核转录因子NF—кB的研究进展

核转录因子ＮＦ κＢ是 1986年由美国麻省理工学院癌症研究中心的Ｂｌｔｉｍｏｒｅ和麻省Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ生物医学研究所的Ｒｗｉａｎｓｅｎ发现的〔1〕。他们在成熟Ｂ细胞和浆细胞中发现的这种蛋白能与免疫球蛋白κ轻链内含增强子的特异性序列结合 ,该序列由 10个核苷酸组成 (5 -ＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣ - 3) ,命名为κＢ〔1〕。ＮＦ κＢ广泛存在于真核生物中 ,是一个由复杂的多肽亚单位组成的蛋白家族。它作为信号传导途径中的枢纽 ,与免疫、肿瘤的发生、发展 ,细胞凋亡的调节以及胚胎发育等重要事件有着密切联系 ,是一种重要的核转录因…     

Kupffer细胞NF—кB激活对胆道梗阻合并肝部分切除鼠肝细胞再生的影响

目的 探讨Kupffer细胞（KCs)NF-кB激活在鼠非肝硬变性胆道梗阻肝部分切除后肝细胞再生过程中的作用。方法 Wistar大鼠随机分为正常大鼠70%肝部分切除组（N-PH）、胆总管梗阻1周70%肝部分切除组（BDO-PH）、BDO-PHIL-10或生理盐水治疗组,EMSA法检测KCsNF-кB激活、RT-PCR法检测肝内HGF、IL-6、TGF-β1及IL-1βmRNA表达,ELISA法检测肝内TNF-α水平,免疫组化法检测肝细胞BrdU标记。结果 BDO-PH后0-72h肝内IL-6mRNA、TGF-β1mRNA、IL-1βmRNA及TNF-α表达增高而HGFmRNA表达减少,肝细胞BrdU标记减少。而IL-10能下调BDO-PH后KCsNF-кB活性、上调肝内HGFmRNA与下调肝内IL-6mRNA,TGF-β1mRNA、IL-1βmRNA及TNF-α表达,从而促进肝细胞BrdU标记。结论 KCsNF-кB过度激活可能抑制非肝硬变性胆道梗阻肝部分切除后肝细胞再生,适当调节KCsNF-кB活性可能促进肝细胞再生。     

严重烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞NF—кB、IкB—α、TNF—α的变化及调控

目的 观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF-кB抑制剂PDTC后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-кB活性,IкB-α的表达及TNF-α的变化,从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制。方法 以15%体表面积Ⅲ度烫伤小鼠为模型。收集腹腔巨噬细胞,采用放射免疫法检测TNF-α的含量,电泳迁移率改变分析法测NF-кB的活性,改变的ELISA及QWestern Blotting法测IкB-α的表达,反转录-PCR测TNF-αmRNA的表达。结果 烫伤后巨噬细胞分泌TNF-α亢进,于伤后12h达到高峰,NF-кB伤后明显活化,于2h达到了高峰,早于TNF-α的增多,IкB-α的表达先降低,后升高,予PDTC后NF-к的活性及TNF-αmRNA表达量均下降,结论 烫伤后NF-кB活性及TNF-α表达明显增强,IкB-α对NF-кB在高水平上维持着一种制约关系,烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-кB途径参与TNF-α表达的调控。     

慢性低氧高二氧化碳对大鼠海马NFкB的影响

目的 探讨慢性低氧高二氧化碳对大鼠海马区NFкB;的影响及其在海马损伤中的作用.方法 采用慢性低氧高二氧化碳肺动脉高压大鼠模型将30只大鼠随机分为正常对照组(NC)、低氧高二氧化碳2周组(2HH)和低氧高二氧化碳4周组(4HH),免疫组织化学法检测海马CA1/3区NFкB的表达,TUNEL法检测海马细胞的凋亡.结果 NC组大鼠海马CA1/3区可见NFкB/p65少量表达于胞浆,而模型组可见NFкB/p65在细胞核内有不同程度的表达,与NC组比较有显著性差异(P<0.01),以4周组最明显.模型组大鼠海马CA1/3区细胞凋亡明显增多(P<0.01),也以4周组最明显.结论 慢性低氧高二氧化碳能引起大鼠海马区NFкB活化,NFкB活化与大鼠海马神经元凋亡有密切关系.     

