基因免疫法在制备凝血酶调节蛋白抗体中的应用研究

目的 探讨应用基因免疫法制备凝血酶调节蛋白(throbomodulin，TM)抗体。方法 运用基因免疫法，即PCR特异性扩增TM胞外编码区所有碱基片段(包括信号肽，TM)，构建pcDNA3．1／TMLEO真核表达质粒。以碱裂解法提取，PEG沉淀法纯化质粒。将纯化后的质粒pcDNA3．1／TMLEO经生理盐水稀释后直接肌肉注射免疫BALB／c小鼠，检测质粒pcDNA3．1／TMLEO在小鼠体内有无表达以及TM抗体的效价和特异性。结果 通过RT-PCR以及TM含量测定在RNA以及蛋白水平上均说明质粒pcDNA3．1／TMLEO在小鼠体内有表达。以EVC-304包板的cell-ELISA检测抗体滴度，随着免疫次数的增加，小鼠血清抗体滴度明显增加，到第五次达到最高1：8000，第6～7次均保持在这一水平。小鼠抗血清通过免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学鉴定，特异性好。结论 在天然TM提取纯化困难的情况下，通过基因免疫制备抗体是可行的。     

弓形虫SAG1、GRA2单基因疫苗及SAG1-GRA2复合基因疫苗的免疫效果观察

目的 检测SAG1和GRA2基因编码的单基因及复合基因疫苗诱导小鼠的免疫应答,评价其抗弓形虫感染的保护性免疫效果.方法 大量制备pcDNA3.1-SAG1、pcDNA3.1-GRA2、pcDNA3.1-SAG1-GRA2真核表达重组质粒,肌内注射BALB/c小鼠,分别于2周、4周后加强免疫一次.另设立pcDNA3.1及PBS对照组.于3次免疫后4周作免疫指标测定(包括ELISA法测定小鼠血清IgG抗体及细胞因子IFN-γ、IL-4,MTT法测定小鼠淋巴细胞增殖能力及NK细胞杀伤活性),并观察弓形虫速殖子攻击感染后小鼠的生存时间.结果 SAG1-GRA2组小鼠血清IgG抗体、IFN-γ、淋巴细胞增殖能力及NK细胞杀伤活性均高于SAG1及GRA2组(P＜0.05);各组均未检测到IL-4;复合基因组小鼠生存时间较单基因疫苗组延长(P＜0.01).结论 弓形虫SAG1-GRA2复合基因疫苗较SAG1、GRA2单基因疫苗具有更好的免疫保护性.     

人溶菌酶基因免疫抗体的制备及其初步应用

目的制备人溶菌酶(hLYZ)基因免疫抗体。方法用多聚乙酰亚胺包裹重组质粒pcDNA3LYZ,经肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA检测免疫血清中hLYZ抗体的效价,所得抗体用Western-blotting法检测转基因小鼠乳汁中重组hLYZ的表达情况。结果2次免疫后,小鼠体内产生了hLYZ特异性抗体,效价达1∶800,用此抗体为第一抗体在转基因小鼠乳汁中检测到分子量与正常hLYZ相同的重组hLYZ。结论用基因免疫方法在小鼠体内制备了可用于检测的hLYZ抗体。     

MUC1-2VNTR基因免疫治疗多发性骨髓瘤荷瘤小鼠的实验研究

目的:明确粘蛋白1两串联重复区(MUC1-2VNTR)基因疫苗对多发性骨髓瘤荷瘤BALB/c小鼠的治疗效果。方法:用转染pcDNA3.1-MUC1的P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞皮下接种以建立BALB/c荷瘤小鼠模型。用含MUC1-2VNTR的重组质粒pcDNA3.1-2VNTR/myc-hisB肌肉注射免疫小鼠,采用乳酸脱氢酶法检测细胞毒性T细胞(CTL)反应活性,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性。观察小鼠的抑瘤率,肿瘤质量。结果:用重组质粒免疫BALB/c荷瘤小鼠25 d后,重组质粒组肿瘤质量明显轻于空质粒对照组(0.5605±0.2065 g vs.1.521±0.6985g)(P0.01)。重组质粒肌肉注射组CTL、NK细胞活性显著高于对照组;小鼠脾淋巴细胞得到增殖,与空质粒对照组比较,差异非常显著(P0.01)。MUC1-2VNTR基因免疫能诱发小鼠抗肿瘤作用。结论:MUC1-2VNTR基因疫苗可针对多发性骨髓瘤荷瘤BALB/c小鼠诱导产生特异性细胞及体液免疫应答,能诱发小鼠抗肿瘤效应,对多发性骨髓瘤的治疗具有潜在的应用价值。     

