脱细胞猪角膜表面基底膜成分的检测

背景:前期实验显示脱细胞猪角膜具有良好的组织相容性,可以支持角膜细胞和皮肤上皮细胞的生长。目的:检测脱细胞猪角膜是否保存了利于角膜上皮细胞生长的重要组织结构—基底膜。方法:利用荧光抗体对脱细胞猪角膜表面的基底膜成分(层粘蛋白和Ⅳ型胶原)进行免疫组织化学检测,荧光显微镜下观察脱细胞猪角膜表面是否保存了基底膜成分。结果与结论:免疫荧光染色显示脱细胞猪角膜前基质表面层粘蛋白和Ⅳ型胶原呈阳性表达,与新鲜猪角膜表面基底膜的荧光表达相同,表明脱细胞猪角膜保存了利于角膜上皮细胞生长的基底膜。     

飞秒激光辅助脱细胞猪角膜移植术治疗真菌性角膜炎的护理

目的探讨飞秒激光辅助脱细胞猪角膜基质(APCS)行板层角膜移植术治疗真菌性角膜炎的护理方法及效果。方法对临床确诊为真菌性角膜炎的37例(37眼)患者用APCS行板层角膜移植术,同时给予针对性护理和定期随访。结果全部病例术后随访4~6个月,31例(83.8%)患者较术前视力提高了3行以上,6例(16.2%)患者视力保持不变;37例患者术后眼部刺激症状均得到缓解;所有病例角膜植片均在7d内全部上皮化,角膜植片术后2周变透明,随访期间均无真菌感染复发征象。结论术前加强心理护理和固视训练,术后密切病情观察和眼部护理,出院前进行科学指导和示范滴眼,出院后做好定期随访和用药监督,是巩固治疗成果的重要环节。     

37例真菌性角膜炎患者行飞秒激光辅助脱细胞猪角膜基质移植术的护理

报道37例真菌性角膜炎患者行飞秒激光辅助脱细胞猪角膜基质移植术的护理经验。其护理要点：术前加强心理护理和固视训练,做好隔离护理和术前准备;术后做好并发症观察和眼部护理;出院前进行健康指导和示范滴眼;出院后做好定期随访和用药监督。本组37例患者术后眼部刺激症状缓解,角膜植片在7 d内全部上皮化。本组6例患者术后视力无变化,31例患者视力不同程度提高;1例患者角膜植片小部分脱落,经绷带加压包扎10 d后角膜恢复透明度;2例患者角膜有新生血管形成,立即拆线,并对新生血管进行切断处理,局部滴用典必殊和环胞霉素A滴眼液,有效抑制其生长;1例患者发生下方角膜部分溶解,给予脱细胞猪角膜基质加固后,移植角膜保持在位。随访4~6个月,37例患者随访期间均无真菌感染复发征象。     

学科新闻:中国海洋大学8年研制出组织工程人角膜内皮

角膜出了问题,过去只能等着别人捐献角膜移植,今后,更多因角膜病失明的患者,将有望通过移植人工"种植"的角膜复明.中国海洋大学海洋生命学院细胞生物学研究室的"组织工程人角膜内皮的体外重建及其在兔角膜移植中作用的探讨"科研课题获教育部鉴定通过,角膜中极其重要的一部分角膜内皮已经可以人工"种植".     

复合皮移植的手术配合

目的 总结11例烧伤或瘢痕整复患者应用猪脱细胞真皮与自体刃厚皮复合移植的手术配合经验.方法 做好患者的心理护理、常规和特殊器械的准备、熟悉手术方法;巡回护士及洗手护士积极主动配合.猪脱细胞真皮组织反复泡洗、消毒,严格执行无菌技术操作原则及消毒隔离制度.结果 11例患者能配合完成手术,手术过程顺利,复合皮生长良好.结论 做好一步法复合皮移植术的手术配合,可提高手术成功率.     

