实时荧光定量聚合酶链反应检测宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒16/18型感染

子宫颈病变是女性最常见的疾患之一,其中最严重的是宫颈癌,而人类乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的发生有密切关系[1]。HPV的亚型,现在发现已超过100种,其中感染生殖道的HPV亚型有近30种,可分为低危型和高危型[2,3]。低危型主要是HPV611型,与尖锐湿疣有关;高危型主要是HPV1618型,与宫颈癌发生相关。有文献报道宫颈鳞癌HPV感染率可高达93%～100%[3],因此,检测子宫颈病变是否感染HPV高危型成为防治宫颈癌的重要一环。我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)方法[4],检测宫颈涂片后剩余的细胞内HPV1618型感…     

实时定量PCR检测外周血中的巨细胞病毒

目的建立定量检测外周血中巨细胞病毒的实时定量PCR方法,并对骨髓移植病人进行巨细胞感染监测。方法构建基于LightCycler-TaqMan探针的实时定量PCR方法,对其进行方法学评价,并抽提外周血DNA,检测正常人与骨髓移植病人巨细胞病毒感染状况。结果经反应条件的优化,该方法的敏感性在10个拷贝数以上,批内与批间差异分别控制在较小范围,对骨髓移植病人巨细胞病毒感染的监测发现病毒拷贝数与病程进展和恢复呈较好的相关关系。结论实时定量PCR方法检测巨细胞病毒感染可为临床对移植患者的感染提供一种有效的监测手段。     

实时荧光PCR法在高危型人乳头瘤病毒检验中的诊断价值研究

将我院收治的96例人乳头瘤病毒(HPV)感染者临床资料作为研究对象,分别通过实时荧光PCR及二代杂交式捕获法(HCⅡ)检测患者样本,分析患者临床病理结果,比较两组方法不同宫颈病变HPV检出率及HPV阳性检出率的差异;PCR对宫颈上皮内瘤变HPV检出率为93.8%稍高于HCII 87.5%,比较无统计学差异(P0.05),PCR对慢性宫颈炎及鳞状上皮病变HPV检出率为64.3%显著高于HCII 35.7%,比较具有统计学差异(P0.05);PCR对HPV阳性检出率为71.9%(69/96)高于HCII 62.5%(60/96),比较具有统计学差异(P0.05),PCR、HCII检测方法总符合率为82.3%(79/96),在(CINII级及III级患者中上述两种方法与病理结果相关性较好(r2=0.953),同时PCR检测的特异性与灵敏性显著高于HCII,比较具有统计学差异(P0.05);实时荧光PCR法对高危型人乳头瘤病毒诊断效果好,其对HPV特异性及灵敏性均较高,与病理结果的相关性较好,值得临床选择。     

实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒应用研究

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测人乳头瘤病毒(HPV)的应用价值。方法随机选择2015年2月至2016年2月于本院就诊的宫颈病变患者203例,采用实时荧光定量PCR和第二代杂交捕获法(HCⅡ)对宫颈组织标本进行HPV DNA检测,对检测结果进行分析。结果 77例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者实时荧光定量PCR和HCⅡ法HPV DNA阳性检出率分别为93.51%和85.71%,二者比较差异无统计学意义(P0.05);和72例慢性宫颈炎及鳞状上皮病变患者实时荧光定量PCR和HCⅡ法HPV DNA阳性检出率分别为59.72%和36.11%,二者比较差异有统计学意义(P0.05)。203例患者实时荧光定量PCR和HCⅡ法HPV DNA阳性检出率分别为71.43%和57.64%,二者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论实时荧光定量PCR和HCⅡ都可用于HPV DNA检测,二者对某些类型宫颈疾病的检测阳性率存在差异。实时荧光定量PCR检测对HPV感染具有一定的辅助诊断意义,有利于宫颈类疾病的早期诊治,值得推广应用。     

实时荧光PCR检测人巨细胞病毒糖蛋白H基因分型

目的利用实时荧光PCR技术建立一种快速、灵敏而特异的检测巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白H基因(gH)分型的方法。方法针对HCMV gH基因的保守区域和分型区域,设计一对保守引物及其相应gH分型的Taq Man探针。实时荧光PCR技术检测HCMV标准株AD169(gH1型)与TOWNE(gH2型),进行特异性及灵敏度评价。另对112例确诊HCMV感染患儿的尿液标本DNA进行检测,再随机选取gH1、gH2基因型PCR扩增阳性产物各4例进行测序验证。结果建立的实时荧光PCR可以特异识别HCMV标准株的gH分型,且检测灵敏度达102CFU/m L。112例尿液标本中86例为gH1型HCMV感染,25例gH2型HCMV感染,1例为HCMV gH基因两种型别混合感染。8株临床分离样本测序结果显示,gH基因和标准株相比保守性95%。结论本研究建立的实时荧光PCR方法快速、特异,适用于HCMV gH基因分型的临床检测。     

