帕金森病大鼠模型黑质白介素-6表达的实验研究

目的探讨白介素-6(IL-6)和小胶质细胞在帕金森病发病机制中作用,阐述小胶质细胞激活后作用的合理模式。方法采用立体定向术将神经毒素6-羟基多巴(6-OHDA)注入大鼠右侧纹状体制作偏侧帕金森病大鼠模型。造模2月后,计数黑质致密部神经元和小胶质细胞数目,观察黑质致密部病理形态学变化,并采用免疫组织化学方法观察黑质致密部IL-6表达水平的变化。结果光镜下观察模型组右侧黑质致密部多巴胺能神经元几乎消失,小胶质细胞数目明显增多,与假手术组及正常对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。免疫组化染色显示模型组右侧黑质致密部可见明显的小胶质细胞核周的棕褐色阳性表达,而模型组左侧与假手术组及正常对照组右侧黑质均未见明显阳性着染区。结论神经毒素6-OHDA可导致神经元释放小胶质细胞激活态物质,激活小胶质细胞释放IL-6介导细胞毒作用,促进神经元的慢性变性坏死。     

帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的氧化应激研究

目的　探索帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的氧化应激发病机制。方法　通过立体定位仪 ,将 6-OHDA注入大鼠一侧纹状体内制备 PD模型 ,2周后观察动物的行为学改变 ,2个月后观察黑质纹状体等的病理形态学变化 ,检测模型组、假手术组和正常对照组的超氧化物歧化酶 (SOD)的活性 ,丙二醛 (MDA)、一氧化氮(NO)代谢产物 (NO x)的含量的变化。结果　成功 PD模型鼠有 2 2只。光镜下 HE染色示模型组右侧黑质的多巴胺神经元受损 ,数目减少。模型组右侧黑质的 SOD的含量下降 ,MDA及 NO x含量明显升高 ,与左侧、假手术组及正常对照组相比有显著差异 (P>0 .0 5)。结论　 6-OHDA纹状体内双靶点注射法是一种有效的制备 PD模型的方法。帕金森病大鼠模型黑质内 SOD活性下降 ,MDA、NO x含量升高 ,氧化应激在 PD的发病中起重要的作用     

褪黑素对离体帕金森病模型黑质NF-KB表达及黑质细胞凋亡的影响

目的研究褪黑素（melatonin，MT）对6-羟多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）所制造的离体帕金森病（Pakinson disease，PD）模型的影响。方法将14只大鼠分成假手术组、MT组和对照组3组，MT组大鼠经腹腔连续3d注射MT，另两组以相同方法注射等量生理盐水，然后MT组和对照组分别取脑片置于含6-OHDA的人工脑脊液中孵育2h。应用TUNEL法、免疫组化技术观察黑质细胞凋亡的数量并检测黑质细胞NF-kBp65表达情况。结果假手术组未见明显黑质细胞凋亡，MT组较对照组黑质细胞凋亡明显减少，且黑质细胞NF—KBp65的表达也有所减少，与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论MT对离体PD模型具有保护作用，其机制可能为抗凋亡。     

褪黑素对离体帕金森病模型黑质NF-κB表达及黑质细胞凋亡的影响

目的研究褪黑素(melatonin,MT)对6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)所制造的离体帕金森病(Pakinson disease,PD)模型的影响。方法将14只大鼠分成假手术组、MT组和对照组3组,MT组大鼠经腹腔连续3 d注射MT,另两组以相同方法注射等量生理盐水,然后MT组和对照组分别取脑片置于含6-OHDA的人工脑脊液中孵育2 h。应用TUNEL法、免疫组化技术观察黑质细胞凋亡的数量并检测黑质细胞NF-κBp65表达情况。结果假手术组未见明显黑质细胞凋亡,MT组较对照组黑质细胞凋亡明显减少,且黑质细胞NF-κB p65的表达也有所减少,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论MT对离体PD模型具有保护作用,其机制可能为抗凋亡。     

铁在大鼠黑质多巴胺能神经元损伤中作用研究

目的：观察铁在多巴胺能神经元损伤过程中的作用，并探讨铁在帕金森病Parkinson disease，PD)起病阶段的作用。方法：通过PD大鼠模型，采用生化、TUNEL方法观察6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑立体定向注射1、7、14、21d PD黑质铁浓度、自由基以及黑质细胞凋亡数变化。结果：1～21d PD大鼠黑质铁浓度、自由基及凋亡细胞数随时间增加而增加，并显著高于对照组。结论：铁在PD发病中具有重要作用。     

