺菌特异性二重PCR检测方法的研究

目的:建立二重PCR方法快速检测食品中的志贺菌(Shigella spp.)。方法:以侵袭性质粒抗原H基因ipaH和铁载体基因iuc为靶基因,筛选引物,建立二重PCR体系。对3株志贺菌和28株非志贺菌进行特异性检测。梯度稀释志贺菌基因组DNA,以不同稀释度DNA作PCR扩增。在孜然牛肉中以不同菌量人工污染,不同增菌时间培养,提取DNA进行PCR扩增。应用该方法检测实际样品。结果:以ipaH、iuc为靶基因的2对引物对志贺菌的检出有很好的特异性。PCR检测的灵敏度在DNA水平上达到78.73 pg。人工污染样品,当起始污染量为0.56 cfu/g时,37℃增菌培养10 h即可检出。一共检测了18份样品,未检出志贺菌,与传统方法一致。利用该方法检测了一份盲样冻干样品,检出志贺菌,与实际结果相符。结论:建立了适用于食品中志贺菌检测的特异灵敏二重PCR方法。     

三亚市小学生志贺菌菌型分布和药敏特征分析

摘要:目的　探讨三亚市小学生志贺菌的分布及药物敏感状况,为痢疾的临床用药及预防控制提供依据。方法　粪便标本进行志贺菌分离培养、鉴定和血清分型,并用K-B法进行药物敏感试验。结果　3803名小学生志贺菌携带率为0.71%,男性携带率（0.71%）与女性携带率（0.69%）差异无统计学意义（χ2＝0.030,P＝0.863）;乡村小学生携带率（0.95%）高于城区（0.34%）,差异有统计学意义（χ2＝4.760,P＝0.029）。检出宋内志贺菌4株,福氏志贺菌23株,主要有F2a、F2b、F4c和F1a等血清型。药敏显示耐药率较高的是复方新诺明（96.30%）、四环素（92.59%）、氨苄西林（85.19%）、哌拉西林（81.48%）、氯霉素（70.37%）,对氟喹诺酮类和第三代头孢类抗菌素耐药率低（3.70%～14.81%）,对氨曲南、亚胺培南和美罗培南100%敏感,多重耐药率为92.60%,福氏和宋内志贺菌的耐药性差异无统计学意义（P＝1,P＞0.05）。结论　小学生隐性感染以福氏志贺菌为主,其次是宋内志贺菌。志贺菌多重耐药严重,治疗时首选氨曲南、亚胺培南和美罗培南,其次为第三代头孢类抗菌素。     

志贺菌检验技术的研究进展

志贺菌（Shigella spp）是引起人类肠道传染病最常见的病原菌,近年来稳居我国感染性腹泻病原菌的首位。为了能够有效防控和治疗水或食源性疾病,快速检验患者、水、食品中的志贺菌,作者就志贺菌的各种检验技术进展进行系统的综述,侧重说明其原理、敏感性、特异性及实用性。当前志贺菌检验技术的开发向着简易、快速、可靠的方向发展,以适用突发公共卫生事件的应急处理和临床诊断治疗的需要。     

志贺菌毒力相关基因的PCR检测分析

目的：利用PCR方法对武汉地区近年来收集的17株志贺菌进行毒力相关基因检测并分析其分布情况。方法：采用8对引物set1A、set1B、shet2A、shet2B、ial、ipaH、stx1与virA分别对志贺菌中毒力相关基因进行检测,结合常规鉴定方法对PCR扩增结果进行分析。结果：SHET1仅在福氏志贺菌（福氏Ⅱ型、福氏Ⅳ型）分离株（包括其标准株）中存在;SH-ET2存在于各型志贺菌（包括其标准株）;ipaH基因存在于各种类型志贺菌（包括其标准株）;17株志贺菌中,引物shet2A和引物shet2B用于检测sen基因分别检出16株和13株;ial、virA在反复复苏的菌株中检出率有所下降,stx1基因只在痢疾志贺菌中检出。结论：志贺菌快速诊断方法（PCR）中应首选检测志贺菌相关毒力基因ipaH基因。