HBVDNA免疫的实验研究

从中国人血清中克隆出HBsAg adr亚型基因,采用pcDNA 3.1HisC真核细胞表达质粒进行基因重组。重组质粒pcDNA 3.1HisC-HBsAg分别用0.01、0．1、1、10和100μg腿部胫骨肌多点免疫BALB／C小鼠．4周时进行同样剂量加强免疫。初次免疫后4周和8周时分别检测HBsAg和HBsAb。结果表明,1μg以上剂量组加强免疫后．均可诱导小鼠产生特异性抗体。揭示HBV有发展DNA疫苗的可能性。     

用O157：H7大肠杆菌经不同免疫途径免疫后的免疫应答特性及其保护力

目的用灭活的O157：H7大肠杆菌以粘膜与系统免疫途径免疫小鼠，研究不同免疫途径免疫后免疫应答特性，及其IgA与IgG抗体与抗感染的关系。方法用灭活的O157：H7大肠杆菌经鼻腔、口腔与腹腔免疫途径免疫BALB／C小鼠。加强免疫两次后的第三周收集血液，气管与肠道粘膜中的分泌物，以ELISA法检测样品中的IgA与IgG抗体。结果研究发现用O157：H7大肠杆菌经鼻腔与口腔途径免疫后能有效地诱导IgA粘膜免疫应答，IgG体液免疫应答；但经腹腔免疫途径免疫后仅能诱导IgG体液免疫应答。在最后一次免疫后的第三周，用致死剂量的O157：H7大肠杆菌经鼻腔感染小鼠，结果发现小鼠经鼻腔与口腔免疫后能抵抗O157：H7大肠杆菌的局部感染，但经腹腔免疫后不但不能保护小鼠抵抗感染，而且比对照组小鼠死亡更快，死亡率更高。结论我们的研究结果提示粘膜免疫途径不但能有效地诱导粘膜免疫应答，而且能保护小鼠抵抗致死剂量的O157：H7大肠杆菌的感染。     

小鼠A细胞介素21原核表达载体的构建及活性鉴定

目的：白细胞介素21是近年发现的由T细胞分泌的细胞因子，具有广泛的免疫调节作用和抗肿瘤活性。为进一步观察其体内外免疫作用，拟构建小鼠白细胞介素21（mlL-21）原核表达载体，并对其表达的活性进行鉴定。 方法：实验于2006—03／2007—05在南京医科大学附属南京儿童医院儿科研究所和东南大学基础医学院病原生物学与免疫学系完成。实验材料：实验中所用BALB／c小鼠由扬州大学比较医学中心提供，六七周龄，雌雄兼备，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。pcDNA3．1／mlL-21质粒由东南大学基础医学院免疫学实验室提供。实验方法：以pcDNA3．1／mlL-21质粒为模板，PCR获得长度为369bp的mlL-21基因片段。将其定向克隆至pET-28a（＋）质粒中，采用PCR酶切和测序等方法对重组质粒进行鉴定。并对重组蛋白进行IPTG诱导表达、Western blot及体外生物学活性检测。 结果：构建了重组原核表达载体pET-28a（＋）／mlL-21，经鉴定后证实重组质粒构建正确。SDS-PAGE显示含重组质粒的诱导菌在M16000位置出现一蛋白条带。Western blot结果显示该蛋白具有良好的免疫原性。体外生物学功能检测显示该重组蛋白能够增强小鼠脾细胞中的NK细胞杀伤活性。 结论：成功构建了重组原核表达载体pET-28a（＋）／mlL-21，表达的mlL-21具有良好的免疫原性。     

