组织工程化人工神经实验研究

目的 研究组织工程化人工神经修复大鼠2.5cm长坐骨神经缺损的效果。方法 21只2月龄Lewis lw雌性大鼠随机分成三个神经移植组,每组7只。A组:种植同源雪旺细胞并具有内部支架结构的胶原神经管,即组织工程化人工神经。B组:无雪旺细胞但具有内部支架结构的胶原神经管。C组:自体神经移植组。术后六个月,进行系列神经电生理监测,神经肌肉组织学观察,S-100和神经微丝蛋白(Neurofilament)免疫组化染色,轴突计数等检查。结果 在A组和C组移植神经上均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位(CMAP),再生轴突已通过移植神经全长,远端肌肉轻度萎缩。而B组中没有或仅记录到极小波幅的CMAP,移植神经远端结缔纤维组织增生,再生轴突罕见,所支配肌肉明显萎缩。结论 初步结果显示:组织工程化人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。     

组织工程化人工神经修复长段神经缺损实验的初步报告

目的 研究组织化人工神经修复大鼠2．5cm长坐骨神经缺损的效果。方法 90只2个月月龄的Lewis1W雌性大鼠,按手术先后顺序随机分成3个神经移植组,每组30只。A组：用种植同源雪旺细胞并具有内部支架结构的胶原神经管桥接,即组织工程化人工神经组。B组：用无雪旺细胞但具有内部支架结构的胶原神经管桥接,即对照组。C组：自体神经移植组。术后6月,进行神经电生理监测,神经肌肉组织学观察;用S－100和神经微丝蛋白免疫组化染色后,行轴突计数等检测。结果 完成对21只大鼠（每组7只）的实验评估。从A组和C组的胫前肌中均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位（CMAP）,再生轴突已通过移植段神经全长,远端肌肉轻度萎缩。B组中则没有或仅记录到波幅很低的CMAP,移植神经远端结缔纤维组织增生,再生轴突罕见,所支配肌肉明显萎缩。结论 组织工程化人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。     

组织工程神经修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的观察组织工程神经修复SD大鼠1．5cm长坐骨神经缺损的效果。方法用甘油处理10只SD大鼠2．0cm长坐骨神经，制备成同种异体脱细胞基质，备用。取SD乳鼠10只，分离坐骨神经，去神经外膜后，剪成小碎块，在DMEM中培养3周，扩增后的细胞鉴定、备用。3个月龄的SD雌性大鼠40只，单纯随机分成4个神经移植组（A、B、C、D），每组10只。A组：用扩增的雪旺细胞加同种异体脱细胞基质桥接，即组织工程化人工神经组。B组：用元雪旺细胞但具有内部支架结构的同种异体脱细胞基质桥接。C组：自体神经移植组。D组；空白对照组。术后12周，进行一般情况、小腿三头肌湿重、再生神经的组织学观察。结果完成对40只大鼠（每组10只）的实验评估。所有大鼠伤口瑚愈合，元死亡。A、B、C组大鼠足部元溃疡形成，D组7只足部有溃疡形成，所有组实验侧小腿三头肌较健侧萎缩，但以D组最明显。小腿三头肌湿重、神经电生理监测A组、C组差异无统计学意义（P〉O．05），A、C组与B、D组差异有统计学意义（P〈O．05），B组与D组差异有统计学意义（P〈0．05）。A组和C组的胫前肌中均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位（CMAP），B组、D组中则仅录到波幅很低的CMAP。A组和C组再生轴突已通过移植段神经全长，远端肌肉轻度萎缩。B组部分通过移植段神经；D组不能通过移植段神经，6例形成神经瘤。结论组织工程人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。     

