温州地方株HPV16型L1基因多态性及蛋白特性分析

目的：了解温州地方株HPV16 L1基因结构特点,分析其结构蛋白L1基因多态性及蛋白特性变化,为基于L1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据。方法：设计HPV16型L1基因特异性引物,从宫颈癌组织标本提取DNA,进行PCR扩增鉴定,PCR产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNAStar软件分析HPV16型L1基因多态性及蛋白特性变化情况。结果：测定的序列与标准基因序列（NC 001526）比较,温州地区宫颈癌感染的HPV16型L1基因同源性为99.1%～99.8%,分别形成8种突变模式,其中3处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也相应发生变化,但其编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性上与标准株相比较无明显变化。结论：温州地方株HPV16 L1核酸有一定程度的变异。     

宫颈癌患者HPV16型L1基因克隆及序列分析

目的 了解萍乡地方株HPV16 L1基因结构特点,分析其结构蛋白L1基因多态性及蛋白特性变化,为基于L1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据.方法 设计HPV16型L1基因特异性引物,从宫颈脱落上皮细胞中提取DNA,进行PCR扩增鉴定,将扩增的片段同T-载体连接,然后导入到大肠杆菌DH-5α中培养,提取质粒DNA进行测序.结果 测定的序列与标准基因序列(NC Sbjct 496)比较,萍乡地区宫颈癌感染的HPV16型L1基因同源性为98.9％～99.6％,分别形成5种突变模式,其中3处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也相应发生变化,但有1处由于核苷酸的丢失造成翻译的氨基酸也相应发生变化.结论 萍乡地方株HPV16 L1核酸有一定程度的变异,可能会造成HPV16 L1蛋白免疫原性的差异..此株改变也可能是本地区导致宫颈癌的主要原因.实验结果为研制适应本地区的基于HPV16 L1的基因工程疫苗提供了可靠实验依据.     

广东地区宫颈病变HPV81型L1基因多态性分析

目的 调查我国广东地区宫颈病变患者组织中HPV81型的阳性率及其Ll基因多态性.方法 采用HPV通用引物对1200例HPV DNA检测阳性的宫颈脱落细胞标本中的HPV L1区基因序列进行PCR扩增,并结合基因测序分析.结果 和结论 获得HPV81型4例.检出率为0.33%.与Genbank标准株相比,广东地区发现的HPV81 L1基因有多处不同,与日本发现的HPV81病毒株相近.     

广东地区宫颈癌HPV52型L1基因突变分析

目的 调查我国广东地区宫颈癌患者组织中HPV52型的感染率及L1基因突变特性,为制备适合中国人群的疫苗提供流行病学资料.方法 采用HPV通用引物对130例宫颈癌标本中的HPV L1区基因序列进行PCR扩增,并结合基因测序分析.结果 获得HPV52型8例,检出率为6.15%,对所获得的各例HPV52 L1基因测序分析.结论 与Genbank标准株相比,广东地区发现的HPV52 L1基因有多处突变,与香港发现的HPV52突变株相近.     

广州地区复发尖锐湿疣患者HPV L1基因原核表达质粒的构建及鉴定

目的构建广州地区复发尖锐湿疣患者人类乳头瘤病毒晚期基因L1的原核表达质粒,为进一步表达L1蛋白奠定基础。方法应用定向克隆策略,将尖锐湿疣患者病变组织中人类乳头瘤病毒L1晚期基因克隆到原核表达载体PQE40。结果通过酶切及测序鉴定出重组子HPV6bL1-PQE40。结论HPV6bL1的原核表达质粒构建成功。     

人乳头瘤病毒18型晚期基因L1的克隆及测序

人乳头瘤病毒是宫颈癌的主要致病因素，其中ＨＰＶ１８致病进程晚具侵袭性，其晚期基因Ｌ１现被有竽疫苗学研究。本实验从ＨＰＶ１８－ＰＢＲ３２２质粒中克隆ＨＰＶ１８Ｌ１片段，构建了ＨＰＶ１８Ｌ１－ＰＧＥＭ重组质粒。对Ｌ１片段峡谷端测序时发现，原始报道序列在５７０１和６８４２位置的碱基为Ｃ，而实际测序结果均为Ｇ，推断其相应三联密码子编码的氨基酸变化分别为Ｐｒｏ→Ａｒｇ，Ｐｒｏ→Ｐｒｏ。     

