尿酸刺激树突状细胞成熟与Toll样受体mRNA表达关系的研究

目的 观察未成熟树突状细胞（DC）经尿酸刺激成熟过程中,TLRs mRNA的表达情况。方法 分离培养小鼠骨髓来源未成熟 DC。以尿酸体外刺激48 h后,RT-PCR方法检测DC TLR2 mRNA、TLR3 mRNA、TLR4 mRNA 、IL-12p70 mRNA等的表达,ELISA法检测上清IL-12P70水平。尿酸及NF-κB抑制剂PDTC刺激不同时间点时,免疫印迹法检测DC NF-κB p65活化情况。结果 尿酸刺激后DC TLRs mRNA 表达出现明显的变化,与培养基对照组相比,TLR2 mRNA、TLR3 mRNA、TLR4 mRNA表达下降（P＜0.05）,以TLR4 mRNA下降最明显;IL-12p70表达显著增高（P＜0.05）;与LPS组相比,TLRs mRNA 与IL-12p70表达水平相似（P＞0.05）。尿酸刺激后15～45 min,DC核因子NF-κB p65显著活化。结论 尿酸能调节未成熟树突细胞 TLR2 mRNA、TLR3 mRNA、TLR4 mRNA及IL-12 p70的表达,促进NF-κB向核内转移,促进DC成熟。TLRs mRNA的动态变化可能为其诱导 DC 成熟及免疫功能提高的机制之一。     

系统性红斑狼疮病人外周血浆细胞样树突状细胞中Toll样受体7的表达及其意义

目的:检测系统性红斑狼疮（SLE）病人外周血中浆细胞样树突状细胞（pDC）中Toll样受体7（TLR7）的表达,探讨其意义。方法:选取SLE病人52例（SLE组）和正常健康人28名（对照组）,利用流式细胞术检测外周血TLR7+的pDC细胞在各组中的比例。结果:SLE病人外周血单核细胞（PBMC）中pDC相对计数显著低于对照组（P<0.01）,SLE组和正常对照组髓样树突状细胞水平差异无统计学意义（P>0.05）。感染组SLE病人外周血pDC水平显著低于非感染组（P<0.01）,初发组SLE病人外周血髓样树突状细胞水平低于复发组（P<0.05）,pDC水平与外周血CRP呈负相关关系（P<0.05）。SLE病人外周血PBMC内pDC中TLR7+细胞的比例显著高于对照组（P<0.01）。血液系统受累组pDC内TLR7+细胞比例高于无血液系统受累组（P<0.05）。TLR7+pDC细胞比例在抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体阳性组及阴性组之间差异均无统计学意义（P>0.05）;TLR7+pDC细胞比例和蛋白尿分级呈显著正相关关系（P<0.01）。结论:SLE病人外周血TLR7+的pDC细胞比例显著升高,且与临床病情活动性有一定的相关性。     

Toll样受体在骨关节炎中的作用研究新进展

Toll样受体(TLRs)是固有免疫系统中一类重要的模式识别受体(PRRs),通过对不同病原相关分子模式(PAMPs)和内源性危险信号相关分子模式(DAMPs)的识别,触发髓样分化因子88(MyD88)依赖和非依赖途径,激活NF-KB信号转导通路,引起细胞因子和炎性介质的分泌,启动固有免疫应答,在骨关节炎的进程中发挥着重要的作用.研究TLR家族分子及其介导的NF-κB信号转导通路及其在OA中的作用,对进一步阐明OA发生发展机制、提供更有效的预防及治疗方案提供理论依据.     

Toll样受体7和NF-κB在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨Toll样受体7(TLR7)和NF-κB在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测20例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达;采用免疫组织化学方法检测90例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达。结果 (1)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达量为(0.72±0.59)、(0.69±0.32),显著高于癌旁正常组织的(0.45±0.36)、(0.47±0.16),其表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的阳性表达率为77.6%(68/90)、75.4%(67/90),明显高于癌旁正常组织的18.9%(17/90)、33.3%(30/90),其表达差异均有统计学意义(P<0.05);TLR7蛋白表达与肿瘤的分化程度和肿瘤浸润深度密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05);NF-κB蛋白(p65)表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)食管癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达呈正相关(r=0.259,P=0.014)。结论 TLR7可能通过上调NF-κB mRNA和蛋白的表达,促进食管鳞癌的发生与发展。     

