乳腺癌MCF-7细胞的增殖及周期与CDK2-AP1基因的表达的相关性研究

目的探讨乳腺癌MCF-7细胞的增殖及周期与CDK2-AP1基因的表达的相关性研究,为临床乳腺癌的分子治疗提供基础。方法取我院研究所保存的人乳腺癌细胞MCF-7进行培养,并构建CDK2-AP1基因编码的病毒表达载体,应用实时定量PCR验证CDK2-AP1基因mRNA和蛋白的表达率。利用流式细胞仪检测MCF-7细胞周期的改变。结果过表达CDK2-AP1基因的慢病毒感染MCF-7细胞可上调其mRNA表达6.87倍。MCF-7细胞过表达CDK2-AP1基因后,增殖能力显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测证实MCF-7细胞过表达CDK2-AP1能够使细胞周期出现G1期阻滞。结论 CDK2-AP1基因具有抑癌基因的功能,在乳腺癌MCF-7细胞过表达该基因能够抑制细胞的生长和克隆形成能力,并且使细胞阻滞于G1期。     

Notch1过表达对K562细胞增殖及其周期的影响

目的 研究外源性Notch1过表达对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖和细胞周期的影响.方法 用脂质体将携带Notch1胞内段(ICN1)的质粒转染入K562细胞,倒置相差显微镜观察转染前后K562细胞形态学变化,RT-PCR 和Western blot检测Notch1 mRNA和蛋白的表达,MTT比色法检测细胞增殖,...     

靶向干扰CDK2AP1对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响

目的：探讨靶向干扰细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白-1（CDK2AP1）对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响。方法构建重组慢病毒 pGCLV- CDK2AP1- shRNA及重组空病毒pGCLV- GFP,分别稳定转染乳腺癌细胞系MCF-7,获得乳腺癌细胞株 MCF-7/RNAi- NC 和 MCF-7/RNAi- CDK2AP1。采用定量 PCR 法检测两组 MCF-7细胞株的CDK2AP1mRNA表达,xCELLigence/RT- CIM实时细胞电子分析系统检测细胞迁移能力,Transwel 实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建乳腺癌细胞株MCF-7/RNAi- NC和MCF-7/RNAi- CDK2AP1,相比MCF-7/RNAi- NC细胞组,MCF-7/RNAi- CDK2AP1细胞组的CDK2AP1mRNA表达受到明显抑制,其细胞迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论乳腺癌细胞MCF-7中CDK2AP1低表达能有效抑制细胞的体外迁移和侵袭能力。     

靶向调控TOX3基因对乳腺癌细胞增殖及周期的影响

目的 研究TOX3基因对人乳腺癌细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法 采用Western blot法检测已构建的稳定沉默TOX3的ZR-75-1细胞和稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。MTT法检测过表达和干扰TOX3基因对乳腺癌细胞增殖活性的影响。平板单克隆实验检测过表达TOX3对MDA-MB-231细胞单克隆形成能力的影响,流式细胞术检测沉默或过表达TOX3后ZR-75-1和MDA-MB-231细胞周期的变化。结果 与阴性对照组比较,稳定沉默TOX3的乳腺癌ZR-75-1细胞TOX3蛋白表达明显下降,过表达TOX3的MDA-MB-231细胞TOX3蛋白表达明显上调。过表达TOX3后,MDA-MB-231细胞的增殖活性明显增强,单克隆形成能力增强,G₀/G₁期细胞所占比例明显减少,G₂/M期细胞比例增多。干扰TOX3后,ZR-75-1细胞增殖活性下降,G₀/G₁期细胞比例增加,G₂/M期细胞比例减少。结论 靶向调控TOX3基因的表达可改变乳腺癌细胞增殖和单克隆形成能力,影响乳腺癌细胞周期。     

过表达NPM1对胰腺癌细胞增殖、凋亡影响的研究*

目的：探讨NPM1过表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法：对人胰腺癌细胞株AsPc-1,BxPc-3,PANC-1,CFPAC-1及人正常胰腺细胞株HPDE6CT作传代培养,检测其中NPM1表达。选择表达较低的细胞行NPM1过表达质粒转染,并设立空白质粒转染对照组。48小时后,采用RT-PCR及Western检测NPM1表达水平变化,并行MTT及流式细胞技术检测细胞增殖、凋亡情况。结果：（1）NPM1在BxPc-3细胞系中表达最低;（2）NPM1过表达组与空白质粒组相比,NPM1的mRNA表达量及蛋白表达量明显增多,差异显著（P<0.05）;（3）NPM1过表达组相比空白质粒组,细胞增殖增加,早期凋亡细胞明显减少（P<0.05）。结论：NPM1的过表达可促进胰腺癌细胞增殖,减少凋亡。     