几丁糖胶原复合膜及激活态雪旺细胞修复周围神经缺损的实验研究

目的研究几丁糖胶原复合膜、激活态雪旺细胞(activatedSchwanncell,ASC)促进周围神经再生的作用。方法将激活态雪旺细胞培养于几丁糖胶原复合膜后,将膜缝制成导管修复大鼠坐骨神经10mm的缺损(D组);并以自体神经移植(A组)、几丁糖胶原复合膜管(B组)及几丁糖胶原复合膜加脑源性神经营养因子[(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)C组]为对照。术后4、8、12周观察肢体运动,复合肌肉动作电位(CMAP)的波幅、潜伏期和运动神经传导速度(MNCV)。术后12周取材,样本染色观察神经轴突再生情况。结果几丁糖胶原复合膜加激活态雪旺细胞修复10mm神经缺损的效果优于几丁糖胶原复合膜加BDNF,与自体神经相似。结论几丁糖胶原复合膜加激活态雪旺细胞能有效地促进周围神经再生。     

小肠黏膜下层复合雪旺细胞构建组织工程化人工神经修复周围神经缺损的研究

目的小肠黏膜下层（small intestinal submucosa，SIS）复合雪旺细胞构建组织工程化人工神经并探讨其修复周围神经缺损的效果。方法SD大鼠60只随机分成三组，每组20只。构建右侧坐骨神经14mm缺损，A组：单纯SIS修复组；B组：复合雪旺细胞的SIS修复组；C组：自体神经移植对照组。术后不同时间段通过大体观察、电生理检测、组织学、透射电镜、图像分析、逆行示踪和小腿三头肌称重等方法分析评价修复效果。结果术后16周，B组移植段与近远段神经外观相似，未有神经瘤形成。组织学和透射电镜检查见B组再生神经组织可顺利通过缺损区，再生神经纤维排列整齐呈束状，含有大量的有髓神经纤维，与C组相似。电生理检测见第16周B组神经传导速度和复合动作电位的波幅均较第12周有所提高，与C组相比差异无统计学意义。真蓝逆行示踪证实B组和C组再生神经轴突轴浆运输功能恢复良好。图像分析证实B组再生神经组织面积百分比、有髓神经纤维密度和髓鞘厚度与C组相比差异无统计学意义，优于A组。B组和C组患侧小腿三头肌肌肉重量和恢复率均优于A组，C组优于B组，且差异有统计学意义。结论SIS复合雪旺细胞构建组织工程化人工神经能有效修复大鼠长距离坐骨神经缺损，有望成为自体神经的替代材料应用于周围神经缺损的修复。     

组织工程化人工神经修复犬盆腔内脏运动神经缺损

目的探讨组织工程化人工神经修复盆腔内脏运动神经缺损的效果,为解决直肠癌手术盆腔植物神经损伤所致性功能障碍的治疗提供新思路和实验依据。方法以密度梯度离心法分离比格犬骨髓间充质干细胞（BMSCs）,体外培养和扩增后备用。制作比格犬盆腔内脏运动神经10mm缺损模型,分3组予以修复。A组：将BMSCs与胶原蛋白海绵混合移植于聚羟基乙酸和聚乳酸共聚物（PLGA）导管中构建组织工程化人工神经桥接盆腔内脏运动神经缺损段;B组：仅将胶原蛋白海绵移植于PLGA导管中桥接神经缺损段;C组：自体神经移植。术后12周移植段神经通过大体观察和免疫组织化学观察及电镜扫描、轴突计数等方法评价各组神经缺损修复的效果。结果术后12周,PLGA导管基本吸收,各组再生神经均能通过缺损区长至神经远端,A组再生神经纤维密度和神经结构与C组相近,均优于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论BMSCs与PLGA导管构建组织工程化人工神经用于修复盆腔内脏运动神经缺损效果好,与自体神经移植效果相当。     

