三种精液处理方法所得精子的体外观察分析

精液处理是人工授精和试管婴儿过程中重要的一环,优化处理精液是为了提高精子的密度和活力,并去除精浆内的前列腺素、抗精子抗体、炎症细胞等不良成分。为寻求简便、高效、快速的精液处理方法,本研究对三种精液处理方法(Earle’s上游法、双层Percoll梯度离心法和单层Percoll高速离心法)进行对比研究,现报道如下:     

PureSperm离心法在宫腔内人工授精周期中优选精子的应用

目的 :探讨PureSperm离心法在宫腔内人工授精 (IUI)周期中优选精子的效果。　方法 :采用PureSperm单、双梯度离心法及Percoll双梯度离心法分别处理精液 ,比较 3种方法的处理效果 ,并将处理后的精子悬液施行夫精IUI。　结果 :单梯度PureSperm较双梯度的PureSperm及Percoll洗涤后精子密度显著增加 (P <0 .0 1) ,双梯度PureS perm及Percoll离心法两者差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,3种方法在洗涤后精子活率、畸形率及妊娠率比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。洗涤后正常形态的精子数量明显增加 ,白细胞、上皮细胞及细胞碎片等非精子成分明显减少。　结论 :PureSperm离心法是一种高效、简便、安全的IUI精液处理方法。     

肝窦内皮细胞一种新的分离和培养方法

本文在利用Percoll梯度密度离心法纯化肝窦内皮细胞（hepatic sinus endothelial cell,HSEC）的基础上,建立一种新的HSEC分离和培养方法,以提高HSEC的得率、活力和体外培养时间.     

不育病人精液中精子细胞的分离与鉴定

目的 :建立一种可从不育病人精液中分离出较多、较纯精子细胞的新方法。　方法 :收集 15例含细胞成分的不育病人精液 ,利用一种改良的非连续Percoll梯度 (15 %、2 2 %、30 %、4 0 %、5 0 %和 6 0 % )离心法分离精子细胞。于 18℃ 2 0 0 0r/min离心 30min后 ,精液细胞被分成单个的细胞组分 ;然后通过细胞计数、形态学、流式细胞术 (FCM )和免疫细胞化学等方法进行分析 ,选择含精子细胞纯度最高的组分。　结果 :经Percoll梯度离心后获得6个细胞组分 ,形态学和FCM分析表明 ,2 2 %组分中主要为精子细胞 [(91.85± 5 .18) % ,P <0 .0 0 5 ],平均密度为(1.0 10± 0 .786 )× 10 5/ml;30 %组分中含包括精子细胞在内的各种未成熟生精细胞 ;而白细胞主要位于 6 0 %组分中。　结论 :利用这种改良的非连续Percoll梯度离心法 ,可从不育病人的精液中分离到较多、较纯的精子细胞     

两种精子优选方法效果比较

目的　探讨精子经王氏管和密度梯度离心法处理后精子参数的变化 ,比较两者在宫内人工授精 (IUI)的临床效果。　方法　选择不育男性精液 15 7份 ,采用两种方法进行配对处理 ,比较两种分离方法前后精子活力、正常形态率、精子顶体形态和精子染色质等变化 ;分离后的精子用于IUI的临床妊娠率。　结果　两种方法处理后的精子活力 (a +b级 )、正常精子形态率、精子顶体完整率、正常染色质率与处理前比较有显著差异 (P <0 .0 1) ;但两种方法分离的精子用于IUI的临床妊娠率无显著差异 (P >0 .0 5 )。　结论　王氏管法和密度梯度离心法处理精子后均获得质量较好的精子 ,但用于IUI后临床妊娠率无明显差异     

Percoll梯度离心前后精子功能指标分析

目的 :通过分析Percoll梯度离心法处理前后精子相关功能指标 ,评价该法在精子体外处理中的作用。　方法 :采用多次曝光摄影技术、瑞 姬氏染色法、低渗肿胀实验 ,观察处理前后精子运动速度、顶体完整率和低渗肿胀率的变化。　结果 :2 5例不育病人精液标本经Percoll梯度离心法处理前后 ,精子运动速度 (2 0 .5 6± 8.13μm/s和 2 5 .18± 8.30 μm/s ,P <0 .0 5 )、顶体完整率 (6 1.2 0 %± 2 1.11%和 70 .36 %± 17.70 % ,P <0 .0 1)和低渗肿胀率 (6 8.2 8%±17.33%和 76 .76 %± 17.10 % ,P <0 .0 5 )均有显著差异。　结论 :精液标本经Percoll梯度离心法处理后 ,各项精子功能指标均较处理前有明显改善 ,该法可广泛应用于辅助生殖医学中。     

Isolate液处理异常精液行宫腔内人工授精的应用评价

为寻求简便、高效的精液处理方法,2002年7月～2003年12月,我院通过对不同程度少弱精子症患者精液采用Earle液上游法和双层Isolate液梯度离心法进行对比研究,现报道如下.     