尼古丁对帕金森病大鼠纹状体多巴胺及黑质自由基含量的影响

目的 :研究尼古丁对帕金森病大鼠的影响 ,探讨其对 PD的作用机制。方法 :通过 6 - OHDA脑立体定向注射术建立大鼠帕金森病模型。采用生化方法观察不同剂量尼古丁对帕金森病大鼠的作用 ,检测黑质自由基、抗氧化剂及多巴胺含量的变化。结果 :造模前及造模后皮下注射尼古丁的 PD大鼠 ,黑质自由基及抗自由基酶及多巴胺含量较PD组有明显改善 (P<0 .0 5 )。结论 :尼古丁可减轻 6 - OHDA对黑质 DA能神经元的损伤 ,对 PD大鼠具有保护作用     

水通道蛋白AQP9在帕金森病脑组织中的表达及作用

目的观察大鼠帕金森病(Parkinson’disease,PD)水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)在脑组织中的表达变化,研究AQP9在帕金森病脑组织发病机制中的作用。方法制造帕金森病动物模型,应用HE染色、免疫组织化学、RT-PCR等方法观察大鼠脑组织AQP9表达变化。结果免疫组织化学和RT-PCR检测结果显示,帕金森病组脑组织AQP9和AQP9mRNA的表达呈动态变化过程,帕金森病组大鼠术后各时间点(除外术后2周时间点)在鼠左侧黑质致密部(SNC)及中脑腹侧被盖区(VTA)区AQP9和AQP9mRNA表达均比假手术组高。结论高表达的AQP9,可能通过调节水电解质与能量代谢,从而在帕金森病发病机制中起重要作用。     

实验性帕金森病黑质的超微结构变化及灵芝孢子粉的影响研究

目的　研究帕金森病 (PD)动物模型黑质的超微结构及灵芝孢子粉对这些超微结构的影响。方法　30只健康雄性SD大鼠被分成 3组 ,每组 10只 ,其中PD组采用立体定向仪注入微量 6 羟多巴 (6 OHDA)至右侧中脑黑质 ,诱发PD模型。将成功的PD模型鼠用电镜固定液灌流固定脑组织 ,然后电镜观察黑质超微结构。灵芝孢子粉组先用灵芝孢子粉预处理 3天 ,再用立体定向仪注入微量 6 OHDA至右侧中脑黑质 ,并连续应用灵芝孢子粉直至4周 ,选择旋转次数最多的 6只大鼠电镜观察黑质超微结构。正常对照组黑质注入 0 2 %抗坏血酸生理盐水混合液。结果　PD组大鼠有较多的凋亡的神经细胞 ,线粒体嵴不清、内质网扩张 ,而正常对照组没有这些变化。灵芝孢子粉预处理组存在轻度的线粒体嵴不清、内质网扩张 ,偶见凋亡的神经细胞。结论　从形态学上说明神经细胞的凋亡在PD的发病机制中具有重要作用 ,同时灵芝孢子粉对黑质神经细胞具有保护作用。     

蛋白酶体抑制剂诱导大鼠运动行为改变的研究

目的 观察蛋白酶体抑制剂诱导大鼠黑质变性及大鼠运动行为改变,探讨蛋白酶体功能下降在帕金森病发病机制中的作用.方法 将蛋白酶体抑制剂立体定向注射入大鼠左侧黑质致密部,对照组注射等体积的生理盐水.观察大鼠自主行为和阿朴吗啡诱导的旋转行为的改变.开野实验观察大鼠自发运动行为改变.免疫组织化学法观察黑质致密部及纹状体内酪氨酸羟化酶的表达.结果 Lactacystin组大鼠给药一周后出现自发性活动减少,动作缓慢,震颤、对外界刺激不自主竖毛,且症状逐步加重;阿朴吗啡可诱导出向健侧的旋转运动.开野实验中,Lactacystin组大鼠自发运动行为出现改变.三周后黑质部位酪氨酸羟化酶免疫阳性细胞及纹状体内酪氨酸羟化酶免疫阳性神经纤维减少.结论 蛋白酶体抑制剂Lactacystin单侧黑质致密部微量注射可以诱导大鼠黑质变性并出现运动行为改变,蛋白酶体抑制剂在帕金森病动物模型制备上有潜在价值,蛋白酶体功能下降可能在帕金森病发病机制中起重要作用.     

