脂肪来源间充质干细胞研究进展

间充质干细胞最早发现于骨髓中,脂肪来源的间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性和分化潜能,并且具有很多优势,有望成为组织工程和基因治疗的新型靶细胞,具有广阔的应用前景.本文综述了脂肪来源间充质干细胞的分离培养、生物学特性及其应用等进展,并对其研究前景进行了探讨.     

1型糖尿病脂肪来源间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的 探究1型糖尿病小鼠脂肪来源间充质干细胞的成骨分化能力。方法 10只21～28日龄C57BL/6雄鼠随机分为两组,糖尿病组小鼠（n=5）腹腔注射链脲佐菌素溶液（STZ）诱导小鼠1型糖尿病（T1DM）模型,正常组小鼠（n=5）注射柠檬酸钠缓冲液作为对照,连续注射5 d,1周后监测小鼠随机血糖,连续测量3 d。分别提取两组小鼠腹股沟和性腺脂肪,分离培养脂肪间充质干细胞（ADSC）,通过细胞形态、流式细胞术检测细胞表型,体外多向诱导分化鉴定细胞特性。为进一步比较两组细胞成骨分化能力的差异,取第3代（P3代）两组ADSC进行体外成骨诱导分化,分别在诱导的第3、5、7天进行碱性磷酸酶（ALP）染色,实时荧光定量PCR(qPCR)和Western印迹检测细胞成骨分化关键转录因子表达。结果 T1DM组小鼠连续3 d随机血糖≥16.7 mmol/L,并出现多饮、多食、多尿及体重增长缓慢的典型表现;两组小鼠脂肪组织来源的培养细胞均呈梭形纤维样、贴壁漩涡状生长;流式细胞术结果显示,两组细胞高表达CD29、CD90,低表达或不表达CD11b、CD34、CD45、MHC-Ⅱ;体外诱导分化结果显示,二者均具...     

真皮来源间充质干细胞的分离培养及成神经分化的研究

目的：研究真皮来源间充质干细胞的分离培养方法及其向神经细胞分化的条件及可行性。方法：取大鼠真皮组织，采用贴壁传代培养筛选法，分离培养真皮间充质干细胞，流式细胞术检测细胞周期，经β-巯基乙醇诱导，倒置显微镜下观察细胞形态变化，免疫细胞化学方法对分化细胞进行鉴定。结果：分离的早期贴壁的真皮来源间充质干细胞经过连续传代培养至第4代，细胞形态较为均一，86％的细胞处于G0／G1期，细胞表面波形蛋白表达阳性，但因子Ⅷ和角蛋白表达阴性。经β-巯基乙醇诱导，真皮间充质干细胞可向神经细胞分化，细胞突起增多，具有神经元的形态学特征，分化后的细胞表达神经元标志物——神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经微丝（NF-200）。结论：大鼠真皮组织中存在着成体多能干细胞，一定条件下可分化为神经元。提示真皮可能是成体多能干细胞的又—来源，有望在神经组织修复和再生中发挥作用。     

半月板碎片来源间充质干细胞样细胞的分离培养及多向分化潜能

目的:探讨半月板碎片来源间充质干细胞(MSC)样细胞的分离培养和多向分化潜能。方法:通过酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞,体外培养至第3代,显微镜下观察其形态和生长状态。取第3代细胞并对其进行向成骨、成脂和成软骨诱导分化。结果:经酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞4~6天可见少量的长梭形贴壁,10~14天细胞成簇生长,克隆集落形成。第3代细胞形态较均一,生长增殖良好。成骨诱导14天后ALP和茜素红染色阳性,有矿化结节形成。成脂诱导14天后油红O染色阳性提示细胞内有脂滴形成。采用细胞微团无血清成软骨诱导21天后甲苯胺蓝染色呈阳性,细胞外有蛋白多糖形成;免疫组织化学染色示特异软骨基质Ⅱ型胶原表达阳性。结论:采用混合胶原酶消化的方法分离获得的半月板碎片来源的细胞贴壁生长,呈典型的长梭形的MSC样细胞形态,在体外适当的诱导条件下具有分化成骨、成脂、成软骨的潜能,有望成为半月板再生的种子细胞来源。     

骨髓间充质干细胞研究进展

骨髓间充质干细胞是干细胞领域的研究热点之一。虽然近几年来有关间充质干细胞的研究已取得了很大进展,但仍有很多问题有待进一步解决。本文主要对间充质干细胞的生物学特性、以及免疫耐受性、分化和促修复、间充质干细胞的标记等问题进行综述。     

间充质干细胞向心肌细胞分化的研究进展

间充质干细胞是用于组织工程和细胞治疗的重要细胞,它可向成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、神经细胞等分化.生物化学因素和物理因素均对间充质干细胞向心肌细胞分化有影响.间充质干细胞向心肌细胞分化的研究主要集中在生物化学因素上.本文综述了在体外环境下生物化学因素以及力学和电磁刺激对间充质干细胞向心肌细胞分化影响的研究进展.     

