实时荧光PCR检测丙型肝炎病毒核酸及其临床意义

目的：探讨实时荧光PCR检测技术在丙型肝炎病原诊断及在监测干扰素-α治疗慢性丙型肝炎早期病毒学应答反应(EVR)中的临床意义。方法：采用一种新的丙型肝炎病毒核酸(HCV—RNA)扩增(PCR)定量检测方法——实时荧光PCR检测HCV—RNA，对96例慢性丙肝(其中20例随机接受Pegasys或Referun-α治疗，每例思者分别采集治疗前后系列血清7份)、30例其它肝病、15例非肝病和86例健康献血员的血清标本进行HCV—RNA检测，部分血清标本与Amplicor(Roche)进行核对。结果：96例慢性丙肝患者血清HCV—RNA检出率85.4％(82／96)、其它肝病、非肝病和健康献血员中均未检出HCV—RNA；部分标本经与Amplicor核对呈较好相关性，r(log)＝0．91。随机接受Pegasys或Referon-α治疗的20例丙肝患者治疗前后EVR显示，前者的EVR似较后者明显，但因病例数太少，无明显统计学差异(G＝4.467,P＞0.05)。结论：实时荧光PCR检出的HCV—RNA载量可较客观地反映丙肝患者体内病毒复制水平，支持干扰素治疗慢性丙型肝炎EVR可用于预测长期疗效。     

血清抗-HCV与HCV RNA检测结果比较

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)是目前诊断丙型肝炎(丙肝)的主要方法,但该方法只不过是从感染者体液免疫应答角度间接证实HCV现症感染或既往感染。而采用高敏感性的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)则能直接证实丙肝病毒血症的存在,对HCV现症感染的证实具有重要意义,我们采用ELISA和RT-PCR技术对154例肝病患者的血清进行了抗-HCV和HCVRNA检测,旨在比较ELISA测定抗-HCV诊断丙肝的价值和RT-PCR测定HCV RNA的优越性,现将结果报道分析如下。     

聚合酶链反应对输血后丙型肝炎的诊断研究

为研究丙型肝炎病毒血症的诊断,以三组与病毒不同区段互补的引物进行反转录巢式聚合酶链反应检测输血后肝炎17例(急性期14例)。按日本毒株的引物检出35％,按非编码区序列的引物检出76％的HCV RNA,两组引物共检出94％,而按Chiron原型的引物检测6例均阴性。HCV多变异,且血清水平极低,用几组不同保守区段的引物,进行巢式PCR,可以获得较高的检出率。     

丙型肝炎干扰素治疗前后外周血单个核细胞中HCV RNA检测研究

丙肝病毒(HCV)是引起非甲非乙型肝炎常见的病原体,HCV感染的病原学诊断,检测血清中特异性抗体采用ELISA或RIB-A和用PCR法检测血清中HCV RNA已有大量报道,但是应用非同位素原位杂交技术检测患者外周血单个核细胞中HCV RNA报告甚少.本文采用地高辛标记的HCV531bp正链和负链(中间复制体),RNA探针,应用原位杂交的方法检测20例慢性丙肝患者用干扰素治疗前和治疗以后的外周血单个核细胞中HCV RNA.旨在探讨干扰素对丙型肝炎的疗效以及丙肝病毒复制情况,现报告如下.     

定量聚合酶链反应检测血清中HCV RNA^＋

目的：探讨定量聚合酶链反应用于检测丙型肝炎病毒HCV含量变化的意义。方法：用信号引物能量转移定量聚合酶链反应（PCR），检测68例丙型肝炎患者血清HCVRNA水平。结果：其HCVRNA含量范围103～1011拷贝／ml，急性丙肝106.83±3.72拷贝／ml，慢性丙肝106.54±2.67拷贝／ml，而无症状携带者104.95±2.16拷贝／ml。血清HCVRNA水平同ALT水平呈相关。结论：丙肝病毒感染后HCV复制水平与肝损害相关，定量检测HCVRNA的水平变化是预测和评价干扰素疗效的重要指标。     

巢式PCR检测人微小病毒B19非结构蛋白DNA的应用价值

目的 从临床流行病学的角度，对新的人微小病毒B19非结构蛋白DNA巢式聚合酶链式反应(PCR)检测方法的效度及信度进行评价，探索其运用于临床筛查B19病毒感染的可行性。方法 以国内目前常用的结构蛋白DNA巢式PCR检测结果，并结合孕妇的典型临床表现作为诊断标准，将30例孕妇分为B19病毒感染组及非感染组，对非结构蛋白DNA巢式PCR的检测结果进行效度及信度评价。结果 新的检测方法血清标本的灵敏度可达100％，组织标本的特异度及阳性预测值高于血清标本，联合试验有助于提高检测的灵敏度或特异度。结论 非结构蛋白DNA巢式PCR检测方法是一种特异、敏感、简便、快速诊断B19病毒感染的新方法。在临床筛查中，血清标本的检测优于组织标本。     

