原位核酸杂交技术在人乳头瘤病毒检测中的应用

目的:评价原位核酸杂交技术在人乳头瘤病毒(HPV)检测中的敏感性。方法:用原位核酸杂交和免疫组织化学技术对60例外阴尖锐湿疣病例进行检测,并对检测结果进行了对比分析。结果:免疫组织化学检测出阳性反应37例,阳性率为61.67%;原位核酸杂交检测出阳性反应56例,阳性率为93.33%,且阳性细胞数及阳性表达强度均高于免疫组织化学检测,背景清晰。结论:原位核酸杂交技术用于HPV的检测中敏感性高,阳性细胞反应与背景显色对比清晰,可克服免疫组织化学检测中假阴性高的弊端。     

以PCR技术为基础的HPV分型检测研究进展

子宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,人乳头瘤状病毒（HPV）感染是子宫颈癌发生的必要条件,因而,运用准确高效的人乳头瘤状病毒分型技术进行病毒分型检测,对子宫颈病变的早期发现和预防以及治疗都显得十分重要。目前,HPV分型检测技术几乎完全依赖于以聚合酶链反应（PCR）技术为基础的分子生物学检测手段,其中在国际上被广泛应用的是杂交捕获法、实时荧光定量PCR、直接测序法、HPVDNA基因芯片技术等。     

HPV核酸原位杂交技术的应用体会

尖锐湿疣是与人类乳头瘤病毒（HPV）感染有关的性传播疾病。据报道女性生殖道尖锐湿疣HPV6／11的阳性表达占96．4％。仅凭H—E切片形态难以进行判断。HPV免疫组化阳性率很低。特异性不强,核酸原位杂交具有较高的敏感性和特异性。我室于1995年开始用原位杂交的方法鉴定HPV以确诊尖锐湿疣。反复实验对地高辛标记的探针在应用技术有了新的认识和体会。     

免疫组化和核酸原位杂交在尖锐湿疣病理诊断中的意义

目的 探讨免疫组化和核酸原位杂交检验人乳头瘤病毒（HPV）和尖锐湿疣（CA）病理诊断中的意义。方法 44例病理形态学诊断为尖锐湿疣的石蜡包埋组织标本。用HPV多克隆抗体和HPV-11单克隆抗体行免疫组化染色，用分别针对HPV6和HPV11-DNA的寡核苷酸探针行原位杂交。结果 ①免疫组化染色：37/44例（84.1%)HPV多克隆抗体染色阳性；6/44型（13.7%）HPV-11单克隆抗体染色阳性；②原位杂交：有38/44例（86.4%)表达HPV-DNA，其中既表达HPV6-DNA又表达HPV11-DNA者26例（59.1%) ；③联合应用免疫组化和原位杂交技术检测，有43/44例（97.7%）呈阳性反应。结论 免疫组化和原位杂交技术检测HPV是病理诊断尖锐湿疣的重要辅助手段，二者的联合使用明显提高了HPV的检出率。在临床应用中结合形态学改变，可提高尖锐湿疣诊断的准确性。     

免疫组化和原位杂交联合应用在尖锐湿疣临床诊断中的价值

目的探讨免疫组化和核酸原位杂交检测人乳头状瘤病毒(HPV DNA)在尖锐湿疣病理诊断中的表达,为临床诊治提供依据。方法收集55例尖锐湿疣石蜡包埋组织标本,用HPV多克隆抗体行免疫组化染色,用HPV6/11DNA的寡核苷酸探针行原位杂交。结果免疫组化染色34例(61.8%)HPV多克隆抗体染色阳性;原位杂交46例(83.6%)表达HPV DNA阳性;其中18例(32.7%)在免疫组化染色中不表达或可疑表达而在原位杂交中表达阳性;联合应用免疫组化和原位杂交技术检测有52例(94.1%)呈阳性反应。结论免疫组化和原位杂交技术检测HPV是病理诊断尖锐湿疣的重要辅助手段,原位杂交法优于免疫组化法(P<0.05),二者联合应用明显提高了HPV的检出率。     