人乳头瘤病毒、人巨细胞病毒和单纯疱疹病毒感染与宫颈癌的关系

目的　本研究旨在探讨宫颈癌前病变和宫颈癌的发生发展与人乳头状瘤病毒及HSV、CMV的关系。方法　对81例不同宫颈病变组织进行HPV16 /18和HPV6 /11原位杂交,同时对98例不同宫颈病变组织用DNA扩增法检测HPV、HSV和CMV。结果　病毒DNA原位杂交信号的分布与HE染色中挖空细胞的分布一致。HPV16 /18与不同宫颈病变组织原位杂交阳性率平均为5 1 .1% ,HPV6 /11的则为6 4 .7%。HPV16 /18、HPV6 /11、HSV、CMV在不同宫颈病变组织中的阳性率分别为2 1%、4 %、2 3%、0 %。结论　HPV感染具有特定的组织学部位,HSV可协同HPV16 /18恶性转化宫颈上皮细胞。     

荧光PCR法检测尖锐湿疣表面脱落细胞人乳头瘤病毒表达的应用

在人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）100余种亚型中，HPV6/11型主要引起人泌尿生殖道尖锐湿疣（eondylomata acuminata，CA）。目前，应用PCR技术检测HPV DNA是诊断该病最敏感的方法，但该法常需活体取材。我们以患者疣体表面脱落细胞为标本。检测HPV6/11 DNA，并与疣体组织检测结果进行比较。     

多重实时荧光定量PCR方法在高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测中的应用

摘要：目的?建立一种基于多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)技术的可同时检测14种高危亚型人乳头瘤病毒(HPV16、18、31、33、35、39、52、45、51、56、58、59、66、68)癌基因E6/E7 mRNA的方法。方法?对14种高危型HPV各自的E6/E7基因序列区域设计特异性引物和探针，配以优化的反应体系，形成HPV E6/E7 mRNA检测体系，评价方法检出限、特异性。收集223例临床样本，分别用自建的一步法MRT-PCR法与转录介导等温核酸扩增(TMA)技术(Aptima?HPV试剂盒)检测HPV E6/E7 mRNA，同时评估HPV E6/E7 mRNA检测结果与薄层液基细胞学检测、宫颈组织病理学检测结果的一致性。结果?建立的检测方法对常见的低危型HPV无交叉检出，且对14种高危型HPV的检测限可达10～100 copies/μL。该方法检测223例临床标本的结果与Aptima??HPV检测结果相比，一致性较好(Kappa=0.910)。以组织病理结果为CINⅡ及以上的作为阳性，MRT-PCR法临床检测敏感性为84.0%，特异性为94.4%，阳性预测值为65.6%，阴性预测值为97.9%。结论?建立的MRT-PCR方法具有特异性好、灵敏度高和稳定性好等优点，为HPV临床快速检测以及宫颈病变筛查提供了一个有效的技术平台。     

荧光定量PCR检测性病患者人乳头瘤病毒核酸

为了解本地区STD患者中HPV的感染情况,我们对2 0 0 1年9月～2 0 0 2年8月收集的35 7名STD患者标本进行HPVDNA荧光定量检测,结果如下。1　材料和方法1.1　研究对象　本院性病门诊尖锐湿疣(CA)患者10 3例,均为男性,年龄2 1～6 5岁,平均30 .2岁;HPV亚临床感染者2 5 4例,男137例,女     

人乳头瘤病毒基因亚型检测在子宫颈疾病诊断中的意义

目的: 探讨不同人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）基因亚型的感染情况及高危型HPV亚型感染与子宫颈疾病间的关系。方法: 选取我院妇科门诊就诊的1 669例患者行HPV基因分型检测,HPV检测结果为阳性的患者在知情同意后行阴道镜检查,对镜下表现可疑的患者进一步行子宫颈组织活检。结果: 1 669例患者中HPV阳性567例,总HPV阳性率为33.97%,HPV亚型感染率前5位由高到低依次为HPV-16（9.05%）、HPV-52（7.85%）、HPV-58（6.29%）、HPV-CP8304（5.81%）、HPV-53（3.71%）。不同年龄段中,≤30岁者为HPV感染的高峰年龄段。在567例HPV阳性的患者中,高危型HPV亚型感染患者共454例,占总HPV感染者的80.07%。病灶组织活检结果为高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)以上的患者中,高危型HPV亚型感染的前5位由高到低依次为HPV-16（58例）、HPV-52（26例）、HPV-58（25例）、HPV-18（10例）、HPV-31（6例）。结论: HPV感染人群高峰有年轻化趋势,HPV基因分型检测在子宫颈疾病诊断中具有重要价值,其中HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-18、HPV-31与子宫颈癌的关系密切。     

