大鼠上橄榄复合体中枢听觉信息处理相关蛋白的研究

目的:同位素相对标记和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术分析大鼠上橄榄复合体(superior olivary complex,SOC)胞膜差异蛋白?方法:从 P60健康的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠的脑组织中,分离出耳蜗核(cochlear nuclear complex,CN)?SOC和下丘(inferior colliculus,IC),用iTRAQ技术检测SOC区域胞膜蛋白并分析其差异表达的蛋白质?以剩余脑组织(Rest)作为对照?结果:质谱分析共鉴定到1 937种膜蛋白质,核团间两两比较,确定SOC有14种区域特异蛋白?Gene ontology(GO)功能分析提示丙氨酸-tRNA连接酶(alanyl-tRNA synthetase,Aars)?双官能谷氨酰-脯氨酸-tRNA合成酶(glutamyl-prolyl-tRNA synthetase,Eprs)?α-内连蛋白(α-internexin,Ina)和溶质载体44A1(solute carrier 44A1,Slc44A1)等蛋白主要参与神经系统发育?神经传递和突触可塑性,其余蛋白与能量代谢有关?结论:iTRAQ技术分析SOC胞膜差异蛋白,鉴定到Aars?Eprs?Ina?Slc44A1等蛋白参与中枢听觉信息处理,为进一步研究中枢听觉处理障碍提供了理论依据?     

侵袭性垂体腺瘤的MRI表现与Bcl-2、Gal-3表达的相关性研究

目的：探讨侵袭性垂体腺瘤MRI表现与B细胞淋巴瘤基因2（Bcl-2）和半乳糖凝集素3（Gal-3）蛋白水平表达的相关关系。方法：采用免疫组织化学Envision法检测26例侵袭性和23例非侵袭性垂体腺瘤组织中Bcl-2与Gal-3的蛋白表达水平,并与MRI表现上垂体腺瘤最大径线进行相关分析。结果：侵袭性垂体腺瘤组Bcl-2与Gal-3的蛋白表达均较非侵袭性垂体腺瘤组增高（P〈0.05）。Bcl-2、Gal-3的蛋白表达与侵袭性垂体腺瘤最大径线呈正相关关系。结论：侵袭性垂体腺瘤生物学行为与Bcl-2与Gal-3的表达增高有关。Bcl-2、Gal-3可用于临床对于垂体腺瘤进行诊断及预后的评价。     

一氧化氮/环鸟苷酸通路在豚鼠耳蜗的定位

目的：检测一氧化氮合成酶（NOS）、可溶性鸟苷环化酶（sGMP）在豚鼠耳蜗的定位。方法：正常豚鼠耳蜗石蜡包埋切片，用免疫组化方法检测NOS，sGMP在豚鼠耳蜗的表达。结果：诱生型一氧化氮合成酶（iNOS）在正常豚鼠耳蜗中表达阴性。神经源性的一氧化氮合成酶（bNOS）、内皮源性的一氧化氮合成酶（eNOS）、sGC及cGMP在耳蜗的不同部位表达有差异。在豚鼠耳蜗主要以eNOS表达为主，且在耳蜗的基底圈表达较强。结论：bNOS，eNOS在豚鼠耳蜗的表达阳性，且伴随sGC，cGMP的表达，提示一氧化氮（NO）/cGMP通路参与耳蜗神经传导、耳蜗的稳态及放大功能调节。     

人和猪神经脱细胞基质蛋白质组学差异

目的：分析猪与人外周神经在脱细胞后的蛋白质组学差异,为猪神经脱细胞材料运用于外周神经损伤（PNI）的修复提供一定的数据支撑。方法：通过研磨和酶解方式提取猪神经脱细胞基质（pDNM）和人神经脱细胞基质（hDNM）内的所有蛋白,采用以串联质量标签（TMT）为标记的液相色谱质谱联用（TMTHPLC-MS/MS）技术定量并对2组差异蛋白进行GO富集化和KEGG通路分析。结果：共鉴定1 448 种蛋白,组间蛋白都能明显区分,组内蛋白相关性良好。其中,pDNM上调蛋白数456个,下调蛋白数170个,且pDNM富含更多的细胞外基质（ECM）相关蛋白。GO分析显示,上调表达蛋白所处的细胞位置集中在生长锥、轴突、神经元胞体。上调表达蛋白参与的生物学过程为细胞迁移、细胞骨架组织、轴突发育。上调蛋白的主要分子功能与生物功能调节、细胞骨架的结构组成、肌动活性有关。KEGG通路分析显示,差异蛋白可参与肌动蛋白细胞骨架的调节、轴突的引导等信号通路的激活。结论：pDNM内含丰富的结构和功能相关蛋白,有望成为修复PNI的备选产品。     