中国妇女子宫颈癌细胞人乳头瘤病毒DNA的检测

使用DNA-DNA斑点杂交技术检测取自北京和新疆两地的40例人宫颈癌活检组织中HPV-16型和18型的DNA相关序列。以~(32)P-HPV-16及18为探针,前者杂交阳性率为75％(30/40),后者为17.5％(7/40)。初步表明,中国妇女宫颈癌的发生与HPV-16型关系密切。HPV-16型和18型的阳性率新疆地区高于北京地区,少数民族高于汉族,提示HPV感染似乎存在地理差异和民族差异。     

免疫组化和核酸原位杂交在尖锐湿疣病理诊断中的意义

目的　探讨免疫组化和核酸原位杂交检测人乳头瘤病毒 (HPV)在尖锐湿疣 (CA)病理诊断中的意义。方法　 44例病理形态学诊断为尖锐湿疣的石蜡包埋组织标本 ,用 HPV多克隆抗体和 HPV- 11单克隆抗体行免疫组化染色 ;用分别针对 HPV6和 HPV11- DNA的寡核苷酸探针行原位杂交。结果　 1免疫组化染色 :37/4 4例(84.1%) HPV多克隆抗体染色阳性 ;6 /4 4例 (13.7%) HPV- 11单克隆抗体染色阳性 ;2原位杂交 :有 38/4 4例(86 .4%)表达 HPV- DNA,其中既表达 HPV6 - DNA又表达 HPV11- DNA者 2 6例 (5 9.1%) ;3联合应用免疫组化和原位杂交技术检测 ,有 43/4 4例 (97.7%)呈阳性反应。结论　免疫组化和原位杂交技术检测 HPV是病理诊断尖锐湿疣的重要辅助手段 ,二者的联合使用明显提高了 HPV的检出率。在临床应用中结合形态学改变 ,可提高尖锐湿疣诊断的准确性。     

PCR联合HPV检测在宫颈癌筛查中的应用

目的探讨荧光PCR法联合高危型人乳头瘤病毒(HPV)分型核酸测定在宫颈癌癌前病变筛查中的应用及其临床效果。方法选取2016年4月～2018年4月我院收治的宫颈癌患者86例,分为对照组和研究组,对照组患者接受荧光PCR法进行检测筛查,研究组患者在应用荧光PCR法的基础上联合高危型人乳头瘤病毒分型核酸测定进行筛查,同病理诊断结果进行对比。结果研究组检测出的高危型人乳头瘤病毒感染率高达75.6%,研究组检测出的高危型人乳头瘤病毒感染率高于对照组(P0.05),40～49岁年龄段的人群感染率最高为82.1%,不同年龄阶段高危型人乳头瘤病毒感染的情况不同(P0.05)。结论荧光PCR法联合高危型人乳头瘤病毒分型核酸测定在宫颈癌癌前病变筛查当中有着非常重要的作用以及对于医学检测具有指导意义,检出率更高,效果理想,临床上应当进一步推广应用。     

食管癌组织中HPV原位杂交及E6,P^21ras和P^53免疫组化…

采用分子原位杂交和ＳＰ法免疫组化技术对柳州地区４０例食管鳞状细胞癌和２０例食管粘膜慢性炎的材料进行地高辛标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１，１６、１８ＤＮＡ及ＨＰＶ１６、２１８早期蛋白Ｅ６、Ｐ＾２１ｒａｓ和Ｐ＾５３癌基因产物检测。     

用免疫组化及原位杂交方法探测人胚胎卵巢褪黑素受体

目的：在前期工作基础上进一步观察人胚胎卵巢组织中褪黑素（Mel)受体的存在及分布。方法：取人胚胎卵巢，石蜡包埋、切片，用原位杂交及免疫组化方法进行检测。结果：免疫组化方法显示卵巢细胞的细胞膜、胞浆、细胞核中Mel1a、Mel1b均呈棕褐色；原位杂交方法显示褪黑素受体Mel1a、Mel1b位于卵巢细胞的细胞浆及细胞核内，呈蓝紫色颗粒。结论：人胚胎卵巢组织中存在有Mel1a及Mel1b两种褪黑素受体，位于卵巢细胞的细胞膜、胞浆、细胞核中，证明卵巢是褪黑素作用的靶器官，褪黑素可能直接作用于卵巢。     