DHRS7对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及其在乳腺癌组织中的表达

［摘 要］目的：探究 DHRS7基因过表达和DHRS7特异性短发夹RNA(shRNA)重组质粒对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及DHRS7与乳腺癌浸润癌的关系,阐明DHRS7在乳腺癌发生、发展中的作用。方法：利用RT-PCR技术将DHRS7基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1( + )质粒中,构建pcDNA3.1-DHRS7重组真核表达质粒。实验分为pcDNA3.1-DHRS7组、阴性对照组(pcDNA3.1组)、空白对照组和DHRS7-shRNA-pGenesil组,用Fugene HD转染试剂将各种质粒转染MCF-7细胞,采用RT-PCR和Western blotting法检测各组MCF-7细胞中DHRS7的表达情况,流式细胞术分析细胞周期变化,免疫组织化学SP法检测乳腺原位癌和乳腺浸润癌组织中DHRS7蛋白的表达情况。结果：成功构建pcDNA3.1-DHRS7重组表达质粒。PCR和Western blotting结果显示,pcRNA-DHRS7组蛋白的表达量高于空白对照组（P<0.05）,DHRS7-shRNA-pGenesil组蛋白的表达量低于空白对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术显示,DHRS7表达上调使MCF-7细胞S期细胞增多（P<0.05）,DHRS7的表达下调使处于G2期的细胞增多（P<0.05）。免疫组织化学染色显示,DHRS7蛋白在原位癌中高表达,阳性表达率为100%（37/37）;在乳腺浸润癌的表达明显降低,阳性率为18.9%（7/37）,两者比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：DHRS7基因参与了MCF-7细胞细胞周期的调控过程,可以抑制细胞增殖,DHRS7蛋白的表达丢失可能促进乳腺癌浸润。     

人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定

【目的】构建表达人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体上。测序鉴定后切下相应的片段,连接到表达载体pET-22b(+)上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3),使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定表达蛋白。【结果】用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌,Westernblot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体,后两者在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。     

GSTP1和RasGRP1在乳腺癌中的表达及对MCF-7细胞增殖迁移能力的影响

目的 探讨谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)和Ras鸟苷酸释放蛋白1(RasGRP1)在乳腺癌的表达及对MCF-7细胞增殖迁移能力的影响.方法 收集80例病理确诊为乳腺癌的初诊患者的乳腺癌组织和对应的癌旁组织,采用免疫组织化学法检测GSTP1和RasGRP1的阳性表达,分析GSTP1和RasGRP1阳性表达与乳腺癌不同...     

Mfn2基因过表达对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及EGFR、EGF蛋白表达的影响

目的 通过使人乳腺癌MCF-7细胞过表达线粒体融合素基因-2(Mfn2),研究外源性Mfn2基因对MCF-7细胞增殖及对表皮生长因子受体(EGFR)、表皮生长因子(EGF)蛋白表达的影响.方法 实验分为对照组、转染空质粒pEGFP-N1组、转染Mfn2质粒的pEGFP-Mfn2组.转染48 h后,检测各组细胞的转染效率、Mfn2mRNA及Mfn2蛋白表达.检测各组MCF-7细胞增殖情况、各组MCF-7细胞周期分布情况.同时检测各组EGFR及EGF蛋白表达情况.结果 转染48 h后pEGFP-N1组及pEGFP-Mfn2组转染效率分别为(49.15±2.04)％及(51.10±2.18)％,高于对照组[(0.58±0.21)％,P＜0.05];pEGFP-Mfn2组的Mfn2 mRNA及Mfn2蛋白表达均显著高于对照组及pEGFP-N1组(P＜0.05);pEGFP-Mfn2组MCF-7细胞增殖抑制率显著高于其余两组(P＜0.05),细胞周期主要阻滞于G0/G1期;pEGFP-Mfn2组EGFR和EGF蛋白表达水平显著低于其余两组(P＜0.05).结论 Mfn2基因过表达可显著抑制MCF-7细胞增殖,其机制可能与Mfn2基因过表达导致了EGFR及EGF表达下调有关.     