自体角膜移植术患者的围手术期护理

目的 总结采用自体穿透角膜移植术或自体游离板层角膜瓣移植治疗角膜白斑及角膜穿孔的护理.方法 术前做好心理护理,按医嘱给药和做好术前术眼护理及全身检查,进行有针对性的术前指导,术后做好生活护理、饮食护理、拆线护理,并仔细观察病情,及时有效处理并发症,做好出院指导.结果 患者术后前房恢复,伤口愈合好,视力有不同程度提高.结论 自体角膜移植术是治疗角膜白斑及穿孔的一种有效术式,积极有效的护理干预是手术成功的重要因素.     

急性排斥期大鼠角膜移植物超微结构的特征性变化

目的:研究急性排斥期同种异体穿透性角膜移植物超微结构的变化,探讨其与角膜移植排斥反应之间的关系。方法:建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,术后观察排斥反应指数变化,急性排斥期取已经发生排斥反应的角膜植片,透射电镜观察角膜植片各层超微结构的变化。并以正常大鼠角膜做对照。结果:与正常角膜相比,已发生排斥反应的角膜植片超微结构改变主要表现为细胞凋亡和细胞坏死共存的特征。结论:细胞毒性T淋巴细胞介导的细胞凋亡可能是导致角膜移植排斥反应发生的主要因素之一。     

深板层角膜移植与穿透性角膜移植视力恢复的差异

背景:角膜移植可主要分为以恢复角膜透明性和提高视力为主要原因的光学性角膜移植和以修补及重建角膜完整性为主要原因的治疗性或结构性角膜移植.目的:对比分析深板层角膜移植与穿透性角膜移植成功率和降低并发症发生率的临床效果.方法:分析深板层角膜移植和穿透性角膜移植患者43例43眼,26例26眼行深板层角膜移植,17例17眼行穿透性角膜移植,供体角膜均来自死亡后的捐献,24 h内4℃湿房保存,移植后用药常规抗炎抗排斥反应,随访3～37个月,观察两组移植前后的裸眼视力和矫正视力,对比疗效、排斥反应、并发症.结果与结论:与移植前比较,两组患者移植后裸眼视力和矫正视力均有提高(P<0.05).深板层角膜移植后并发症为后弹力膜穿孔1例,移植排斥反应2例,穿透性角膜移植后青光眼1例,虹膜前粘连1例,排斥反应4例.深板层角膜移植可以减少排斥反应的发生率和并发症,移植后视力恢复与穿透性角膜移植无明显差异,但建议内皮功能正常的角膜基质病变可尽量选择深板层角膜移植.     

角膜移植260例病因分析并与国外数据比较

目的:总结进行角膜移植手术患者的病因学资料,并与国外相应统计资料比较。方法:收集2001-12/2005-12在南昌大学医学院第一附属医院眼科接受角膜移植手术的260例患者(260眼)的临床资料做以统计,内容包括性别、年龄,与角膜移植相关的临床诊断、手术方法等,患者均知情同意。患者的病种统计以出院时第一诊断为基准。260例患者中行单纯板层角膜移植125例,单纯穿透性角膜移植63例,联合羊膜覆盖33例,联合角膜缘干细胞移植术20例,联合结膜瓣遮盖术19例。术后半年进行视力评估,视力<3.7为盲。结果:260例角膜移植患者全部进入结果分析,无脱落。①260例患者中男162例,女98例,年龄(24±19)岁。角膜移植的病因按病例数由多至少排列,首位为角膜炎后角膜白斑,计86例(占3.08%),尤以病毒性角膜炎为主;外伤后角膜疤痕病变居第2位,计78例(占30%),随后为角膜溃疡并穿孔、蚕食性角膜溃疡、圆锥角膜、角膜皮样瘤、角膜营养不良、角膜失代偿、角膜葡萄肿以及角膜原位癌。角膜炎后角膜白斑病毒性角膜炎后最为多见,而国外类似的统计表明大泡性角膜病变占据首位。②术后半年260例角膜移植患者的脱盲率达94%。结论:与发达国家角膜移植最常见病因为大泡性角膜病变不同,角膜炎后角膜白斑、外伤后角膜疤痕、角膜溃疡并穿孔依次是国内角膜移植最常见的原因。     