不同来源的间充质干细胞生物学特性差异研究进展

各种来源的问充质干细胞（MSC）除满足国际细胞治疗协会（ISCT）规定的要求外,在表面标记物、增殖、分化、迁移、生物学功能方面有其差异性,骨髓MSC研究最早,最为透彻,但其增殖效率低,易被污染等劣势限制了其应用;脂肪、脐血、脐带、羊水、胎盘来源的MSC取材方便,传代能力强,免疫反应低,被污染的概率较小,无伦理学限制等优点逐渐被人们重视,且利用不同MSC的优劣势将其应用于不同的领域。笔者通过查阅国内外相关文献,从细胞表面标记物,增殖、分化、迁移能力,以及功能方面进行分析总结,初步探讨了各种来源的间充质干细胞的优缺点．为今后临床选取合适弹摁的种子细晌提供帮助。     

牛间充质干细胞及其应用研究进展

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)是一种成体多能干细胞,其自我更新、长时间增殖、免疫调节和多谱系分化等特性为人类和动物诸多疾病的治疗开辟了新的道路.在各种干细胞类型中,间充质干细胞由于来源广泛、易于获取以及在特定培养条件下仍然具有分化为各胚层细胞的能力而受到广泛关注.近年来,家畜特别是牛的间充质干细胞研究取得了进展,对牛间充质干细胞的来源、培养条件以及实际应用都有了长足进展.但是,依旧存在间充质干细胞来源狭窄,传代次数有限,分化潜能有争议,实验数据不足导致相关机制不明晰等问题.提出了拓展充质干细胞来源、优化培养条件、增加资助力度和临床试验等建议.旨在为以后相关研究提供帮助..     

人胚胎骨髓间充质干细胞在大鼠体内分化为肝细胞的研究

目的：观察人胚胎骨髓间充质干细胞(MSC)在受体大鼠体内的分化演变，研究人胚胎骨髓间充质干细胞在活体大鼠体内转化为人肝细胞的可行性。方法：将人胚胎MSC移植到肝损伤合并自身肝细胞再生抑制大鼠的脾脏。术后分时段取脾脏进行免疫组化染色，了解人白蛋白(ALB)、人角蛋白(CK8)、人CK18、人CK19的表达情况。结果：人胚胎MSC移植后10d大鼠脾脏的人CK8、人CK18、人CK19免疫组化染色可见阳性细胞；移植后15d大鼠脾脏组织内人ALB免疫组化染色可见阳性细胞。结论：人胚胎MSC能够在自身肝细胞再生抑制的肝损伤大鼠脾脏内分化为肝细胞。     

脐血间充质干细胞的培养及诱导分化的研究进展

骨髓是间充质干细胞的丰富来源,但是关于脐血及循环血中是否存在MSC,在研究初期一直存在争议。2000年,Erices等首次报导了从脐带血中分离培养出低密度类似骨髓MSCs的贴壁细胞,其表达SH1,SH2等间充质细胞标志抗原,并可分化成为成骨细胞和脂肪细胞,其免疫表形和功能特点与骨髓来源的MSC极为相似,同时发现早产儿脐血中间充质干细胞的含量要较足月儿丰富。有研究者证明,脐带血中含有间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）,并且具有多向分化潜能和很高的可塑性。     

自成人脂肪组织分离与培养间充质干细胞的实验研究

目的 探索成人脂肪组织源性间充质干细胞(ADMSCs)的分离、体外培养,为其将来应用于临床心肌梗死的治疗提供实验依据。方法 无菌条件下获取腹部手术病人大网膜脂肪组织,胰酶消化30min,离心,在含15％胎牛血清的DMEM中,37℃、5％CO2饱和湿度下常规培养,对第2代细胞进行免疫组织化学染色,鉴定其表面分子CD44、HLA-DR及Ⅷ因子。结果 成人脂肪组织中含有大量间充质干细胞,免疫化学染色鉴定除CD44阳性间充质干细胞外,所分离细胞同时含有部分HLA-DR阳性成纤维细胞和Ⅷ因子阳性的血管内皮细胞。结论 建立了一种自人体脂肪组织分离、培养ADMSCs经济简便的方法,为其应用于临床提供了实验依据。     

脂肪来源干细胞的多向分化性及其在组织工程中的应用

近期研究表明间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）可以从脂肪组织获得,这类细胞被称为脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）。ADSCs与骨髓来源MSC具有相似的多向分化性,并且存在容易获取、取材创伤小和细胞获得量大等优点,因此有望成为组织工程中另一种很有前景的种子细胞来源。本文介绍了ADSCs多向分化性的最新研究进展,以及在各种组织工程中的应用情况。     