新疆地区妇女宫颈病变组织中HPV感染与分型研究

目的探讨人乳头瘤状病毒（human papillomavirus,HPV）型别在宫颈病变中分布情况。方法采用基因芯片技术对239例宫颈癌前病变或宫颈鳞癌患者的石蜡组织标本进行23种HPV基因型别检测。结果检测出20种基因型,HPV总感染率为90．0％（215／239）;单一感染中高危型HPV16感染率为84．2％（117／139）,低危型中HPV11感染检出1例;多重感染率为35．3％（76／215）,64例为HPV16与其他高危病毒的复合感染,5例为HPV16与低危病毒（6,11,43）的复合感染,7例为低危病毒与低危病毒的复合感染。结论高危型HPV16感染是新疆地区妇女宫颈病变中常见亚型,多重感染可能与宫颈病变进展无关。     

FQ—PCR检测HPV基因型的临床应用分析

目的了解人乳头瘤病毒感染患者HPV6,11型和HPV16,18型的分布。探讨HPV—DNA分型检测的临床应用价值。方法采用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）方法检测1567例HPV感染者疣体组织或分泌物中的HPV6,11型和HPV16,18型。结果男女性均可感染HPV6,11和HPV16,18型,男性感染者以HPV6,11型为主,感染率为27．68％（157／567）。女性1000人次中,确诊感染HPV有659人,HPV阳性320人次,检出率为32％,其中低危型208例,即HPV6,11型阳性率为31．56％;高危型112例,即HPVl6,18型为16．99％。结论FQ—PCR具有灵敏度高、特异性强、简捷方便的特点,适于临床推广应用。HPVDNA分型检测技术可以快速区分高危型及低危型HPV感染,有助于对尖锐湿疣的复发和宫颈癌变作出可能性预测。     

宫颈癌病理组织中HPV基因型别分析

目的调查本地区子宫颈癌病理组织中HPV基因型别,为子宫颈癌HPV筛查方法的选择提供依据。方法应用可检测23种HPV基因型别的基因芯片法对61例经病理证实的子宫颈癌石蜡包埋组织进行HPV基因型别分析。结果在61例子宫颈癌组织标本中,共检出41例HPV阳性,阳性率为67.2%,其中HPV16型别26例,占HPV阳性病例的63.4%(26/41),HPV18型别12例,占HPV阳性病例的29.2%(12/41),HPV33型1例,不同基因型混合感染2例,分别为HPV16/18与HPV16/59型别混合感染各一例,各占HPV阳性病例的2.4%(1/41)。结论在本地区的61例子宫颈癌病理组织中,以16和18基因型最为常见,共占HPV阳性型别构成比的95.3%,说明本地区与子宫颈癌密切相关的HPV基因型别较为集中。     

高危型人乳头状瘤病毒16,18型DNA检测在宫颈病变筛查中的应用价值

目的评价高危型人乳头状瘤病毒16,18型(HPV16,18)DNA检测在宫颈病变筛查中的价值。方法收集209例病理组织学结果为癌及癌前病变[宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈浸润癌]和296例病理组织学为良性病变(炎症、息肉等),并同时做了液基细胞学检查、HPV16,18 DNA检测的病例,统计比较HPV16,18 DNA检测与液基细胞学检查对癌及癌前病变的敏感性、特异性及阴性预测值;比较不同病变程度分类患者中HPV16,18的检出率。结果 209例癌及癌前病变患者中HPV16,18阳性158例,液基细胞学阳性[低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、不除外高级别鳞状上皮细胞(ASC-H)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌]128例。296例宫颈良性病变患者HPV16,18阳性43例,液基细胞学阳性2例。HPV16,18 DNA检测对癌及癌前病变的敏感性为75.6%,液基细胞学为61.2%,两者比较差异有统计学意义(χ2=12.69,P<0.01),HPV16,18 DNA对癌及癌前病变的检出率明显高于液基细胞学。HPV16,18 DNA检测特异性为85.5%,阴性预测值为83.2%;液基细胞学特异性为99.3%,阴性预测值为78.4%;CINⅡ病变的HPV阳性检出率明显高于CINⅠ(χ2=6.69,P<0.05)。结论高危型HPV16,18感染与宫颈癌及宫颈癌前病变的发生、发展密切相关,HPV16,18 DNA检测对癌前病变和宫颈癌的敏感性高于液基细胞学、特异性低于液基细胞学,对宫颈炎、息肉等良性病变的阴性预测值高于液基细胞学,检测HPV16,18 DNA有着重要的临床价值。     