黑龙江省尖锐湿疣组织HPV感染的型别分析

目的 分析黑龙江省尖锐湿疣组织中感染的人乳头瘤病毒(HPV)基因型分布情况,比较保守引物和序列特异引物PCR扩增方法.方法 提取26例尖锐湿疣组织标本中DNA,用HPV L1区通用引物及HPV 6b、HPV11、HPV16、HPV18型L1区特异引物进行PCR扩增,分析尖锐湿疣组织中感染的HPV型别分布并比较两种扩增方法的结果.结果 26例标本中,HPV 6b和11型感染例数分别为4和11例,各占15.4%和65.4%;HPV 16型感染2例,占总例数7.7%;有2例合并HPV6b/11型混合感染,占7.7%;1例合并HPV11/16/18型的混合感染,占3.8%.用通用引物扩增后26例标本中1例为阴性. 结论黑龙江省地区尖锐湿疣组织HPV DNA检出率为100%,以低危型别11和6b型为主,偶见高危型别16、18型感染.鉴定HPV感染保守引物与型别特异性引物PCR方法相比,前者可导致少量假阴性产生.     

干扰素γ基因内含子1+874位点多态性与复发性尖锐湿疣的关系

目的 研究干扰素γ(IFN-γ)基因内含子1+874位点多态性与复发性尖锐湿疣(CA)的关系.方法 采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术检测76例复发性CA患者(CA组)与80名正常对照者(对照组)IFN-γ基因内含子1+874位点的T/A单核苷酸多态性.结果 CA组IFN-γ基因1+874位点基因型TT、TA、AA频率分别为10.5%、34.2%、55.3%,对照组分别为7.5%、30.0%、62.5%,两组间差异无显著性(γ2=0.959,P=0.619).结论 IPN-γ基因内含子1+874位点多态性与复发性CA无关.     

宫颈尖锐湿疣组织中HPV分型与端粒酶活性的研究

目的由于宫颈尖锐湿疣(CA)皮损中HPV高危型感染常与其癌变有关，而端粒酶活性增高多见于恶性疾病。该研究探讨宫颈CA皮损中HPV分型与端粒酶活性的关系。方法采用荧光定量PCR检测HPV病毒分型，端粒重复序列扩增文件-酶标法(TRAP—ELISA)检测端粒酶活性。结果尖锐湿疣患者皮损中端粒酶活性明显高于正常皮肤组织；24例(40．0％)HPV16／18型阳性，34例(56．7％)HPV6／11型阳性，2例未检测到HPV；HPV16／18型感染的皮损中端粒酶活性明显高于HPV6／11型感染者。结论认为端粒酶活性与HPV型别有关，可能与HPV病毒协同参与CA发病，HPV16／18型阳性者在临床可能有癌变倾向，抑制端粒酶活性可能可以阻碍疣体生长，为临床治疗提供一个新的方向。     

人乳头瘤病毒6b L1 VLPs免疫治疗生殖道尖锐湿疣的初步研究

目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)6b型L1蛋白形成的病毒样颗粒(VLPs)对女性生殖道复发性尖锐湿疣(CA)的免疫治疗作用.方法:采用HPV6b L1 VLPs 1μg、5μg、10 μg 3组剂量经0 w、4 w、8 w免疫18例CA复发患者.分别用ELISA法和迟发性超敏反应(DTH)检测血清特异性抗体和细胞免疫效应,同时每周随访观察CA病变情况直到20 w.结果:所有研究对象均能在免疫后的血清中检测到特异性抗体.各剂量组免疫前后比较,血清抗体均值间差异均有统计学意义(均P＜0.05);所有患者DTH试验均呈阳性反应.经免疫治疗后20 w的观察,77.8%(14/18)的患者CA完全消退,61.1%(11/18)的患者CA于9 w之内完全消退,14例CA完全消退对象随访1年未见复发.生殖道CA消退与机体DTH反应有相关性(rs=-0.746,P=0.000).结论:HPV6b L1 VLPs可用于生殖道复发性CA的免疫治疗研究.     

HPV6b VLPs检测尖锐湿疣病人血清和宫颈分泌物抗体的意义

目的 :探讨人乳头瘤病毒 (HPV)感染后尖锐湿疣 (CA)病人机体产生的免疫反应及特异性抗体用于HPV感染的诊断价值。方法 :采用重组杆状病毒 昆虫细胞系统制备HPV 6bL1VLPs抗原 ,以酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别检测 4 9例CA病人和 4 5例正常对照的血清抗体、4 6例CA病人和 36例正常对照的宫颈分泌物抗体 ,并用血凝抑制试验检测抗体的中和活性。结果 :CA组HPV6bL1VLPs特异性的血清IgG抗体和分泌物IgA抗体的OD值和阳性率均显著高于正常对照组 (P <0 .0 0 1)。HPV 6型与HPV 11型DNA阳性者的血清IgG和分泌物IgA抗体的阳性率差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。血清IgG和分泌物IgA抗体血凝抑制试验平均效价较正常对照组为高。结论 :生殖道HPV感染后可产生全身和局部生殖道粘膜抗体反应 ,两类抗体均具中和活性。HPV6型与HPV11型感染者的血清和分泌物抗体均存在交叉反应。血清抗体和局部分泌物抗体可能具有用于诊断HPV感染的价值     