Ox—LDL诱导大鼠系膜细胞TGF—betal转录增强和NF—kB的活化

目的：研究氧化低密度脂蛋白(oxidation of low density lipoprotein，Ox-LDL)对肾小球系膜细胞(mesangial cell，MsC)核转录因子kB(nuclear factor-kB,NF-kB)与转化生长因子β1(transforming growth factor-betal，TGF-β1)活性的影响，探讨脂质肾损伤的分子机制。方法：以TGF-β1转录起始位点上游序列构建的报告基因质粒转染系膜细胞研究Ox-LDL对TGF-β1启动子的活性的影响，RT—PCR半定量方法检测不同时间和不同浓度的Ox-LDL。诱导后TGF-β1 mRNA水平的变化，并用凝胶迁移分析实验观察不同浓度和不同时间组的Ox-LDL对肾小球系膜细胞NF-kB结合活性的影响。结果：Ox-LDL呈浓度依赖性增加TGF-β1启动子活性，100μg/ml的Ox-LDL可使TGF-β1启动子活性在36h达到最高点；NFkB的结合活性对Ox-LDL刺激依时间延伸呈持续激活，在早期有明显波动，活性最强分别在6h和36h。结论:Ox-LDL诱导系膜细胞TGF-β1表达增强可能有核转录因子NF-kB的参与。     

NF—κB的研究进展及其在糖尿病中的作用

参与炎症反应和免疫反应的介质纷繁复杂、彼此关联，在体内构成了一个十分复杂的网络体系。而作为众多炎性因子共同的转录调节蛋白——核因子NF—κB的发现，为疾病的防治提供了新的线索。NF—κB是Sen和Baltimore于1986年发现的。1988年，Baeuede和Baltimore报到了NF-KB的特异性抑制物IκB。通常情况下NF—vB与IκB结合以无活性形式存在于细胞浆中，潜伏形式的NF—κB可被多种诱导物激活．进入核内与相应的靶基因结合，发挥转录调节作用，广泛参与多种生理或病理过程。[第一段]     

试论中药诱导肿瘤细胞凋亡的机制

细胞凋亡与肿瘤的发生和发展密切相关。新的研究发现,肿瘤不仅是细胞增殖和分化异常的疾病,而且是细胞凋亡异常的疾病。中药诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤的又一新的重要途径,其主要机制是:①影响和阻滞肿瘤细胞的生长周期;②影响癌基因和抑癌基因的表达;③诱生和促使机体细胞产生细胞因子;④增强NK细胞活性;⑤糖皮质激素样作用;⑥影响信号分子等。     

供肝冷保存再灌注期间核因子NF—кB和抑制蛋白IкBs的变化及其意义

目的:研究肝移植期间供肝组织中核因子NF-κB的激活特征及其活性调控机制.方法:改良Kamada法建立大鼠原位肝脏移植模型,按供肝在4℃乳酸林格液中的冷保存时间,实验分冷保存2 h组和6 h组,凝胶迁移率改变分析法(EMSA)和Western印迹法测定移植期间不同时相供肝组织中NF-κB的活性变化及其主要抑制蛋白IκB-α、IκB-β的表达水平.结果:两组供肝组织在冷缺血保存期间其NF-κB活性与正常肝组织相比无明显差异(P>0.05),再灌注后30 min至6 h两组的NF-κB活性均出现显著的诱导激活(P<0.01),其中冷保存2 h组供肝组织的NF-κB活性高峰出现在再灌注1 h;而冷保存6 h组在再灌注30 min即达到活性高峰,并维持在较高的激活水平;供肝组织中抑制蛋白IκB-α的含量显著高于IκB-β,两组的IκB-α蛋白在再灌注30 min至1 h均有明显降解(P<0.05),而IκB-β蛋白仅在冷保存6 h组有较明显的降解(再灌注30 min).结论:核因子NF-κB仅在供肝的再灌注早期呈诱导性激活,其激活特征与供肝的冷保存再灌注损伤有关,抑制蛋白IκB-α在供肝的NF-κB活性调控中可能起了主要作用.     

