前列腺癌及前列腺上皮内瘤13号染色体等位基因杂合性缺失分析

目的　探讨原发性前列腺癌及高级别前列腺上皮内肿瘤 (PIN) 13号染色体等位基因杂合性缺失 (LOH)及其意义。　方法　经显微切割技术获取前列腺癌及PIN标本各 10例。提取DNA ,采用PCR及微卫星多态性技术 ,对 13号染色体上 14个微卫星标志位点LOH进行检测。　结果　 10例原发性前列腺癌中 7例 13号染色体上至少有一个位点检测到LOH。 13q14及 13q12～ 13为两个高频LOH区。 10例PIN中 13号染色体的 14个位点均未检测到LOH。　结论　前列腺癌中存在 13号染色体的高频LOH区 ,乳腺癌易感基因 (BRCA2 )、视网膜母细胞瘤基因 (RB1)及位于附近的肿瘤抑制基因可能与前列腺癌的发生发展有关     

散发性结直肠癌22q13区域杂合缺失的精细定位分析

目的在染色体高频杂合缺失区22q13精细定位，以筛查可能与结直肠癌相关的肿瘤抑制基因。方法荧光标记的微卫星引物与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行PCR反应。产物在ABI Prism 377自动荧光测序仪进行电泳、扫描以及杂合缺失分析。其结果与临床病理因素进行相关性检验。结果8个位点平均杂合缺失率为35．6％。发现两个高频缺失区域：一个在D22S1171和D22S274之间，约2．7厘摩（cM）；另一个在D22S1160和D22S1149位点之间，约1．8cM。D22S1171位点与肿瘤发生部位显著相关（P=0．020）；D22S114位点与肝转移显著相关（P=0．008）；D22S1160位点与淋巴结转移显著相关（P=0．016）；其余位点与临床病理因素无显著相关性（P〉0．05）。筛选发现ARHGAP8基因和PPARA基因可能是肿瘤抑制基因。结论散发性结直肠癌22q13区域存在两个高频杂合缺失区，分别约2．7cM及1．8cM。ARHGAP8基因和PPARA基因可能是22q13区域与散发性结直肠癌相关的肿瘤抑制基因。     

肾细胞癌3p21杂合子丢失的分子病理

应用聚合酶链反应－限制性片长度多态性分析技术检测３１例非乳头状肾细胞癌３ｐ２１杂合子丢失。结果显示：肾细胞癌中３ｐ２１杂合子率为３８．７％，杂合子丢失率为６６．７％。杂合子丢失阳性患者的５年存活率为２５．０％，而杂合子丢失阴性和纯合子示毛失患者的５年存活率为６５．２％，二者比较，差异有显著性。     

应用激光捕获显微切割技术对肝细胞癌8号染色体短臂杂合性缺失的研究

目的探讨8p杂合性缺失（LOH）的特点及其与肝细胞癌（HCC）临床病理特征的相关性。方法选择8p上5个具有高度多态性的微卫星标记，对62例HCC组织利用激光捕获显微切割（LCM）技术进行LOH分析。结果有56．5％（35／62）的HCC患者在1个或多个基因位点发生LOH。LOH频率最高的3个位点依次为D8S298（51．1％，24／47）、D8S1771（48．8％，21／43）和D8S264（43．5％，20／46）。D8S298位点肝内转移者的LOH频率明显高于无转移者（P〈0．05）；在D8S1771位点，肿瘤直径〉3cm的LOH频率明显高于≤3cm组（P〈0．05）。结论HCC在染色体8p特定位点上LOH明显，在这些区域可能存在一个或多个与HCC发生发展相关的肿瘤抑制基因。8p上部分位点的LOH与临床病理特征有一定的相关性。     

散发性结直肠癌4号染色体等位基因杂合缺失的研究

目的 通过在4号染色体寻找杂合缺失区域，为定位、筛选高频杂合缺失区存在的散发性结直肠癌相关肿瘤抑制基因提供依据。方法 20个荧光标记的微卫星引物与83例结、直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应。微卫星的平均遗传距离是10．4里摩（cm01）。产物进行电泳、扫描及杂合缺失分析，并与临床、病理因素进行相关性检验。结果 短臂（4p）、长臂（4q）的平均杂合缺失率为24．25％、28．56％，可见3个最小的高频缺失区域（Region）：R1：在D4S405和D4s3013（4p14—15．2）之间；R2：在D4s3000和D4s2915位点之间（4q12—21．1）；R3：在D4S407和IMS2939位点之间（4q25—31．1）。D4S1534位点与肝脏转移有关（P〈0．05），其余位点与临床病理因素均无显著相关（P〉0．05）。结论 4号染色体的3个高频杂合缺失区域4p14—15．2、4q12—21．1、4q25—31．1存在散发性结直肠癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因。     