Mu受体在小鼠树突状细胞中的诱导表达

目的研究Mu受体在小鼠树突状细胞中的诱导表达。方法取7～8周龄的C57BL/6J雌鼠骨髓细胞培养,培养7d后,用CD11c＋磁珠,采用磁性分选的方法纯化树突状细胞。用免疫荧光染色PCR检测Mu受体及其基因在树突状细胞中的表达。并用流式细胞仪对树突状细胞的表型进行分析。结果Mu受体在激活的树突状细胞上有明显（P〈0.05）表达。不同Toll样受体的配体诱导不同程度的Mu受体表达。结论活化的树突状细胞可诱导表达Mu受体。     

肠易激综合征患者结肠黏膜Toll样受体4表达及信号通路的研究

目的 研究Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白(MD)-2与核因子κB在肠易激综合征(IBS)患者结肠黏膜的表达,了解TLR4在IBS发病机制中的作用及其信号传导通路.方法 采用免疫组化方法检测30例IBS腹泻型患者(IBS组)及12名健康志愿者(健康对照组)结肠黏膜TLR4、MD-2和核因子κB的表达,半定量分析TLR4平均A值,分析MD-2和核因子κB的刚性表达率.结果 IBS患者较健康对照者结肠黏膜TLR4 A值高(0.40±0.10 vs 0.30±0.05,P=0.001).正常肠上皮细胞(IEC)MD-2无表达,炎症部位MD-2低表达;IBS组肠上皮固有层MD-2阳性细胞数较健康对照组多(26/30 vs 7/12).IBS组核因子κB表达阳性率及强度均高于健康对照组(A值0.31±0.04vs 0.25±0.04,P=0.003).结论 IBS患者的肠道黏膜存在炎症因子核因子κB信号传导通路的活化,炎症在IBS的致病机制中发挥重要的作用;TLR4在IBS发病中可能起一定作用;MD-2在IEC低表达或无表达,可能参与肠黏膜对肠道菌群的耐受.     

Toll样受体在辐射防护中的作用

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是近年来发现的在宿主抗病原微生物免疫应答中发挥重要作用的受体分子,它在天然免疫中可识别病原微生物相关分子模式,激活先天性免疫应答。本文阐述了部分Toll样受体(TLR4、TLR5、TLR9)在辐射防护中的作用及其相关机制,为进一步研究Toll样受体在辐射防护中的作用提供理论依据。     

Toll样受体在树突状细胞的表达及其功能研究进展

树突状细胞(dendritic cells,DCs)是体内功能最强的抗原提呈细胞,它通过Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)识别病原相关模式分子,在固有免疫应答和适应性免疫应答中起桥梁和纽带作用,并调控免疫应答的强度和质量.文中就近年来TLRs在DCs的表达和功能研究进展作一综述.     

Toll样受体与心血管疾病相关研究进展

天然免疫系统被认为是抵御外来病原体入侵的第一道防线。然而，近年越来越多的研究认为，组织坏死与损伤等非病原因素也可激活天然免疫。因此，引起天然免疫系统反应的危险信号既可以是外源性的病原体也可以是内源性的自身因素。     

TRAIL及其受体在人树突状细胞分化过程中的表达及其调控

目的：检测人单核细胞（monocyte）和CD34^ 干细胞来源的树突状细胞（DC）--MoDC和CD34DC,在分化发育不同阶段表达TRAIL及TRAIL受体（TRAIL-Rs）的情况和外源性因子LPS或IFN-β刺激未成熟DC后TRAIL-Rs的表达变化。方法：采用RT-PCR和FACS两种方法检测人DC表达TRAIL和TRAIL-Rs的水平。结果：人CD34^ 干细胞在向CD34DC分化过程中,表达TRAIL和TRAIL-Rs的先后顺序为DCR1和DCR2( 0d),DR4和DR5( 5d),TRAIL( 8d)。成熟DC表达中度水平的TRAIL、DR4、DR5、DCR2,不表达DCR1。除了DCR1外,MoDC和未经诱导的单核细胞表达TRAIL及其4个膜受体的水平基本一致,DCR1在诱导过程中逐渐降低。未成熟的MoDC在LPS的刺激下,表达DR5和DR4的水平增高,在IFN-β刺激下表达DR5的水平增高。结论：TRAIL和TRAIL-Rs可能参与DC分化或其功能的发挥。LPS或IFN-β能够增加DC对TRAIL诱导凋亡的敏感性,表明它们参与机体的免疫调控。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中树突状细胞的变化