传染性非典型肺炎疫苗的研制：重组真核质粒PVAX1／SARS-CoV M的构建及免疫原性研究

目的：构建真核表达质粒PVAX1／M，免疫Balb／c小鼠，测定其诱导的特异性免疫应答，探讨传染性非典型肺炎(severe acute resperatory syndrome，SARS)防治和康复的可能手段。方法：根据GenBank中登录的SARS-CoV M蛋白基因序列设计引物，采用反转录聚合酶链反应方法从感染SARS病毒的VeroE6细胞中扩增得到约666 bp的片段，构建重组真核表达质粒PVAX1／M。体外转染COS-7细胞，细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达后，肌肉注射免疫Balb／c小鼠(雌性，6周龄)，加强免疫3次后，测定其诱导免疫应答的能力。结果：构建的重组质粒经酶切及测序鉴定，与GenBank中登录的序列完全一致；细胞免疫化学方法均显示重组质粒可在COS．7细胞中表达有免疫原性的SAILS-CoV M蛋白；免疫小鼠血清中检测到较高滴度的抗体，并能诱导特异性的CTL反应。结论：成功构建真核表达质粒PVAX1／SARS-CoV M，并能诱导小鼠产生特异性的免疫应答，为SARS的预防康复提供了可能的治疗手段。     

HCV核心区DNA疫苗的构建及初步鉴定

目的 构建HCV核心蛋白DNA疫苗,观察其诱导BALB/C小鼠产生体液免疫应答的效果,为研制应用于人类的HCVDNA疫苗提供实验依据.方法 将HCVC基因片段插入真核表达载体pCDNA3.1(+),构建真核表达载体pCDNA3.1HCVcore,并用酶切分析鉴定;肌注BALB/C小鼠,以ELISA法检测小鼠血清HCV抗体.结果 经酶切分析证实重组质粒pCDNA3.1HCVcore构建正确;9只小鼠经3次DNA免疫后均出现抗HCV抗体.结论 成功地构建出HCVC区DNA疫苗,并可诱导BAIB/C小鼠体液免疫应答.     

弓形体RH株抗原基因SAG1的扩增克隆及鉴定

目的：体外扩增弓形体主要表面抗原SAG1基因,构建pcDNA3-SAG1真核表达质粒,为研制弓形体疫苗奠定基础。方法：采用PCR技术,自行设计一对寡核酸引物（P1,P2）,从弓形体RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1抗原的基因片段,扩增的目的片段经纯化后用EcoR1和HindⅢ双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中,转化入大肠杆菌TG1,用氨苄青霉素和PCR初筛,将PCR扩增阳性的重组子分别用Sac1单酶切、EcoR1和HindⅢ双酶切鉴定,结果成功地构建真核型表达质粒pcDNA3-SAG1,从而为进一步SAG1重组抗原的体外表达创造有利条件。结果：从RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1的全基因序列,扩增目的基因片段大小与预期长度（1025bp),相符;将分离、纯化的目的基因片段SAG1任入pcDNA3质粒HindⅢt和EcoR1位点,构建重组质粒pcDNA3-SAG1。结论：成功构建重组质粒pcDNA3-SAG1。     

T细胞受体β独特型抗原决定簇DNA疫苗诱导抗淋巴瘤抗体的研究

目的 观察T细胞受体（TCR）β不同独特型抗原决定簇DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗人类CEM淋巴瘤细胞免疫反应的情况。方法 RT-PCR扩增CEM细胞特异性重排的TCRβ基因片段，克隆至真核表达载体pcDNA3中，然后以此为模板，扩增编码不同抗原决定簇的基因片段到pcDNA3中作为DNA疫苗。肌肉注射法免疫小鼠，间接免疫荧光法检测小鼠血清中抗体生成情况。结果 CEM细胞TCRβ共包含5个抗原决定簇，其DNA疫苗免疫的6只小鼠全部产生了特异性抗独特型抗体（最高滴度1：480）；含4个抗原决定簇的DNA疫苗免疫的6只小鼠中有4只产生了特异性抗独特型抗体，但滴度均较低（最高滴度1：80）；仅含2个抗原决定簇的DNA疫苗未能使小鼠产生特异性抗独特型抗体。结论 包含TCRβV区全长，共有5个抗原决定簇的独特型DNA疫苗可以诱导小鼠产生抗淋巴瘤细胞的独特型特异性抗体；含有4个抗原决定簇的DNA疫苗仍可诱导特异性抗体的生成，但这种反应较弱，而仅含有2个抗原决定簇的DNA疫苗则不能诱导小鼠产生抗淋巴瘤的特异性抗体。     

