LncRNAHOTAIRM1/HOXA1促进胶质瘤增殖迁移和侵袭

目的 探究长链非编码RNA HOTAIRM1(LncRNA HOTAIRM1)靶向调控HOXA1对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集2020年10月至2021年12月于温州市中心医院接受手术治疗的60例胶质瘤患者的肿瘤组织及癌旁正常脑组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定并比较正常脑组织和胶质瘤组织中HOTAIRM1 mRNA和HOXA1 mRNA表达;构建干扰LncRNA HOTAIRM1的慢病毒载体(sh-HOTAIRM1)及其阴性对照载体(sh-NC)、HOXA1过表达载体(pcDNA3.1-HOXA1)及其阴性对照载体(pcDNA3.1-NC)。培养人胶质瘤细胞LN229并进行转染干预,分为对照组(无转染)、sh-HOTAIRM1组(转染sh-HOTAIRM1)、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-HOTAIRM1+HOXA1组(转染sh-HOTAIRM1和pcDNA3.1-HOXA1)、sh-HOTAIRM1+NC组(转染sh-HOTAIRM1和pcDNA3.1-NC)。采用MTT法检测转染后各组细胞增殖能力,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡...     

细胞外ATP对U87胶质瘤细胞生长和侵袭的作用

目的观察细胞外三磷酸腺苷(adenosine Triphosphate,ATP)对体外培养的U87人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法采用MTT法检测不同浓度细胞外ATP对U87胶质瘤细胞增殖的影响;以相同条件下不加ATP作为对照组,以加入100μmol/L ATP作为处理组,采用Transwell细胞侵袭实验检测100μmol/L细胞外ATP对U87胶质瘤细胞侵袭能力的影响;用时间显微镜动态观察100μmol/L的ATP作用下U87胶质瘤细胞的迁移情况。结果高浓度(5 000μmol/L)细胞外ATP对U87胶质瘤细胞增殖有显著抑制作用,较低浓度(50、100、500μmol/L)细胞外ATP对U87胶质瘤细胞增殖无明显影响,5 000μmol/L ATP组与其他浓度组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell侵袭实验中,处理组细胞跨膜细胞数为(163.83±17.81)明显多于对照组(89.83±13.27)(P<0.01);迁移实验中,处理组细胞运动速度为(163.83±17.81)μm/h,对照组细胞运动速度为(89.83±13.27)μm/h,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 100μmol/L的细胞外ATP对体外培养的U87胶质瘤细胞的侵袭和迁移具有明显促进作用。     

ADAMDEC1对人脑胶质瘤U87细胞生物学行为的影响

目的 研究解聚素金属蛋白酶家族癸蛋白1(ADAM-DEC1)对人脑胶质瘤U87细胞增殖、黏附、侵袭、迁移和凋亡的影响及可能机制.方法 实验组(ADAMDECl-RNAi)人脑胶质瘤U87细胞用携带特异性siRNA的慢病毒感染来下调ADAMDEC1的表达,对照组(CONTROL-RNAi)用阴性对照慢病毒感染,通过观察GFP荧光的表达情况来判定转染效率,采用Real-time PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白质水平检测稳定转染的U87细胞ADAMDEC1基因的表达情况,CCK-8法检测下调ADAMDEC1表达后细胞增殖及黏附能力的变化,Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力的变化,流式细胞技术检测细胞凋亡的变化.结果 与CONTROL-RNAi相比,ADAMDECl-RNAi mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01) ;CCK-8法检测结果显示下调ADAM-DEC1表达能够显著抑制U87细胞的增殖(P< 0.05)和黏附能力(P<0. 01) ;Transwell检测结果显示下调ADAMDEC1表达能够显著抑制U87细胞的侵袭和迁移能力(P<0. 01);流式细胞术检测结果显示下调ADAMDEC1表达能够促进 U87细胞的凋亡(P<0.01).结论 在体外细胞培养试验中,下调ADAMDEC1表达能够显著抑制U87细胞的增殖、黏附、侵袭、迁移能力,促进U87细胞的凋亡.     

siRNA干扰PDLIM1表达抑制胶质瘤细胞U87迁移与侵袭

目的 研究人PDZ和LIM域蛋白1(PDLIM1)特异性siRNA对人胶质母细胞瘤U87细胞系迁移、侵袭能力的影响,并对其相关机制进行初步探讨.方法 用小RNA干扰技术下调U87细胞PDLIM1,用荧光实时定量Real-time PCR技术验证siRNA干扰效率;采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;用Western blot法检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达情况,并探讨相关机制.结果 经PD-LIM1-siRNA干扰后,胶质瘤U87细胞中PDLIM1在mRNA水平显著下调(P<0.001);与对照组相比,迁移和侵袭能力被显著抑制(P<0.001);PDLIM1基因表达下调后,U87细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、β-catenin、Slug下调.结论 PDLIM1通过EMT相关转录因子Slug调节N-cadherin、β-catenin蛋白表达,是其调节胶质瘤U87细胞迁移及侵袭能力的可能机制之一.     

