利用FISH技术检测胃癌组织中HER2基因及其与p53蛋白表达的相关性

目的 探讨胃癌组织中HER2基因状态及其与p53蛋白表达的相关性.方法 采用FISH和免疫组织化学技术对67例胃癌组织中HER2基因状态和p53蛋白进行了检测.结果 FISH检测HER2基因扩增率17.9%(12/67),HER2基因无扩增的55例中拷贝数增加和基因扩增者共49.3%(33/67).HER2蛋白表达率43.3%(29/67),在HER2蛋白表达3+、2+者中HER2基因扩增比例分别为3/4和6/9与1+者3/16比较差异有统计学意义(P<0.05).p53蛋白表达率58.2%(39/67),HER2基因扩增率、p53蛋白表达率与胃癌的浸润深度、淋巴结有无转移差异有显著性(P <0.05);与组织学类型、年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05).结论 HER2基因扩增率和基因拷贝数增加与p53蛋白表达率呈正相关,HER2基因状态和p53蛋白表达的联合检测对于胃癌的转移、患者的病情发展及预后评估有一定的参考价值,对指导临床制定个体化治疗方案有重要意义.     

结直肠癌原发灶、门静脉血和肝转移灶K-ras基因突变的研究

目的:观察结直肠癌患者门静脉血液、原发肿瘤组织及相应肝转移灶K-ras基因突变情况,分析三者的一致性,探讨结直肠癌患者门静脉血K-ras基因突变与肝转移关系。方法:实时荧光定量PCR技术和基因测序技术检测59例结直肠癌患者门静脉血液、原发肿瘤组织及15例肝转移灶K-ras基因突变,结合其临床资料分析。结果:59例结直肠癌组织中20例(33.9%)发现K-ras基因突变,18例(30.5%)结直肠癌患者的门静脉血中也发现K-ras基因突变,15例肝转移灶中8例(53.3%)发现K-ras基因突变,与原发癌组织的基因突变率差异不明显(P0.05)。18例门静脉血存在K-ras基因突变者,其相应的肿瘤组织中均发现K-ras突变。结直肠癌组织中无K-ras基因突变者,患者门静脉血未发现基因突变。8例肝转移灶发现K-ras基因突变者门静脉血亦均有K-ras基因突变,7例肝转移灶无K-ras突变者门静脉血也无K-ras突变。原发肿瘤组织、相应门静脉血和5例同时性、2例异时性肝转移灶的K-ras基因突变类型基本一致(即K-ras基因12密码子GGT突变为GAT或GTT),1例异时性肝转移灶K-ras基因突变类型为13密码子GGC突变为GAC。原发癌组织与门静脉血K-ras基因突变一致率为96.6%(57/59),肝转移灶与门静脉血K-ras基因突变情况基本一致,但突变类型有不同。结论:结直肠癌的原发灶、门静脉血及肝转移灶的K-ras基因突变较为一致,原发癌组织和门静脉血均有K-ras基因的突变,预示着肿瘤可能通过血行转移至肝脏。     

荧光原位杂交与免疫组织化学检测胃癌组织中HER-2基因及蛋白表达一致性

目的探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)与免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测胃癌组织中HER-2基因扩增及与C-erbB-2蛋白表达结果的一致性。方法采用FISH和IHC法分别检测50例胃癌组织中HER-2基因扩增和C-erbB-2蛋白表达,并采用SPSS 19.0进行统计学分析。结果 50例胃癌标本进行IHC检测结果 11例为(﹢),9例为(),4例为(),26例为(-);50例胃癌标本进行FISH检测结果 11例为(+),39例为(-);其中,FISH检测阳性标本中IHC检测有2例(﹢),5例(),4例()。IHC检测C-erbB-2蛋白为()的病例FISH检测均为(+),而IHC检测C-erbB-2蛋白()的9位患者中有4例经FISH检测证实HER-2呈(-),5例呈(+)。结论 IHC与FISH检测HER-2状态结果的符合率为95.1%(39/41),具有高度一致性(Kappa系数=0.773,P<0.001)。当IHC检测C-erbB-2蛋白表达为(-)或()时IHC和FISH检测结果有较高符合率,可作为临床是否应用Herceptin治疗的依据,而C-erbB-2蛋白表达为()的病例则必须进一步行HER-2基因扩增检测。     