原位杂交和免疫组化双标记技术在大鼠全脑脑片培养中的应用

目的探讨联合应用原位杂交(in situ hybridization,ISH)和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)技术检测全脑脑片特定核酸和蛋白的表达。方法在静态全脑脑片培养的基础上,将培养的脑片进行冰冻切片,然后联合应用原位杂交和免疫组化技术检测特定基因的表达情况。结果脑片冰冻切片的质量可以进行后续的实验;与单纯应用一种方法相比,联合应用两种技术可同时在核酸水平和蛋白水平检测待测基因,两种显色方法不相互冲突,且可以更直观地显示核酸和蛋白的表达模式。结论原位杂交和免疫组化双染技术明显优于单纯的原位杂交技术或免疫组化;该双染技术可用于脑片培养中的基因和蛋白检测。     

原位杂交检测宫颈活检组织HPV感染的临床意义

目的探讨原位杂交（ISH）检测宫颈活检组织中人类乳头瘤病毒（HPV）感染对宫颈癌早期诊断的临床意义。方法对128例宫颈活检的石蜡标本,分别行常规检测和ISH-HPV检测。结果①二种方法检测慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（CIN）、宫颈鳞状细胞癌（SCC）HPV感染检出率分别为2.5%与8.9%、37.5%与55.0%和66.6%与90.0%,检出率SCC〉CIN〉慢性宫颈炎,ISH法明显优于常规检测法（χ2=7.5625,P〈0.01）。②在所检测的128例宫颈活检组织标本中,21～30岁患者的HPV感染率明显高于其它年龄组。结论慢性宫颈炎、CIN、宫颈鳞状细胞癌与HPV6/11/16/18/31/33密切相关,随着病变程度的加重,HPV感染的检出率明显升高。ISH方法对早期宫颈HPV感染患者在分子病理学水平作出准确、特异、快速的诊断,同时具有细胞阳性定位功能。通过HPV感染的检测,可以积极预警年轻人群中宫颈癌的发生。     

原位检测大鼠肝癌发生过程中端粒酶活性

目的　在大鼠实验性肝癌发生过程中原位显示端粒酶及其变化。方法　用含 0 .0 5 % 3′ 甲基 4 二甲基氨基偶氮苯的玉米粉喂饲大鼠 12周以制备肝癌模型。组织冰冻切片酶催化端粒延伸 PCR(原位TRAP)法检测端粒酶活性。结果　正常肝细胞、胆管细胞以及汇管区细胞一般均阴性。肝纤维化、早期肝硬化病变中一小部分肝细胞呈弱阳性 ,间质内增生的肌纤维母细胞端粒酶活性较强 ,增生的胆管细胞和结节状增生肝细胞显示弱至中等强度酶活性。不典型增生的胆管细胞及肝细胞内可见较强的酶活性。肝细胞性肝癌和胆管细胞性肝癌中绝大部分癌细胞可见端粒酶表达 ,但强弱不一。上述端粒酶活性一般位于细胞核内。结论　大鼠肝癌发生过程中端粒酶活性逐渐增加提示该酶对肿瘤细胞获得永生化特性具有重要意义。     

双色FISH检测人精子染色体非整倍体方法的建立

建立：用双色FISH检测人精子染色体非整倍体的方法。方法：采用双色荧光原位杂交（FISH）方法取适量精子标本用EDTA／PBS处理,然后用二硫苏糖醇（DTT）,使精子去凝集。固定后滴片,然后与双色荧光直接标记探针杂交。结果：在OLYMPUS荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的蓝色杂交信号,头部有1个绿色荧光杂交信号的精子为X染色体精子（X精子）,有1个红色荧光杂交信号的精子为Y染色体精子（Y精子）。精子头部有2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子。结论：双色荧光原位杂交（FISH）方法可以用于测定人精子染色体非整倍体率的变化。     

女阴尖锐湿疣及宫颈病变免疫组化与原位杂交HPV DNA的对比研究

目的　检测非妊娠期、妊娠期尖锐湿疣、子宫颈上皮内瘤变 (CIN)、宫颈癌组织中人乳头瘤病毒 (HPVDNA)的表达 ,为临床诊治提供依据。方法　收集非妊娠期、妊娠期尖锐湿疣标本各 30例 ,宫颈上皮内瘤变 (其中CINⅠ 12例、CINⅡ 9例、CINⅢ 7例 )及宫颈癌各 2 8例 (高、中、低分化鳞癌分别为 7、16、5例 )采用免疫组化SP及原位杂交法检测HPV 6 /11DNA及HPV 16 /18DNA。结果　 (1)人乳头瘤病毒感染组织不同 ,HPVDNA的阳性率有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;(2 )原位杂交法检测优于免疫组化法。结论　 (1)人乳头瘤病毒感染广泛存在于外阴尖锐湿疣、宫颈上皮内瘤变 (CIN)、宫颈癌中 ;(2 )人乳头瘤病毒与宫颈癌关系密切 ;(3)原位杂交法检测HPVDNA有助于尖锐湿疣、CIN、宫颈癌的诊断与治疗。     

