帕金森病免疫介导黑质损伤的动物实验研究

目的研究帕金森病(PD)患者血清中抗大鼠黑质部膜蛋白IgG抗体的提取方法以及抗体的特异性免疫损伤作用.方法差速离心法粗提SD大鼠黑质质膜,并将其偶联至溴化氢活化的琼脂糖4B(CNBr-activitied-sepharose 4B)上,将20例临床确诊的PD患者血清上样,收集洗脱峰,将洗脱产物通过蛋白A亲和层析柱,收集洗脱峰,间接酶联免疫吸附实验(ELISA)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分别检测其抗原结合活性和纯度.24只雄性SD大鼠随机分为3组,每组8只PBS组(注射PBS),健康组(注射健康人IgG),PD IgG组(注射PD IgG),对大鼠一侧黑质致密部(SNpc)进行立体定向注射,免疫组化检测酪氨酸羟化酶(TH)阳性的细胞数.结果层析后的洗脱产物为两条清晰的条带,相对分子质量分别为25 000,50 000,这与IgG轻链和重链相对分子质量的理论值相符合,证明其具有抗原结合活性并达到电泳纯.注射4周后,免疫组化显示PD IgG组注射侧的TH阳性细胞数比非注射侧下降了51%,而健康IgG组仅下降了4%,PBS组未见明显改变.统计学分析注射物对黑质的损伤作用显示,PD IgG组与健康IgG组相比差异有显著意义(P<0.05),PD IgG组与PBS组相比差异也有显著意义(P<0.05).结论用免疫亲和层析法可获得PD血清中抗大鼠黑质部膜蛋白的IgG抗体成分,其对黑质多巴胺能神经元具有免疫损伤作用.     

实验性帕金森病中脑黑质多巴胺能神经元继发性免疫组织化学改变

本研究旨在观察帕金森病 (ＰＤ)中脑黑质残存多巴胺(ＤＡ)能神经元ｂｃｌ 2、ｂａｘ和一氧化氮合成酶 (ｎＮＯＳ)的蛋白表达 ,探索ＰＤ中脑黑质残存ＤＡ能神经元继发性损伤的机制。材料方法 :将 6 羟多巴胺注入中脑右侧黑质部 ,建立右侧选择性偏侧大鼠ＰＤ动物模型。术后 2周 ,腹腔注射阿朴吗啡诱发大鼠旋转行为 ,旋转速度达到 6ｒ/ｍｉｎ(Φ 35ｃｍ/ｒ)视为成功ＰＤ选择性偏侧模型 ,实验分为正常对照组、ＰＤ组 ,每组 8例 ,正常对照组除不行ＰＤ造模手术外 ,其余处理方法与ＰＤ组相同。ＰＤ组于造模术后 2周断头处死 ,分离中脑 ,常规固定…     

铁离子对黑质纹状体多巴胺神经元毒性作用的实验研究

目的 探讨铁离子对黑质纹状体多巴胺神经元的毒性作用。方法 采用立体定向偏侧大鼠黑质内注入50μg FeCl3和FeCl2，4周后用阿朴吗啡诱导动物行为学变化，高效液相色谱(HPLC)检测纹状体内多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素递质含量的变化，免疫组化观察黑质多巴胺神经元和胶质细胞的改变。结果 FeCL3和FeCL2均可引起注射侧纹状体内DA含量选择性降低，而NA、A含量无显著改变；注射侧黑质内DA神经元显著缺失、胶质细胞显著增生；FeCL3组阿朴吗啡诱导大鼠向同侧旋转行为，FeCL2组大鼠于术后即出现特征性自发性对侧旋转行为，阿朴吗啡不能诱发其旋转。结论 铁离子对黑质纹状体多巴胺神经元具有毒性作用，Fe^3 作用最强，胶质细胞的增生可能参与了这一毒性作用过程。     