特异引物双扩增即时PCR与传统测序法检测肠癌、肺癌患者K-ras基因突变的比较

目的 以特异引物双扩增即时PCR技术K-ras检测试剂盒(下称ADx-K-ras即时PCR试剂盒)和Sanger DNA测序法同时检测结直肠癌和肺癌患者K-ras基因,以了解K-ras基因突变频率和突变类型,比较ADx-K-ras即时PCR试剂盒和Sanger DNA测序法用于肿瘤K-ras基因体细胞突变检测的临床价值.方法 收集临床肿瘤病理石蜡切片样品827例,其中肠癌样品583例,肺癌样品244例,提取DNA后,对K-ras基因第12和13密码子进行PCR扩增后,使用ADx-K-ras即时PCR试剂盒进行检测,与此同时,将PCR扩增后的产物进行Sanger DNA测序.两种方法对K-ras基因第12和13密码子的检测结果进一步进行各个突变类型的数目和突变率的统计对比.结果 ADx-K-ras即时PCR试剂盒对827例样品检测都得到了明确的结果,检测成功率为100%,Sanger DNA测序成功检测了677例,成功率为81.9%.583例肠癌样品中ADx-K-ras即时PCR试剂盒检测出突变192例,突变检出率为32.9%,Sanger DNA测序成功的样品533例,检出突变160例,突变检出率为30.0%.244例肺癌样品中ADx-K-ras即时PCR试剂盒检出突变26例,突变检出率为10.7%,Sanger DNA测序成功的样品144例,检出突变12例,突变检出率为8.3%.肠癌中第12密码子第2位的GGT→GAT最常见,占全部突变的35.1%(66/188),其次是第13密码子第2位的GGC→GAC,26.6%(50/188),第12密码子第2位的GGT→GTT,18.6%(35/188),第12密码子第1位的GGT→GCT最少见,1.6%(3/188).肺癌中第12密码子第1位的GGT→GTT最常见,占全部突变的40.9%(9/22),同样第12密码子第1位的GGT→GCT最少见,占全部突变的4.5%(1/22).结论 肠癌中K-ras突变率明显高于肺癌.对于甲醛固定石蜡包埋样品而言,ADx-K-ras即时PCR试剂盒对样品的DNA质量的耐受性较好,检测成功率高于Sanger DNA测序,可替代Sanger DNA测序法成为临床上对肿瘤K-ras基因体细胞突变检测的实用方法.     

208例内镜活检胃癌组织中HER-2蛋白的表达及意义

目的：分析内镜活检胃癌组织中HER-2蛋白的表达及意义。方法应用免疫组织化学( immunohistochemistry, IHC)法检测208例内镜活检胃癌组织中HER-2蛋白表达,采用荧光原位杂交( fluorescence in situ hybridization, FISH)技术检测IHC 2+胃镜活检组织中HER-2基因扩增,并对相应的临床病理特征(性别、年龄、肿瘤发生部位及Lauren分型)进行综合分析。结果208例内镜活检胃癌组织中HER-2 IHC 3+阳性率为7．7%(16/208),IHC 2+为13．5%(28/208),IHC 1+为45．7%(95/208),IHC 0为33．2%(69/208)。 IHC 2+的胃癌活检组织中 FISH 阳性率为14．2%(4/28)。 HER-2总体阳性率为9．6%；HER-2蛋白过表达与患者性别、年龄均无关( P>0．05),与发生部位及Lauren分型密切相关(P<0．05)。结论内镜活检胃癌组织中HER-2蛋白过表达与胃癌发生部位、Lauren分型密切相关。     

