细胞凋亡与线粒体

细胞凋亡过程一般经过诱导—调控和执行—效应三个阶段。线粒体不仅对细胞凋亡的启动和调控具有重要意义,而且是细胞凋亡执行的关键元件。死亡信号诱使线粒体PT开启导致凋亡相关活性物质的释放,并继而对caspase酶系激活是细胞凋亡实现的最基本的生物化学途径。Bcl2和BclXl通过对线粒体的作用阻抑细胞凋亡的发生。细胞凋亡线粒体机制的揭示对于认识细胞死亡的生物学本质,探索对细胞死亡的调控提供了重要启示     

重构型Caspase-6对HeLa细胞凋亡的诱导作用

目的 将人Caspase-6基因大小亚基顺序颠倒，表达为重构型Caspase-6分子，探讨其对细胞凋亡的促进作用。方法 RT－PCR获取人Caspase-6基因，测序判断正确后，通过重组PCR的方法构建大小亚基顺序颠倒的重构型Caspase-6（RevCasp6)基因。将其克隆入含绿色荧光蛋白（GFP）蛋白的真核表达载体pIRES2-EGFP中，转染人宫颈癌细胞系HeLa，在荧光显微镜下观察细胞形态的变化，用电子显微镜进一步观察细胞的凋亡特征。结果 获得了人Caspase-6基因，并成功地构建了大小亚基顺序颠倒的Rev-Casp6基因。以构建的RevCasp6真核表达载体，转染HeLa细胞后，荧光显微镜观察到细胞生长不良，细胞核结构破坏和细胞死亡。电子显微镜观察显示，转染了RevCasp6基因的细胞呈凋亡的典型特征。结论 RevCasp6基因具有诱导HeLa细胞凋亡的作用。     

半夏提取物调节Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达诱导白血病细胞凋亡

背景:温热中药半夏拥有可人工广泛种植、易提纯等优势,其提取物可抑制慢性髓系白血病、急性髓系白血病、急性T淋巴白血病细胞增殖,但是作用机制尚不明确。目的:探讨中药半夏提取物对3种白血病细胞凋亡的作用机制。方法:慢性髓系白血病细胞株(K562)、急性髓系白血病M3细胞株(HL-60)、急性T淋巴白血病细胞株(C8166)在半夏提取物5种浓度梯度中分别作用24,48,72 h,采用CCK-8法评估3种白血病细胞增殖情况并从中筛选出有明显抑制作用的中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度。然后进一步采用流式细胞术检测3种白血病细胞早期凋亡发生率,采用RT-PCR与Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白水平。结果与结论:①5种质量浓度的半夏提取物作用3种白血病细胞具有细胞增殖抑制作用,中(300 mg/L)、高(500 mg/L)质量浓度半夏提取物增殖抑制率较高,与低质量浓度组(100 mg/L)、对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);②中、高质量浓度半夏提取物可诱导3种白血病细胞早期凋亡;③中、高质量浓度半夏提取物可以下调3种白血病细胞的Bcl-2 mRNA表达,上调Bax及Caspase-3 mRNA表达(P<0.05;P<0.01);④中、高质量浓度半夏提取物作用72 h后,K562、C8166细胞的Bcl-2蛋白条带明显减弱,而HL-60细胞无减弱变化;Bax及Caspase-3蛋白条带明显增强;⑤结果表明,半夏提取物能有效抑制髓系白血病、T淋巴细胞白血病细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与其调节Bax/Bcl-2、Caspase-3蛋白表达有关。     

BCL-2家族与线粒体对细胞凋亡的调控

线粒体是细胞凋亡调控的中心环节, 它通过释放膜间隙中的促凋亡蛋白(细胞色素C、Smac/DIABLO、AIF和en donucleaseG等)来起作用。线粒体膜间隙 (IMS)蛋白的释放是由BCL-2家族蛋白调控的。BCL-2家族蛋白能够诱导线粒体通透性转变孔道 (PT孔道 )的开放, 导致细胞凋亡。关于PT孔道开启的机制是近年来研究的一个热点。本文综述了近年来有关线粒体与BCL-2家族对细胞凋亡调控的研究进展。     