延边地区慢性丙型肝炎患者及病毒携带者的丙型肝炎病毒基因型分布

[目的]了解吉林省延边地区慢性丙型肝炎患和丙型肝炎病毒携带丙型肝炎病毒基因型的分布．[方法]应用逆转录-聚合酶链反应技术，检测了48例本地区抗丙型肝炎病毒阳性血清，其中有29例为逆转录-聚合酶链反应RNA阳性；对29例逆转录-聚合酶链反应阳性的标本，应用限制性片段多态性技术，进行丙型肝炎病毒基因型分型．[结果]25例慢性丙型肝炎患血清中17例为丙型肝炎病毒RNA阳性，各8例查出丙型肝炎病毒Ⅱ型和丙型肝炎病毒Ⅲ型，1例丙型肝炎病毒Ⅱ/Ⅲ混合型；在23例丙型肝炎病毒携带中12例为丙型肝炎病毒RNA阳性，其中有9例丙型肝炎病毒Ⅱ型，3例丙型肝炎病毒Ⅲ型．慢性丙型肝炎和丙型肝炎病毒携带之间丙型肝炎病毒基因型分布无显性差异．[结论]丙型肝炎病毒各基因型(Ⅱ和Ⅲ)与感染的病情严重程度关系不大．     

丙型肝炎病毒感染的不同人群HCV RNA定量研究

目的　了解丙型肝炎病毒感染的不同人群血清 HCV RNA水平 ,比较定性和定量 PCR结果 ,探讨 HCV含量与血清 AL T的相关性 .方法　采用荧光定量 PCR和逆转录巢式定性 PCR同时检测 136例丙型肝炎病毒感染者血清 HCV RNA,并测定定量 PCR (+ )者血清 AL T.用相关系数分析 HCV RNA含量与血清 AL T的关系 .结果　定性 PCR阳性率为 80 .88% ,定量 PCR阳性率为 77.94% .两者相对符合率为 94.12 % .定量 PCR(+ )血清 (10 6例 ) HCV RNA含量在 10 7.0 4～ 10 1 0 .96拷贝· L- 1 .无症状献血员 HCV RNA含量显著低于慢性丙型肝…     

血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测在100例丙型肝炎患者诊断中的应用价值

[目的]探讨血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测在丙型肝炎患者诊断中的临床意义.[方法]选择2017年1月至2019年2月间接受检测的100例丙型肝炎患者作为研究对象,所有患者均接受单独血清丙型肝炎病毒核酸含量检测、肝功能检测及血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测,比较不同检测方法的阳性率并分析血清丙型肝炎病毒核酸含量与肝功能指标的相关性.[结果]血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测的阳性检出率显著高于单独血清丙型肝炎病毒核酸含量检测和肝功能检测(χ~2=19.151,P<0.01);胆碱酯酶正常组的前白蛋白及白蛋白水平均显著高于胆碱酯酶轻度异常组和胆碱酯酶异常组,相关性分析结果显示,血清胆碱酯酶与前白蛋白、白蛋白呈正相关(r=0.725,0.806,P<0.05).[结论]血清丙型肝炎病毒核酸含量联合肝功能检测在丙型肝炎的诊断中有较高的阳性检出率.     

丙肝病毒感染者外周血抗-HCV与HCVRNA测定结果比较

多年来,抗-HCV检查已成为筛选献血员的常规项目之一,但输血后丙肝仍屡见不鲜.我们对78例非甲非乙型肝炎患者 进行了检查,发现抗-HCV阴性40例中,HCV RNA阳性11例,现报道如下. 1 材料和方法①病例选择:根据1995年在北京修订的<病毒性肝炎防治方案>诊断标准,选择非甲非乙型肝炎病毒感 染患者78例,皆为1996年7月～1999年12月在我院住院的患者,其中肝硬化12例,肝癌5例,肝炎61例.②方法:78例 患者皆行外周血HCV RNA检测及抗-HCV检则.HCV RNA采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR).抗-HCV采用第二代酶 联免疫吸附试验诊断盒. 2 结果 78例患者中,抗-HCV阳性38例,占48.7%,HCV RNA阳性32例,占41.0%.抗-HCV阳性38例中HCV RNA阳性21例,占26.9%,抗-HCV阴性40例中,HCV RNA阳性11例.占14.1%. 3 讨论丙型肝炎患者外周血中抗-HCV、HCV RNA可单项存在,亦可重叠存在.Sakamoto等报道抗-HCV阳性的 血液透析患者有25.0%HCV RNA阳性,这是因为丙肝一部分可自愈,但抗原消失后一段时间抗体才转阴,因此丙型肝炎 抗-HCV阳性患者不能确定何时感染上丙型肝炎及目前是否有传染性.丙肝病毒感染后,HCV RNA检出时间早于抗-HCV阳 转时间,而且敏感性高于后者,是一种早期、灵敏及特异的HCV感染诊断方法. 丙型肝炎存在输血及非输血感染途径.输血与血制品是感染丙肝的重要途径.同时进行抗-HCV及HCV RNA检测,可     