帕金森病实验动物模型研究进展

帕金森病(PD)是一种进行性神经退行性病变,其主要特征为黑质纹状体通路的多巴胺能神经元发生变性坏死。尽管以改善PD症状为主的现代医疗方法取得了很大进步,但大多数患者最终还是走向衰弱和残疾。因此,为了更好地了解PD的病理机制和寻求更有效的治疗方法,PD相关动物模型的制作很重要。此文综述了目前常见的PD动物模型并探讨了其各自的应用价值。     

还原型谷胱甘肽对帕金森病保护性治疗的实验研究

目的观察还原型谷胱甘肽对帕金森病(PD)大鼠模型的保护性治疗作用,并探讨其作用机理.方法应用6-羟基多巴制作PD大鼠模型.将大鼠模型随机分为4组(每组8只):模型组,谷胱甘肽(GSH)组,左旋多巴(Ldopa)组,谷胱甘肽 左旋多巴组,另设对照组(8只),分别给予相应处理,共45天,给药前后均进行行为学测试,给药结束后行免疫组化和电镜观察,并测定黑质区谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)及线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ水平.结果 (1)GSH对其旋转行为无明显影响(P＞0.05);(2)GSH 能减轻黑质区氧化应激损伤;(3)GSH能增强黑质呼吸链酶复合体Ⅰ活性;(4)免疫组化发现GSH组TH-IR神经元较模型组明显增多(P＜0.001);(5)电镜下发现GSH可部分延缓凋亡进程.结论 (1)GSH能减轻黑质区氧化应激损伤,并对线粒体呼吸链具有一定保护作用;(2)GSH与L-dopa合用既可有效改善症状,又对残存黑质多巴胺能神经元具有保护性治疗作用.     

农药百草枯致小鼠帕金森病模型研究

目的:研究百草枯致C57BL小鼠帕金森病模型中脑黑质多巴胺能神经元的损伤和纹状体多巴胺递质的变化。方法:C57BL小鼠每周两次百草枯(10mg·kg-1体重)腹腔注射,共6周。悬挂法观察小鼠行为学改变。中脑黑质部位行酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色检查黑质部多巴胺能神经元变化。HPLC法观测纹状体中多巴胺含量的变化。结果:百草枯组C57BL小鼠出现显著的行为学障碍,悬挂得分减少;中脑黑质细胞数量减少;纹状体多巴胺含量降低。结论:C57BL小鼠慢性暴露于百草枯可成功复制帕金森病模型。     

帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的氧化应激研究

目的　探索帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的氧化应激发病机制。方法　通过立体定位仪 ,将 6-OHDA注入大鼠一侧纹状体内制备 PD模型 ,2周后观察动物的行为学改变 ,2个月后观察黑质纹状体等的病理形态学变化 ,检测模型组、假手术组和正常对照组的超氧化物歧化酶 (SOD)的活性 ,丙二醛 (MDA)、一氧化氮(NO)代谢产物 (NO x)的含量的变化。结果　成功 PD模型鼠有 2 2只。光镜下 HE染色示模型组右侧黑质的多巴胺神经元受损 ,数目减少。模型组右侧黑质的 SOD的含量下降 ,MDA及 NO x含量明显升高 ,与左侧、假手术组及正常对照组相比有显著差异 (P>0 .0 5)。结论　 6-OHDA纹状体内双靶点注射法是一种有效的制备 PD模型的方法。帕金森病大鼠模型黑质内 SOD活性下降 ,MDA、NO x含量升高 ,氧化应激在 PD的发病中起重要的作用     

双侧胚胎黑质组织移植治疗帕金森病的双盲对照实验研究

目的通过前瞻性双盲随机对照实验评价胚胎黑质组织移植治疗帕金森病的疗效。方法将34例晚期帕金森病病人随机分组,行双侧胚胎黑质组织移植,每侧移植1个或4个捐赠者的黑质组织,对照组移植安慰剂,并观察24个月,在实验开始和结束时记录“关”状态下的统一帕金森病等级评分(UPDRS)。结果总体疗效没有显著性意义,P=0.244。移植安慰剂组和1个组织组的评分分别下降了(9.4±4.25)分和(3.5±4.23)分,而移植4个组织组评分增加了(0.72±4.05)分,两两比较均无统计学意义。按疾病严重程度分组,并进行对比分析,结果发现病情较轻者组疗效好,结果有统计学…     