两种精子体外处理技术的比较

两种精子体外处理技术的比较夏长所朱桂金罗丽兰由于在助孕技术中，需要用人工方法选择功能正常和最具备受精能力的精子，作者以２１例不育男性精液对目前最广泛使用的两层不连续Ｐｅｒｃｏｌ密度梯度离心技术和上游法进行比较，包括处理前后精子密度、活动力、前向活动力...     

三种精液检测工具的比较与评价

本文报告了用Ｍａｃｒｏ精子计数权与Ｍａｋｌｅｒ精子计数板及血细胞计数板分别就精子密度，活动精子百分率和精子运动速度进行了分析，统计结果表明，三种计数板在精子密度计数上有极了的一致性；Ｍａｃｒｏ板和Ｍａｋｌｅｒ板对活动精子百分率和精子运动速度的分析也无显著性差异。作者认为：国产Ｍａｃｒｏ板可以取代血细胞计数板和Ｍａｋｌｅｒ板用于精液分析，在推广普及后将有助于我国精液检查的标准化。     

精子分离两种方法的比较和评价

目的 :探讨王氏管法和精子上游法在精子分离中的应用 ,比较两者的优缺点。　方法 :随机选择 12 7份精液 ,采用 2种方法进行配对处理 ,比较 2种方法分离前后精子活动率、形态、活力和精子顶体形态、精子染色质以及精子膜完整性等参数的变化。　结果 :2种方法处理后的精子活动率、精子活力以及精子形态有显著的差异 (P <0 0 1) ,王氏管法处理后精子顶体完整率、正常染色质率及精子膜完整率亦显示出显著的差异 (P <0 0 1)。　结论 :王氏管法和精子上游法在精子处理中均可获得较好的精子质量 ,但王氏管法则获得更优质的精子 ,且具有方便操作和实用的特点。     

1层和2层梯度离心法分离精子的效果评价

目的:评价1层和2层Percoll密度梯度离心法分离精子的效果。方法:20份精液标本分别行50%1层,90%和45%Percoll2层密度梯度离心分离,处理前后应用SCA(sperm class analyzer)精子质量分析仪分析精子密度、活力和圆形细胞密度。结果:1层法分离后精子回收率为(65.5±12.8)%,明显高于2层法(P<0.01);1层和2层法分离后a级精子百分率明显高于处理前(P<0.05,P<0.01),而1层法分离后a级精子百分率明显低于2层法(P<0.05);1层法分离精子后c级精子百分率明显高于2层法(P<0.05),与处理前相比没有明显差异(P>0.05);2层法分离后a+b级精子百分率明显高于处理前(P<0.05),1层法分离后a+b级精子百分率与处理前相比没有明显差异(P>0.05);1层和2层法分离后圆形细胞密度明显低于处理前(P<0.05,P<0.01),两种方法之间没有差异(P>0.05)。结论:1层法分离后精子回收率较高,精子的活力改变不大;2层法分离后精子回收率较低,精子的活力明显改善;1层和2层法都可以较好地把精子与圆形细胞分开。两种方法各有优势,在精子体外处理中都有着重要的应用价值。     

小鼠睾丸精子细胞的分离与鉴定

目的 :建立一种简单、可有效分离小鼠睾丸精子细胞的方法。　方法 :用组合酶消化成年小鼠睾丸制备睾丸细胞悬液 ,然后经 6层非连续Percoll梯度 (15 %、2 2 %、30 %、4 0 %、5 0 %和 6 0 % )离心法分离 ,通过形态学和流式细胞术鉴定各个Percoll梯度中精子细胞的含量 ,并以伊红Y排斥试验测定细胞的存活率。　结果 :组合酶消化后获得的睾丸细胞悬液中 ,97%以上细胞仍然存活。经Percoll梯度离心 ,共形成 6条细胞带 ,其中 2 2 %梯度中主要为精子细胞 (平均 86 .7% ,P <0 .0 5 ) ,85 .5 %以上细胞存活 ;而 30 %梯度中细胞密度最高 (P <0 .0 5 ) ,含有各级未成熟生精细胞 ,存活细胞超过 92 %。　结论 :采用组合酶消化结合非连续Percoll梯度离心法 ,可从小鼠睾丸中分离到较多较纯的存活精子细胞     