CREB1在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的：探讨CREB1在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法：采用中国脑胶质瘤基因组计划（CGGA）数据库中CREB1在不同级别胶质瘤组织中的表达数据,分析CREB1的表达水平与胶质细胞瘤患者临床预后的相关性。采用CREB1小干扰RNA（si?CREB1）转染胶质瘤U251及U87细胞,通过CCK8试验及Transwell试验观察下调CREB1表达后胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的变化。结果：CREB1在人脑高级别胶质瘤组织中的表达高于低级别组,胶质瘤患者中高表达CREB1提示预后不良。下调CREB1表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力。结论：CREB1与胶质瘤的病理级别和临床预后相关,si?CREB1可以抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力。     

转录因子FOXC2与胃癌发生发展的相关性研究

目前,胃癌已成为危害人类健康的最常见的恶性肿瘤之一[1],早发现早诊治对于其预后有非常重要的价值.叉头框C2(ForkheadboxC2,FOXC2)是一个转录因子,属于人类forkhead家族,具有很多生物学行为,许多疾病以及恶性肿瘤的发生都可由FOXC2的基因突变而引起[2].本研究旨在分析FOXC2与胃癌临床病理...     

人白细胞介素-33在胶质瘤中高表达并能促进胶质瘤细胞U251的侵袭作用

目的:探讨人白细胞介素(interleukin,IL)-33在胶质瘤中的表达及在胶质瘤细胞U251侵袭中的作用?方法:采用免疫组化法检测了16例正常脑组织及86例不同级别胶质瘤标本IL-33蛋白的表达情况;应用Transwell小室检测IL-33对U251侵袭的影响;应用Western blot检测IL-33对胶质瘤细胞NF-κB及其磷酸化状态的影响?结果:免疫组化结果显示,IL-33在胶质瘤组织中表达高于正常脑组织(54.65% vs. 6.25%,P < 0.001)?IL-33在低级别胶质瘤(WHO Ⅰ?Ⅱ级)和高级别胶质瘤(WHO Ⅲ?Ⅳ级)组织中的阳性表达率分别为17.4%和68.3%(P < 0.001)?体外胶质瘤细胞的功能试验中,IL-33能促进U251细胞的侵袭(P < 0.05),并伴随NF-κB蛋白表达上调(P < 0.05)?结论:IL-33在胶质瘤中高表达,IL-33可能通过促进胶质瘤细胞NF-κB磷酸化,从而促进胶质瘤细胞的侵袭能力,对IL-33作用机制的进一步研究将为胶质瘤的临床治疗提供新思路?     

槲皮素对胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响

目的探讨黄酮类化合物槲皮素对人胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响。方法将U87细胞分成Q0、
Q50、Q100和Q150 4个组,Q0组加适量二甲亚砜（槲皮素溶剂）处理,Q50、Q100和Q150组槲皮素的浓度分别为50、100、150 μmol/L。分别
通过transwell体外侵袭实验、transwell体外迁移实验、Click-iT Edu test技术和流式细胞术检测槲皮素对其侵袭迁移能力,增殖
能力及其细胞周期的影响。结果槲皮素处理36 h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150组的侵袭细胞比率分别为：52.08%、24.63%
和13.13%,P均<0.05。槲皮素处理12 h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150的迁移细胞比率分别为：49.46%、26.78%和14.56%,P
均<0.05。槲皮素处理24 h后,Q0、Q50、Q100和Q150组的增殖细胞百分比分别为25.21%、18.38%、16.74%和15.24%。G0/Gl期C6细
胞所占比例分别为71.14%、72.71%、69.29%、66.47%,S 期分别为25.32%、22.48%、21.96%、23.32%,G2/M 期分别为3.53%、
4.80%、8.75%、10.25%;Q100、Q150组的G2/M期细胞比例与Q0组比较,P均<0.05。结论槲皮素能明显降低胶质瘤细胞的侵袭迁移
能力;并可通过阻断U87细胞的细胞周期进程来抑制其增殖。
     