Puma/Bbc3在细胞凋亡中的作用及其机制

Puma/Bbc3是新发现的Bcl 2家族BH3 only亚家族成员 ,在 p5 3依赖性和p5 3非依赖性细胞凋亡中都起到重要作用 ,Puma/Bbc3、Bcl 2 /Bcl xL、Bax/Bak之间的相互作用 ,线粒体膜通透性的改变 ,促凋亡分子的释放及Caspase级联效应是Puma/Bbc3凋亡效应的分子基础。     

实验性隐睾诱导小鼠生精细胞凋亡的研究

目的 研究手术隐睾所致成年小鼠生殖细胞凋亡及相关调节因子ｂｃｌ－２、ｂａｘ蛋白在曲细精管中的定位、变化。方法 以末端脱氧核糖核酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测凋亡的生殖细胞,生物素－抗生物素蛋白ＤＣＳ体系间接免疫荧光法检测Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ蛋白在曲细精管中的定位、分布。结果 隐睾术后３ｄ,手术侧睾丸重量及细胞凋亡数量与对侧地无明显区别。而６￣１５ｄ,睾丸重量明显减轻,凋亡细胞     

透骨草提取物诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其相关机制研究

目的:探讨透骨草提取物诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其相关机制。方法:荧光显微镜观察Hela细胞形态,透射电镜观察Hela细胞超微结构,流式细胞术检测Hela细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达水平。结果:100μg/ml透骨草提取物处理的Hela细胞后,荧光显微镜显示Hela细胞皱缩,细胞核浓缩呈新月状边集。透射电镜可见Hella细胞表面突起和微绒毛减少,核断裂、染色质凝聚且边缘化,有"出芽"现象。流式细胞术显示透骨草提取物处理的Hela细胞凋亡率为(25.90±1.13)%,明显高于对照组(P<0.01)。Western blot结果显示透骨草提取物处理的Hela细胞Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达达明显低于与对照组(P<0.05)。结论:透骨草提取物可诱导Hela细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达有关。     

Caspases和Caspases抑制剂控制细胞凋亡的分子机制

目前关于细胞凋亡的概念、基因克隆、基因敲剔、基因调控、信号传导及在疾病发生中的作用得到较为深入的研究。在哺乳动物中发现至少有12种Caspases家族成员,它们具有两种酶催化活性,参与打靶、激活及调控起着级联反应,在执行和控制细胞凋亡的过程中的过程中发挥着重要作用。已发现Caspases抑制剂对控制Caspases级联反应具有重要价值,将为细胞凋亡的分子机制和控制疾病的认识提供了新的思路。     

细胞凋亡的免疫学诱导及其调控机制

细胞凋亡是受遗传控制的单个细胞自灭过程，是机体维持稳态的重要机制之一。近来发现免疫系统中的许多细胞因子，抗原及受体和细胞成份均与细胞凋亡的诱导有关。     

CIK细胞对A549肺癌细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用的形态学研究

目的 研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对A549肺癌细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用.方法 应用MTT法检测CIK细胞对肺癌细胞株的抗增殖作用的影响及细胞毒活性;通过倒置显微镜、HE染色、AO/EB荧光染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变.结果 MTT比色法表明随着CIK细胞与肺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强(P<0.01).CIK细胞作用于肺癌细胞24 h后,形态学观察肺癌细胞发生凋亡或坏死.结论 体外制备的CIK细胞对肺癌A549细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用.     