食管鳞状细胞癌中HER-2基因扩增和蛋白表达

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中HER-2基因扩增和蛋白表达状况以及与临床病理指标的关系。方法收集96例ESCC组织,采用免疫组化法检测HER-2蛋白表达,采用FISH法检测HER-2基因扩增,并对患者进行随访。结果免疫组化结果显示3例HER-2呈3+,15例2+,11例1+,67例-,3+的病例中2例HER-2基因扩增,15例2+的病例中1例拷贝数6.0。HER-2蛋白过表达与基因扩增存在显著相关性(P0.000 1)。HER-2基因扩增/蛋白过表达与肿瘤组织无坏死(P=0.012)、低临床分期(P=0.040)存在一定相关性。HER-2基因扩增/蛋白过表达患者呈预后好的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论 HER-2在ESCC中有一定的基因扩增率和蛋白过表达率,两者具有相关性,且HER-2基因/蛋白过表达是潜在预后好的指标。     

NQO1基因C609T多态性与乳腺癌分子分型的关系及意义

目的探讨乳腺癌中醌氧化还原酶1(quinone oxido reductase 1,NQO1)基因第6外显子(C609T)多态性的分布,并分析其与乳腺癌分子分型的关系。方法采用高通量Taq Man MGB实时荧光定量PCR技术对248例女性乳腺癌患者外周血中的NQO1基因C609T rs1800566位点进行基因分型检测;应用免疫组化SP法染色及FISH基因扩增技术检测ER、PR、HER-2及Ki-67的表达。结果 248例乳腺癌中,CC基因型占27.42%(68/248)、CT基因型占49.60%(123/248)、TT基因型占22.98%(57/248),符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05);5例HER-2()患者未行FISH检测,予以剔除,其余行FISH检测:Luminal A型占15.2%(37/243)、Luminal B型占51.4%(125/243)、HER-2过表达型占19.8%(48/243)、基底细胞型占13.6%(33/243);携带CT和TT基因型者较携带CC基因型患者的乳腺癌组织中ER、PR阳性率明显升高(P<0.05),HER-2及Ki-67蛋白表达在两组中的差异无统计学意义(P>0.05);NQO1基因C609T多态性在不同分子分型的乳腺癌中的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NQO1基因C609T多态性与乳腺癌的分子分型无关,NQO1基因(CT+TT)在基底细胞型乳腺癌中缺失率较低,其基因多态性可为分子分型中乳腺癌的异质性提供合理解释。     

胃癌中HER-2表达异质性的病理学分析

目的检测胃癌组织中HER-2蛋白表达水平和基因扩增情况,定量分析HER-2表达和分布特征的异质性,探讨其在判读中的影响。方法应用免疫组化检测并观察胃癌组织中HER-2蛋白表达水平及分布特征,应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测HER-2基因扩增情况,并运用欧式距离等进行统计学处理。结果 373例胃癌手术切除标本中HER-2蛋白阳性率(3+)为12.33%,与基因扩增情况显著相关(P0.001)。98例有HER-2蛋白表达的标本总异质性、组内异质性及组间异质性大小差异均有统计学意义(P值分别为0.025、0.001、0.040);组内异质性大小明显低于组间异质性。根据标准判读为HER-2蛋白为2+及3+的病例异质性最大,1+病例最小。HER-2蛋白表达分布较均一的病例近乎为零,而同时具有阴阳脸及花斑样特征的病例最多。根据标准判读HER-2蛋白为0的病例中,有7例具有明显异质性。结论胃癌组织中HER-2蛋白表达的异质性较大且类型多样,判读时首先要增加观察视野,选择至少2个组织块进行HER-2蛋白检测;其次无论HER-2蛋白表达水平高低,均需同时检测基因扩增情况,以确保判读结果的准确性,更好的指导临床用药。     

结直肠癌原发灶与肝转移灶K-ras基因状态的研究

目的观察K-ras基因在结直肠癌原发灶及肝转移灶的突变状态。方法采用富集PCR配对测序法检测46例（男35例,女11例）结直肠癌肝转移患者原发灶及肝转移灶K-ras基因突变状态,其中结肠癌肝转移21例（45.7%）,直肠癌肝转移25例（54.3%）。结果46例中有18例（39.1%）原发灶K-ras基因为突变型,其中17例对应的肝转移灶K-ras基因为突变型,1例对应的肝转移灶K-ras基因为野生型。28例（60.9%）原发灶K-ras基因为野生型者中,26例对应的肝转移灶K-ras基因为野生型,2例对应的肝转移灶K-ras基因为突变型。统计分析表明,原发灶与肝转移灶K-ras基因突变状况差异无统计学意义（P=1.00）。结论转移性结直肠癌原发灶与肝转移灶的K-ras基因突变状态差异无统计学意义。     