胸腺鳞癌微卫星不稳定和杂合性缺失的初步探讨

目的 检测胸腺鳞癌微卫星不稳定(MSI)和杂合性缺失(LOH)发生频率,以探讨胸腺鳞癌MSI现象的合适微卫星(MS)位点.方法 选择5个微卫星多态性标记,从石蜡包埋的存档标本中选取9例肿瘤组织和其对应的自身正常组织,提取DNA后用PCR扩增,6%聚丙稀酰胺凝胶电泳,银染显色后进行MSI和LOH分析.结果 9例胸腺鳞癌均出现MSI或LOH.在所检5个位点中D6S1708、TP53、DM、D11S988和D8S136微卫星不平衡发生率分别为66.7%(6/9)、33.3%(3/9)、33.3%(3/9)、33.3%(3/9)和0%(0/9).D6S1708遗传学改变多为LOH(5/6),D11S988位点仅见于LOH.结论 D6S1708、TP53、DM和D11S988可以作为研究胸腺鳞癌微卫星的位点;微卫星不平衡可能在胸腺鳞癌的发生中起一定作用,其与胸腺鳞癌临床病理特点的关系尚需进一步探讨.     

前列腺癌及高级别前列腺上皮内肿瘤8号染色体等位基因杂合性缺失分析

目的 :分析原发性前列腺癌及高级别前列腺上皮内肿瘤 (PIN) 8号染色体等位基因杂合性缺失 (LOH)并探讨其意义。　方法 :经显微切割获取前列腺癌及PIN各 10个样本DNA ,采用PCR及微卫星多态性技术 ,对 8号染色体上的 14个微卫星位点LOH进行检测。　结果 :10个原发性前列腺癌样本在 8号染色体有不同LOH的频率 ,8p 2 3.1 p2 3.2及 8p2 1 p2 2为两个高频LOH区。 10个高级别PIN样本检测 8号染色体 14个微卫星位点 ,有 5个样本至少有一个位点检测到LOH。　结论 :前列腺癌中存在 8号染色体的高频LOH区 ,分别位于 8p 2 3.1 p 2 3.2 ,8p2 1 p2 2区 ,高级别PIN出现LOH的位点与前列腺癌相同 ,位于 8p 2 3.1 p 2 3.2及 8p2 1 p2 2区的肿瘤抑制基因可能与前列腺癌的发生发展有关     

散发性结肠直肠癌肿瘤分化及转移相关基因杂合缺失分析

目的：探讨散发性结肠直肠癌患者2号染色体上可能的肿瘤转移相关基因位点。方法：以2号染色体上30个不同荧光标记的高度多态性微卫星引物对83例散发性结肠直肠癌患者基因组DNA扩增相应的微卫星位点,用ABI PRISM 377测序仪进行基因扫描,检测各位点杂合缺失率,比较与肿瘤分期、分化的关系。结果：24个位点获得有效数据,平均遗传距离为11厘摩（cM),杂合缺失率平均为15．16％,较高的有2个们点：D2S206（2q33-37)的32．08％和D2S364（2q24.2)、31．03％,其余位点的杂合缺失率均小于20．00％;D2S142（2q24.1)、D2S126（2q35)、D2S2211（2q24.2)、D2S305（2q23.3)的杂合缺失率随着肿瘤恶性程度的增加而增高,后2个位点间的缺失有相关性。结论：已知几个错配修复基因位点附近的微卫星位点并无高频杂合缺失发生,D2S2305（2q23.3)到D2S2211（2q24.2)之间区域为整体性缺失,此区域和D2S142（2q24.1)、D2S126（2q35)2个位点与肿瘤的恶性程度相关,提示存在未知的肿瘤分化和转换相关基因的可能。     

散发性结直肠癌患者18号染色体高频杂合缺失的研究

目的：探讨散发性结直肠癌患者18号染色体上抑癌基因相关的杂合缺失（LOH）情况，并探索新的抑癌基因位点。方法：对83例散发性结直肠癌患者基因组DNA用14个不同荧光标记的高度多态性微卫生引物，扩增相应的微卫星位点，平均距离为10厘摩（centi-morgan,cM）。用ABI PRISM377测序仪进行基因扫描，统计各位点杂合缺失率。结果：在12个获得有效数据的微卫星位点中，平均杂合缺失率为36．78％,18p中最高为D18S53（38．09％），18q中最高为D18S474（55．74％）。4位患者的18号染色体所有杂合位点都存在缺失，30位患者的杂合缺失位点不少于50％（平均6个／人）；缺失位点少于50％的有53人（平均1个／人）。结论：结直肠癌患者18号染色体存在高频的LOH，并以整体缺失为特点。存在高频LOH的区域定位有转化生长因子（TGF）信号传导相关基因、结直肠癌缺失基因（DCC）、Rb结合蛋白8(RbBP8），特别是TGF信号传导相关基因MADH2、4、转化生长因子－β1反应元件（TGF－β1）等的缺失可能对结直肠癌的发生有重要影响。18p也有存在未知抑癌基因的可能。     

