序贯培养对小白鼠胚胎体外发育的影响

目的:探索序贯培养技术对小白鼠胚胎体外发育的影响。方法:将 2 -细胞期的小鼠胚胎随机分为序贯培养组与传统培养组进行培养 ,观察分析两组的 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率。结果:序贯培养组 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率分别为 70 .5 %、6 8.2 %、6 5 .9% ,传统培养组分别为 4 5 .7%、4 5 .7%、34.3%。两组比较 ,序贯培养组高于传统培养组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :采用适当的培养液进行序贯培养 ,更适合小白鼠胚胎的体外发育     

小鼠胚胎体外发育的影响因素分析

为了建立适宜的胚胎体外培养体系，本试验对小鼠２－细胞胚胎体外发育及其影响因素进行了研究。结果表明，２－细胞胚胎在供试的三种培养基中均可进一步发育；血清、ＣＯ２气体纯度、培养基水的纯度等均可影响到胚胎的发育，从而优化了胚胎体外培养的实验室条件和方法。     

小鼠胚胎原始生殖细胞的体外培养

采用细胞生物学方法和组织培养技术研究小鼠胚胎原始生殖细胞(PGCs)的一般形态学特征及生物学特点.在体外培养条件下,PGCs 按体积大小可分大、中、小3类。本研究发现,中、小型原始生殖细胞在培养的第2、3 d 增多,形态似大型原始生殖细胞。培养中的 PGCs 不贴壁而悬浮生长于培养液中,培养到第6～7 d时开始死亡。体细胞(间充质细胞或间皮细胞)贴壁生长,生长旺盛,与PGCs 同时死亡。     

IVF实验室质控中影响鼠胚体外培养的因素分析

目的 :建立适宜的小鼠胚胎体外培养体系 ,探讨CO2 气体纯度和培养器皿对小鼠胚胎体外发育的影响。 方法 :采用微滴法培养 2 细胞鼠胚 ,以 4～ 8 细胞鼠胚和桑椹胚形成率作为判断培养效果的指标。 结果 :普通纯度CO2 气体培养组的 4～ 8 细胞形成率、桑椹胚形成率分别为 12 .5 %、0 .0 % ,高纯度CO2 气体培养组分别为6 7.6 %、4 4 .1% ,两组比较差异有统计学意义 (P均 <0 .0 0 1)。国产玻璃器皿培养组的 4～ 8 细胞形成率、桑椹胚形成率分别为 74 .4 %、5 3.5 % ,进口一次性器皿培养组分别为 85 .7%、6 2 .8% ,两组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :高纯度CO2 气体更适宜鼠胚的体外发育 ;国产玻璃器皿与进口一次性器皿对鼠胚体外发育的效果相近     

小鼠胚胎干细胞的培养

ＥＳ细胞的培养应满足促进细胞增殖和抑制细胞分化而保持其高度未分化潜能。我们用胚胎成纤维细胞作为饲养层，培养基ＤＭＥＭ中加白血病抑制因子的方法来培养ＥＳ细胞。培养的ＥＳ细胞呈集落状生长，细胞排列紧密，呈未分化状态。胚胎成纤维细胞作为饲养层是分离培养ＥＳ细胞最普遍使用而且有效的方法。本文还围绕ＥＳ细胞培养中的促进增殖和抑制分化这两个方面的影响因素进行了讨论。     

探讨保持胚胎干细胞全能性的体外培养条件

目的 探讨保持胚胎干细胞全能性的体外培养条件。方法 将ＥＳ－Ｄ３细胞株培养在ＳＮＬ饲养层细胞和原代小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上以及在无饲养层的条件下，培养基中加入小鼠白血病抑制因子或用Ｂｕｆｆａｌｏ Ｒａｔ Ｌｉｖｅｒ（ＢＲＬ）条件培养Ａ在进行培养，并对培养细胞进行碱性磷酸酶检测和染色分析。结果 ＥＳ－Ｄ３在上述培养体系中能形成正常形态伯克隆，并且经多次传代后碱性磷酸酶检测为阳性，而且核型保持稳定。     