骨髓和脂肪来源的间充质干细胞治疗2型糖尿病的疗效比较

目的 比较大鼠骨髓和脂肪来源的间充质干细胞在2型糖尿病中的疗效.方法 30只成模2型糖尿病大鼠随机分为3组:糖尿病组(T2DM,n=10)、骨髓间充质干细胞治疗组(BMSC,n=10)及脂肪间充质干细胞治疗组(ADSC,n=10),同期正常大鼠(n=10)作为对照组.干细胞分别从正常大鼠骨髓及腹股沟脂肪组织分离培养获得.制模后和细胞注射后每日检测各组血糖.细胞注射后第7天行空腹糖耐量和胰岛素敏感性实验.胰腺组织行胰岛素/胰高血糖素免疫荧光染色.结果 与T2DM组比较,干细胞注射7d后2型糖尿病大鼠的随机血糖持续缓慢下降,糖耐量及胰岛素敏感性均得以改善,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)降低,胰岛内β细胞数量增加(P＜0.05),但是两种类型的间充质干细胞的疗效并无显著差异.结论 骨髓和脂肪来源的间充质干细胞在2型糖尿病大鼠中的疗效相当,脂肪间充质干细胞可作为2型糖尿病治疗的理想细胞.     

不同途径移植脂肪间充质干细胞在肝内定居数量的比较

目的：探讨大鼠脂肪间充质干细胞（adipose tissue-derived mesenchymal stemcells，ADMSCs），在同种异体不同途径移植后的肝内定居情况。方法：用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记从大鼠脂肪中分离并培养至的第三代脂肪间充质干细胞，分别从尾静脉和门静脉注入同种异体、由CCl4造成肝损伤的大鼠体内。移植2w后分别取肝组织，通过激光共聚焦显微镜观察两种移植途径对大鼠脂肪间充质干细胞在肝内定居的影响。结果：在两组大鼠的中央静脉及肝汇管区均可见BrdU标记的细胞；BrdU标记阳性的细胞在门静脉移植组600倍镜下每张切片平均为127．5个，在尾静脉移植组平均120．7个（P〉0．05）。结论：脂肪间充质干细胞在肝脏定居的细胞数量与移植途径无关。     

基因修饰人骨髓间充质干细胞作为骨组织工程种子细胞异种移植的实验研究

目的观察人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4-免疫球蛋白融合蛋白(hCTLA4-Ig)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)作为种子细胞异种移植到F344大鼠体内是否成骨,探索获得骨组织工程异基因种子细胞的一种方法。方法应用含有目的基因hCTLA4-Ig和增强绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒感染第1代hMSCs,应用G418筛选出抗性细胞群(hMSCs-CTLA4);用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法分别检测hMSCs-CTLA4中hCTLA4-IgmRNA和蛋白质表达。用荧光激活细胞分选仪(FACS)检测hMSCs-CTLA4中表达hCTLA4-Ig蛋白的阳性率。将hMSCs-CTLA4作为种子细胞在体外构建组织工程骨并移植到F344大鼠皮下,用X线片、组织形态学、免疫组织化学方法分别观察其体内成骨状况和hCTLA4-Ig表达情况。结果分离的hMSCsCD105表达阳性,CD34表达阴性。hMSCs-CTLA4的细胞形态呈梭形,与hMSCs比较无明显改变;倒置荧光显微镜观察见绝大多数细胞呈绿色,强阳性表达EGFP。RT-PCR、免疫细胞化学结果分别证实hMSCs-CTLA4表达hCTLA4-IgmRNA和蛋白。FACS检测结果显示:hMSCs-CTLA4表达hCTLA4-Ig蛋白的阳性率为78.4%。本实验构建的组织工程骨,每克脱钙骨基质(DBM)上吸附、生长的细胞约(1～1.5)×106个。DBM/hMSCs-CTLA4组植入F344大鼠皮下术后2～12周均可检测到hCTLA4-Ig阳性表达细胞,8～12周出现人源性新生骨组织;而单纯DBM组与DBM/hMSCs组表现为DBM逐渐被吸收,代之以纤维结缔组织,没有新生骨组织出现。结论以hMSCs-CTLA4作为种子细胞构建的组织工程骨异种移植到F344大鼠皮下可以成骨。hCTLA4-Ig基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)可能作为骨组织工程异基因种子细胞的来源。     

人脐带间充质干细胞来源的外泌体促进小鼠成骨前体细胞增殖与分化

 