HPV感染在尖锐湿疣及外阴和宫颈上皮内瘤变病变中的分布

目的探讨HPV感染在尖锐湿疣和上皮内瘤变(包括外阴和宫颈)病变中的分布情况。方法通过HPV基因分型检测对330例尖锐湿疣和250例上皮内瘤变病变进行了HPV6、11、42等低危型及16、18、31、33、39、45、52、56、58等高危型DNA检测。结果 330例的尖锐湿疣组织中:274例为HPV6/11型(83.0%),46例为HPV16/18型(13.9%);250例上皮内瘤变病变组织中,8例为HPV6/11型(3.2%),167例为HPV16/18型(66.8%)。结论尖锐湿疣感染的HPV类型以HPV6、11为主,上皮内瘤变病变HPV类型以HPV16、18为主。     

尖锐温疣患者有乳头瘤病毒6,11型的检测及L1基因的序 …

目的 检测尖锐湿疣患者组织中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６型和１１型的感染率,分析Ｌ１晚期基因序列及其蛋白质的氨基酸序列,为基因工程疫苗的研究提供依据。方法 采用ＰＣＲ方法测定北京和锦州两地区３４例尖锐湿疣患者病损组织中ＨＰＶ６型及１１型的感染率,并扩增Ｌ１晚期基因,构建重组测序质粒,双脱氧法测序观察其变异状况。结果 ＨＰＶ１１型感染率为７３．５％（２５／３４）,６型感染率为４４．１％（１５／３４）,其     

人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1基因的克隆和序列分析

目的 从已感染人乳头瘤病毒（HPV）的新鲜宫颈癌组织中获得HPV16型晚期表达基因L1，为HPV感染的检测和治疗奠定基础。方法 根据引物设计原则设计一对特异引物，并用PCR方法从宫颈癌组织中获得L1基因，用pGEM-T作为克隆物体，构建重组质粒并以双脱氧法双向测定插入片段序列，拼接出L1基因序列，自动测序验证并分析序列。结果 从西安地区1例宫颈癌临床标本克隆到的1株HPV16型L1蛋白编码序列经BLAST2．0分析与既往报道序列存在高度同蛋白编码序列经BLAST2．0分析与既往报道序列存在高度同源性。结论 构建的重组质粒为进一步研究L1蛋白的表达及其免疫学创造了条件。     

HPV 6b L1VIRUS-LIKE PARTICLES ELICIT HUMORAL IMMUNITY IN MICE

Humanpapillomaviruses(HPV)aresmallDNAviruses.CertaintypesofHPV,suchasHPV6and11,cancausegenitalwarts.TheevidencefortheassociationofcertainHPVtypeswiththeetiologyofcervicalneoplasiahasbeenfirmlyestablished(1).Theabilitiesofvirus-likeparticles(VLPs)tomimictheconformationofnaturalHPVvirionsmakethemattractiveasprophylacticvaccinecandidates.VLPshavenowbeenproducedinavarietyofex-September2003CHINESEMEDICALSCIENCESJOURNALpressionsystemsforallthemajorHPVtypesassoci-atedwithhumand…     

人乳头瘤病毒11型主要衣壳蛋白L1基因的克隆及序列分析

目的 从临床尖锐湿疣标本克隆人乳头瘤病毒（HPV）11型主要衣壳蛋白L1基因,进行序列测定及序列分析比较,以为研究该临床病毒株的免疫原性及流赞美同学奠定基础。方法 以临床尖锐湿疣标本总DNA为模板,用L1基因保守区简并引物以PCR方法分段扩增衣壳蛋白L1基因在部,重组入pGEM-3zf(-)质粒载体,以双脱氧法双向测定插入片段序列,拼接出L1基因序列,通过BLAST2.0与已报道序列进行比较。结果 从西安地区一尖锐湿疣临床标本克隆到的一株HPV11型L1蛋白编码序列与一文献报道大部分相同,但有些位点有点突变,结论 构建的pGEM-3zf(-)重组质粒为进一步通过杂交、体内分段表达等手段研究研究该株病毒L1蛋白的免疫学和流行病学性质创造了条件。