小鼠体外受精及其胚胎体外培养的比较研究

目的 通过比较不同品系小鼠体外受精情况以及不同培养液对C57BL/6J小鼠胚胎体外培养效果的实验,进一步完善小鼠体外受精和早期胚胎体外培养体系.方法 对C57BL/6J、DBA/2、FVB/NJ、BALB/c、KM、ICR及BARR Ⅱ小鼠进行超排和体外受精,并对C57BL/6J小鼠体外受精后的2-细胞胚胎用HTF、CZB、KSOM、M16、HECM五种培养液在相同条件下进行体外培养到囊胚,计算4-细胞～囊胚的发育率.结果 各品系小鼠平均排卵数为13.0～38.7个(P＜0.01),体外受精率为70.2%～92.8%(P＜0.05).不同培养液至4-细胞的发育率为60.3%～95.8%,其中KSOM的4-细胞发育率为95.8%,最适合2-细胞向4-细胞的发育.8-细胞发育率为52.8%～91.1%,桑椹胚发育率为40.6%～87.5%,囊胚发育率为5.1%～75.4%,各阶段胚胎发育率均差异显著.其中适合于金黄仓鼠桑椹胚、囊胚发育的HECM-2并不支持C57BL/6J囊胚的发育,其囊胚发育率只有5.1%,CZB最适合其囊胚的发育.结论 遗传背景是影响小鼠超排及体外受精效果的主要因素之一.葡萄糖的存在不利于克服2-细胞发育阻断,胚胎在8-细胞期以前,主要能源物质不是葡萄糖,直到桑椹胚后期,葡萄糖才是主要的能量物质.磷酸盐可引起胚胎发育阻断.氨基酸和EDTA有利于克服胚胎发育阻滞.     

应用小鼠胚胎体外培养技术研究氟的胚胎发育毒性

目的　探讨无机氟的发育毒性及机理。方法　妊娠 8.5d大鼠胚胎于体外旋转培养系统中给予不同剂量的氟化钠 ,培养 48h后 ,测定卵黄囊直径 ,胚胎体长和头长 ,用Maele Fabry形态学评分系统进行器官形态评分 ,评价胚胎器官分化发育情况。结果　随着氟剂量的增加 ,反映胚胎生长发育和器官分化的各项指标呈现出下降趋势 ,有一定的剂量效应关系。其中 ,卵黄囊及血管网发育分化对氟较敏感 ,剂量为 5 .0mg·L- 1 时与对照比较已有显著性差异。大于或等于 1 0 .0mg·L- 1 时对多数指标影响显著 ,Maele Fabry形态学总评分与对照相比呈现显著差异。胚胎畸形发生率在剂量为 1 5 .0mg·L- 1 明显升高 ,主要表现为神经管闭合不全和体翻转不全。结论　无机氟有潜在的致畸性和发育毒性     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎分别进行体外培养，研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％、10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养，观察研究小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎进行培养。结果：含低浓度乙醇（1％以下）的培养液对8细胞胚胎和桑葚胚的囊胚形成有促进作用，而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。含高浓度乙醇（≥3％）的培养液则对各期胚胎有不同程度的抑制作用，但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力将逐渐增强。     

Effect of Clenbuterol Hydrochloride on the in vitro Development of Mouse Embryo

Clenbuterol hydrochloride is a strongβ2 receptor agitator,and it was used toprevent and treat bronchial asthma.However,it is seldom used today because of itsstrong side-effect to the heart[1 ] .Clenbuterol hydrochloride also helps in the forma-tion of bo…     

共培养在小鼠胚胎发育过程中的作用

目的 通过人子宫内膜上皮与小鼠胚胎共培养,了解其对胚胎发育的影响。方法 观察共培养２４、３６ｈ及６０ｈ后的小鼠胚胎,并分级,结果 １共培养组停留于２细胞胚胎数显著少于对照组;２共培育２４、３６ｈ后,鼠胚１￣３有胚胎比例较对照组增加,差异有显著性;６０ｈ后,１￣３级胚胎比较与对照组相比差异无显著性。结论 人子宫内膜上皮与小鼠胚胎短期共培养有利于改善胚胎质量。     

C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎冷冻保种技术研究

目的 建立C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎的冷冻保种技术.方法 通过直接收集体内发育的2-细胞胚或者通过体外受精方法获得2-细胞胚,采用玻璃化冷冻法冷冻、复苏、移植,后代经PCR检测.结果 体内发育至2细胞期胚胎90枚,解冻后的平均复苏率是67.78％,移植产仔率是21.31％,后代的阳性率是23.08％;体外受精的2细胞期胚胎203枚,解冻复苏60枚,平均复苏率是63.33％,移植产仔率是15.78％,后代的阳性率是33.33％.结论 两种胚胎冷冻途径均获得了C57-ras癌症转基因动物模型阳性小鼠,建立了该模型动物的低温保存方法.     