急性脑缺血再灌注损伤钙离子与氧自由基作用实验研究

为探讨钙离子与氧自由基在急性脑缺血再灌注损伤中的作用，用复制大鼠急性脑缺血再灌注动物模观察脑缺血再灌注过程中脑组织H2O2、Ca^2 、MDA含量及病理学变化及尼莫地平对上述指标的影响，结果表明，急性脑缺血再灌注后有细胞内钙超载和自由基代谢紊乱，且在再灌注损伤中有协同作用，加重组织损伤，促进脑水肿，尼莫地平对其有保护作用。     

雌激素对帕金森病保护作用的实验研究

目的探讨雌激素对帕金森病是否具有保护作用.方法利用免疫组化染色(ABC)法计数酪氨酸羟化酶(TH)的阳性细胞数,用TUNEL法观察每视野下凋亡细胞的数目,比较各组的差异.结果正常雌性小鼠造模(A)组比去势后造模(B)组中只给予生理盐水(B1)组、造模后去势(C)组中只给予生理盐水(C1)组的TH阳性细胞数目多,凋亡细胞数目少(P＜0.05);B1组与C1组差异无显著性(P＞0.05);B2组(B组中给予雌激素组)比B1组及C2组(C组中给予雌激素组)比C1组TH阳性细胞多,凋亡细胞数目少(P＜0.05).结论雌激素对帕金森病具有保护作用和损伤修复作用,且与凋亡有关.     

The cholinergic system and Parkinson disease

Although Parkinson disease (PD) is viewed traditionally as a motor syndrome secondary to nigrostriatal dopaminergic denervation, recent studies emphasize non-motor features. Non-motor comorbidities, such as cognitive impairment, are likely the result of an intricate interplay of multi-system degenerations and neurotransmitter deficiencies extending beyond the loss of dopaminergic nigral neurons. The pathological hallmark of parkinsonian dementia is the presence of extra-nigral Lewy bodies that can be accompanied by other pathologies, such as senile plaques. Lewy first identified the eponymous Lewy body in neurons of the nucleus basalis of Meynert (nbM), the source of cholinergic innervation of the cerebral cortex. Although cholinergic denervation is recognized as a pathological hallmark of Alzheimer disease (AD), in vivo neuroimaging studies reveal loss of cerebral cholinergic markers in parkinsonian dementia similar to or more severe than in prototypical AD. Imaging studies agree with post-mortem evidence suggesting that basal forebrain cholinergic system degeneration appears early in PD and worsens coincident with the appearance of dementia. Early cholinergic denervation in PD without dementia appears to be heterogeneous and may make specific contributions to the PD clinical phenotype. Apart from well-known cognitive and behavioral deficits, central, in particular limbic, cholinergic denervation may be associated with progressive deficits of odor identification in PD. Recent evidence indicates also that subcortical cholinergic denervation, probably due to degeneration of brainstem pedunculopontine nucleus neurons, may relate to the presence of dopamine non-responsive gait and balance impairments, including falls, in PD.     

Dopamine agonist therapy for Parkinson disease and pathological gambling

We report 6 patients with pathological gambling during pharmacologic treatment for Parkinson disease (PD). Four patients were treated with levodopa/carbidopa and dopamine agonist (DA), and 2 patients received DA monotherapy. We reviewed several published reports regarding pathological gambling and antiparkinsonian therapy and suggest that more advanced PD and antiparkinsonian combination therapy (e.g., levodopa/carbidopa and DA) increases the risk for development of pathological gambling behavior compared with monotherapy with either DA or levodopa/carbidopa.     