雌激素对去卵巢大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的保护作用

目的观察雌激素对去卵巢大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的作用,探讨雌激素防治帕金森病的可能性。方法成年雌性大鼠行卵巢切除术、随机分为雌激素组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),应用立体定向技术注射六羟基多巴胺(6OHDA)于大鼠中脑黑质,采用免疫组织化学的方法对黑质多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶(TH)进行标记并记数阳性细胞。同时,对大鼠进行行为学观测。结果在没有给予雌激素的去卵巢大鼠组,阿朴吗啡(APO)诱导的旋转次数与对照组相比有显著增加(P<0.05)、大鼠中脑黑质TH阳性神经元数目与对照组比较也有显著减少(P<0.01)。结论雌激素对雌性大鼠中脑黑质多巴胺能神经元具有保护作用。     

一种帕金森病大鼠模型的建立及评价

目的探讨应用6-羟基多巴胺（6-OHDA）毁损大鼠黑质致密部制作偏侧帕金森病（PD）模型的方法和应用价值。方法采用立体定向微量注射6-OHDA于大鼠黑质致密部,观察经阿朴吗啡诱导后大鼠的行为及黑质多巴胺能神经元形态学变化。结果部分大鼠注射后即出现行动迟缓、少动、竖毛、躬身、尾部强直、肢体震颤、嗅探和易激惹等异常行为。术后4周时,共33只大鼠经阿朴吗啡诱导后在30min（P〈0．01）的平均旋转圈数〉7r／min,达到成功模型的标准,模型成功率为82．5％（33／40）。免疫组化观察发现模型组大鼠注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧和对照组注射侧区明显减少（P〈0．01）。结论利用6-OHDA毁损大鼠黑质致密部可以较快建立稳定的PD大鼠模型,方法简便实用,动物死亡率低,模型成功率高。     

帕金森病行为学和黑质形态学实验研究

目的观察帕金森病大鼠行为学及其形态学特点。方法本试验通过PD大鼠模型,采用行为学观察、TUNEL法、HE染色、Nissl染色及电镜方法,观察模型成功后1d、7d、14d PD大鼠行为、形态学变化。结果 PD大鼠旋转圈数无明显变化,凋亡细胞、尼氏细胞逐渐减少,超微结构损伤逐渐加重。结论 PD大鼠旋转行为变化有其病理学基础。     

还原型谷胱甘肽保护性治疗帕金森病的机制研究

目的观察还原型谷胱甘肽(GSH)对帕金森病(PD)大鼠模型的异常行为、黑质抗氧化系统、线粒体呼吸链功能及细胞形态学的影响。方法应用6-羟基多巴胺立体定向注射制作PD大鼠模型。将24只大鼠随机分为3组(每组8只):模型组、GSH组、假手术组,分别给予相应处理,共45d,给药前后均进行行为学测试,给药后测定各组大鼠黑质区谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)及线粒体呼吸链酶复合体水平,并行免疫组化检测。结果(1)GSH对大鼠旋转行为无明显影响(P>0.05)。(2)GSH能减轻黑质区氧化应激损伤。(3)GSH能增强黑质呼吸链酶复合体I活性。(4)免疫组化发现GSH组TH-IR神经元数量较模型组明显增多。结论GSH能减轻PD模型大鼠黑质区氧化应激损伤,并对线粒体呼吸链及细胞形态具有一定保护作用。     

FosB/△FosB在左旋多巴治疗帕金森病大鼠诱发异动症中的表达与作用

目的探讨FosB/△FosB在左旋多巴治疗帕金森病大鼠诱发异动症中的表达与作用。方法左侧内侧前脑束(MFB)立体定位注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备偏侧帕金森病(PD)大鼠模型,筛选出完全毁损和部分毁损的偏侧PD大鼠模型。完全毁损与部分毁损左旋多巴治疗组PD大鼠分别给予左旋多巴治疗,完全毁损生理盐水治疗组PD大鼠给予生理盐水治疗,假手术大鼠为对照组。每组实验终点,旋转行为评估药物疗效,免疫组织化学技术检测纹状体区FosB/△FosB表达水平。结果随左旋多巴治疗时间的延长,动物旋转圈数逐渐缩短(P<0.01),异动症(AIM)评分逐渐升高(P<0.01),部分毁损PD大鼠的AIM评分低于完全毁损者(P<0.01),毁损侧纹状体区FosB/△FosB阳性细胞数、平均光密度值逐渐增高(分别P<0.01),完全毁损组高于部分毁损者(P<0.01)。生理盐水治疗的PD大鼠纹状体区FosB/△FosB阳性细胞数、平均光密度值无明显变化(P>0.05)。结论纹状体区FosB/△FosB表达水平的改变可能参与了左旋多巴诱发异动症的产生。     