恶性脑胶质瘤中FOXC2的表达情况及其对预后的影响

目的了解恶性脑胶质瘤中FOXC2的表达情况及其对预后影响。方法收集郑州大学第一附属医院2015年10月至2017年10月经治恶性脑胶质瘤100例(胶质瘤组)及因外伤等非肿瘤原因切除脑组织者100例(对照组),对切除标本行免疫组化了解FOXC2的表达情况及其对预后影响。结果胶质瘤组FOXC2表达阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。在恶性脑胶质瘤中,FOXC2表达在年龄(≥50岁组与<50岁组)、性别间差异无统计学意义(均P>0.05)。恶性脑胶质瘤WHO分级各分级之间FOXC2表达情况差异有统计学意义(P<0.05)。FOXC2表达情况是恶性脑胶质瘤生存期预测的独立危险因素(RR=5.2,P<0.05)。FOXC2表达阳性组存活时间短于阴性表达组,差异有统计学意义(χ~2=20.895,P<0.05)。结论 FOXC2表达水平与恶性脑胶质瘤临床分级、预后等密切相关。     

FOXC2对结直肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭能力的影响

目的：明确叉头框C2（FOXC2）在结直肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法采用逆转录病毒感染的方法建立FOXC2稳定过表达的结直肠癌细胞株（SW480／FOXC2）及空载体对照细胞株（SW480／pBabe）,显微镜下观察结直肠癌细胞形态改变。Western blot及免疫荧光法检测FOXC2过表达细胞株及对照细胞株中E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin的表达情况;Tr‐answ ell侵袭小室实验检测结直肠癌细胞迁移能力的改变。结果过表达后SW480细胞的形态发生了明显的变化,从原来典型的上皮细胞形状变成长梭形,类似于成纤维细胞的形态;Western Blot及免疫荧光检测结果显示,FOXC2过表达后上皮分子标志物E‐cadherin表达明显下调,而间质分子标志物Vimentin及N‐cadherin表达显著上调;Transwell侵袭实验结果显示,FOXC2过表达后结直肠癌细胞侵袭潜能明显增强。结论 FOXC2过表达能诱导结直肠癌细胞SW480发生上皮‐间质转化并增强其侵袭能力。     

异丙酚抑制胶质瘤U87细胞增殖和侵袭的作用机制及其对miR-134表达的影响

目的： 探讨异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭的影响,并探讨其抗肿瘤作用的可能机制。方法： 胶 质瘤 U87 细胞分为空白组、阳性对照组和异丙酚处理组(1.00、2.00、5.00 mmol/L)。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力,Transwell小室检测异丙酚对U87细胞侵袭、迁移能力的影响;采用real time PCR检测细胞微RNA-134(microRNA-134,miR-134)的表达;采用蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原Ki-67、侵 袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)以及磷酸肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路相关蛋白 的表达。结果： 与空白组相比,阳性对照组和异丙酚处理组48 h后U87细胞增殖倍数,细胞侵袭和迁移数量,Ki- 67、MMP-2 和 MMP-9 蛋白表达,以及磷酸化 PI3K (p-PI3K)/PI3K 和磷酸化 Akt(p-Akt)/Akt 比值均显著降低(均 P< 0.05);miR-134水平显著升高(P<0.05)。与阳性对照组和1.00 mmol/L异丙酚处理组相比,2.00和5.00 mmol/L异丙酚 处理组48 h后U87细胞增殖倍数,细胞侵袭和迁移数量,Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达,以及p-PI3K/PI3K和p Akt/Akt比值均显著降低(均P<0.05);miR-134水平显著升高(P<0.05)。与2.00 mmol/L异丙酚处理组相比,5.00 mmol/L 异丙酚处理组48 h后U87细胞增殖倍数,细胞侵袭和迁移数量,Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达,以及p-PI3K/ PI3K和p-Akt/Akt比值均显著降低(均P<0.05);miR-134水平显著升高(P<0.05)。结论：异丙酚能降低人胶质瘤U87细 胞增殖速度,降低 U87 细胞侵袭和迁移能力,这可能是通过上调 miR-134 表达、抑制 PI3K/Akt 信号通路激活来实 现的。     