99mTc-DTPA-DG对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的观察99mTc-DTPA-DG对人乳腺癌MCF-7细胞DNA合成的影响,探讨99mTc-DTPA-DG作为一种分子显像剂评价肿瘤的疗效。方法采用一步法合成99mTc-DTPA-DG,培养人乳腺癌MCF-7细胞,分别加入不同浓度的DTPA-DG、FDG和DG(每毫升生理盐水中分别加入DTPA-DG、FDG和DG为5mg,25mg及50mg),干预24h后,掺入3H-TdR6h,检测3种药物是否参与人乳腺癌MCF-7细胞DNA的合成,比较不同的浓度下细胞的摄取率,以及不同药物对细胞增殖的影响。结果DTPA-DG及DG均掺入人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,DTPA-DG组摄取率高于DG组和FDG组(n=4,P<0.00),且浓度为0.5mg时3H-TdR摄取率最高。FDG随着时间的延长和浓度的升高,摄取率逐渐下降,可能不掺入细胞核或者产生了细胞毒性。结论99mTc-DTPA-DG能够参与肿瘤细胞的增殖,反映细胞核的活性,可以作为一种分子显像剂评价肿瘤的疗效。     

外源性p27Kip1基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响

目的：探讨外源性p27Kip1基因对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响。方法：应用脂质体转染法将含人野生型p27Kip1基因质粒DNA转染乳腺癌MCF-7细胞,免疫细胞荧光化学方法验证p27Kip1基因转染MCF-7细胞后蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期的变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,观察外源性p27Kip1对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响。结果：免疫细胞荧光化学方法证实p27Kip1基因转染MCF-7细胞后存在蛋白表达;流式细胞仪检测结果提示,细胞周期出现G0/G1期阻滞;细胞计数法绘制细胞生长曲线显示细胞增殖明显抑制。结论：外源性p27Kip1基因对乳腺癌MCF-7细胞生长和细胞周期有明显抑制作用。     

CXCR4/SDF-1对乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的影响

目的:探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人乳腺癌细胞MCF-7生长与增殖的影响. 方法:采用Western Blot免疫印迹法检测MCF-7细胞CXCR4蛋白的表达. 以CXCR4单克隆抗体(CXCR4 mAb)作用MCF-7细胞,通过MTT比色法、软琼脂克隆形成实验和细胞周期检测观察MCF-7细胞的生长情况;通过流式细胞仪检测MCF-7细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达. 结果:MCF-7细胞表达CXCR4蛋白;CXCR4 mAb作用后,MCF-7细胞生长能力明显降低,并且PCNA蛋白含量由对照组的(91.6±5.3)%降为(78.1±3.6)%(P＜0.05). 结论:CXCR4 mAb可明显抑制MCF-7细胞的增殖.     

大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞系体外增殖和细胞周期的影响

目的观察大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞体外增殖及细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法分别采用台盼蓝拒染法、流式细胞术,在不同条件下测定大豆黄酮对细胞增殖抑制率及细胞周期分布的影响。蛋白激酶C(PKC)活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞的体外增殖,作用24h可使MCF-7细胞的细胞周期阻滞于G2/M期和S期。细胞内PKC活性分析表明:大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞内PKC的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为13.27μmol/L。结论大豆黄酮可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的体外增殖,其作用机制可能与细胞周期G2/M期和S期阻滞及抑制PKC的活性有关。     

喉鳞癌中CDK2对细胞周期的影响及其意义

目的 探讨喉鳞癌组织CDK2激酶表达与肿瘤细胞增殖之间的关系. 方法 取手术中获得的50例喉鳞癌组织,12例非典型增生组织和30例声带息肉组织,用免疫组化的方法检测CDK2与PCNA的表达;用流式细胞术检测喉鳞癌组织细胞周期比率. 结果 在喉鳞癌组织中CDK2与PCNA的阳性率表达分别为68.0%和86.0%,显著高于声带息肉组织(P<0.05);并且CDK2的表达与临床分期、病理分级、淋巴转移密切相关,与患者的年龄、性别和原发部位无关. 结论 喉鳞癌中CDK2过度表达可能与肿瘤细胞增殖异常密切相关.在诊断和治疗喉鳞癌中,CDK2可能是一个有重要作用的指标.     