组织工程化人工神经修复周围神经缺损的实验研究

目的　研究雪旺细胞和生物降解支架材料复合后构建成的组织工程化人工神经修复神经缺损的效果。方法　将雪旺细胞制成 1× 1 0 8/ml的ECM (extracellularmatrix,ECM)凝胶 ,与PLA无纺纤维布复合培养 7d ,置入PLA中空纤维管中 ,构建成组织工程化人工神经。建立大鼠坐骨神经缺损 1 0mm的动物模型 ,A组为人工神经组 ;B组为雪旺细胞复合ECM凝胶组 ;C组为单纯ECM凝胶组 ;D组为自体神经移植组。术后 8周、1 2周 ,行神经电生理和组织学检测评价疗效。结果　术后 1 2周A组的再生神经纤维已越过远端缝合口 ,有髓神经纤维数和神经纤维密度稍差于D组 ,但再生神经组织的面积显著高于后者 ;A、D组的髓鞘厚度和dLAT、NCV、AMP、AREA均无显著差别 ,但明显高于B、C组。结论　雪旺细胞、ECM凝胶和PLA多孔材料与PLA中空纤维管组合后构建成的组织工程化人工神经 ,修复周围神经缺损的效果接近于自体神经移植     

雪旺细胞种于医用组织引导再生胶原膜构建自体人工神经的实验研究

目的;设计并构建一种新型的神经引导导管。方法：将兔雪旺细胞种到用成粘蛋白多孔医用组织引导的再生胶原膜支架培养2周后,用倒置显微镜、扫描电镜观察雪旺细胞吸附、生长迁移情况;以雪旺细胞胶原膜管的形式植入体内,观察它诱导神经再生的能力。结果：成年兔雪旺细胞在医用组织引导再生胶原膜上生长良好,并均匀分布于支架表面,且基质分泌旺盛。体内模型发现神经已通过移植物长入远端,胶原膜已吸收。结论：雪旺细胞可以在多聚医用组织引导再生胶原膜上得到扩增,种有雪旺细胞的医用组织引导再生胶原膜导管可以形成一个诱导神经轴突再生的微环境,形成的三维立体结构具有人工神经的基本特性,为组织工程方法修复长段神经缺损提供了研究基础。     

经诱导的骨髓基质干细胞应用于组织工程化人工神经的实验研究

目的 探讨骨髓基质干细胞应用于组织工程化人工神经修复大鼠10mm长坐骨神经缺损的效果。方法 28只体重在160～200g的雌性F344大鼠随机分成4组，每组7只。A组：种植经诱导5d后的同源骨髓基质干细胞并具有内部支架结构的中空管；B组：种植同源许旺细胞并具有内部支架结构的中空管；C组：无细胞只具有内部支架结构的中空管；D组：自体神经移植组。术后3个月，进行系列神经电生理监测、坐骨神经功能指数测定、神经组织学观察、S—100及神经微丝蛋白兔疫组化染色和轴突计数等检查。结果 术后12周内，实验组(A组)的各项检测指标均优于C组(P＜0．05或0．01)，与B和D组间差异无显著性(P＞0．05)。结论 初步结果显示经诱导的骨髓基质干细胞可作为外周神经组织工程中的种子细胞，并应用于人工神经修复外周神经缺损。     

经脂肪源性干细胞诱导的施万样细胞用于组织工程化人工神经的实验研究

目的研究经大鼠脂肪源性干细胞（ADSCs）体外诱导分化的施万样细胞应用于组织工程化外周神经,修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法Wistar大鼠48只,体重200-250g,随机分成3组,每纽i6只,分别用下面3种不同的方法修复15mm坐骨神经缺损：DMEM组（支架内注射培养基）、诱导组（支架内注射施万样细胞）和自体神经移植组．通过足迹实验（坐骨神经功能指数测定）、神经电生理检测、胫前肌湿重比率测定进行功能检测;应用透射电镜、图像分析系统进行组织学观察。结果术后12周诱导组的SFI指数、神经传导速度、潜伏期、波幅以及胫前肌重量恢复、神经纤维数目、轴突直径、髓鞘厚厦好于DMEM组（P〈0．05）,接近自体移植组。再生神经中标记细胞观察显示PKH-26标记的ADSCs,依然呈红色荧光。结论ADSCs诱导分化后的施万样细胞与去细胞同种异体神经两者构建的组织工程化神经能有效地修复大鼠坐骨神经缺损,其效果与自体神经移植相似：ADSCs经诱导后的细胞可以作为组织工程种子细胞新的来源。     