中枢VIP参与电针对大鼠胃黏膜的保护作用

目的：探讨中枢迷走背核复合体（DVC）血管活性肠肽（VIP）参与电针对大鼠胃黏膜保护作用的机制。方法：采用束缚－冷应激法复制胃黏膜损伤大鼠模型，通过中枢DVC微量注射VIP，观察电针对胃黏膜血流量（GMBF）、损伤模型（LI）和跨壁电位差（PD）的影响。结果：中枢DVC微量注射VIP后，模型组GMBF、PD明显增加（P＜0．05或P＜0．01），LI下降（P＜0．01），电针对中枢DVC微量注射VIP后的GMBF增加有协同作用。结论：VIP参与电针对损伤的胃黏膜的保护作用；DVC是VIP作用的中枢特异性部位之一。     

大鼠脊髓排尿反射通路的形态学研究

目的研究大鼠脊髓水平的排尿反射路径.方法于大鼠膀胱壁注入结合霍乱毒素B亚单位的辣根过氧化物酶（CB-HRP）,研究膀胱感觉传入末梢在脊髓内的分布部位.于L1～L2 节段的中间侧细胞柱及骶副交感核分别给予辣根过氧化酶（HRP）和结合麦芽凝集素的辣根过氧化物酶（WGA-HRP）,分别在L6～S1检测逆标神经元和L1～L2检测顺行示踪末梢.结果膀胱感觉末梢从脊髓后角进入脊髓后,主要分布走向至骶副交感核和后联合核.于交感中枢给予HRP后,在副交感中枢的背内侧发现有逆标的非胆碱能性神经元,且该神经元的所在部位正好位于膀胱的感觉末梢分布的部位.于骶副交感核给予WGA-HRP后,发现在L1～L2节段中间侧细胞柱区有顺行的神经末梢.结论脊髓内部除了有盆神经-副交感中枢-盆神经的反射通路以外,可能还存在有盆神经-交感中枢-腹下神经的反射路径.     

SP和CGRP阳性神经元在大鼠上橄榄复合体中的分布

目的：研究大鼠上橄榄复合体（SOC）中P物质（SP）和降钙素基因相关肽（CGRP）免疫反应阳性神经元的分布特点,并探讨其意义．方法：采用免疫组织化学及免疫荧光双标记技术,对大鼠脑干进行冰冻切片,在显微镜下观察sP和CGRP免疫阳性神经元胞体及神经纤维的分布特点．结果：SP阳性神经元胞体主要分布在斜方体核（Tz）,CGRP阳性神经元胞体主要分布在外侧上橄榄核（ISO）及Tz,在Tz中尚可见大量CGRP阳性神经终末包绕sP和CGRP双标记神经元胞体．结论：CGRP与SP在听觉传导功能中有协同作用,且Tz内sP阳性神经元可能参与了对LSO内CGRP阳性神经元的调控,进而参与调节橄榄耳蜗束的神经活动．     

豚鼠耳蜗核神经生长因子的免疫组化定位研究

目的：研究神经生长因子（Nervegrowthfactor,NGF）在正常豚鼠耳蜗核内分布定位。方法：采用免疫组化（ABC）方法。结果：NGF在正常耳蜗内呈非均匀性广泛分布,蜗神经腹侧核部及蜗神经背侧核散在、较少,蜗神经核颗粒层无阳性染色。结论：提示NGF在正常耳蜗核内可能对维持正常听力有一定的作用。     