软壳技术应用于穿透性角膜移植术后白内障超声乳化手术的疗效

目的:评价软壳技术应用于穿透性角膜移植术后白内障超声乳化手术的疗效.方法:对穿透性角膜移植术白内障患者20例20眼行白内障超声乳化摘除术联合人工晶体植入术,术中应用Duo Visc粘弹剂的软壳技术保护角膜内皮,超声乳化Soverign超声乳化仪行冷超声,并植入AR40e丙烯酸折叠式后房型人工晶体,术前,术后7 d、30 d、90d、1年随访观测裸眼视力、最佳矫正视力、角膜内皮细胞计数、六角形细胞计数.结果:20例患者术后裸眼视力范围0.2～0.7,最佳矫正视力0.3～1.2,角膜内皮细胞损失率6.2%,经过3～12个月的随访,无一例发生大泡性角膜病变.结论:穿透性角膜移植术后白内障超声乳化手术时使用DuoVisc粘弹剂软壳技术,超声乳化时行冷超声并行囊袋内超声能有效保护角膜内皮.     

Porcine radial artery decellularization by high hydrostatic pressure

Many types of decellularized tissues have been studied and some have been commercially used in clinics. In this study, small‐diameter vascular grafts were made using HHP to decellularize porcine radial arteries. One decellularization method, high hydrostatic pressure (HHP), has been used to prepare the decellularized porcine tissues. Low‐temperature treatment was effective in preserving collagen and collagen structures in decellularized porcine carotid arteries. The collagen and elastin structures and mechanical properties of HHP‐decellularized radial arteries were similar to those of untreated radial arteries. Xenogeneic transplantation (into rats) was performed using HHP‐decellularized radial arteries and an untreated porcine radial artery. Two weeks after transplantation into rat carotid arteries, the HHP‐decellularized radial arteries were patent and without thrombosis. In addition, the luminal surface of each decellularized artery was covered by recipient endothelial cells and the arterial medium was fully infiltrated with recipient cells. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

带蒂结膜瓣自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉210例效果观察及护理

目的:探讨带蒂结膜瓣自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉的效果及护理方法。方法:对210例翼状胬肉患者行带蒂结膜瓣自体角膜缘干细胞移植术,并对其实施完善、周密的护理。结果:本组患者植片愈合好,角膜创面光滑透明,无角膜新生血管形成,术后6个月内无复发及其它并发症,1年后复发者4例。结论:对翼状胬肉患者行带蒂结膜瓣自体角膜缘干细胞移植术,并给予术前安全管理、协助完善术前检查、充分的心理护理、术后细致的眼部护理、详尽的出院指导,可促进患者康复,取得满意效果。     

供体角膜两种抗菌处理方法的效果比较

目的研究供体角膜消毒方法,观察抗生素和消毒剂两种处理技术的效果,预防角膜移植术后感染。方法用定性培养法和稀释法,对抗生素和消毒剂处理角膜的抗菌效果进行了检测。结果用1000单位的妥布霉素和含有效碘5000 mg/L聚维酮碘分别对供体角膜浸泡处理30 min和5 min,手术时对其保存液及剩余的角巩膜环分别进行细菌培养,妥布霉素处理组细菌检出阳性率为15.38%;聚维酮碘处理组细菌检出阳性率为5.13%。结论用有效碘5000 mg/L聚维酮碘或1000单位妥布霉素浸泡处理供体角膜,均显示出比较好的抗菌效果;聚维酮碘抗菌效果效果好于妥布霉素。     