核因子-кB在TNF-α诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的了解白血病细胞系HL-60中,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的核因子-кB(NF-кB)活化与细胞凋亡之间的关系.方法采用脂质体基因转染技术,将突变的核因子抑制蛋白(IкBα)质粒(pCMV4-IкBαs32/36A)转染HL-60细胞,于48 h后测其瞬时表达效应.用间接免疫荧光和Western bbt技术检测转染组和非转染组HL-60细胞的NF-кB活化状态,同时用流式细胞术和MTT法分别检测TNF-α对两组HL-60细胞的凋亡诱导及生长抑制效应.结果 TNF-α可诱导非转染组HL-60细胞的NF-кB活化,不能诱导转染组细胞的NF-кB活化,即突变型IкBα可特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化.结论用突变型IкBα特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化,能明显增加其对TNF-α的敏感性.     

NF—κB与心肌缺血—再灌注的研究进展

核转录因子ＮＦ κＢ由Ｓｅｎ等在 1986年首先发现于Ｂ淋巴细胞 ,它可与免疫球蛋白的κ轻链基因增强子 10ｂｐＤＮＡ序列 (5′ ＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣ 3′)特异结合 ,调控免疫球蛋白κ轻链的转录[1] 。此后又逐渐发现很多其ＷＢ细胞多种基因的启动子或增强子均有ＮＦ κＢ的结合位点 ,它可调控许多细胞因子、炎症介质、趋化因子的基因转录 ,具有广泛的生物活性。心肌缺血再灌注 (Ｉ/Ｒ)可诱发ＮＦ κＢ的激活 ,调控相关基因的转录。1　ＮＦ κＢ的分子生物学特性ＮＦ κＢ是由ＮＦ κＢ/Ｒｅｌ蛋白家族的两个亚基组成的二聚体蛋白质 ,家族中 …     

靶向诱导肿瘤细胞凋亡与特异性抗肿瘤细胞应答机制的研究

项目简介：肿瘤的发生发展与细胞增殖和凋亡调节失控密切相关；而肿瘤细胞及凋亡的肿瘤细胞免疫原性弱，不能诱导机体产生有效的特异性抗肿瘤免疫效应，是肿瘤细胞可以逃逸机体抗肿瘤作用的重要原因。所以．影响细胞增殖、调节细胞凋亡、增强肿瘤细胞的免疫原性等一系列问题，就成为倍受专家学者关注的热点。     

实验性脑出血后大鼠神经细胞凋亡与NF—κB的表达

目的：研究实验性脑出血后大鼠神经细胞凋亡与NF—κB表达的动态变化,并初步探讨两者的关系。方法：将大鼠随机分为脑出血组、假手术组和对照组,应用立体定向技术将自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型,大鼠分别在不同时间点断头取脑,连续冠状切片做TUNEL染色和NF—κB免疫组化染色。结果：凋亡细胞在脑出血后6h出现,1d后开始增多,3d达到高峰,并持续到7d仍有表达,并且与NF—κB的表达变化一致,各组与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。脑出血后TUNEL阳性细胞与NF—κB的表达呈正相关（r=0．957,P〈0．01）。结论：脑出血后存在细胞凋亡,且可能与NF—κB的激活有关。     

NF-кB/Ⅰ-кB在过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用

目的探讨氧化应激损伤心肌细胞的分子机制.方法采用0.5 mmol/L过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞;末端标记检测细胞凋亡;Westernblot检测蛋白质含量;免疫组化检测NF-κB在细胞内的分布.结果①H2O2损伤3 h,心肌细胞死亡率和乳酸脱氢酶(LDH)释放率均较对照组明显升高(P＜0.01);②H2O2损伤24 h,末端标记发现大量凋亡细胞;Westemblot示NF-κB内源性抑制蛋白I-KB(inhibitor KB,I-KB)在H2O2损伤5 min即减少,15 min时减至最低,而后逐渐恢复;免疫组化显示H2O2损伤0.5 h可引起心肌细胞中NF-κB从胞浆向胞核移位;与单纯损伤组比,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)能明显降低心肌细胞LDH释放率(P＜0.01).结论在H2O2所致心肌细胞损伤中,既有坏死,又有凋亡的发生,而NF-κB/I-κB信号通路的激活可能介导了H2O2所致的心肌细胞损伤.     