原位杂交法检测喉癌组织中人乳头状瘤病毒的研究

采用原位核酸杂交技术，地高辛标记人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）６Ｂ／１１，１６／１８型ＤＮＡ作 探针，对４４例喉癌石蜡包埋标本中ＨＰＶ－ＤＮＡ同源序列进行了检测，同时用１６例喉息肉石蜡包埋 标本作为对照。结果显示：ＨＰＶ ６Ｂ／１１杂交阳性者在喉癌组为 ８／４４（１８． ２％），喉息肉组为２／１６ （１２．５％）（Ｐ＞０．０５）；ＨＰＶ １６／１８杂交阳性者在喉癌组为 １９／４４（４３．２％），喉息肉组为 ２／１６ （１２．５％）（Ｐ＜０．０５）。提示：ＨＰＶ １６／１８型感染与喉癌的发生有密切关系，是喉癌发病学中一个不 容忽视的致癌因素。     

直肠腺癌患者人乳头状瘤病毒感染与k-ras基因突变检测

目的：探讨HPV感染及k-ras基因突变与直肠腺癌的关系。方法：应用PCR/SSCP银染法检测75例直肠腺癌患者癌及相应正常大肠黏膜组织中HPV DNA和k-ars基因第12、13密码子。结果：直肠腺癌组织中HPVDNA阳性检出率为73.3%（55/75）,而正常黏膜未检测到HPV DNA。HPV感染与患者年龄、Duke’s分期及淋巴结转移有关,而与患者的族别、性别、肿瘤直径、大体类型、组织学类型及浸润深度无关。75例直肠腺癌组织中检测到k-ras基因突变34例（45.3%）,均与患者年龄、肿瘤的大体类型、组织学类型、侵袭深度、淋巴结转移及Duke’s分期无关,且与HPV感染亦无关联（χ2=0.240,P=0.624,rP=0.056）。结论：HPV感染可能是导致直肠腺癌恶性表型的重要因素;而k-ras基因突变与HPV感染无关。     

乳腺癌HER2基因IHC与FISH检测方法的比较及其与临床病理的关系

目的：比较免疫组织化学法（IHC）和荧光原位杂交法（FISH ）检测乳腺癌 HER2基因状态的一致性,并分析HER-2基因的表达状态与各临床病理指标的关系。方法应用IHC和 FISH法分别检测乳腺癌患者H ER2蛋白表达和H ER2基因扩增状况（1448例）,进行一致性分析,并分析H ER2基因的表达状态与各临床病理相关指标的关系。结果 HER2蛋白的阳性（3＋）表达率为24．5％（355/1448）,阴性（0/1＋）表达率为60．8％,可疑（2＋）表达率为14．7％。 HER2基因扩增率为27．8％（402/1448）,HER2蛋白IHC检测为0/1＋和3＋时,与HER2基因FISH检测的一致性很高,分别为99．7％（877/880）和99．2％（352/355）,2＋时结果一致性差,符合率为22％（47/213）。HER2基因扩增与ER及PR均阴性（P＜0．001）、P53阳性（P＜0．001）,Ki67高表达（P＜0．001）、组织学分级高（Ⅲ级）（ P＜0．001）、T N M分期晚（Ⅲ/Ⅳ）（ P＜0．05）、肿瘤瘤体大（≥5 cm ,P＜0．001）有相关性,与患者年龄、淋巴结是否转移、绝经状态、肿瘤部位及脉管瘤栓无相关性（P＞0．05）。结论 IHC是乳腺癌 HER2基因状态初步筛查的首选方法,但FIS H为H ER2基因检测更为可靠的方法。 H ER2基因表达状态是判断乳腺癌预后的良好指标,并为临床乳腺癌患者的用药提供可靠依据。