目的 了解慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺组织中的DCsmRNA表达变化.方法 通过烟熏＋脂多糖（LPS）方法建立COPD大鼠模型.HE染色观察气道及肺组织病理学的改变,同时用荧光定量RT-PCR检测CD86mRNA及OX-62mRNA在肺组织中的表达变化.结果 COPD模型组大鼠肺组织HE染色符合慢性支气管炎及肺气肿的病理改变.与正常对照组相比,COPD模型组大鼠CD86mRNA及OX-62mRNA表达均增加（P＜0.01）.结论 COPD模型组大鼠第28天病理表现符合人类COPD的特征性病理改变,提示COPD大鼠模型建立成功.COPD模型组大鼠肺组织中CD86mRNA及OX-62mRNA的表达较正常对照组明显升高,提示树突状细胞（DCs）在COPD大鼠肺部表达增加,这可能是COPD发生发展的重要因素.     

Expression of soluble Toll-like receptors in pleural effusions

Background The Toll-like receptors （TLRs） represent a group of single-pass transmembrane receptors expressed on sentinel cells that are central to innate immune responses.The aim of this study was to investigate the presence of soluble TLRs in pleural effusions, and the diagnostic values of TLRs for pleural effusion with various etiologies.Methods Pleural effusion and serum samples were collected from 102 patients （36 with malignant pleural effusion, 36with tuberculous pleural effusion, 18 with bacterial pleural effusion, and 12 with transudative pleural effusion）.The concentrations of TLR1 to TLR10 were determined in effusion and serum samples by enzyme linked immunosorbent assay.Four classical parameters （protein, lactate dehydrogenase, glucose and C-reactive protein （CRP）） in the pleural fluid were also assessed.Receiver-operating characteristic curves were used to assess the sensitivity and specificity of pleural fluid TLRs and biochemical parameters for differentiating bacterial pleural effusion.Results The concentrations of TLR1, TLR3, TLR4, TLR7 and TLR9 in bacterial pleural effusion were significantly higher than those in malignant, tuberculous, and transudative groups, respectively.Analysis of receiver operating characteristic curves revealed that the area under the curves of TLR1, TLR3, TLR4, TLR7 and TLR9 were 0.831, 0.843,0.842, 0.883 and 0.786, respectively, suggesting that these TLRs play a role in the diagnosis of bacterial pleural effusion.Also, the diagnostic value of TLRs for bacterial pleural effusions was much better than that of biochemical parameters （protein, lactate dehydrogenase, glucose and CRP）.Conclusions The concentrations of TLR1, TLR3, TLR4, TLR7 and TLR9 appeared to be increased in bacterial pleural effusion compared to non-bacterial pleural effusions.Determination of these pleural TLRs may improve the ability of clinicians to differentiate pleural effusion patients of bacterial origin from those with other etiologies.     

中性粒细胞诱导适应性免疫应答过程中树突状细胞成熟活化

目的 探讨T辅助（Th）1细胞免疫应答过程中,中性粒细胞（PMN）对树突状细胞（DC）的调节作用。方法 将脂多糖（LPS）刺激的中性粒细胞（LPS-PMN）和未成熟树突状细胞（imDC）共培养,流式细胞术检测DC表面CD40和CD86,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素12（IL-12）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）。将与LPS—PMN共培养后DC（PMN-DC）提纯,与FITC标记的卵清蛋白（FITC-OVA）培养,检测其吞噬功能。将PMN-DC与D011．10T细胞和OVA17肽共培养,计活细胞数,胞内染色测干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素4（IL-4）。结果 LPS-PMN可刺激imDC CD40和CD86上调并分泌IL-12、肿瘤坏死因子（TNF）-α,且这种能力能被抗TNF-α单抗所抑制。与imDC对照,PMN—DC吞噬功能下降,能显著刺激D011．10T细胞增殖,分泌高水平IFN-γ、少量IL-4。结论 LPS-PMN具有促使imDC成熟活化,刺激其分泌细胞因子,发挥其在Th1免疫应答中抗原呈递,促进Th1分化的作用。     