核因子—кB在缺血性脑损伤中作用机制的研究

目的 探讨核因子-кBDNA（NF-кB）结合活性在缺血性脑损伤后的变化。及NF-кB在缺血性脑损伤中的作用。方法 采用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。采用EMSA法观察大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区NF-кBDNA结合活性变化。原位细胞凋亡检测法（TUNEL染色）及电镜观察脑缺血后CA1区神经原凋亡情况，结果 大鼠全脑缺血再灌后海马CA1区NF-кBDNA结合活性于再灌注6h开始升高，再灌注12h达高峰，再灌注72h其结合活性仍保持一定水平，再灌注7d其结合活性达到对照组水平。再灌注24h海马CA1区出现凋亡细胞，再灌注72hCA1区凋亡细胞达高峰。结论 NF-кB参与了脑缺血再灌注损伤机制。NF-кB在脑缺血再灌后的不同时间发挥不同的作用。     

流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究

目的：观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究FasL在此过程中的作用．方法：流感病毒以20m．o．i．感染Hela、Raji、SMMC-7721和SPC-A-1等肿瘤细胞,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变,DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带,PI染色流式细胞仪检测细胞DNA含量,Annexin-V FITC／PI流式细胞仪进行凋亡定量分析,并用生物素-亲和素ELISA测定流感病毒诱导后细胞培养上清中sFasL浓度的变化。结果：经流感病毒诱导后,四种肿瘤细胞均显示凋亡的形态学改变,细胞DNA电泳出现梯状条带,流式细胞仪测定表明细胞凋亡率增高,且显示一定的时间效应;在上述过程中,细胞培养上清中sFasL浓度有明显增高。结论：流感病毒可诱导上述肿瘤细胞发生凋亡,其发生机制可能与FasL表达增加有关。     

核因子кB在皮质酮损伤海马神经元中的作用

目的：探讨核因子кB(NF-кB)在皮质酮损伤海马神经元中的作用。方法：一组原代培养的海马神经元直接加入皮质酮，于不同的时间提取核蛋白，利用凝胶阻滞电泳的方法观察皮质酮对NF-кB表达的影响。另一组培养的神经元在加入皮质酮前2h培养液中加入кB decoy DNA抑制NF-кB表达，采用MTT法进一步观察它们对海马神经元的影响。结果：NF-кB在皮质酮作用下活性表达水平显著下降。NF-кB活性被кB decoy DNA抑制后，皮质酮引起的海马神经细胞损伤加重。结论：NF-кB对皮质酮引起的海马神经元损伤有保护作用。     

IL—1预刺激对反义IRAK—2寡核苷酸抑制NF—κB活化的影响

目的 研究白介素－１（ＩＬ－１）预刺激对反义受体相关激酶－２寡核苷酸（ＩＲＡＫ－２ＯＤＮ）抑制ＩＬ－１激活核因子－ｋａｐｐａ Ｂ（ＮＦ－κＢ）的影响。方法 实验分ＩＬ－１预处理组和非预处理组。以脂质体介导反义ＩＲＫＡ－２ＯＤＮ转染２９３细胞,以夹心酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）检测ＮＦ－κＢ的含量。结果 ＩＬ－１非预处理组反义ＩＲＡＫ－２ＯＤＮ不能抑制ＮＦ－κＢ活性,而预处理组ＮＦ－κＢ活化受到     

细胞因子表达与NF-кB活化在溃疡性结肠炎发病中的意义

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)目前认为是由多因素共同作用所致,主要包括环境、遗传、感染和免疫等因素.其中活化的免疫细胞产生的细胞因子介导的异常免疫反应在UC发病机制中的作用及其与核因子-кB(NF-кB)的密切关系,越来越引起人们的关注.本文对常见的细胞因子及NF-кB在UC发病中的作用进行综述.