多西他赛对乳腺癌细胞中Cav-1表达及细胞增殖的影响

目的 研究多西他赛对乳腺癌细胞中Cav-1(Cav-1)表达及细胞增殖的影响.方法 通过Real-time PCR和Western-blot检测不同浓度多西他赛作用下乳腺癌细胞MCF-7中Cav-1的表达情况;野生型MCF-7细胞株为对照组,通过基因转染技术建立Cav-1 过表达的MCF-7细胞株(转染组)及空载体的MCF-7细胞株(空载体组),利用CCK-8比色法分析多西他赛对各组细胞增殖的影响.通过Western-blot分别检测多西他赛作用下各组细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况以及PI3K/AKT 信号转导通路的活化情况.结果 在5~40 μg/mL浓度范围内,随着多西他赛作用浓度的增大,MCF-7细胞中Cav-1的蛋白表达量逐渐增加.不同浓度多西他赛对MCF-7细胞的增殖均有明显的抑制作用;在同一浓度多西他赛作用下,转染Cav-1组细胞的增殖抑制率明显高于对照组和空载体组(P<0.01).与对照组和空载体组相比,20 μg/mL多西他赛作用后转染组细胞中Bax的表达升高(P<0.01),而Bcl-2的表达降低(P<0.01),并且磷酸化AKT (p-AKT)蛋白的表达水平下降(P<0.01),而对照组和空载体组之间Bax、Bcl-2以及p-AKT蛋白的表达则无明显差异(P>0.05).结论 多西他赛可以通过促进Cav-1的表达影响PI3K/AKT 信号转导通路,进而调节凋亡相关蛋白的表达抑制MCF-7 细胞的增殖.     

过表达精子相关抗原9对前列腺癌细胞PC3生物学行为的影响

目的 研究精子相关抗原9(sperm-associated antigen 9,SPAG9)对前列腺癌细胞增殖、细胞周期、侵袭转移等生物学行为的影响,探讨可能的分子机制.方法 前列腺细胞PC3中转染SPAG9后,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞SPAG9的表达变化;CCK-8检测SPAG9对PC3细胞增殖的影响;流式细胞术检测SPAG9对PC3细胞周期的作用;Transwell实验检测转染SPAG9对PC3细胞体外迁移能力的影响.结果 qRT-PCR检测结果表明SPAG9组的SPAG9的相对表达量(20.776 3±3.080 9)明显高于对照组(1.010 2±0.178 4)(P ＜0.01).Western blot结果显示在前列腺癌细胞PC3中过表达SPAG9后成功.CCK-8实验表明SPAG9促进细胞增殖;流式细胞术检测结果表明过表达SPAG9使PC3细胞周期加快;在Transwell迁移实验中,SPAG9转染细胞后,SPAG9组穿膜细胞数为(88.078 ±4.509)/视野,对照组穿膜细胞数为(54.333 ±4.582)/视野,SPAG9组细胞迁移能力明显高于对照组(P ＜0.05).结论 SPAG9促进前列腺癌细胞PC3的增殖、细胞周期及侵袭转移等生物学行为,并可能通过ERK和JNK信号通路发挥这些作用.     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法,流式细胞(FCM)、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制和可能的机制.结果塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性.流式术检测出典型的亚二倍体"凋亡峰",凋亡率(7.31±2.37)%～(48.30±2.86)%;使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.塞来昔布降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2和CDK4的表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子p21WAF1/CIP1n蛋白表达.结论体外塞来昔布抑制HT-29细胞增殖,并诱导细胞凋亡;下调CDK2和CDK4蛋白表达,上调P21WAF1/CIPln蛋白表达.塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关.     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究三羟异黄酮(genistein,Gen)对乳腺癌细胞株MCF鄄7细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用MTT比色法观察Gen对MCF鄄7细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期分布,Westernblot分别检测周期素B(cyclinB)、周期素E(cyclinE)蛋白表达情况。结果:Gen(≥10μmol/L)对MCF鄄7细胞生长有显著抑制作用,细胞生长阻滞于G2/M期,cyclinB蛋白表达增加,且呈剂量-效应关系;但对cyclinE蛋白表达无影响。结论:Gen抑制MCF鄄7细胞增殖、诱导G2/M期阻滞与其导致cyclinB蛋白积累有关,与cyclinE蛋白表达无明显关系。     

地塞米松对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察不同浓度的地塞米松(Dex) 对人乳腺癌细胞系(MCF-7) 细胞增殖、细胞周期分布及P21/WAF1表达的影响.方法:以不同浓度Dex(10-10～10-6 mol/L)处理细胞,采用活细胞计数法观察细胞增殖情况;测定碱性磷酸酶(AKP)活性;通过流式细胞仪技术,测定Dex作用后其细胞周期分布;通过蛋白印迹分析的方法检测Dex对p21/WAF1表达的影响.结果:Dex对MCF-7细胞的增殖有明显抑制作用, 10-7mol/L Dex作用5 d后活细胞计数为对照组的70%,细胞在G0/G1期停滞; Dex还可使MCF-7 细胞AKP活性增高,这种作用具有时间和剂量依赖性;Dex对p21/WAF1表达无明显影响.结论:Dex对MCF-7细胞有明显的增殖抑制作用,细胞在G0/G1期停滞.