Toll样受体在感染性休克中的作用

感染性休克是多种病原体引起 ,以革兰阴性菌为主介导的一组严重的临床综合征 ,其病死率很高。Toll样受体 (TLR)是免疫细胞膜上的病原体识别受体 ,在介导病原体识别、信号转导、免疫反应的激活中起关键作用。在疾病早期 ,TLR表达增强的细胞对病原体高度敏感 ,通过上调肿瘤坏死因子等细胞因子的表达 ,增强炎症反应杀伤病原体。然而 ,过高的促炎反应将造成组织器官的损害。     

C型凝集素受体和Toll样受体在子前期重度患者胎盘中的表达

目的分析子前期(PE)患者胎盘组织中C型凝集素样受体家族中DC-SIGN和甘露糖受体(MR)以及Toll样受体(TLR)家族中TLR-2和TLR-4的表达情况。方法采集PE重度患者(PE组,n=20)及正常妊娠妇女(NP组,n=20)的新鲜胎盘标本;采用免疫组织化学技术对胎盘组织中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的表达进行定位分析;采用Western blotting法检测胎盘组织中的DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的蛋白表达。结果两组胎盘组织中均有DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的表达,主要位于胎盘合体滋养层细胞,在细胞滋养层细胞中亦有少量表达。PE组与NP组比较,胎盘组织TLR-4阳性细胞表达率明显升高(P<0.01);DC-SIGN、MR阳性细胞表达率明显降低(P<0.01,P<0.05),TLR-2阳性细胞表达率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论相对于正常晚期妊娠妇女,PE患者胎盘组织中C型凝集素受体DC-SIGN和MR表达减少,TLR-4过度表达;两种受体家族活化平衡失调可能是PE发病机制中的关键环节之一。     

Rapamycin Modulates the Maturation of Rat Bone Marrow-derived Dendritic Cells

The purpose of the study was to observe the effect of rapamycin （RAPA） on the differentiation and maturation of rat bone marrow-derived dendritic cells （BMDCs） in vitro. BMDCs from Wistar rats were cultured with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor plus interleukin-4 in the presence or absence of RAPA （20 ng/mL）, and stimulated with lipopolysaccharide （LPS） for 24 h before cells and supernatants were collected. Surface phenotype of BMDCs was flow-cytometrically detected to determine the expression of maturation markers, MHC class Ⅱ and CD86. Supernatants were analyzed for the production of IL-12 and IFN-γ cytokines by using ELISA. BMDCs were co-cultured with T cells from Lewis rats and mixed lymphocyte reaction was assessed by MTT method. The morphology of BMDCs stimulated with LPS remained immature after RAPA pretreatment. RAPA significantly decreased the CD86 expression, impaired the IL-12 and IFN-γ production of BMDCs stimulated with LPS, and inhibited the proliferation of allogeneic T cells. In conclusion, RAPA can inhibit the maturation of BMDCs stimulated with LPS in terms of the morphology, surface phenotype, cytokine production, and ability of BMDCs to stimulate the proliferation of allogeneic T cells in vitro.     

Toll样受体4在宫颈癌细胞系中的表达及与HPV16感染的关系

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)在不同宫颈癌细胞系中的表达特点及其与人乳头状瘤病毒(human papillomavirus 16,HPV16)感染的关系。方法采用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测细胞系中HPV16的感染情况;细胞免疫荧光法对H8、SiHa、Caski细胞进行TLR4抗体荧光标记;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测H8、SiHa、Caski细胞中TLR4蛋白的表达量。结果 H8、SiHa、Caski细胞中均有HPV16E6的表达;荧光显微镜和激光共聚焦显微镜发现TLR4表达在HPV16阳性宫颈癌细胞的细胞膜和细胞浆中;TLR4在不同宫颈癌细胞系中的表达差异具有统计学意义(P<0.05),其中在Caski细胞中表达最高,在SiHa细胞中次之,在H8细胞中表达量最低。结论 TLR4在宫颈癌细胞系中的表达与HPV16感染有关,HPV16感染的程度对TLR4表达量有影响,推测TLR4参与了女性宫颈上皮HPV16的感染,两者共同对宫颈上皮病变发展过程发挥重要作用。