Evaluation of Endotoxin in Culture Medium for Human in vitro Fertilization

To determine whether the presence of bacterial endotoxin in the commercial culture media utilized for human in vitro fertilization （IVF）, and evaluate the difference in detecting endotoxin in culture medium between the human sperm motility assay and the 2-cell mouse embryo assay. Methods Thirty-six batches of culture media commonly used in IVF laboratories from 3 manufacturers were determined for thepresence ofendotoxin before using the medium for the assisted reproductive programs （group A）. After being used, 25 specimens among above media were also tested （group B）. The chromogenic limulus amoebocyte lysate （LAL） test was used for quantification the content of endotoxin. In addition, the human sperm motility assay was compared with the 2-cell mouse embryo assay to evaluate the difference in detecting endotoxin in culture medium. Results Endotoxin was not detected in group A. However, 2 samples were positive in group B, Sperm did not show significant change in motility in group A during 24 h of incubation when compared with the control （P〉0. 05）. However, in group A the 2-cell embryo development to blastocyst was suppressed in 3 batches of media. Conclusions Regular screening of each batch of culture medium should be performed if possible although there was no evidence of endotoxin contamination in commercially prepared pre-tested media. Culture environment should be stringently controlled in case the medium is polluted. The sensitivity of the sperm motility assay was lower than that of the mouse embryo assay for detecting low levels of endotoxin or toxic compounds in the medium.     

昆明小鼠卵子的体外受精及其新培养系统的建立

本研究首次将CZB培养液应用于昆明小鼠早期胚胎的培养，建立了一个可行的胚胎体外培养的新方法，采用昆明种成熟雄鼠附睾尾部精子与常规超排法得到的卵子在TYH培养液中进行体外受精后，将卵子分别移入WM和CZB培养液中进行发育培养。WM中的胚胎发生阻滞而未能继续发育；CZB培养液中的胚胎有79%发育至4细胞期，81%的胚胎发育至桑椹胚阶段，突破了胚胎培养中存在的“2细胞阻滞”现象。而于胚胎培养的不同阶段向培养液中添加葡萄糖也未表现出明显的作用。表明在昆明小鼠胚胎培养的早期阶段，葡萄糖并非一种重要的营养物质。     

小鼠早期胚胎原始生殖细胞的组织化学研究

对妊娠12.5～16.5d小鼠胚胎的原始性腺做恒冷箱切片与胶原酶分离标本进行组织化学研究。结果证明,原始生殖细胞含有丰富的碱性磷酸酶(AKP)和亮氨酸氨基肽酶(LNAse),后者为作者第一次发现。酸性磷酸酶(ACP),非特异性酯酶(NSE),葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase),琥珀酸脱氢酶(SDH),3-磷酸腺苷酶(ATPase),糖原及脂类含量极少。用AKP染色可把原始生殖细胞分为大、中和小3类,后者与体细胞很难区别。     

鸡胚细胞的培养

研究了鸡胚细胞的生长规律，葡萄糖的利用和乳酸、氨等代谢产物的积累规律，比较了培养基对细胞生长的促进作用，筛选了合适的微载体，初步探讨了用微载体培养鸡胚细胞的方法。实验结果表明，鸡胚细胞在DMEM培养基中生长良好，最适合的微载体为胶原型微载体，如GT-2，Gytodex-3。     

Effects of Malachite Green on the Development of Mouse Embryo In Vitro

Objective To observe effects of malachite green （MG） on the development of mouse embryo in vitro.Methods Two-cell mouse embryos were obtained and exposed to different concentrations of MG （0 ng/ml, group A, the control; 10 ng/ml, group B; 100 ng/ml, group C; 1 000 ng/ml, group D）. The 2-cell mouse embryo assay was used to determine the 2-cell embryo development to the blastocyst. In addition, at the same concentrations of MG, the human sperm motility assay was used to evaluate the influence of MG on sperm viability.Results At the 8-cell stage, groups C and D showed inhibitory effects when compared with the control （P〈0.01）. Rate of the blastocyst in groups C and D was lower than that of the control （P〈O.O1）. In the sperm motility assay, significant changes in motility after 24 h of incubation in groups C and D were observed compared with the control （P〈0. 01）. However, no differences were found on 24 h sperm motility between group B and the control （P〉0.05）. Conclusion MG would have deleterious effects on the development of mouse embryo, and the effects were dose-related. The sperm motility assay could also detect high levels of MG in culture medium.     

小鼠胚胎脑细胞体外培养形态的演变

用体外培养法观察了小鼠胚胎脑细胞在生长发育中形态的变化。并对双极神经元、多极神经元，锥体细胞，放射状胶质细胞，原浆性星形胶质细胞变化过程进行了描述。