胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体表达的影响

目的研究胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt、KDR表达的调控作用.方法以不同剂量的中药复方胃康宁制剂给SD大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养两代后,分别用免疫组化法和RT-PCR检测不同剂量组胃癌细胞中VEGF及其受体Flt、KDR的表达情况.结果胃康宁高、中、低剂量组对P53、VEGF和Flt的免疫组化检测与对照组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01);中、低剂量组与高剂量组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01).胃康宁高、中、低剂量组对VEGF及其受体Flt、KDRmRNA表达检测与对照组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01);中、低剂量组与高剂量组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01),提示与用药剂量有一定的关系.结论胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子及其受体Flt、KDR的表达有抑制作用.     

中药胃康宁对胃癌细胞周期因子Cyclin E、CDK2和p27表达的影响

目的:观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞Cyc lin E、CDK2(Cyc lin dependant k inase 2,CDK2)和p27mRNA及其蛋白表达的作用。方法:分别以高、中、低不同剂量的胃康宁制剂对W istar雄性大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量组含药血清培养胃癌细胞,采用免疫组织化学SABC法检测各组胃癌细胞中Cyc linE、CDK2和p27蛋白的表达,RT-PCR法检测各组胃癌细胞中Cyc lin E、CDK2和p27 mRNA的表达。结果:免疫组化法结果显示,胃康宁高、中、低剂量组Cyc lin E和CDK2灰度值均有明显升高,与空白对照组比较,P<0.05~0.01,而p27灰度值则显著降低(P<0.05~0.01);RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,胃康宁低、中、高剂量组均能明显降低Cyc lin E和CDK2 OPTD I值(P<0.05~0.01)。同时,还能升高p27 OPTD I值(P<0.05~0.01)。结论:中药胃康宁可抑制胃癌细胞周期因子Cyc lin E、CDK2及其mRNA的表达,促进细胞周期抑制因子p27及其mRNA的表达,这可能是胃康宁抑制胃癌细胞生长的机制之一。     

益气活血中药对人胃癌细胞作用的研究

目的:观察具有益气活血作用的中药党参、五灵脂、水蛭等对胃癌细胞生长及P53和VEGF及其受体表达的作用.方法:分别以高、中、低等不同的剂量的中药制剂对Wistar雄性大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量组的含药血清培养胃癌细胞,以倒置显微镜及流式细胞仪观测各组胃癌细胞的生长状况,并用免疫组化法检测各组胃癌细胞中P53和VEGF及其受体的表达.结果:与对照组比较,用药组胃癌细胞的生长及细胞周期明显改变(P＜0.05);P53和VEGF的表达明显减弱(P＜0.05).结论:益气活血中药对胃癌细胞的生长、P53和VEGF及其受体的表达有抑制作用.     

健脾导滞方对人胃癌细胞的作用

目的:观察中药健脾导滞方对胃癌细胞生长、对P53和VEGF及其受体表达的作用.方法:分别以高、中、低等不同剂量的健脾导滞方制剂对Wistar雄性大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量组的含药血清培养胃癌细胞,以倒置显微镜及流式细胞仪观测各组胃癌细胞的生长状况,并用免疫组化法检测各组胃癌细胞中P53和VEGF及其受体Flt的表达.结果:与对照组比较,用药组胃癌细胞的生长及细胞周期明显改变;P53和VEGF及其受体的表达明显减弱(P＜0.05).结论:健脾导滞方对胃癌细胞的生长,对P53和VEGF及其受体的表达均有抑制作用.     