叶酸拮抗同型半胱氨酸诱导的内皮细胞凋亡的作用机制

目的： 明确同型半胱氨酸（Hcy）对内皮细胞凋亡的影响以及叶酸的拮抗作用，阐明Bax和Bcl-2在同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及叶酸拮抗中的作用。方法: 用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后，应用末端转移标记技术（TUNEL）以及Annexin V/PI染色加流式细胞术了解细胞凋亡状态，免疫组化方法检测Bax、Bcl-2的表达。结果: Hcy能促进细胞凋亡，叶酸具有拮抗作用。Hcy能促进细胞Bax、Bcl-2的表达，上调Bax/Bcl-2比值，叶酸能减少细胞表达Bax及Bcl-2，下调Bax/Bcl-2比值。结论: Bax、Bcl-2参与了Hcy诱导内皮细胞凋亡以及叶酸拮抗作用的过程。     

重组人可溶性TRAIL分子诱导白血病细胞株凋亡的研究

比较重组人可溶性TRAIL(rhsTRAIL)诱导Jurkat细胞株、K562细胞株以及HL-60细胞株凋亡之间的差异,探讨这些差异与细胞表面TRAIL受体(DR4、DR5、DcR1和DcR2)表达量的关系。不同浓度的rhsTRAIL分别处理Jurkat细胞、K562细胞和HL-60细胞12 h、24 h和48 h后,用流式细胞仪检测经碘化丙啶(PI)染色后的细胞凋亡情况;用RT-PCR方法检测细胞表面受体DR4、DR5、DcR1、DcR2的表达。培养12 h、24 h、48 h后,不同浓度rhsTRAIL诱导Jurkat细胞株的凋亡率均明显高于对照组,且具有剂量依赖性和时间依赖性;但K562细胞株和HL-60细胞株未见明显的凋亡发生。RT-PCR结果显示,培养12 h、24 h、48 h后,Jurkat细胞株表面DR4的表达随时间的延长和rhsTRAIL浓度的升高而升高,而DR5、DcR1和DcR2的表达未检出;K562和HL-60细胞株表面DR4的表达没有明显变化,而且DR5、DcR1和DcR2的表达也未检出。rhsTRAIL诱导Jurkat细胞株的凋亡具有剂量依赖性和时间依赖性,且与其细胞表面DR4的表达呈正相关;在一定的浓度条件下,rhsTRAIL未能诱导K 562和HL-60细胞株发生明显凋亡,且其细胞表面DR4的表达也未见明显变化。这些结果提示,应用TRAIL治疗不同种类白血病时,应注意它的使用剂量和适应范围。     

不同IL-15基因转染对NCI-H446细胞诱导PBMC增殖和杀伤肿瘤细胞的影响

目的 研究不同IL-15基因转染对NCI-H446细胞诱导外周血单个核细胞(PBMC)增殖和杀伤肿瘤细胞的影响.方法 野生型NCI-H446细胞(Cw)和被3种IL-15基因分别转染的3种NCI-H446细胞(Cmp:被IL-15成熟肽基因转染;Cp:被原型IL-15基因转染;Csp:被信号肽换为IL-2信号肽的改型IL-15基因转染),用丝裂霉素(M)处理后(分别名为MCw、MCmp、MCp和MCsp)作为刺激细胞刺激健康志愿者的PBMC.对这些被刺激的PBMC,分别名为MCw-PBMC、MCmp-PBMC、MCp-PBMC和MC-sp-PBMC.台盼蓝拒染法计数细胞数,流式细胞术测定CD4 细胞和CD8 细胞百分率.在MCmp-PBMC,MCp-PBMC和MCsp-PBMC中,选择其细胞数和CD4 细胞和/或CD8 细胞百分率统计学上明显高于MCw-PBMC的作为效应细胞,MTT法测定它们对Cw的杀伤.结果 与MCw-PBMC相比,MCp-PBMC在细胞数、CD4 细胞和CD8 细胞百分率及对Cw的杀伤上,均显著提高(P＜0.05).结论 原型IL-15基因转染能提高NCI-H446细胞诱导PBMC增殖和杀伤野生型NCI-H446细胞的能力.     