IL-21重组载体的构建及其诱导T细胞活化增殖的研究

目的构建小鼠IL-21基因真核重组表达载体,为IL-21基因治疗肿瘤奠定基础。方法分离BALB/c小鼠脾细胞,提取总RNA,经RT-PCR扩增IL-21基因片段,构建重组质粒pcDNA3.1(-)-IL-21,分组免疫小鼠,检测其脾细胞膜表面CD分子。结果重组质粒测序结果与GenBank中序列一致,大小为490 bp。核酸疫苗免疫组小鼠脾细胞表面CD分子表达量明显高于PBS和pcDNA3.1(-)空质粒组。结论成功的构建了重组质粒pcDNA3.1(-)-IL-21,该核酸疫苗免疫小鼠后,可有效地诱导其体内T细胞的活化增殖。     

心脏基因工程研究对一级康复的干预作用：构建柯萨奇B2病毒毒粒蛋白候选基因疫苗诱导体液免疫的评估

目的：探讨心脏基因工程研究中构建柯萨奇B2病毒毒粒蛋白侯选基因疫苗，并评价其诱导体液免疫的效果：方法：实验于2003—05／12在中国农业科学院国家生物重点实验室哈尔滨兽医研究所生物二室完成。采用反转录聚合酶链反应技术扩增柯萨奇B2病毒的主要中和抗原毒粒蛋白基因，通过分子克隆构建pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白基因免疫质粒。选择3周龄BALB／c雄性小鼠30只，随机分成3组，pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白组：对小鼠进行pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白免疫；空载体对照组对小鼠进行pcDNA3免疫；磷酸盐缓冲液组：对小鼠进行磷酸盐缓冲液免疫，每组10只。每组免疫时间和接种量、接种方法相同。采用酶联免疫吸附法测定pcDNA3．柯萨奇B2病毒毒粒蛋白、pcDNA3、磷酸盐缓冲液免疫小鼠后2，4，6，8周柯萨奇B2病毒特异性抗体免疫球蛋白C水平。结果：①获得pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白基因免疫质粒，可在HeLa细胞中表达。②免疫后6，8周pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白组柯萨奇B2病毒特异性抗体免疫球蛋白G水平明显高于免疫后4周似4靠0．153&;#177;0．013，0．150&;#177;0．011，0．142&;#177;0．014，P〈0．01，0．05）；免疫后4周pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白组柯萨奇B2病毒特异性抗体免疫球蛋白G水平明显高于空载体对照组和磷酸盐缓冲液组（0．120&;#177;0．007，0．119&;#177;0．009．P〈0.011。结论：pcDNA3-柯萨奇B2病毒毒粒蛋白可诱导小鼠产生体液免疫，做为候选基因疫苗，以基因免疫的角度参与心脏基因工程研究．有望为该病毒性心肌炎的发生起到一级预防作用。     