目的 提取人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hucMSCs)来源的外泌体(hucMSC-exo),观察其对小鼠成骨前体细胞(mouse osteoblast progenitor cells, mOPCs)的作用。方法 体外分离培养hucMSCs,超速离心法收集外泌体;采用CCK8试剂盒检测不同浓度梯度hucMSC-exo对mOPCs增殖的影响,碱性磷酸酶活性检测以及茜素红染色观察不同浓度梯度hucMSC-exo对mOPCs矿化的影响。结果 成功提取hucMSCs,呈现旋涡状贴壁式生长,形态呈长梭形,具有多向诱导分化潜能。HucMSCs来源的外泌体呈圆形、椭圆形,大小在80 nm左右最多,阳性表达CD9,CD63。CCK8法结果显示5、10 μg/ml的hucMSC-exo可以显著地促进mOPCs在体外的增殖(P<0.05),碱性磷酸酶和茜素红染色结果发现5、10 μg/ml的hucMSC-exo组可以明显提高mOPCs碱性磷酸酶活性及钙化结节的形成,且10 μg/ml的外泌体浓度作用强于5 μg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 成功提取了hucMSCs及hucMSC-exo,hucMSC-exo可以以浓度依赖的方式促进mOPCs的增殖与成骨分化。

     

不同传代倍数人羊膜来源的间充质干细胞成骨成脂分化平衡的研究

目的比较不同传代倍数的人羊膜来源的间充质干细胞（hAMSCs）的增殖活性以及成骨、成脂的分化能力。方法采用胶原酶和胰蛋白酶法分离人胎盘羊膜来源的MSCs,测定分离细胞的表面分子标志。对第3、5、7、9代hAMSCs绘制细胞生长曲线,分别加入成骨和成脂诱导剂,诱导3W后行茜素红和油红O染色,比较不同传代倍数的hAMSCs成骨染色阳性率和成脂率。结果hAMSCs传代至第9代时仍呈克隆样生长,但细胞增殖活力有下降;在第5代后成骨分化能力下降（P〈0．01）,而传代至第7代后,成脂分化能力才有下降（P〈0．01）。结论hAMSCs在连续传代中能保持MSCs的生长特性,但多向诱导分化能力在不同的传代倍数中有一定差别。     

经体外预处理人胎儿骨髓间充质干细胞的潜在自身成瘤性

目的评价经体外预处理、启动免疫保护功能的人胎儿骨髓间充质干细胞（hfBMSCs）的潜在自身成瘤性。方法采用流式细胞术检测细胞表型及细胞周期,染色体核型分析检测遗传稳定性,裸鼠皮下接种检测体内成瘤性。结果体外预处理的hfBMSCs呈正常间充质干细胞表型,可通过阻滞细胞周期于G0-G1期抑制hfBMSCs生长增殖（P〈0.05）,对染色体核型无影响,不具备体内成瘤性。结论经体外预处理的人胎儿骨髓间充质干细胞不具有自身成瘤性。     

悬滴培养对人脂肪间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨悬滴培养对人脂肪来源间充质干细胞(hADSCs)成骨诱导分化的影响。方法利用酶消化法分离培养hADSCs,采用流式细胞术检测其表面标志的表达。对hADSCs进行悬滴培养,贴壁后添加诱导剂对其进行成骨诱导分化,以平板培养组为对照,诱导分化7d及21d时,利用RT-PCR检测成骨基因Runx2及Osteopontin的表达。结果分离培养的hADSCs表达干细胞表面标志CD44、CD90、CD105,不表达CD34、CD45;悬滴培养3d的hADSCs可形成大小均一的球状三维结构;RT-PCR结果表明,在成骨诱导分化的不同时间点,hADSCs悬滴培养组的成骨基因Runx2及Osteopontin表达均比平板培养组高,表明悬滴培养可促进hADSCs的成骨诱导分化。结论悬滴培养有利于hADSCs的成骨诱导分化,有助于提高其成骨诱导效率。     

脑瘫患者骨髓间充质干细胞传代过程中细胞表型和所分泌细胞因子变化特点

 目的 分析脑瘫患者骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)的基本生物学特性,观察其在传代培养过程中的表型和所分泌的因子变化,为临床应用提供理论依据.方法 密度梯度离心法提取脑瘫患者的BMSCs,采用人淋巴细胞分离液分离BMSCs,在相同条件下观察各代细胞形态、生长情况,检测各代细胞的表型和分泌的细胞因子.结果 BMSCs在第3至第10代,CD29、CD44、CD106等表型的表达变化无统计学差异,CD54的表达变化最大,在第9代时最高.CD14、CD34、CD45和HLA-DR等细胞表型在各代骨髓间充质干细胞中表达均<5%;NGF、NT3、VCAM、ICAM-1、VEGF、BDNF等细胞因子的浓度变化无统计学差异,PGE2的变化需进一步研究予以确认.结论 在体外培养的条件下,8代以前的细胞生长形状稳定,可作为组织工程等临床应用的良好对象.