人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架构建的组织工程心脏瓣膜

背景:去细胞处理的猪主动脉瓣膜植入人体后发生了免疫排斥反应,分析引起免疫排斥反应的原因是由于猪瓣膜的细胞外基质与宿主发生接触引起了免疫激活.目的:试图将人自身的细胞外基质履盖去细胞猪瓣膜表面起到隔离猪瓣膜与宿主血液成分接触的作用.同时应用免疫组化的方法验证人细胞外基质覆盖瓣膜的效果.设计、时间及地点:观察性实验,于2008-08/2009-04在解放军第二军医大学长海医院胸心外科实验室完成.材料:新鲜猪心脏瓣膜取白上海五丰上食肉联厂,采用酶消化法将猪主动脉瓣叶行脱细胞处理.密度梯度离心法从健康志愿者骨髓中获取骨髓基质干细胞.方法:用人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架来构建组织工程瓣膜,再应用前期制备的抗人细胞外基质单克隆抗体,采用免疫组织化学染色鉴定人细胞外基质在体外构建的组织工程瓣膜上的黏附情况.以未构建的去细胞猪瓣叶为对照组.主要观察指标:①组织工程瓣膜上种子细胞的黏附和生长情况.②免疫组织化学法检测人细胞外基质在瓣膜上覆盖的效果.结果:光镜下观察瓣膜表面均形成了细胞层.扫描电镜所见细胞排列欠规则,未完全覆盖去细胞瓣叶表面,可见裸露的瓣膜支架.免疫组织化学方法检测构建的瓣膜表面呈阳性反应证明有人的细胞外基质黏附,而对照组呈阴性证明了检测方法具有特异性.结论:体外构建的组织工程瓣膜上检测到有人的细胞外基质黏附.     

薄角膜近视病人行准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术的护理

[目的]探讨薄角膜近视病人行准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术(LASEK)的护理方法.[方法]对48例(95眼)薄角膜近视病人术前严格检查和精心准备,做好心理护理,消除病人紧张、恐惧情绪;术中密切护理配合;术后予以健康指导及定期复查.[结果]48例(95眼)术后随访6个月,全部病人裸眼视力好于术前最佳矫正视力,达到了预期目的,无并发症发生.[结论]良好的护理配合是手术成功的有力保障.     

猪去细胞心脏瓣膜的免疫原性

背景:在去细胞猪瓣膜(Synergraft 瓣膜)的临床应用时发现异种的细胞外基质引发了人体一个强烈的炎症反应.早期的炎症反应严重地削弱了瓣膜内壁的基质结构,导致了移植物的结构破坏及衰败.从Synergraft瓣膜的事件中认识到猪去细胞瓣膜仍然具有免疫原性,尤其是在儿童患者中这种免疫反应会更强烈.因此对于细胞外基质蛋白引起的免疫排斥反应仍需要进一步的研究.目的:通过生物信息学的方法找到人与猪细胞外基质蛋白的基因序列差异,并制备抗体验证基质的免疫原性.设计、时间及地点:以Ⅳ型胶原基质为观察对象进行人、猪细胞外基质基因差异性的对比研究.于2008-06/2009-05在解放军第二军医大学长海医院胸心外科实验室完成.材料:新鲜猪瓣膜由上海五丰上食肉联厂提供,去细胞猪瓣膜、杂交瘤细胞和单克隆抗体由长海医院胸心外科实验室制备.方法:通过比较人、猪、鼠基因序列之间的相似区域和保守性位点,寻找有进化关系基因序列之间共同的保守区域、位点和序列差异,探索导致它们产生共同功能的基因序列以及基因序列间的差异片段.应用制备的抗猪Ⅳ型胶原单克隆抗体,采用免疫组化染色鉴定猪去细胞瓣膜上的猪瓣膜自身的细胞外基质存留情况.主要观察指标:Ⅳ型胶原基因序列差异分析结果、自制抗体有效性的免疫组化测试、自制抗体对猪去细胞瓣膜Ⅳ型胶原的检测结果.结果:通过基因比对的方法找到了人与猪Ⅳ型胶原的基因序列差异.通过杂交瘤技术成功制备检测细胞外基质的单克隆抗体;用免疫组化的方法检测到猪去细胞瓣膜上有猪的细胞外基质存留.结论:猪去细胞瓣膜支架上检测到有猪的细胞外基质存留,并且具有免疫原性.     