雪旺细胞构建人工神经在大鼠长段神经缺损中的修复作用研究

[目的]研究雪旺细胞与PLGA构成的组织工程化人工神经修复大鼠周围神经缺损的效果。[方法]将雪旺细胞接种在内置polyglactin910纤维的PLGA中空管，构建成组织工程人工神经。将60只SD大鼠随机分3组，每组20只，建立大鼠坐骨神经缺损20mm的动物模型。A组用切下的自体神经段原位缝合，B组使用雪旺细胞组织工程人工神经进行修复，C组用未接种雪旺细胞的PLGA中空管进行修复。术后8、12周使用神经电生理和组织学观察分别进行效果评价。[结果]在大体观察、组织学观察中，B组的恢复表现与A组相近。在神经电生理检测、小腿三头肌肌肉重量测定、桥接物横切面神经纤维数量测定的结果分析中B组略低于A组但明显高于C组。B组大鼠桥接段远端辣根过氧化酶示踪后在脊髓前角可以看到被标记的神经元。透射电镜可见B组桥接物中段大量的再生神经纤维。[结论]用雪旺细胞和PLGA构建组织工程人工神经修复大鼠外周神经缺损，可以修复20mm的长段周围神经缺损，并可获得接近于大鼠自体神经修复的效果。     

血管化人工神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 研究血管化人工神经导管修复SD大鼠坐骨神经缺损的效果.方法 将成年雌性SD大鼠18只,制成14 mm的大鼠坐骨神经缺损模型,随机分为3组,用不同的材料修复缺损.A组:自体神经修复组;B组:普通PGLA神经导管修复组;C组:血管化人工神经导管修复组.术后行大体观察;术后6、12周行肌电图和再生神经轴突检测,评价神经修复效果.结果 术后6、12周,C组与B组相比,神经传导速度快,动作电位振幅大,再生神经轴突数量多且质量高,差异有显著的统计学意义(P<0.05).结论 血管化人工神经导管能促进神经再生,有效地修复长段神经缺损.     

生物人工周围神经修复大鼠不同长度周围神经缺损

目的 采用一种自行研制的具有良好生物相容性的部分脱乙酰甲壳质构建人工神经来修复大鼠坐骨神经不同长度的缺损，研究证实其修复效果。方法 选用24只健康雄性SD大鼠，随机分为3组造成不同长度（5、10、15mm）的坐骨神经缺损，右侧进行人工神经桥接修复，左侧进行原位神经移植。12周后进行神经电生理检测以及组织学检测。结果 5mm以及10mm组，光镜下能够观察到人工神经内新生的纤维延续存在。组织学证明。此种人工神经能够有效的修复10mm以内的大鼠坐骨神经缺损；神经肌肉复合动作电位的产生表明：12周后神经已经长过缺损段，神经传导功能恢复，并且已经长入远端靶器官。结论 结果证明这种套管能够有效的桥接10mm的大鼠坐骨神经缺损（神经直径的6～8倍）。可能应用于周围神经缺损的治疗。同时可以作为进一步开发组织工程化的人工神经的良好载体。     

新型组织工程化神经导管修复大鼠周围神经缺损

目的观察丝素/胶原蛋白支架联合许旺细胞(SCs)/脂肪源性干细胞(ADSCs)共培养所构建的新型组织工程化神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验效果。方法2015年2月至2016年8月,分别体外分离、培养及纯化SD大鼠SCs和ADSCs,并将SCs与ADSCs按照2∶1的比例和丝素/胶原蛋白支架共培养,来构建新型组织工程化神经导管,用于修复大鼠坐骨神经10mm缺损。实验随机分为4组:单纯丝素/胶原支架移植组(Scaffold组)、组织工程化神经导管移植组(TENC组)、自体神经移植组(Autograft组)、未手术对照组(Normal组),每组10只大鼠。采用Instron5865力学试验机测试导管的力学性能,扫描电镜(SEM)观察导管内部空间结构及细胞的生长增殖情况,术后12周分别行电生理学及形态分析学等一系列检查评估神经再生情况,并采用单因素方差分析(one-wayANOVA)进行数据分析,如果组间差异有统计学意义,则进一步采用Turkey法进行两两比较,P<0.05为差异有统计学意义。结果扫描电镜观察可见导管内部相通性良好,在三维的孔隙中及表面上有许多神经元样细胞生长并伸出长突起,细胞生长状况佳。力学试验机测试显示导管最大和平均弹性模量分别为(10.80±0.30)MPa、(8.14±0.20)MPa。根据再生神经大体观察、电生理学检查及形态学结果统计分析可得,各组实验动物都不同程度上实现缺损神经的修复再通。但从实验动物神经修复效果来讲,TENC组和Autograft组都较为相似,差异无统计学意义(P>0.05),但都优于Scaffold组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丝素/胶原蛋白支架联合SCs/ADSCs共培养所构建的新型组织工程化神经导管具备初步生物神经样结构,且对大鼠坐骨神经缺损的再生修复具有良好的桥接及促进神经生长作用。     