帕金森病患者睡眠障碍临床分析

目的分析帕金森病(PD)患者睡眠障碍发生情况及可能影响因素。方法采用统一帕金森病评定量表(UPDKS)、Hoehn-Yahr分级表、汉密尔顿抑郁量表、改良Webster评分、匹兹堡睡眠质量指数(PQSI)、爱泼沃斯思睡量表(ESS)及简明精神状态量表(MMSE)对PD患者病情及睡眠情况进行评定,并与对照组进行对照分析。结果62例PD患者中53例(85.5%)有睡眠障碍,其中失眠46例(86.8%),异态睡眠39例(73.6%),白天睡眠障碍36例(69.2%),与对照组对比均有显著差异(P<0.05)。结论PD患者睡眠障碍较为常见,主要表现为失眠、异态睡眠、日间嗜睡、睡眠发作等,其程度与抑郁、病情严重度及多巴胺能药物剂量等有关。     

人羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病鼠的研究

目的 观察人羊膜上皮细胞在帕金森病鼠移植后的存活情况,以及它对帕金森病鼠旋转行为的改善作用.方法 采用6-羟多巴胺立体定向纹状体注射制作帕金森病鼠模型;51只大鼠随机分三组:人羊膜上皮细胞移植组、假手术PBS对照组以及空白模型对照组.制模成功后第5周用人特异性抗体Nestin和Vimentin检测人羊膜细胞的存活情况,第10周切片观察黑质部TH阳性神经元的变化情况,高效液相色谱--电化学仪测定纹状体多巴胺(DA),高香草酸(HVA),3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)等浓度以及脑脊液DA的含量.结果 人羊膜上皮细胞帕金森病鼠侧脑室内移植可以存活达10周;移植组大鼠旋转数较对照组明显降低(P≤0.01);黑质部TH阳性神经元数量较对照组升高(P≤0.01),纹状体区DA、HVA和DOPAC含量较PBS对照组明显升高(P＜0.01～0.05),移植组脑脊液DA含量较PBS对照组也显著增加(P＜0.01).结论 人羊膜上皮细胞侧脑室移植可以改善帕金森病鼠的旋转行为,其机制可能与其增加纹状体区多巴胺等递质水平有关.     

帕金森病患者线粒体功能缺陷的研究

目的　探讨帕金森病 (PD)患者线粒体功能缺陷类型及其基因突变基础。方法　用溴化乙啶抑制人食管癌细胞系的线粒体DNA复制 ,制备出无线粒体DNA细胞系。将 2 0例PD患者组及2 0名正常对照组血小板与之融合 ,用选择性培养液挑选出融合细胞 ,大量培养后用极谱法测定线粒体酶复合体活性及抗氰呼吸。结果　以苹果酸和谷氨酸为底物时患者组 ( 1.2 5± 0 .0 8)明显低于正常对照组 ( 1.75± 0 .0 8) ,降低 2 8.6% ;以琥珀酸、维生素C和TMPD为底物时患者组与正常对照组差别无统计学意义。这些结果表明 ,线粒体酶复合体II～Ⅴ活性正常 ,以苹果酸和谷氨酸为底物的氧耗率的降低来源于酶复合体I活性受损。由于融合细胞核背景一致 ,其线粒体功能仅受mtDNA影响 ,因此本试验发现的患者酶复合体I缺陷来源于mtDNA的突变。抗氰呼吸PD患者组平均为 ( 8.76±0 .2 5 ) % ,正常对照组平均为 ( 6.2 0± 0 .10 ) % ,差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。结论　PD患者线粒体酶复合体I活性降低 ,来源于线粒体DNA突变 ,可能导致自由基增多 ,在PD神经元变性中起重要作用。     