IL-2、IFN-γ和GM-CSF基因佐剂对pcDNA3/MDC-VP1 DNA疫苗免疫作用的影响

目的:观察IL-2、IFN-γ和GM-CSF重组质粒对pcDNA3/MDC-VP1 DNA疫苗免疫的免疫增强效果。方法:将50只4～6周龄雄性BALB/c小鼠随机分成pcDNA3组、pcDNA3/MDC-VP1组、pcDNA3/MDC-VP1+pcDNA3/hIL-2组、pcDNA3/MDC-VP1+pcDNA3/m IFN-γ组、pcDNA3/MDC-VP1+pcDNA3/mGM-CSF组,每组10只。均每3周接种1次,共3次。每次接种的第20d内眦静脉采血,用微量中和试验(固定病毒-稀释血清法)检测血清中和抗体效价。第3次免疫后3周,每组取3只小鼠脾脏制备淋巴细胞悬液,检测淋巴细胞增殖活性与特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果:各组血清中和抗体滴度随免疫次数增加而提高(P0.05);第3次免疫后pcDNA3/MDC-VP1+pcDNA3/mGM-CSF组的血清中和抗体滴度、脾脏淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性均高于其他组(P0.05)。结论:三种细胞因子基因佐剂均能增强pcDNA3/MDC-VP1的免疫效果,GM-CSF基因佐剂的免疫效果优于IL-2和IFN-γ。     

透明带抗原表位肽的合成及其诱导的特异性抗体水平

目的化学合成透明带抗原表位肽，检测其在小鼠体内诱导的特异性抗体水平。方法用标准Fomc方案在430A自动肽合成仪上合成ZP2^121-140表位肽．并与等量完全弗氏佐剂混悬后左胫前肌免疫雌性BALB／c小鼠。在不同时间段收集小鼠阴道冲洗液，离心取上清。检测特异性IgA抗体;不同时间段断尾取血。分离血清，检测特异性IgG抗体。结果在430A自动肽合成仪上成功合成了20肽，并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达85％以上；抗原合成肽免疫小鼠后，血清中特异性IgG抗体滴度最高达1：3000．阴道冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达1：500。结论化学合成透明带抗原肽能在小鼠体内诱导出高滴度特异性抗体,从而为研制透明带避孕疫苗提供实验基础。     

透明带抗原表位肽的合成及其诱导的特异性抗体水平

目的化学合成透明带抗原表位肽，检测其在小鼠体内诱导的特异性抗体水平。方法用标准Fomc方案在430A自动肽合成仪上合成ZP2^121-140表位肽．并与等量完全弗氏佐剂混悬后左胫前肌免疫雌性BALB／c小鼠。在不同时间段收集小鼠阴道冲洗液，离心取上清。检测特异性IgA抗体;不同时间段断尾取血。分离血清，检测特异性IgG抗体。结果在430A自动肽合成仪上成功合成了20肽，并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达85％以上；抗原合成肽免疫小鼠后，血清中特异性IgG抗体滴度最高达1：3000．阴道冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达1：500。结论化学合成透明带抗原肽能在小鼠体内诱导出高滴度特异性抗体,从而为研制透明带避孕疫苗提供实验基础。     

人多形上皮黏蛋白与巨噬细胞集落刺激因子基因融合构建双基因多表位抗原的真核共表达质粒

背景：一些实验已经证明在同一载体上构建含多个基因的共表达载体，可提高转染和表达效率。目的：利用多形上皮黏蛋白（polymorphic epithelial mucin，MUC1）多肽骨架中含有许多连续重复系列，构建人MUC1重复序列串联体基因与巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte macrophagehage colony stimulating factor，GM-CSF）基因重组的真核共表达质粒pcDNA3．1（＋）．MUC1-GM-CSF，并观察重组质粒在COS-7细胞中的表达。设计、时间及地点：基因重组体设计实验，于2005—09，2006-12在解放军第四军医大学动物中心实验室完成。材料：真核表达载体pcDNA3．1（＋）由英国Taylor-Papadimitriou教授惠赠，pGEM-3zf（-）-GM-CSF质粒、COS-7细胞、pUC18载体及E．coli DH5α为自备，雌性BALB／c小鼠由解放军第四军医大学实验动物中心提供。方法：将信号肽及编码MUC1基因片段合成、合成的片断经退火等方法获得MUC1基因重复序列串联体，酶叨鉴定及序列分析后，与GM—CSF基因克隆入pcDNA3．1（＋）真核表达载体中，构建真核共表达质粒pcDNA3．1（＋）-MUC1-GM—CSF。以重组质粒转染COS-7细胞。主要观察指标：通过间接免疫荧光法及ELISA检测目的基因的表达。结果：酶切鉴定及序列分析表明，重绍质粒含育人MUC1重复序列串联体与GM-CSF的融合基因，在COS-7细胞中可检测到MUC1表达，重组质粒免疫小鼠可诱导产生抗GM—CSF抗体。结论：成功构建了人MUC1基因重复序列串联体与免疫佐剂GM—CSF基因重组成为双基因多表位抗原的真核共表达质粒。     