Decellularized human corneal stromal cell sheet as a novel matrix for ocular surface reconstruction

The shortage of donor corneas as well as the limitations of tissue substitutes leads to the necessity to develop alternative materials for ocular surface reconstruction. Corneal surface substitutes must fulfill specific requirements such as high transparency, low immunogenicity, and mechanical stability combined with elasticity. This in vitro study evaluates a decellularized matrix secreted from human corneal fibroblasts (HCF) as an alternative material for ocular surface reconstruction. HCF from human donors were cultivated with the supplementation of vitamin C to form a stable and thick matrix. Furthermore, due to enhanced cultivation time, a three‐dimensional like multilayered construct which partly mimics the complex structure of the corneal stroma could be generated. The formed human cell‐based matrices (so‐called cell sheets [CS]) were subsequently decellularized. The complete cell removal, collagen content, ultrastructure, and cell toxicity of the decellularized CS (DCS) as well as biomechanical properties were analyzed. Surgical feasibility was tested on enucleated porcine eyes. After decellularization and sterilization, a transparent, thick, cell free, and sterile tissue substitute resulted, which allowed expansion of limbal epithelial stem cells with no signs of cytotoxicity, and good surgical feasibility. DCS seem to be a promising new corneal tissue substitute derived from human cells without the limitation of donor material; however, future in vivo studies are necessary to further elucidate its potential for ocular surface reconstruction.     

小光区大修边准分子激光角膜皮下磨镶术治疗难治性近视眼的临床护理

[目的]探讨薄角膜合并近视度数较高一般方法不能治疗的近视眼病人采用小光区大修边准分子激光角膜上皮下磨镶术的临床护理方法。[方法]选高屈光度薄角膜不能行LASIK病人157例(312眼)为观察对象,行小光区大修边LASEK手术,制订最佳护理方案。[结果]通过常规护理保证手术效果,通过心理疏导解决了病人的心理障碍。[结论]该项技术我科首先在国内开展报道具有创新性,对角膜厚度薄合并高度屈光不正的病人,该手术是一种安全有效的手术方法。     

脂肪间充质干细胞分化为内皮细胞并体外构建组织工程心脏瓣膜

背景:组织工程心脏瓣膜是利用组织工程技术将种子细胞种植于瓣膜支架上所构建的一种人工瓣膜,目前国内外研究主要集中于种子细胞来源及支架选择上。目的:探讨人脂肪间充质干细胞体外向内皮细胞诱导分化后的细胞作为种子细胞,脱细胞猪主动脉瓣膜作为支架体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性。方法:利用吸脂术采集脂肪组织,分离、培养脂肪间充质干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表型;免疫细胞化学方法及RT-PCR检测细胞分化标志物;应用TritonX-100联合胰蛋白酶的方法制备脱细胞猪主动脉瓣支架,将体外培养扩增的诱导分化后的内皮细胞种植于支架上构建组织工程心脏瓣膜,光镜及电镜下观察组织工程心脏瓣膜的组织学结构。结果与结论:脂肪组织分离培养的脂肪间充质干细胞向内皮细胞诱导分化后表达CD31、CD34、CD144、Ⅷ因子和内皮型一氧化氮合成酶等内皮细胞特异性抗原;脱细胞猪主动脉瓣膜支架脱细胞完全,弹力纤维及胶原纤维保持完整;构建的组织工程心脏瓣膜可见支架上排列连续的单细胞层。提示脂肪间充质干细胞在体外向内皮细胞诱导分化后已初步具有内皮细胞功能,在脱细胞猪主动脉瓣膜支架上生长良好,可以在体外初步构建组织工程心脏瓣膜。     

23例1型糖尿病患者行猪胰岛细胞移植手术治疗的护理

总结猪胰岛移植治疗1型糖尿病患者的手术治疗护理。护理重点包括:术前,做好各项专科检查,评估及筛选合适的患者,密切监测血糖,将血糖控制在理想范围,针对患者出现的心理问题(如对手术的恐惧及术后疗效期望过高)进行护理;术后,预防感染,进行保护性隔离;严密监测血糖,警惕高血糖、低血糖的出现;做好个体化饮食指导及护理,准确执行各种用药,观察药物反应;针对患者恐惧、紧张等给予心理疏导及支持;观察与预防并发症,做好出院健康宣教及出院随访。本组患者进行猪胰岛细胞移植手术治疗后,未出现明显移植排斥反应,生命体征平稳,移植治疗6个月随访血糖控制较前明显改善。