聚合酶链反应检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸的研究

本文报道了简便快速检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的聚合酶链反应(PCR)方法。检测单浆献血员61例,其中抗-HCV阳性30例,检出血清HCV RNA阳性者17例;抗-HCV阴性31例,检出血清HCV RNA阳性者9例。检测6例血清HCV RNA阴性、抗-HCV阳性丙型肝炎患者的肝穿标本,发现4例HCV RNA阳性。说明本文所建立的PCR方法是诊断HCV感染的特异性强、敏感度高的一种新方法。检测肝组织内的HCV RNA可提高HCV RNA的检出率。本文还对标本的处理及如何避免假阳性等问题进行了讨论。     

多重巢式PCR同步筛查HBV、HCV和HIV-1的方法建立

目的:探讨多重巢式聚合酶链式反应(PCR)对血液中HBV、HCV和HIV-1同步筛查的方法进行构建。方法:选取我疾控中心HIV-1、HCV以及HBV血清标本,明确HCV、HBV与HIV-1的引物探针组合。结果:将合并感染HCV和HIV 1的样本与己知HBV DNA阳性的样本混合作为合并感染三种病毒的样本,同时提取这三种病毒核酸。结论:在HBV、HCV与HIV-1同步筛查中,多重巢式PCR具有较大的潜力。     

干扰素治疗5例丙型肝炎效果及血清丙肝病毒动态观察

干扰素治疗５例丙型肝炎效果及血清丙肝病毒动态观察杨俊英，杜绍财，陶其敏近年来，应用干扰素治疗丙型肝炎取得了较好的临床效果，但对血清中丙肝病毒（ＨＣＶ－ＲＮＡ）含量的变化，以判断干扰素治疗的效果，尚未见报道。作者应用定量ＰＣＲ法检测了３例干扰素治疗的１...     

慢性丙肝患者抗病毒治疗前后血清IL-18、IL-10、sIL-2R、TNF-α水平变化的临床观察

目的 探讨IL－18、IL－10、sIL-2R、TNF－α在慢性丙型肝炎发病中的作用,观察干扰素抗病毒治疗对于上述细胞因子水平的影响。方法 酶联免疫吸附法（ELISA）检测10例正常人、24例丙型肝炎病毒携带者及27例慢性丙肝患者（包括干扰素治疗前、后）血清中上述细胞因子水平。结果 慢性丙肝患者血清中上述细胞因子显著高于正常对照组（P＜0．05）及丙肝病毒携带者组（P＜0．05）,且其值与谷丙转氨酶（GPT）呈显著正相关;经干扰素治疗后上述细胞因子水平均明显降低,HCV－RNA未阴转组治疗前血清中sIL-2R、IL－10水平明显高于HCV－RNA阴转组（P＜0．05）。结论 上述细胞因子共同参与慢性丙型肝炎的发病,并可用于评价干扰素对于机体免疫状态的影响;且sIL－2、IL－10对预测抗病毒疗效有重要意义。     

丙肝病毒血清分型研究

目的:对收治的丙型肝炎病患者情况进行血清学分型研究,评价丙肝病毒(HVC)血清分型在医院临床检测的必要性。方法:取来医院治疗的丙型肝炎患者的血清100份,并采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法来检测待检血清的特异性抗体,对这100份血清进行分型,并进行统计学卡方检验分析。结果:检测出有特异性反应的血清96份,血清学分型检测率达到96%,其中1型54例,2型32例,1和2混合型10例。结论:HVC血清分型方法有非常高的分型率(达96%),能够有效的检测出丙肝病毒血清型,该分型方法适用于医院临床检测。     

丙肝病毒血清分型研究

目的:对收治的丙型肝炎病患者情况进行血清学分型研究,评价丙肝病毒(HVC)血清分型在医院临床检测的必要性.方法:取来医院治疗的丙型肝炎患者的血清100份,并采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法来检测待检血清的特异性抗体,对这100份血清进行分型,并进行统计学卡方检验分析.结果:检测出有特异性反应的血清96份,血清学分型检测率达到96％,其中1型54例,2型32例,1和2混合型10例.结论:HVC血清分型方法有非常高的分型率(这96％),能够有效的检测出丙肝病毒血清型,该分型方法适用于医院临床检测.     