不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6基因真核质粒的保护性研究

目的:探讨不可分型流感嗜血杆茵(nontypeable Haemophilus influenzae,NTHi)外膜蛋白P6(outer membrane protein P6,P6)真核质粒的免疫保护性及其可能的保护机制.方法:构建pcDNA3.1/HisA-P6核酸疫苗,转染HeLa细胞;将P6质粒免疫BALB/c小鼠后,ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生水平:CCK-8法分析脾淋巴细胞增殖情况,并建立小鼠NTHi感染模型,检测小鼠鼻咽部灌洗液NTHi数目变化:HE染色法分析鼻黏膜病理变化.结果:pcDNA3.1/HisA-P6在HeLa细胞中有目的蛋白的表达,免疫后pcDNA3.1/HisA-P6组小鼠脾淋巴细胞产生的IFN-γ及刺激指数均高于pcDNA3.1/HisA、PBS对照组(P<0.05).而IL-4的表达无差异;P6组鼻咽部NTHi清除率也显著高于对照组(P<0.01);病理显示P6组小鼠鼻黏膜组织结构基本正常,而时照组鼻黏膜紊乱、脱落.讨论:P6核酸疫苗可诱导小鼠产生明显的抗NTHi保护效应,其可能的保护机制包括细胞免疫、体液免疫及黏膜免疫.     

Aβ42基因在大肠杆菌中的表达及诱导BALB/c小鼠的抗体产生

目的研究纯化大肠杆菌中Aβ42蛋白的表达情况,并探索该蛋白接种小鼠后抗体的产生情况。方法构建表达载体pGEX-4T-1-Aβ42,设置不同的诱导温度来进行Aβ42在大肠杆菌中表达。用SDS-PAGE、GST柱及Western blot来鉴定纯化目的蛋白。动物实验中,用福氏佐剂采用背部多点注射的方式免疫BALB/c小鼠3次。间接ELISA法检测免疫小鼠血清和脑组织匀浆上清液中特异性抗体的滴度。结果在25℃下,经1.0 mmol/L的IPTG诱导后该蛋白表达量最多,实现可溶性表达。小鼠实验中,第2次免疫后,Aβ42蛋白组小鼠的免疫血清有抗Aβ42抗体产生,且第三次免疫后,抗体数量增高。同时,在脑组织匀浆上清液中也可检测出低滴度的抗Aβ42抗体。结论在大肠杆菌中可获得了高纯度的可溶性Aβ42蛋白。该蛋白结合福氏佐剂免疫BALB/c小鼠后,可诱导小鼠产生特异性的抗Aβ42抗体。     

丙肝核心抗原-CD40L胞外段真核表达载体的构建及其免疫原性分析

目的构建丙肝核心抗原-CD40L胞外段融合蛋白真核表达载体,并探讨其免疫原性。方法应用基因重组技术在原有载体的基础上构建真核表达载体pcDNA3.1-core-CD40L并加以鉴定。该表达质粒肌肉内注射免疫小鼠,ELISA法检测小鼠外周血中抗丙肝核心抗体,流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚型,real time PCR法检测外周血单个核细胞内细胞因子,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了真核表达载体pcD-NA3.1-core-CD40L,该载体能诱发小鼠产生高滴度的抗丙肝核心抗原的抗体,流式和real time结果证实该质粒能诱使小鼠T淋巴细胞由T0期向Th1和Th2转换,并以Th1为主,CTL杀伤结果显示该表达质粒能诱使小鼠产生高水平的细胞杀伤能力。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-core-CD40L,该质粒能够在小鼠体内正确表达,并能诱发高水平的细胞杀伤活性。