进展期乳腺浸润性导管癌HER-2/neu蛋白表达的稳定性分析

目的探讨HER-2/neu蛋白在进展期乳腺浸润性导管癌原发灶和同期腋窝淋巴结转移灶中的表达,指导临床检测标本的选择以及检测报告的分析与应用。方法收集进展期乳腺浸润性导管癌标本100例制备全信息组织芯片,采用免疫组化法检测HER-2/neu蛋白表达,FISH法检测HER-2/neu基因扩增状态,分析其特点、稳定性及其相互关系。结果 69%病例HER-2/neu蛋白呈均质性表达,与同期腋窝淋巴结转移灶相比,原发灶蛋白均质阴性病例一致性最强,均质阳性病例次之,均质不确定病例最差;三者相比差异有统计学意义(P0.000 1)。36例HER-2/neu蛋白不确定和异质性病例的FISH检测显示20例为基因均质扩增,13例为基因均质非扩增,3例为基因异质性,其中31.65%的蛋白阴性位点HER-2/neu基因扩增。结论乳腺浸润性导管癌HER-2/neu蛋白表达在肿瘤原发灶和同期腋窝淋巴结转移灶之间稳定性较高,尤以阴性病例最稳定;免疫组化与FISH同步检测及对比分析可能为乳腺癌患者的治疗及预后提供更为精准的信息;应用全信息组织芯片更能全面检测HER-2/neu蛋白表达及基因状态,并可用于深入分析乳腺癌基因分型及其它相关指标在肿瘤进展中的变化。     

基因芯片技术的研究进展

基因芯片技术的诞生是基于人类基因组计划的成果,它以一种全面、综合、系统的思维方式来研究生命现象。同时,它还是疾病诊断和治疗的重大方法学突破,也是新药开发筛选的新方法。     

液压转基因技术

 外源基因靶向进入动物体内并高效表达是研究基因功能和进行基因治疗的基础。近几年建立的液压转基因技术能简便、快速、安全、高效地将质粒靶向导入动物体内，并能在靶部位高效、稳定表达。本文介绍了液压转基因技术概念、机理及其应用等。     

SSX基因家族研究进展

SSX基因家族由9个成员组成,其中SSX-1、SSX-2和SSX-4经常出现在滑膜肉瘤t(X18)染色体易位的SYT-SSX融合基因中.SSX基因家族可编码肿瘤/睾丸抗原,在睾丸以外的正常组织中,除甲状腺微弱表达外,没有发现它们的存在.HOM-MEL-40是最早用重组cDNA表达文库血清学分析技术确定的由SSX-2基因表达的抗原.近来的研究发现蛋白SSX-241-49是CD8+CTL免疫识别的优势表位,而SSX-237-58和SSX-219-34分别是CD4+T细胞识别相关的HLA-DR及HLA-DP限制表位.日本学者也发现SYT-SSX基因融合蛋白断裂点衍生肽是MHC Ⅰ分子HLA-A24和HLA-B7限制的CTL识别的表位.所有这些研究,证明SSX基因家族编码蛋白是肿瘤免疫治疗有前景的靶标之一.     

基因定量检测方法研究进展

基因定量检测已经成为研究基因组变异以及由于基因重组所引起的相关疾病的重要手段。大片段的基因组的重复和缺失可以引起致病突变。使用PCR和测序等定性检测方法很难探测到杂合状态的缺失和重复,因此探寻高效、可靠、灵敏的基因定量检测方法是当务之急。在过去的几年中已经相继出现了一些自动高效的技术方法。现在可用的基因定量方法大致可以分成3类:DNA印迹技术,细胞遗传学方法和以PCR扩增为基础的定量。本文对基因定量的最新进展作一综述,探讨其优缺点以期对定量研究方法的选择有所帮助。     

Combination gene therapy using VEGF-shRNA and fusion suicide gene yCDglyTK inhibits gastric carcinoma growth