骨髓干细胞诱导分化构建组织工程神经

[目的]探讨组织工程化神经修复周围神经缺损的作用。[方法]以DMEM为培养基体外诱导人骨髓基质干细胞分化为雪旺细胞，与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经；建立坐骨神经缺损10mm的Wistar大鼠动物模型，A组：经诱导骨髓基质干细胞分化雪旺细胞与天然细胞外基质（extra cellular matrix，ECM）凝胶及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经桥接神经缺损；B组：单纯将ECM凝胶注入可降解聚乳酸导管桥接神经缺损；C组：自体神经移植组。术后12周进行神经电生理检测、新生神经组织学观察和轴突计数等检测坐骨神经功能恢复情况。[结果]1．诱导后骨髓基质干细胞呈梭形、胞核大、周围有光晕、突起细长呈纵形排列，GAFP及S-100免疫组织化学染色阳性。动物模型各组经移植术后12周，再生神经已通过缺损区长至神经远端。A组、C组组织学及电生理检测指标均优于B组（PAB=0．021，PBC=0．001），A组与C组无显著性差异（PAC=0．065）；A、B组聚乳酸导管降解吸收明显。[结论]骨髓基质干细胞在体外可诱导分化为雪旺氏细胞，利用其与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经可以修复周围神经缺损。     

甲壳素涂层并预置引导纤维神经导管的实验研究

目的探讨甲壳素涂层并预置引导纤维神经导管修复周围神经缺损的效果。方法成年雌性SD大鼠24只，无菌条件下切断双侧坐骨神经，制成14mm的大鼠坐骨神经缺损模型。根据不同修复材料随机分为4组，每组6只。A组：甲壳素涂层并预置引导纤维的聚乳酸聚羟基乙酸共聚物（polyglycolic-lacticacid，PGLA）神经导管；B组：甲壳素涂层的PGLA神经导管；C组：单纯PGLA神经导管；D组：自体神经移植作为对照。术后4周和12周行大体观察、肌电图检查、S-100免疫组织化学染色和组织学观察，图像分析评价修复效果。结果术后4周A、B及C组观察到神经导管中有新生轴索通过，再生神经发育不成熟；D组近段有髓神经纤维均匀疏散分布，远段未见明显再生神经束形成。术后12周各组再生神经已通过神经导管长入远端，肌电图、S100免疫组织化学染色和图像分析结果表明A组再生神经轴突数量及再生神经质量优于B、C组，差异有统计学意义（P〈0．05）。D组移植神经轴突直径、髓鞘厚度、纤维密度与A、B及C组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），但D组近段神经髓鞘部分空泡样变性及脱髓鞘改变，远段再生神经束形成少。结论甲壳素涂层并预置引导纤维的神经导管能有效修复周围神经缺损。     