奥氮平连续处理后大鼠中缝背核组织差异表达蛋白的生物信息学分析

目的 分析奥氮平连续处理的大鼠中缝背核蛋白的差异表达,探究奥氮平使用早期导致代谢障碍可能的中枢5-HT机制。方法 将40只SD大鼠随机分配到奥氮平组[灌胃奥氮平1.2 mg/(kg·d）]和对照组（灌胃等量0.9%氯化钠溶液）,两组各分配10只雌性大鼠、10只雄性大鼠。给药1次/d,连续28 d。最后一次给药1 h后处理大鼠,并取大脑中缝背核样本。利用绝对和相对定量同位素标记技术联合液相色谱-串联质谱技术对大鼠中缝背核组织进行蛋白质组学分析,进一步对差异表达蛋白进行GO、KEGG通路、COG、蛋白互作网络分析。另将24只大鼠随机分为4组：2个奥氮平组和2个对照组（6只/组）,类似方法得到大鼠中缝背核样本,根据蛋白质组学数据选择目标基因的表达进行qRT-PCR和Western blot验证。结果 筛选出奥氮平组与对照组大鼠中缝背核差异表达蛋白有72种上调、142种下调。GO注释分析显示,涉及奥氮平的差异表达蛋白参与细胞过程、生物调节、代谢过程、应激反应、多细胞生物过程以及结合、催化活性、分子功能调节、转录调节活性等分子功能。KEGG富集分析显示,涉及奥氮平的差异表达蛋白主要参与流体剪切应力与动脉粥样硬化、5-羟色胺能突触 、丁酸代谢、甲状腺激素合成 和IL-17信号通路等;PPI分析显示,涉及奥氮平的差异表达蛋白Hmgcs2、Cav1、Hsp90b1、Canx、Gnai1、MAPK9和LOC685513(Gng14）位于蛋白质互作网络的节点。qRT-PCR和Western blot结果显示,丁酸代谢和5-羟色胺(5-HT）能突触通路4个基因及其蛋白,其中丁酸代谢的关键调节基因Hmgcs2及其蛋白在药物处理组明显下调（P<0.01）,5-羟色胺2受体调控的Slc6a4、Gnai1基因及其蛋白在药物处理组均出现显著高表达（P<0.05）。结论 奥氮平使用早期可能主要通过调控中缝背核组织Hmgcs2、Cav1、Hsp90b1、Canx、Gnai1、Slc6a4、MAPK9和Gng14等差异表达蛋白以及5-HT能突触通路等,参与大鼠机体代谢障碍的中枢5-HT作用机制。     

EBV潜伏膜蛋白2的结构与功能分析

目的：预测和分析EBV潜伏膜蛋白2（LMP2）的结构和功能。方法：采用互联网数据库和生物软件,从SwissProt蛋白质数据库中检索LMP2的氨基酸序列,通过生物软件分析预测其理化性质、二级结构及空间结构。结果：分析显示LMP2由497个氨基酸组成,分子量53 011.4 Da,等电点4.85,为疏水性蛋白;具有12个疏水跨膜区,其N端含有免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）和脯氨酸富集基序（PY基序）,前者位于氨基酸序列74～77和85～88处,后者位于56～60和97～101处;含有15个α螺旋结构和7个β片层结构,通过无规则卷曲连接α螺旋和β片层。结论：通过对LMP2生物信息学的分析,获得了此蛋白的理化特性及部分参与调节跨膜信号传导功能区的信息,为进一步研究EBV的感染与致病机制、研制EBV亚单位疫苗等奠定基础。     

CK19、Gal-3和 HBME-1在甲状腺良恶性结节中的表达及其意义

目的：研究细胞角蛋白19（CK19）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）和间皮瘤相关抗体-1（HBME-1）在甲状腺良恶性结节中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法检测75例甲状腺良恶性结节中 CK19、Gal-3和HBME-1蛋白表达,良性结节36例（甲状腺滤泡性腺瘤14例,结节性甲状腺肿22例）,恶性结节39例（甲状腺乳头状癌36例,甲状腺滤泡癌3例）。结果 CK19、Gal-3和 HBME-1蛋白表达在良性结节的阳性表达率分别为41．7％、25．0％、11．1％,在恶性结节的阳性表达率均为94．9％;CK19、Gal-3和 HBME-1在诊断恶性结节的敏感性均为94．9％,特异性分别为33．3％、69．4％、88．9％。结论3项指标中,HBME-1在诊断恶性结节的敏感性和特异性最为理想;CK19、Gal-3和 HBME-1三者联合使用在甲状腺良恶性结节诊断和鉴别诊断中具有实用价值。     

EB病毒潜伏性膜蛋白1转化NP69细胞的蛋白表达分析

目的探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1（LMP1）转化鼻咽上皮细胞NP69的表达蛋白。方法采用比较蛋白质组学方法,鉴定NP69-pLNSX与NP69-LMP1细胞系中的差异表达蛋白,分析LMP1在NP69细胞中参与调节的蛋白。结果鉴定了LMP1在NP69细胞中参与调节有22个蛋白（表达上调的蛋白9个,下调的13个）。结论LMP1在NP69细胞中可能通过调节Vimentin和Keratin 19等蛋白的表达而起转化作用。     