Molecular and immunohistochemical characterization of B-cell lymphoma-2-negative follicular lymphomas

Aberrant expression of the antiapoptotic protein BCL (B-cell lymphoma)-2 in neoplastic germinal centers is one of the diagnostic hallmarks of follicular lymphoma. If BCL-2 cannot be detected by immunohistochemistry, the distinction between florid follicular hyperplasia and follicular lymphoma might become a diagnostic challenge. Most of those cases also lack the typical t(14;18), and the underlying pathophysiologic conditions of follicular lymphoma that lack BCL-2 protein expression are largely unknown. Here, we collected 18 BCL-2-negative follicular lymphoma cases from 5 different institutions. After restaining, 9 cases proved to be truly BCL-2 negative (6 follicular lymphoma grade 2, 2 follicular lymphoma grade 3a, and 1 follicular lymphoma grade 3b). In 4 additional cases, BCL-2 was very faint (all grade 2). Of the 9 BCL-2-negative follicular lymphoma cases, 2 were negative for CD10 (22%); all showed expression of BCL-6. Apoptotic level as determined by caspase 3 was the lowest in the BCL-2-positive follicular lymphoma group (15 ± 8 mm(2)), the highest in the normal/reactive group (n = 7, 60 ± 12 mm(2)) and very similar in the BCL-2 low follicular lymphoma and BCL-2-negative follicular lymphoma groups (25 ± 13 and 33 ± 19 mm(2), respectively), assuming an intermediate position between reactive follicles and BCL-2-positive neoplastic follicles (P < .001 [Kruskal-Wallis]). Also noted was a difference in proliferation fractions between the BCL-2-positive follicular lymphoma (27% ± 15%), the BCL-2 low follicular lymphoma (30% ± 20%) and the BCL-2-negative follicular lymphoma groups (30% ± 22%). Regarding the network of follicular dendritic cells, 8 (89%) of 9 cases from the BCL-2-negative subgroup showed disrupted, weakly developed networks, whereas all of the follicular lymphoma BCL-2 low-expression cases showed a well-defined and strongly developed follicular dendritic cell network. Among BCL-2-negative follicular lymphoma, BCL-2 and BCL-6 breaks were found in 1 case each, whereas in the follicular lymphoma BCL-2 low group, only 1 case with a BCL-6 break was recorded. No statistically significant result was achieved upon assessment of BCL-2α or BCL-2β RNA or the ratio of α/β isolated by real-time-polymerase chain reaction. Taken together, BCL-2-negative follicular lymphoma did not show a BCL-2 break on the genetic level and showed both increased apoptotic and proliferation rates compared with BCL-2-positive follicular lymphoma. In our series, BCL-6 breaks were infrequent in BCL-2-negative follicular lymphoma.     

17-AAG阻滞HCT-15细胞周期并诱导其凋亡

目的:观察17-AAG对人结直肠癌HCT-15细胞株凋亡和周期及相关分子机制的影响。方法:体外培养HCT-15细胞,分别给予不同剂量的17-AAG及不同作用时间,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞的活力;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期的变化;RTPCR和Western blotting法检测凋亡和周期相关因子的表达水平。结果:1.25~20 mg/L浓度的17-AAG作用24 h和48 h后对HCT-15细胞有显著抑制作用,且有明显的时间、剂量依赖性;0.425、0.85和1.7 mg/L浓度的17-AAG作用48 h后,各组细胞发生G1期阻滞及明显凋亡,STAT3 mRNA和蛋白的表达水平明显下降,凋亡和周期相关因子cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平下调,Cyt C、caspase 9及caspase 3 mRNA和蛋白表达水平上调。结论:17-AAG对人结直肠癌细胞的活力具有明显抑制作用,使细胞周期发生G1期阻滞和细胞凋亡。17-AAG可能通过阻断STAT3通路下调cyclin D1而发生G1期阻滞;17-AAG可能通过阻断STAT3通路启动线粒体凋亡通路来诱导细胞凋亡。     