局部应用FK506促进外周神经再生的研究进展

外周神经损伤的修复一直是基础和临床科研的一个热门课题，许多学者从不同材料的外周神经桥接到构建组织工程化的外周神经移植修复、药物促进轴突再生等方面进行了不懈的研究，但是由于外周神经系统的特殊和复杂性，可以应用于临床的组织工程化神经短期内还不能实现，所以目前的治疗仍是从自体神经移植和药物促进轴突再生以防止肌肉萎缩方面入手。在药物治疗方面，FK506最先作为免疫抑制剂广泛应用移植外科，近来国内外学者发现其有强大的促进周围神经再生的作用，但是由于全身用药时肾毒性、高血糖和中枢神经系统毒性等副作用的存在而使其临床应用的可能性受到了阻碍。     

周围神经移植修复脊髓损伤的实验研究

目的：探讨自体坐骨神经移植修复脊髓损伤的可行性。方法：将58只雌性Wistar大鼠分为二组，实验组：采用显微外科技术，将50只大鼠于T13水平切除左半侧脊髓10mm，再取右侧坐骨神经10mm移植到脊髓缺损处，近端接脊髓，远端接马尾，分别于术后2、4、6、8、12、22周在光镜和电镜下观察移植处坐骨神经、吻合口远端马尾神经、左后肢坐骨神经再生情况，并用摄像机记录患肢功能恢复情况。对照组：8只大鼠，于13水平切除左半侧脊髓10mm，不移植坐骨神经，观察脊髓缺损远端马尾神经和左右肢坐骨神经再生情况。结果：对照组坐骨神经的轴突及髓鞘部分崩解，密度降低，无再生轴突形成。实验组术后4周电镜下偶见移植处坐骨神经髓鞘及轴突形成，术后8周光镜及电镜下可见较多细的有髓神经纤维，22周时接近正常；同时观察到左后肢坐骨神经再生；大鼠后肢功能部分恢复，肌力达3级。结论：大鼠脊髓损伤后有再生能力，周围神经移植修复脊髓损伤是可行的。     

恒河猴坐骨神经损伤修复后胫神经和腓总神经预后差异的研究

目的研究恒河猴坐骨神经损伤修复后胫神经和腓总神经髓鞘变性与再生的变化规律及其轴突密度差异情况。方法取健康成年恒河猴9只,雌雄不限,体质量3.5~4.5 kg,通过锐性切割造成胫神经和腓总神经离断损伤模型。术中取3只动物,于损伤平面以远5 mm处切取长5 mm的胫神经及腓总神经作为正常对照;余6只采用神经外膜缝合法修复后,于术后3、8周各取3只行大体观察、神经电生理检测,并切取胫神经和腓总神经吻合口远端神经组织行Luxol Fast Blue染色,观察胫神经和腓总神经髓鞘变化情况,计算胫神经和腓总神经轴突密度和轴突再生率。结果术后实验动物均出现下肢肌肉萎缩及足趾不同程度溃疡。大体观察见吻合部神经膨大,周围结缔组织增生,粘连明显。术后3周未检测到胫神经及腓总神经复合肌肉动作电位(compound muscle action potential,CMAP),8周腓总神经CMAP波幅小于胫神经。组织学观察示,术后3周胫神经和腓总神经轴突均发生不同程度变性,以腓总神经变性明显,腓总神经轴突再生率为13.2%,显著低于胫神经的44.5%;术后8周胫神经和腓总神经均可见再生轴突,腓总神经轴突再生率为10.3%,仍显著低于胫神经的35.3%。结论与腓总神经相比,胫神经损伤修复后轴突退变速度慢、再生速度快,轴突再生比例高,其靶器官有更多神经纤维支配,靶肌肉CAMP恢复快、幅度高,胫神经功能恢复更好。     

构建生物人工神经修复周围神经缺损的实验研究

目的：探讨生物人工神经对周围神经再生的作用。方法：用自体雪旺氏细胞、Ⅳ型胶原及可降解的聚乳酸导管构建生物人工神经，桥接10mm缺损的鼠坐骨神经，对照组行自体神经移植，术后8周，2组行大体观察、组织学检查及神经电生理检查。结果：实验组再生神经纤维数、再生轴突恢复率、运动神经传导速度及复合肌肉动作电位振幅均同对照组相近。结论：实验构建的生物人工神经能有效的促进周围神经再生。