Clinical trials of suicide gene therapy have achieved limited success, which suggests a need for improvement. Angiogenesis plays a crucial role in the progression of cancers, which is greatly regulated by vascular endothelial growth factor (VEGF).The current study was designed to evaluate the anti-tumor effects of VEGF siRNA in combination with fusion suicide gene yCDglyTK. Introduction of a VEGF-targeted small hairpin RNA (shVEGF) to CDTK/5-FC system could induce cell apoptosis more effectively and decrease micro vessel density in xenograft tissue, thus resulted in a significant tumor growth delay in SGC7901 xenografts. These findings for the first time suggest the potential of combination gene therapy using suicide gene therapy and anti-angiogenesis gene therapy.     

心血管疾病基因治疗进展

载体是基因治疗的一个限速因素。本文主要介绍了近两年来基因运载体系，基因转移方式，新的基因治疗策略的进展以及它们在心血管中的应用。     

过表达Gnb2l1基因对体外节律基因mPer1表达的影响

目的:评价过表达Gnb2l1基因对节律基因mPer1表达的影响。方法:用PMA刺激NIH3T3细胞,使节律基因稳定表达后,用脂质体介导方法将质粒pcDNA3.1/Gnb2l1转染至NIH3T3细胞,并以空载体质粒pcDNA3.1/vector为对照。利用RT-PCR技术检测不同时间点Gnb2l1 mPer1在NIH3T3细胞中的表达水平,研究过表达Gnb2l1基因对mPer1基因表达的影响。结果:采用RT-PCR技术显示成功转染,实验组比对照组Gnb2l1表达量明显增高(p0.05)。并且发现实验组的mPer1表达量比对照组明显增高,但是经过余弦分析发现两组相比mPer1的表达周期无明显改变。结论:成功过表达Gnb2l1基因使节律基因mPer1表达量增加,中值增高(p=0.038)。     

基因枪转导K-RAS反义基因对胰腺癌细胞(K-RAS P21)蛋白表达的影响

目的观察基因枪转导K-RAS突变特异性反义基因对胰腺癌细胞K-RAS P21蛋白的影响。方法利用基因枪技术,将反义基因转导入宿主细胞,通过免疫细胞化学和Western blot方法,观察K-RAS突变特异性反义基因转导后AsPC-1、MiaPaCa-2和BxPC-3三种人胰腺癌细胞系K-RAS P21蛋白的变化。结果转导K-RAS突变特异性反义基因后,AsPC-1和MiaPaCa-2胰腺癌细胞的K-RAS P21蛋白表达明显降低;BxPC-3胰腺癌细胞的K-RAS P21蛋白表达无明显变化。结论突变特异性K-RAS反义基因经基因枪有效转导后,可用于胰腺癌的治疗。     

斑驳病的一种新的KIT基因突变

目的 研究1个斑驳病家系先证者及其母亲的基因突变情况。方法 经组织病理、电镜检查结合典型的临床特征确立斑驳病的诊断。采用聚合酶链反应及DNA直接测序的方法对1个斑驳病家系进行基因突变检测。结果 家系中先证者存在KIT基因第1833位G〉A，导致V6041。100名健康对照者及其它家庭成员不存在此突变。结论 V6041是引起该家系临床表型的原因。     

基因枪转导K-RLIS反义基因对胰腺癌细胞（K-PLASP21）蛋白表达的影响

目的观察基因枪转导K-RAS突变特异性反义基因对胰腺癌细胞K-RASP21蛋白的影响。方法利用基因枪技术，将反义基因转导入宿主细胞，通过免疫细胞化学和Westernblot方法，观察K-RAS突变特异性反义基因转导后ASPC-1、MiaPaCa-2和BxPC-3三种人胰腺癌细胞系K-RASP21蛋白的变化。结果转导K-RAS突变特异性反义基因后，AsPC-1和MiaPaCa-2胰腺癌细胞的K-RASP21蛋白表达明显降低；BxPC-3胰腺癌细胞的K-RASP21蛋白表达无明显变化。结论突变特异性K-RAS反义基因经基因枪有效转导后，可用于胰腺癌的治疗。