云南地区丙型肝炎病毒基因亚型及RNA载量在丙型肝炎进展中的变化

目的 检测云南地区慢性丙型肝炎、丙肝相关性肝硬化、丙肝相关性肝癌患者中丙肝病毒 (HCV) 的基因亚型及RNA载量在疾病进展过程中的变化.方法 通过收集2016年1月至2017年4月昆明医科大学第一附属医院及云南省传染病医院收治的患者241例, 其中丙型肝炎组患者169例, 丙肝相关性肝硬化组56例, 丙肝相关的肝癌组16例作为研究对象.采用PCR荧光探针法检测血清中丙肝病毒基因亚型以及HCV RNA载量.结果 在丙型肝炎患者中3b型最多 (27.81%) ;在丙肝相关性肝硬化患者中1b型最多 (30.36%) ;在丙肝相关性肝癌中3 b型最多 (31.25%) .3组患者基因亚型比例无显著差别 (P>0.05) .慢性丙型肝炎、丙肝相关性肝硬化、丙肝相关性肝癌组患者的HCV RNA载量分别为 (332±114) Copies/m L、 (189±73) Copies/m L、 (152±56) Copies/m L.3组患者HCV RNA载量的差异显著 (P<0.01) , 慢性丙型肝炎组高于其他2组 (P<0.01) , 但丙肝相关性肝硬化组与丙肝相关性肝癌组患者HCV RNA载量没有明显差别 (P>0.05) .结论 云南地区丙型肝炎中以3b型为主, 丙肝相关性肝硬化中以1b型为主, 丙肝相关性肝癌中3b型为主.在慢性丙型肝炎进展过程中HCV RNA载量减低.     

核酸检测技术在血液筛查中的应用研究

目的大样本、多方法调查深圳地区无偿献血人群中乙肝、丙肝和艾滋病病毒血清学阴性者的核酸阳性率,探讨在我国血液筛查中引进核酸扩增技术的必要性,了解和分析献血者血清学阴性核酸阳性感染状况。方法采用大样本数调查,应用ROCHE PCR-ELISA、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法和CHIRON TMA(转录依赖的扩增技术)多种方法对血清学检测阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1RNA检测,对乙肝阳性献血者追踪检测ALT和乙肝两对半标志物,对丙肝核酸阳性献血者追踪检测ALT及抗-HCV及HBV DNA和HCV RNA病毒载量。结果共对141288人份血样进行了检测,检出HBsAg(-)、HBV DNA阳性28例,总阳性率为0.020%,其中21例为anti-HBc阳性,占0.015%。HIV-1RNA未检出阳性,17例HBsAg(-)、HBV DNA阳性样本追踪发现,9例发生了血清转换现象,4例呈窗口期特征,所有追踪的HBV DNA阳性献血者ALT检测结果正常。1例anti-HCV(-)、HCV RNA阳性献血者追踪发现为典型窗口期献血,ALT显著升高。结论应采用高灵敏度的核酸扩增技术筛查血液中的乙肝和丙肝病毒,可提高血液安全。     

广西部分地区人类免疫缺陷病毒感染者合并丙型肝炎病毒感染情况分析

目的 了解广西人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者中HIV/丙型肝炎病毒(HCV)的混合感染率及其HCV RNA的阳性率,为今后HIV患者丙肝筛查及预防提供参考.方法 采用ELISA法检测HIV感染者血清中的丙肝病毒抗体,按结果分成抗-HCV(+)组和抗-HCV(-)组,再用巢式PCR法检测血清的HCV RNA,分析比较HCV RNA阳性率.结果 在300例HIV感染者中,有146例抗-HCV阳性,154例抗-HCV阴性;在抗-HCV阳性组中,HCV RNA的阳性率为78.08％(114/146);在抗-HCV阴性组中,HCV RNA阳性率为26.62％(41/154);ELISA法和巢式PCR法检测HCV感染的符合率为75.67％[(113+114)/300].结论 在广西的HIV感染者中HCV感染状况较严重.对HIV感染者进行丙肝筛查时,为减少漏诊率,建议采用PCR方法检测抗-HCV阴性血清中的HCV RNA.     

用ELISA检测丙型肝炎患者HCV-IGM免疫复合物

丙型肝炎免疫复合物的测定对疾病的诊断、疗效观察、预后判断及发病对丙肝患者HCV-IGM免疫复合物进行了检测，报告如下。材料和方法1待测血清：丙肝患者血清均获上级传染病中心，抗FICV--IgG阳性（科华公司试剂盒），有明确输血史，诊断符合1990年全国病毒性肝炎修订标准。正常对照血清自健康献血员。及时分离血清，-30℃保存。