睾丸肿瘤染色体杂合性丢失及微卫星不稳定性研究

目的　探讨睾丸肿瘤的发生、发展与微卫星不稳定性（ ＭＳＩ） 及染色体杂合性丢失（ＬＯＨ）的关系。　方法　利用ＰＣＲＭＩＡ技术,选用８ 种微卫星标记位点,分析２２ 例睾丸肿瘤ＬＯＨ及ＭＳＩ的变化。　结果　２２ 例中１４ 例出现ＬＯＨ（６４％ ）。定位于第９ 号染色体上的Ｄ９Ｓ６３ 位点的ＬＯＨ 发生率最高为４５％ ,次为第５ 号染色体上的ＡＰＣ位点（４３ ％） 及第１８ 号染色体上的ＤＣＣ位点（２５ ％） ;８ 例表现为ＭＳＩ（３６ ％） ,１７ 例表现为ＬＯＨ 或（ 和）ＭＳＩ,总阳性率为７７％ 。　结论　染色体９ｑ 及５ｑ 上存在的抑癌基因的失活以及微卫星不稳定性改变可能在睾丸肿瘤的发生发展中起重要作用。     

散发性结直肠癌染色体20q11-13区杂合性缺失精细定位

目的 研究散发性结直肠癌20号染色体杂合性缺失情况,并对20q11-13区进行精细定位.方法 收集1998年至1999年上海市第一人民医院83例结直肠癌患者的肿瘤组织和对应的正常黏膜组织,采用10个微卫星标记的引物对20号染色体进行杂合性缺失分析,在20q11-13区域另取10个微卫星标记的引物并对标本进行PCR分析.以Genescan 3.1和Genotyper 2.1软件进行基因分型和精确定位.结果 在20号染色体上发现一个高频杂合性缺失区即20q11-13区.进一步的精细定位,界定了两个高频杂合性缺失区:20q11.2、20q12,并在该杂合性缺失区发现了抑癌基因E2F1、PMP24和MAFB.结论 20号染色体有两个高频精细杂合性缺失区,该区很可能存在一个或多个与结直肠癌相关的新的抑癌基因.     

染色体1pter-p36.21杂合性缺失与瘢痕疙瘩的关系

目的寻找瘢痕疙瘩1pter-36.21中可能存在的肿瘤抑制基因的杂合性丢失(LOH)区域,为发现和定位瘢痕抑制基因提供线索和依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对25例瘢痕疙瘩组织和外周静脉血标本进行微卫星分析。结果瘢痕疙瘩组织在所选的位点上的LOH发生率为60%(15/25),明显高于正常对照组织的4%(1/25,P<0.05),在所选的位点上均未发现微卫星不稳定性(MSI)。D1S243位点、D1S468位点、D1S507位点、D1S199位点的LOH发生率分别为28%(7/25)、40%(10/25)、52%(13/25)、12%(3/25),其中D1S243、D1S468、D1S507的LOH发生率比较具有统计学意义(P<0.05)。结论发生在D1S243-D1S468-D1S507位点的LOH存在与瘢痕疙瘩有关的潜在瘢痕抑制基因(SSG),而1pter-36.21上LOH微卫星不稳定性与瘢痕疙瘩发生的关系不大。     

色素沉着息肉综合征患者肿瘤LKB1基因杂合性缺失及其对肿瘤易感性的研究

目的 研究色素沉着息肉综合征（Ｐｅｕｔｚ－Ｊｅｇｈｅｒｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ,ＰＪＳ）患者肿瘤的ＬＫＢ１基因杂合性缺失,探讨其肿瘤易感性机制。方法 以微分离技术分离６例与ＬＫＢ１连锁的色素沉着息肉综合征患者１４个肿瘤和相应正常组织的石蜡切片,提取ＤＮＡ,选择与ＬＫＢ１紧密连锁的Ｄ１９Ｓ８８６和Ｄ１９Ｓ５６５微卫星标志,经聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增,以测序仪检测和分析其杂合性缺失。结果 ５７％的易感肿     