中药胃康宁对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子的影响

目的 观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2（Cyclin dependant kinase2,CDK2）Cdk4、Cdk6和p16^INK4a、p27^KIP1mRNA及其蛋白表达的作用。 方法 分别将高、中、低不同剂量的中药胃康宁制剂对SD大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量含药血清培养胃癌细胞,用流式细胞仪检测细胞周期的变化;采用免疫组织化学SABC法及RT-PCR法检测各组胃癌细胞中CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4、Cdk6和p16^INK4a、p27^KIP1蛋白和mRNA的表达。 结果 中药胃康宁能将增殖过程中的MGC-803胃癌细胞阻滞于G0-G1期,使之不进入或延迟进入S期（即DNA合成期）,抑制胃癌细胞的生长;免疫组化法结果显示,与空白对照组比较,中药胃康宁高、中剂量组CyclinE和Cdk2,CyclinD2和Cdk4、Cdk6蛋白均有明显升高,而p27KIP1、p16INK4a蛋白则显著降低（P＜0.01）;RT-PCR结果显示,中药胃康宁高、中剂量组均能明显降低CyclinD2、CyclinE、Cdk2和Cdk4、Cdk6 OPTD值,同时升高p27KIP1、p16INK4a OPTDI值（P＜0.01）。 结论 中药胃康宁可抑制胃癌细胞促细胞周期相关因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4和Cdk6的表达,同时增强胃癌细胞周期抑制因子p27^KIP1、p16^INK4a的表达,这可能是中药胃康宁抑制胃癌细胞生长的作用机制。     

健脾导滞中药对胃癌细胞VEGF及其受体表达的作用

目的：研究中药复方健脾导滞中药对胃癌细胞血管内皮生长因子（VEGF）及其受体F1t、KDR表达的调控作用。方法：以不同剂量的中药复方健脾导滞中药制剂给SD大鼠灌胃制备含药血清，然后以含药血清培养胃癌细胞，共同培养两代后，分别用免疫组化法和RT-PCR检测不同剂量组胃癌细胞中VEGF及其受体Flt、KDR的表达情况。结果：与对照组相比，VEGF及其受体Flt在用药组胃癌细胞中的表达减弱，染色变浅，并且与用药剂量有一定的关系；VEGF mRNA及其受体Flt mRNA、KDR mRNA在用药组胃癌细胞中的表达也受到抑制。结论：中药健脾导滞中药对胃癌细胞血管内皮生长因子及其受体Flt、KDR的表达有抑制作用，是一个值得进一步研究开发的中药复方。     

中药胃康宁防治胃癌作用的机制探讨

目的 :观察健脾解毒散结中药胃康宁含药血清对胃癌细胞周期调控因子CyclinD1,CyclinD2,Cdk4(Cyclin dependant kinase4,CDK4),Cdk6和p16^INK4amRNA及其蛋白表达的作用。 方法: 分别将高、中、低不同剂量的中药胃康宁制剂ig SD大鼠,制备含药血清,然后分别用不同剂量含药血清培养胃癌细胞;采用免疫组织化学SABC法及RT-PCR法检测各组胃癌细胞中CyclinD1,CyclinD2,Cdk4,Cdk6和p16^INK4amRNA和蛋白的表达。 结果: 免疫组化结果显示,与空白对照组比较,胃康宁高、中、低剂量组CyclinD1灰度值变化,无统计学意义(P>0.05);CyclinD2,Cdk4,Cdk6灰度值均有明显升高,而p16^INK4a灰度值则显著降低(P<0.05,P<0.01);RT-PCR结果显示,胃康宁高、中、低剂量组CyclinD1 OPTDI值变化,无统计学意义(P>0.05);但能明显降低CyclinD2,Cdk4和Cdk6 OPTDI值,同时升高p16^INK4a OPTDI值(P<0.05,P<0.01)。 结论 :中药胃康宁可抑制胃癌细胞促细胞周期相关因子CyclinD2,Cdk4和Cdk6的表达,同时增强胃癌细胞周期抑制因子p16^INK4a的表达,这可能是健脾解毒散结中药胃康宁抑制胃癌细胞生长的作用机制。     

胃康宁含药血清对胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用及机理研究

目的:观察胃康宁含药血清对胃癌细胞的增殖影响,从细胞凋亡角度探讨作用机理。方法:制备胃康宁含药血清培养胃癌细胞,采用MTT法检测细胞增殖,Hoechst DNA荧光染色法检测细胞凋亡,并计数凋亡率。结果:胃康宁各剂量组在初期均有抑制细胞增殖的作用,而高、中剂量抑制时间更持久。胃康宁高剂量组具有诱导细胞凋亡的作用。结论:胃康宁含药血清可明显抑制细胞增殖,其机理除与诱导细胞凋亡有关,还与细胞周期受阻也有关系。     