Curcumin protects nigral dopaminergic neurons by iron-chelation in the 6-hydroxydopamine rat model of Parkinson’s disease

Objective Curcumin is a plant polyphenolic compound and a major component of spice turmeric (Curcuma longa). It has been reported to possess free radical-scavenging, iron-chelating, and anti-inflammatory properties in dif- ferent tissues. Our previous study showed that curcumin protects MES23.5 dopaminergic cells from 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-induced neurotoxicity in vitro. The present study aimed to explore this neuroprotective effect in the 6-OHDA-lesioned rat model of Parkinson’s disease in vivo. Methods Rats were given intragastric curcumin for 24 days. 6-OHDA lesioning was conducted on day 4 of curcumin treatment. Dopamine content was assessed by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection, tyrosine hydroxylase (TH)-containing neurons by immunohistochemistry, and iron-containing cells by Perls’ iron staining. Results The dopamine content in the striatum and the number of TH-immunoreactive neurons decreased after 6-OHDA treatment. Curcumin pretreatment reversed these changes. Further studies demonstrated that 6-OHDA treatment increased the number of iron-staining cells, which was dramatically decreased by curcumin pretreatment. Conclusion The protective effects of curcumin against 6-OHDA may be attributable to the ironchelating activity of curcumin to suppress the iron-induced degeneration of nigral dopaminergic neurons.     

Neurorescue Effect of Rosmarinic Acid on 6-Hydroxydopamine-Lesioned Nigral Dopamine Neurons in Rat Model of Parkinson's Disease

Rosmarinic acid (RA) is a naturally occurring polyphenolic compound. It has been reported that RA possessed antioxidant and anti-inflammatory properties. Our previous study showed that RA could protect MES23.5 dopaminergic cells against 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-induced neurotoxicity in vitro. The purpose of this study was to explore the neuroreparative (neurorescue) effect of RA on 6-OHDA-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) in vivo. In this study, the rats were given RA orally after intrastriatal 6-OHDA lesion. Results showed that the dopamine content in the striatum decreased and the numbers of tyrosine hydroxylase-immunoreactive neurons reduced after 6-OHDA treatment. RA treatment after 6-OHDA administration could restore these changes. Further studies demonstrated that 6-OHDA treatment increased the iron-staining positive cells, which were markedly decreased by RA treatment. Moreover, RA suppressed the increased ratio of Bax/Bcl-2 at gene level induced by 6-OHDA. This indicates that the neurorescue effects of RA against 6-ODHA-induced degeneration of the nigrostriatal dopaminergic system were achieved by decreasing nigral iron levels and regulating the ratio of Bcl-2/Bax gene expression.     

同型半胱氨酸对离体帕金森模型的作用及其机制的研究

目的:研究同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对离体帕金森(parkinson's disease,PD)模型的多巴胺能神经元的作用及其机制。方法:12只大鼠分成四组,脑片分别于对照组、含6-羟多巴胺、Hcy及6-羟多巴胺+Hcy的人工脑脊液中孵育2小时。分别用抗酪氨酸羟化酶免疫组织化学方法及生化方法观测黑质阳性细胞体及突起的变化,以及自由基和抗自由基酶的变化。结果:Hcy与6-羟多巴胺共孵育可以引起离体脑片黑质TH阳性细胞突起及纤维数减少,自由基反应增强,抗自由基酶减少,存在显著性差异(P<0.05)。结论:Hcy加重离体PD模型动物的多巴胺能神经元损伤,其机制可能与氧化应激反应有关。     

高频电刺激丘脑底核对黑质神经元保护作用的研究

目的探讨高频电刺激丘脑底核对帕金森病(PD)大鼠黑质致密部(SNc)神经元的保护作用及机制。方法将40只SD大鼠随机分为3组,正常对照组10只,模型组及刺激组各15只。模型组及刺激组大鼠于脑内侧前脑束注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备大鼠偏侧PD模型,刺激组大鼠丘脑底核区植入刺激电极实施高频电刺激(130Hz),对三组动物的行为学、SNc神经元的形态学改变进行观察和分析。结果术后2、4周时,刺激组SNc神经元凋亡的阳性率分别为(39.98±12.11)%和(41.12±9.23)%,模型组则为(61.74±7.82)%和(67.12±10.23)%;两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。术后2、4周时,刺激组Bcl-2/Bax比值为0.84±1.01和0.88±0.81,模型组则为0.39±0.15和0.30±0.58;两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高频刺激丘脑底核对PD大鼠黑质SNc神经元有保护作用,其机制可能与改变了SNc区神经递质的分布和代谢有关。