Loss of heterozygosity on chromosome 2 in Japanese patients with prostate cancer

BACKGROUND: Loss of heterozygosity (LOH) on chromosome 2 is thought to occur only occasionally in prostate cancer (PCa), but allelic losses in this region are frequent in other types of human cancer, such as lung, thyroid, head and neck, and cervix. Here, we show a high-resolution deletion map of markers on chromosome 2 in Japanese patients with PCa. METHODS: Tissue samples were obtained from 66 patients with PCa. DNA from normal, tumor, or metastatic tissue was used as the template for polymerase chain reaction amplification for LOH using 24 microsatellite markers on human chromosome 2. RESULTS: Nineteen of the 66 cases (29%) showed LOH for at least one locus on chromosome 2. LOH on 2p was observed more frequently in cancer death cases than in organ confined and regional diseases (P < 0.001). Paired DNAs were available from both primary and metastatic tumors in the eight cases of cancer death; among those pairs, we detected LOH on 2p in four primary tumors, and in all metastatic foci (P < 0.05). Detailed deletion mapping in these tumors identified four distinct commonly deleted regions on 2p 16.3, 2p 12-cent, 2q 21.3, and 2q 23.1-2q 32.1. CONCLUSIONS: These results suggest that inactivation of putative tumor suppressor genes on chromosome 2 that may play an important role in the progression of Japanese patients with PCa.     

应用染色体8p微卫星杂合性缺失标记观察同一肝细胞癌结节内部不同肿瘤细胞群克隆差异

目的用染色体8p微卫星的杂合性缺失（LOH）作为肿瘤的遗传性标记，对同一肝细胞癌结节内部不同肿瘤细胞群是否有克隆差异进行研究。方法在10例肝细胞癌患者，同一肿瘤结节内部不同颜色质地的部分作为不同的细胞群，手工辅助显微切割获取较纯的肿瘤细胞，抽提肿瘤细胞DNA；选取5个染色体8p微卫星位点D8S277、D8S254、D8S258、D8S298、D8S1771，进行微卫星LOH的检测。结果在10例肝细胞癌患者，7例检测出8p微卫星的LOH，3例未检测出8p微卫星的LOH。6例患者在同一肿瘤结节的内部不同肿瘤细胞群之间出现微卫星位点LOH类型的差异，1例患者3个肿瘤细胞群的LOH类型相同。结论在同一肝细胞癌结节的内部，不同的肿瘤细胞群之间存在克隆差异，这种差异说明不同的肿瘤细胞群可能有不同的克隆来源，从而为观察同一肿瘤内不同肿瘤细胞群的生物学特性提供依据。     

Loss of heterozygosity of chromosome 16q in gallbladder carcinoma.

BACKGROUND: The present study was planned to investigate cumulative genetic changes during development and progression of gallbladder carcinoma (GBC) in clinical patients. MATERIALS AND METHODS: We examined GBC DNA from resected tissue isolated from 56 cases of GBC for loss of heterozygosity (LOH) at six loci on five chromosomal arms (1p36, 9p21, 13q14, 16q24, 17p13), using highly polymorphic microsatellite markers. RESULTS: High incidences of LOH at 1p36 (19/36: 53%), 9p21 (12/32: 38%), 13q14 (20/36: 56%), 16q24 (31/54: 61%), and 17p13 (15/36: 42%) were detected. When comparing genetic features with clinicopathological stages of these tumors, it appeared that only LOH at 16q24 had a high incidence (5/6: 83%) at an early stage (T1a: tumor invades lamina propria) of the disease, although large numbers of LOH were found on all chromosomal arms in tumors of more advanced stages (T1b, T2, T3, and T4). CONCLUSION: These results suggested that the putative tumor suppressor gene on 16q24 may be strongly related to an early step of carcinogenesis in GBC and that GBC acquires a high malignant potential when the tumor invades the muscle layer.     

Loss of heterozygosity at 3p in benign lesions preceding invasive breast cancer

BACKGROUND: Loss of heterozygosity (LOH) at chromosome 3p is one of the most common genetic abnormalities identified in human cancers and has occasionally been noted in benign proliferative lesions predisposing to breast cancer. If the frequency of LOH at 3p in benign proliferative lesions correlates with the subsequent development of breast cancer, it may be possible to develop powerful tools for molecular risk assessment based on this technology. MATERIALS AND METHODS: Archival paraffin-embedded tissues from benign breast biopsies in five women who have developed breast cancer and three women who have not developed breast cancer were microdissected and allelotyped at 3p using six microsatellite markers. RESULTS: No LOH was detected in the biopsies from women who have not developed breast cancer. For women developing breast cancer, the proportion of informative loci showing LOH in the benign proliferative lesions was 0.47 as compared to 0.57 for the associated breast cancers. There was no LOH detected in epithelial DNA from a fibroadenoma. Of 15 informative loci, 4 (27%) showed LOH in both the benign proliferative lesion and the associated cancer; however, the actual parental allele lost was different in three of these four cases. CONCLUSIONS: These results suggest that there are specific patterns of genetic instability common to preneoplastic lesions and the breast cancers that subsequently develop even when the paired lesions are not clonally related. LOH analysis of benign breast epithelium may provide a tool for molecular risk assessment and a surrogate endpoint for breast cancer chemoprevention trials.