豚鼠脑干听觉中枢生长抑素免疫反应产物的分布

目的 研究生长抑素（ＳＳ）在豚素脑干听觉中枢的分布及意义。方法 采用免疫组化ＡＢＣ法观察了豚鼠脑干听觉中枢的耳蜗核（ＣＮ）、上橄榄核簇（ＳＯＣ）及下丘（ＩＣ）内ＳＳ免疫反应阳性产物的分布。结果 在脑干听觉中枢广泛分布着ＳＳ阳性神经元、纤维及终末。ＳＳ阳性神经元主要分布在蜗神经腹核（ＶＣＮ）、斜方体核（ＮＴＢ）、内侧上橄榄核（ＭＳＯ）及橄榄周核（ＰＯＮ）,而ＳＳ阳性纤维及终末主要分布在下丘、外侧上橄     

神经内分泌肿瘤诊断中NSE,Cg—A SYP标志的意义

神经内分泌肿瘤是一组以含有神经内分泌颗粒，可分泌特异性激素或多肽为共同特征的特殊肿瘤，它发生部位广泛，形态结构多样，给病理诊断带来困难。研究发现，正常及肿瘤性神经内分泌细胞中含有某些共同物质，可作为识别神经内分泌肿瘤特异性标记物。目前应用较多的标记物有神经特异性烯酸化酶（NSE），嗜铬颗粒蛋白A（Cg-A）及突触膜蛋白（Svv）。本研究应用NSE、Cg-A、SYP三种标记物的抗体，对不同部位的神经内分泌肿瘤进行标记，以探讨三种标记物在神经内分泌肿瘤中的诊断价值。材料和方法一、一般资料（一）材料收集1977～1994年…     

半乳凝素-3和5-脂氧合酶在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的：研究半乳凝素3（galectins-3,Gal-3）和5脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-LOX）在胰腺癌中的表达及其关系。方法：收集胰腺癌44例组织及其配对的癌旁组织,采用RT-PCR检测Gal-3和5-LOX的mRNA表达情况;采用免疫组织化学染色法检测Gal-3和5-LOX的蛋白表达及分布。结果：Gal-3和5-LOX在胰腺癌组织中的mRNA表达分别为40例（90.9%）和38例（86.4%）,均明显高于配对的癌旁组织5例（11.4%）和7例（15.9%）,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。有淋巴结转移和病理分期Ⅱ期胰腺癌组织中Gal-3和5-LOX的阳性表达率高于无淋巴结转移和病理分期Ⅰ期（P＜0.05）,且Gal-3和5-LOX mRNA表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度和血管侵犯无显著相关。Gal-3和5-LOX有协同作用,呈高度正相关（r=0.71,P＜0.05）。Gal-3在胰腺癌组织和癌旁组织中蛋白阳性表达,分别为39例（84.1%）和8例（13.6%）,两者比较差异具有统计学意义（P＜0.05）,且多为强阳性表达。5-LOX在胰腺癌组织和癌旁组织中的蛋白阳性表达,分别为37例（84.1%）和8例（18.2%）,两者比较差异具有统计学意义（P＜0.05）,且多为阳性表达。结论：Gal-3和5-LOX在胰腺癌中表达增高,与病理分期和淋巴结转移有关,Gal-3和5-LOX表达呈正相关。     

关注人工听觉脑干植入

人工听觉脑干植入（ABI）是一种中枢听觉重建技术,通过直接在脑干蜗核处安置电极阵列,刺激听觉神经组织产生听觉,因此可以不受耳蜗或蜗神经病变的限制。多通道ABI诞生至今近30年,其适应证已从最初的神经纤维瘤病2型（NF2）患者扩大到重度内耳和（或）蜗神经畸形的先天性耳聋患者等,手术年龄也从成人降到幼儿。本文就ABI的原理...     