高危型HPV检查和TCT在宫颈癌及癌前病变的早期诊断临床研究

目的研究高危型人乳头瘤病毒(HPV)检查及薄层液基细胞学技术(TCT)在宫颈癌与癌前病变的早期诊断的临床应用价值。方法回顾性分析高危型HPV检查及TCT对1 248例宫颈癌筛查对象的检查结果。比较两种方法及联合应用的临床诊断价值。结果病理组织学CINⅠ期组、CINⅡ期组、CINⅢ期组、宫颈癌组高危型HPV感染率及TCT阳性率与正常及炎症组比较均有统计学差异(P<0.05);CINⅠ-Ⅲ期及宫颈癌组高危型HPV感染率、TCT阳性率均高于正常及炎症组;高危型HPV检测与TCT两种方法联合检测灵敏度(92.2%),正确诊断指数(0.71)、阴性预测值(99.6%)及阳性预测值(40.2%)均有不同程度的提高。结论高危型HPV检测与TCT联合对宫颈癌早期发现、早期诊断有重要的临床意义。     

实时PCR快速检测宫颈组织HPV16感染的应用

目的建立实时PCR技术快速检测宫颈组织HPV16感染。方法根据GeneBank中HPV16E6序列,设计合成特异的引物和MGB荧光探针,优化实验条件,并对40例宫颈癌,38例宫颈非典型增生,20例正常对照宫颈组织标本进行HPV16DNA检测。结果建立了灵敏、特异地检测宫颈组织HPV16DNA的实时PCR技术;宫颈癌、宫颈非典型增生和正常对照宫颈组织中HPV16DNA阳性率分别为42.5%、34.2%和0%;宫颈癌组织中HPV16DNA平均拷贝数(106.01±1.22拷贝/mL)高于宫颈非典型增生组(105.78±1.37拷贝/ml),但差异无显著性(P>0.05)。结论实时PCR检测宫颈组织内HPV16感染,具有快速、简便、特异性强等优点,适用于临床常规检测。     

宫颈鳞癌人乳头状瘤病毒16/18E6感染与脆性组氨酸三联体表达状态的研究

目的探讨宫颈鳞癌中人乳头状瘤病毒(HPV)16/18 E6、脆性组氨酸三联体(FH IT)蛋白表达的情况以及两者的相关性,了解HPV16/18 E6、FH IT蛋白表达与宫颈癌临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学M axV ision法对40例宫颈鳞癌组织标本和10例正常宫颈组织,进行HPV16/18 E6、FH IT蛋白表达的检测。结果 HPV16/18 E6蛋白在宫颈癌组织中比在正常宫颈组织中表达明显增多,FH IT蛋白在宫颈癌组织中比在正常宫颈组织中表达明显减少,FH IT蛋白与HPV16/18 E6蛋白的表达存在相关关系。结论 FH IT蛋白缺失与宫颈鳞癌发生有关,它的缺失可能作为HPV16/18阳性高危人群的筛选指标。     

荧光定量PCR检测在宫颈癌筛查中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测宫颈病变人乳头瘤病毒(HPV)13种高危型DNA的可行性,为检测宫颈组织中HPV的感染提供有效的方法。方法选择197例阴道细胞学检测异常的宫颈脱落细胞,使用FQ-PCR方法检测13种高危型HPV DNA,同时取宫颈病变处组织进行组织病理学检查。结果 329例样本中HPV 13种高危型阳性者218例,阳性率为66.26%:CT值范围在13～40之间,平均为(26±2.31);组织病理学检测186例阳性,阳性率为56.53%,经χ~2检验,差异有统计学意义(χ~2=6.566,P=0.0104);阴性标本为Undet。结论 FQ-PCR方法检测宫颈病变中13种高危型HPV DNA感染,具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点,对宫颈癌的普查和治疗有指导意义。     

新疆维吾尔族及汉族宫颈癌及高危癌前病变与HPV感染亚型关系研究

目的了解新疆维吾尔族（维族）、汉族妇女宫颈癌及高危癌前病变患者人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）各亚型感染情况。方法利用HPV分型检测试剂检测21种HPV亚型在新疆维、汉族宫颈癌各40例及宫颈高危癌前病变各40例中分布情况。结果 HPV56,58型是维、汉族妇女宫颈癌中除HPV16型外感染率较高的高危分型,且在维族与汉族妇女宫颈癌中感染率差异有统计学意义（P=0.027,P=0.023）;维族二重感染多为HPV16＋56型感染,汉族多为HPV16＋58型感染;维、汉族高危癌前病变间多重感染率差异有统计意义（P〈0.05）。结论新疆维、汉族宫颈癌患者均有较高HPV感染率,且维、汉族妇女HPV感染亚型具有民族差异。