司立吉林对早期帕金森病患者多巴胺能神经元的影响

目的观察司立吉林对早期帕金森病患者多巴胺能神经元的影响。方法早期帕金森病患者22例,随机分为安坦治疗组(11例)和司立吉林治疗组(11例);年龄分别为(61.6±8.3)岁和(60.8±5.0)岁。两组患者入组时均经纹状体99mTc-TRODAT-1单光子发射计算机体层扫描以及帕金森病量表评分,随后开始施行药物治疗。观察治疗前、治疗后6个月、治疗后13个月帕金森病量表评分结果,以及治疗13个月后纹状体单光子发射计算机体层扫描99mTc-TRODAT-1特异性摄取值百分率的变化。结果(1)治疗13个月后,两组患者患病肢体对侧及同侧纹状体对99mTc-TRODAT-1单光子发射计算机体层扫描特异性摄取值下降百分率分别为:安坦组(28.9±13.0)%、(31.8±15.6)%,司立吉林组(30.39±14.7)%、(32.6±16.6)%,两组间相比差异无显著性意义(均P>0.05)。(2)帕金森病量表评分显示,治疗6个月时,安坦组评分为(23.7±4.3)分,司立吉林组为(13.1±5.5)分;治疗13个月时两组评分分别为(27.0±4.3)和(9.8±4.8)分,司立吉林组明显优于安坦组(均P<0.05)。结论司立吉林对于早期帕金森病患者的临床效果较好,而且不加重纹状体多巴胺能神经元的凋亡。     

抑郁症与帕金森病患者脑多巴胺转运蛋白核素显像的对照研究

目的 探讨抑郁症与帕金森病患者脑多巴胺转运蛋白核素显像的特点.方法 采用多巴胺转运蛋白显像剂(99Tcm-TRODAT-1)通过单光子发射型计算机断层显像(SPECT)成像技术,对13例抑郁症患者、17例帕金森病(PD)患者和10名正常对照进行脑多巴胺转运蛋白分布核素显像.结果 三组比较,右侧纹状体与左侧纹状体(RST/LST)比值比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而右侧纹状体与小脑(RST/CB)和左侧纹状体与小脑(LST/CB)放射性比值的差异有统计学意义(均P＜0.01).其中对照组RST/CB和LST/CB最高(分别为3.486±0.207和3.553±0.158),其次为抑郁症组(分别为2.255±0.290和2.317±0.341),而PD组最低(分别为1.522±0.237和1.547±0.262).结论 抑郁症和PD患者的双侧纹状体及小脑的放射性比值均低,其中PD患者更显著.     

多巴胺转运体SPECT显像评估帕金森病严重程度的研究

目的本研究探讨显像评估帕金森病严重程度的意义.方法对15例对照者和30例帕金森病患者(根据Hoehn-Yahr分级分为早期组18例,中晚期组12例)行99mTc-TRODAT-1 DAT SPECT断层显像,注射示踪剂2～3 h后采集图像,勾画出感兴趣区(双侧纹状体和枕叶),计算机自动计算感兴趣区的放射性计数,最后测算出纹状体与枕叶部位的放射性计数比值和非对称性指数,并进行比较分析.结果对照组特异性放射性计数比值是0.58±0.16(左侧)、0.56±0.32(右侧),早期帕金森病组特异性放射性计数比值为0.40±0.33(症状对侧或症状严重肢体对侧)、0.51±0.12(症状同侧),中晚期帕金森病组特异性放射性计数比值为0.23±0.18(症状严重肢体对侧)、0.40±0.17(症状同侧);对照组非对称性指数是5.12±0.48,早期帕金森病组为9.05±14.61,中晚期组为20.67±14.2,3组间比较均有显著性差异(P＜0.05).结论多巴胺转运体99mTc-TRODAT-1 SPECT显像有助于帕金森病严重程度的判断.     

Classical Parkinson disease versus Parkinson complex – Reflections against staging and in favour of heterogeneity

Pathological studies have prompted the idea that Parkinson disease (PD) is a multisystem disorder, which starts far away from the nigrostriatal dopamine system and it goes through a long pre-clinical period. Evidence from epidemiological research, functional imaging, olfaction and sleep studies provides support to this hypothesis. Accordingly, PD is seen as an homogeneous disease which sequentially affects different neural structures leading to a well-defined clinical picture. This concept, recently named PD complex, has deep theoretical and practical implications which raise some concerns. This report shows the concept of classical PD as opposed to PD complex. Although the relevance of the central argument concerning the PD complex concept is admitted, it needs to be fully proved before premature conclusions are drawn. In contrast, the notion of classical and clinically significant PD can explain many of the well-characterized pathological and clinical features of the disease and it gives support to the idea that the magic word in PD is variability.