特异性SARS-CoV N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位初步分析

目的：用分段表达纯化的SARS冠状病毒（SARS-CoV）的核衣壳蛋白（nucleocapsid N蛋白）制备针对该蛋白不同区域抗原表位的高特异性单克隆抗体（McAb）,初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。方法：用分段表达纯化的SARS～CoV的N蛋白（分别记为N1蛋白、N2蛋白）分别免疫Balb／c小鼠制备McAb,通过检测其亚类、效价及相对亲和力鉴定McAb的生物学特性,以Western blot鉴定单克隆抗体特异性,并对McAb结合表位进行初步分析。结果：筛选出7株抗SARS-CoV N1蛋白及2株抗SARS-CovN2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定6株为IgG1,2株为IgG2b,1株为IgG3,腹水效价10^5以上;亲和常数达10^8以上。Western blot证实所获的单克隆抗体可与SARS-CoVN蛋白发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示2株N1 McAb识别相同的抗原表位,其余均识别不同的抗原表位。结论：通过分段表达纯化的SARS-CoVN蛋白而制备的特异性针对SARS-CoV N蛋白不同区域抗原表位的单克隆抗体中,N1单抗识别N蛋白N端（1-549bp）,N2单抗识别N蛋白C端（496～1269bp）,可初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。     

半乳糖凝集素3在宫颈癌转移中的作用

目的检测宫颈癌样本中半乳糖凝集素3（Gal-3）的表达水平,研究其在宫颈癌转移中的作用。方法选取2009年6月1日至2010年6月1日于广州市第一人民医院妇产科诊治的宫颈癌患者为研究对象。癌组织活体取材,结合病理切片及临床诊断,将患者分为正常宫颈组织组（n=8）,原位癌（CINⅢ）组（n=12）,鳞癌I期组（n=10）,鳞癌Ⅱ期组（n=9）。所取标本分别为正常对照宫颈组织和不同临床分期的宫颈癌组织标本。免疫印迹法检测Gal-3蛋白的表达情况。体外培养宫颈癌细胞株HeLa及SiHa细胞,转染siRNA（50nmol/L）抑制Gal-3表达后,采用MTT法、Transwell侵袭小室法观察其对宫颈癌细胞株增殖和侵袭的影响。结果随着宫颈癌临床分期升高,Gal-3蛋白表达水平随之增加,与正常宫颈组织组比较,CIN、鳞癌I期（S（I））、鳞癌Ⅱ期（S（Ⅱ））组Gal-3蛋白分别增加了（35.2±8.4）%、（97.6±18.2）%和（179.4±20.7）%,差异均有统计学意义（P〈0.05）。在培养的宫颈癌HeLa、SiHa细胞株上,与转染对照siRNA比较,转染Gal-3siRNA48h后可明显抑制Gal-3蛋白表达,抑制率分别为（81.6±4.7）%、（87.5±6.8）%。转染特异性siRNA48h后,以普通培养液（含10%胎牛血清）继续培养细胞24h,与对照组（转染非特异性siRNA组）比较,HeLa及SiHa细胞增殖率分别降低（42.4±6.4）%、（50.6±7.2）%,差异均有统计学意义（P〈0.01）,侵袭细胞数目分别降低（48.6±5.8）%、（52.4±8.3）%,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 Gal-3蛋白表达与宫颈癌临床分期密切相关,Gal-3可能通过促宫颈癌增殖和侵袭能力,促进宫颈癌的恶性进展。     

脾虚模型大鼠延脑腹外侧核小泡乙酰胆碱转运体免疫组化研究

目的：探讨脾虚模型大鼠胆碱能神经的变化。方法：选用特异性较强小泡乙酰胆碱转运体（VAChT）抗血清，从形态学上观察模型大鼠胆碱能神经在延脑腹外侧核中的变化。结果：模型大鼠延脑腹外侧核VAChT免疫反应与对照组相比明显减弱。结论：脾虚大鼠胆碱能神经VAChT免疫反应明显减弱，VAChT是一种新的独特 的研究中枢及外周胆碱能神经元的最有效标志物。     

血红素氧合酶-2在新生大鼠延髓的表达及意义

目的探讨产生内源性一氧化碳（carbon monoxide,CO）的关键酶血红素氧合酶-2（heme oxygenase-2,HO-2）在新生大鼠延髓的表达及意义。方法采用新生Sprague-Dawley大鼠,行石蜡切片,分别进行HE染色和免疫组织化学染色（SP法）,观察新生大鼠延髓神经核团的分布和不同神经核团中神经元的形态,以及新生大鼠延髓是否存在HO-2阳性神经元和阳性神经元的分布情况。结果在舌下神经核、疑核、巨细胞网状核、面神经核等部位均可见HO-2阳性神经元。结论 HO-2阳性神经元存在于新生大鼠延髓呼吸相关神经核团,提示内源性CO可能参与中枢性呼吸活动的调节。