抗人DR5单克隆抗体诱导HL-60细胞凋亡机制

探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)诱导白血病细胞系HL-60细胞凋亡的可能机制。MTT法检测mDRA-6对HL-60细胞的生长增殖的影响,以及Caspase 8、10、3抑制剂对mDRA-6抑制HL-60细胞生长增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳检测HL-60细胞DNA片断化降解;Western blot检测mDRA-6对HL-60细胞Caspase 8、10、3的激活改变。结果发现,mDRA-6呈时间、浓度依赖性地抑制HL-60细胞的生长增殖,10 mg/L的mDRA-6作用HL-60细胞6 h、8 h和10h,细胞增殖抑制率分别为23.96%、44.10%和50.28%;琼脂糖凝胶电泳显示,10 mg/L的mDRA-6作用6 h,HL-60细胞呈现凋亡细胞特有的DNA梯形条带;Western blot检测结果发现,mDRA-6作用HL 60细胞不同时间,Caspase 8均只有酶原条带出现,无激活片段产生,而Caspase 10和Caspase 3显示明显裂解片段产生,并随mDRA-6作用时间延长而增多;预先使用15μmol/L的Caspase 10及Caspase 3抑制剂孵育细胞1 h,能够使mDRA-6对HL-60细胞的生长抑制率分别降低64.15%(t=10.13、P<0.01)和53.69(t=8.93、P<0.01)%,而预先使用15μmol/L的Caspase 8抑制剂孵育细胞1 h,mDRA-6对HL-60细胞的生长抑制率仅降低4.40%(t=0.52、P>0.05)。以上实验结果提示,mDRA-6通过激活Caspase 10启动凋亡信号分子,诱导白血病HL-60细胞凋亡。     

胰岛素对滋养层细胞凋亡的调节作用及机制

目的 :探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制。方法 :将培养的妊娠早期滋养层细胞 ,分为正常对照组(细胞 +培养液 )、H2 O2 组 (细胞 +培养液 +H2 O2 )和胰岛素 +H2 O2 组 (细胞 +H2 O2 +胰岛素 )。采用透射电镜观察及流式细胞术 ,观察H2 O2 诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2 O2 诱导的细胞凋亡的抑制作用。并检测胰岛素对滋养细胞caspase 3的活性及Bcl 2蛋白表达的影响。结果 :H2 O2 可诱导培养的滋养细胞凋亡 ,透射电镜下可见特征性的细胞核改变。胰岛素可显著抑制H2 O2 诱导的细胞凋亡 ,流式细胞仪检测其凋亡率较H2 O2 组显著下降 (P <0 .0 1)。H2 O2 组滋养细胞中caspase 3的活性较对照组显著增高 (P <0 .0 1) ,而Bcl 2蛋白的表达则较对照组显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :胰岛素可明显抑制H2 O2诱导的滋养细胞凋亡 ,其机制可能与降低caspase 3的活性和促进Bcl 2蛋白的表达有关     

细胞增殖和凋亡失调在肺曲菌病发病中的意义

目的 观察细胞增殖与凋亡在肺曲菌病中的表达特征,探讨其在发病中的意义。方法 选用成人正常肺组织10例(对照组1)、肺曲菌病周围相对正常肺组织20例（对照组2）及肺曲菌病20例(病例组),采用免疫组化法检测KI-67、BCL-2和BAX的表达。结果 肺曲菌病病变区支气管上皮细胞KI-67和BAX的表达明显强于两对照组（P<0.01）;BCL-2的表达明显弱于两对照组（P<0.05）;BAX/BCL-2的比值明显高于两对照组（P<0.01）;肺曲菌病3种亚型中,BAX/BCL-2的比值在IPA中显著高于ABPA和曲菌球（P<0.05）。结论 细胞增殖和凋亡的失调在肺曲菌病发生发展中起重要的作用。