Percoll法处理对人精子运动参数的影响

为观察来源于３种不同精液标本精子运动参数的差异及其Ｐｅｒｃｏｌ处理后的变化，本文对新收集的正常精液精子（Ⅰ组），少精及弱精症精子（Ⅱ组）及正常精液冻融精子（Ⅲ组）各１０份，分别于Ｐｅｒｃｏｌ处理前后用电子计算机精液分析仪（Ｃｏｍｐｕｔｅｒａｓｉｓｔｅｄｓｅｍｅｎａｎａｌｙｓｅｒ）进行运动特性分析，记录ＭＯＴ、ＶＳＬ、ＶＣＬ、ＬＩＮ、ＡＬＨ、及ＶＡＰ６项参数，其结果进行统计学分析。Ｐｅｒｃｏｌ处理后，各组精子６项参数值均较处理前提高，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５～０．００１）。处理前Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ组除ＶＳＬ无显著差异外，余５项参数值均有显著差异。Ⅲ组的ＡＬＨ，ＶＣＬ最高，其它参数Ⅰ组最高。Ｐｅｒｃｏｌ处理后差异值降低。Ｐｅｒｃｏｌ处理后精子运动６项参数值均提高；异常精液精子运动特性与正常精液精子有明显差异；正常精子冷冻复苏后其ＶＣＬ及ＡＬＨ明显提高。     

4种精子计数方法的比较

目的:评价血细胞计数池、Makler计数池、CellVU计数池和计算机辅助精液分析(CASA)系统4种精子计数方法的准确性和精确性。方法:使用两种已知浓度的质控乳胶珠溶液,1份浓度为(35±5)×106/ml,另1份浓度为(18.0±2.5)×106/ml,评价4种计数方法的准确性和精确性,并比较4种方法计数精液的结果。结果:计数乳胶珠时,CellVU计数池的结果最接近已知浓度,分别为(39.70±4.76)、(19.09±2.02)×106/ml,变异系数(CV)值分别为12.80%和10.58%;血细胞计数池和Makler计数池结果均高于已知浓度,前者为(44.84±4.86)×106/ml、(21.04±1.87)×106/ml,CV值分别为10.81%和8.89%,后者为(52.36±7.78)×106/ml、(24.54±3.67)×106/ml,CV值分别为14.86%和14.96%;CASA系统结果低于已知浓度,为(28.53±2.06)、(14.62±0.95)×106/ml,但CV值最低,分别为7.22%和6.50%。计数精液时,CellVU计数池与CASA系统结果差异无显著性(P=0.71),分别为(45.28±34.52)、(41.96±31.93)×106/ml,血细胞计数池和Makler计数池结果差异无显著性(P=0.14),分别为(76.98±59.90)、(63.89±53.84)×106/ml,CellVU计数池、CASA系统与血细胞计数池、Makler计数池结果间差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论:计数精液时,CASA系统与CellVU计数结果差异无显著性。各实验室可选择合适的手工或CASA计数方法。     

Percoll、白蛋白处理前后精子低渗肿胀百分率的比较

本文报告了用低渗肿胀试验观察经Percoll梯度离心和白蛋白柱处理前后的精子低渗肿胀率，结果显示：Percoll、白蛋白柱处理前精子低渗肿胀率为73．8±8．0％。处理后的精子低渗肿胀率分别为84.6±72％、87．7±8.1％．与处理前比较差异均非常显著。提示精液经体外处理后再行人工授精是治疗不育症的一种手段。     

精液体外处理方法的选择

精液体外处理的目的是要达到符合要求的活动精子的密度和活力 ,减少或去除精浆内前列腺素、免疫活性细胞、抗精子抗体、细菌和碎片 ,减少精液的粘稠度 ,促进精子获能 ,改善精子受精能力 ,使能取得丈夫精液人工授精 (ＡＩＨ)的妊娠。但临床报道的受孕率高低不一[1] ,除了精子本身受精功能障碍或卵子异常外 ,精子体外处理方法的选择和效果也是重要的原因之一 ,本文就体外处理方法的选择作一综述。一、精液体外处理方法的选择丈夫精液人工授精的指征至今仍存在争论 ,一般认为性交障碍或异常、精子在女性生殖道内运行障碍、精液异常等均可进行Ａ…     

三种精液检测工具的比较与评价

本文报告了用Macro精子计数板与Makler精子计数板及血细胞计数板分别就精子密度、活动精子百分率和精子运动速度进行了比较分析。统计结果表明，三种计数板在精子密度计数上有极好的一致性，Macro板和Makler板对活动精子百分率和精子运动速度的分析也无显著性差异。作者认为，国产Macro极可以取代血细胞计数板和Makler板用于精液分析。在推广普及后将有助于我国精液检查的标准化。     

计算机和光学显微镜两种方法分析精子形态比较

精子形态分析是评价男性生育能力的重要检测项目[1].自动精子形态分析(automated sperm morphology analysis,ASMA)在发达国家已开始应用,并逐步替代光学显微镜下人工检查方法[2].我国尚处于开发研究阶段,本文采用国产ASMA系统对195例不育男性精子形态进行分析,并与经典光学显微镜下人工分析方法比较,以探讨ASMA系统的临床意义.     

三种精液检测方法的比较和临床评价

精液常规分析是评价男性生育力的一项基本检查，研究表明精液常规对预测男性精子结构和功能完整性有效率可达38．13％。血细胞计数板应用于精液常规分析已有半个多世纪，迄今仍为多数男性病实验室所采用。近年来，随着男科学实验室检测技术的发展，许多新的检测工具陆续应用于临床。