人类疱疹病毒6A亚型DR7基因对神经胶质瘤细胞U87增殖､迁移､侵袭能力的影响

目的:构建含人类疱疹病毒6A亚型DR7基因的慢病毒,研究DR7基因表达对神经胶质瘤细胞U87增殖?迁移?侵袭能力的影响?方法:PCR扩增DR7基因,克隆至慢病毒载体pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP,构建pLenti6.3-DR7-IRES2-EGFP重组慢病毒载体,经293T细胞包装重组病毒转染至神经胶质瘤细胞U87,经blasticidin筛选建立稳定表达株,通过细胞增殖实验?细胞周期实验?细胞划痕及Transwell实验研究稳定表达DR7基因对U87细胞的增殖?迁移及侵袭能力的影响?结果:成功构建了pLenti6.3-DR7-6 × His-IRES2-EGFP慢病毒表达载体,筛选了稳定表达DR7基因的U87-DR7-EGFP细胞株,CCK-8细胞增殖实验显示,稳定表达DR7基因的U87-DR7-EGFP细胞与阴性对照细胞U87-NC-EGFP?U87细胞相比,细胞增殖活性明显增高,差异具有统计学意义(P < 0.001)?细胞周期检测发现U87-DR7-EGFP细胞S?G2/M期细胞所占比例多于U87-NC-EGFP?U87细胞:S期的比例分别为(34.73 ± 1.12)%?(24.89 ± 0.93)%?(25.39 ± 0.96)%,差异具有统计学意义(P < 0.001);G2/M期分别为(17.35 ± 1.61)%?(11.36 ± 1.50)%?(13.17 ± 1.95)%,差异具有统计学意义(P < 0.05)?细胞划痕实验表明,U87-DR7-EGFP细胞愈合能力明显强于U87-NC-EGFP?U87细胞,划痕6 h愈合率分别为:(33.55 ± 2.83)%?(23.50 ± 3.18)%?(22.03 ± 1.47)%,差异具有统计学意义(P < 0.01);划痕12 h愈合率分别为(70.50 ± 5.39)%?(53.60 ± 4.67)%?(55.09 ± 2.83)%,差异具有统计学意义(P < 0.001)?Transwell实验表明,U87-DR7-EGFP细胞的穿膜数量明显多于U87-NC-EGFP?U87细胞,分别为:(543.00 ± 22.94)?(387.00 ± 15.63)?(412.00 ± 20.30)个,差异具有统计学意义(P < 0.001)?结论:人类疱疹病毒6A亚型DR7基因表达能在体外促进人神经胶质瘤细胞U87增殖?迁移及侵袭,提示其在神经胶质瘤的发生和发展中可能起一定作用?     

胰岛素对高脂饮食小鼠皮下及附睾周围来源的脂肪细胞血浆纤溶酶原激活物抑制物-1、叉头框蛋白C2及叉头框蛋白O1表达的影响

目的研究高脂饮食喂养小鼠附睾周围和皮下来源的脂肪细胞血浆纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）、叉头框蛋白C2（FOXC2）及叉头框蛋白O1（FOXO1）表达水平,探讨不同类型肥胖的机制。方法 20只小鼠随机分为对照组和高脂组,分别给予正常饮食和高脂饮食喂养12周。取其附睾周围及皮下脂肪组织,原代培养前脂肪细胞经分化后,Western blot法测定脂肪细胞中PAI-1的蛋白表达水平,并用RT-PCR法检测胰岛素作用前后高脂组附睾周围及皮下脂肪细胞FOXC2和FOXO1的mRNA表达水平。结果高脂组小鼠体重显著高于对照组（P〈0.05）;组内比较小鼠附睾周围脂肪组织PAI-1表达显著高于皮下脂肪组织,差异有统计学意义（P〈0.05）;胰岛素作用后,FOXC2 mRNA水平有所升高,附睾附近脂肪细胞升高明显,与皮下脂肪细胞相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;胰岛素作用后,FOXO1 mRNA表达有所降低,附睾附近脂肪细胞降低明显,与皮下脂肪细胞相比,差异统计学意义（P〈0.05）。结论高脂小鼠附睾周围和皮下来源的脂肪细胞的PAI-1表达不同,胰岛素作用后FOXC2及FOXO1的表达存在差别,这种差别可能是不同类型肥胖的机制之一。     

不同浓度五味子乙素对U87胶质瘤细胞的凋亡作用

目的 研究不同浓度五味子乙素( Sch B )诱导U87 胶质瘤细胞的凋亡作用. 方法 用0、50、100、200 mg/L 4个浓度梯度的五味子乙素作用U87胶质瘤细胞24、48、72 h,MTT法检测五味子乙素对细胞增殖的抑制作用,判定凋亡效果. 结果 随着五味子乙素作用浓度的升高和时间的增加,诱导脑胶质瘤细胞凋亡作用更明显. 当五味子乙素作用浓度达100、200 mg/L,作用时间大于24 h时,可检测到明显的凋亡细胞. 结论 高浓度的五味子乙素能够诱导U87胶质瘤细胞的凋亡,并有一定的时间和剂量依赖性.     

FOXC1在复发性乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义

目的:探讨FOXC1蛋白表达与复发性乳腺浸润性导管癌的临床病理特征间相关性.方法:采用免疫组化S-P法检测42例复发性乳腺癌石蜡组织中FOXC1蛋白的表达.结果:FOXC1蛋白在21例(50％)乳腺浸润性导管癌中表达,定位于胞核.FOXC1阳性表达与乳腺浸润性导管癌组织学分级相关(P＜0.05),与复发性乳腺癌患者的耐...