化浊解毒方含药血清对胃癌细胞VEGF及COX-2表达的影响

目的:研究化浊解毒方对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及环氧合酶-2(COX-2)表达的调控作用。方法:以不同剂量的化浊解毒方给Wistar大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养2代后,分别用免疫组化法检测VEGF、COX-2的表达情况。结果:化浊解毒方高、中、低剂量组胃癌细胞中VEGF、COX-2的表达减弱,与对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.01);而且高剂量组表达减弱更为明显,与低、中剂量组与较,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:化浊解毒方对胃癌细胞VEGF及COX-2的表达有抑制作用。     

回药爱康方对Lewis肺癌小鼠血清VEGF、CD44V6表达的影响

目的 观察回药爱康方及其协同化疗药对Lewis肺癌小鼠血清VEGF、CD44V6表达的影响。方法将50只C57BL／6小鼠常规接种Lewis肺癌细胞,24h后随机分荷瘤模型组、单纯化疗药组、回药低剂量组、回药低剂量加化疗药组、回药高剂量加化疗药组。治疗后观察各组脾脏、胸腺和瘤体质奄;用ELASA法检测各组VEGF、CD44V6的表达差异。结果①与荷瘤模型组比较,其余各组瘤质量差异均有统计学意义（P〈0．01）;与单纯化疗药组比较,回药低剂量组、回药低剂量加化疗药组、回药高剂量加化疗药组瘤质量差异均有统计学意义（P＜0．01）;与回药低剂量组比较,回药低剂量加化疗药组、回药高剂量加化疗药组瘤质量差异均有统计学意义（P〈0．01）。②与单纯化疗组比较,各组脾脏指数差异均有统计学意义（P〈0．01）;除回药低剂量加化疗药组外,其余各组胸腺指数与单纯化疗组比较差异均有统计学意义（P＜0．01）。③各组VEGF、CD44V6与化疗组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论爱康方协同化疗抑瘤效果、降低血清VEGF、CD44V6表达效果优于单纯化疗,且爱康方可以降低化疗后免疫抑制。     

胃热消炎合剂对人胃癌细胞SGC-7901增殖影响的机制研究

目的研究胃热消炎合剂对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法取对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901进行体外实验,其中空白血清组加入含10%正常血清培养,低剂量含药血清组加入含2.5%药物血清+7.5%正常血清培养,中剂量含药血清组加入含5%药物血清+5%正常血清培养,高剂量含药血清组加入含10%药物血清培养,胃热消炎合剂含药血清通过给大鼠灌胃的方式获得。分别采用CCK-8法、EdU染色法和免疫荧光法检测各组细胞增殖情况,采用RT-PCR法检测各组细胞增殖信号通路p53-p21的相关基因p21、p53、CyclinD1、CDX2、CDK7mRNA的表达情况,采用Western blot法检测各组细胞中p21、p53、CyclinD1、CDX2蛋白表达水平。结果各含药血清组SGC-7901细胞增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性。各含药血清组p21、p53 mRNA表达水平均明显高于空白血清组(P均<0.05),CyclinD1 mRNA表达水平均明显低于空白血清组(P均<0.05),且呈浓度依赖性;各组CDX2、CDK7mRNA表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。各含药血清组p21蛋白表达水平均明显高于空白血清组(P均<0.05),且呈浓度依赖性;低剂量含药血清组和中剂量含药血清组p53蛋白表达水平均明显高于空白血清组(P均<0.05),而高剂量含药血清组p53蛋白表达水平明显低于空白血清组(P<0.05);各组CyclinD1、CDX2蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论胃热消炎合剂可能通过作用于细胞周期来抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,其可能具有预防和治疗早期胃癌的作用。     

参葵汤对卵巢癌患者新鲜实体瘤细胞及细胞株Tyk-nu细胞增殖的影响

目的:研究参葵汤对卵巢癌细胞增殖的影响.方法:应用中药血清药理学方法制备含参葵汤大鼠血清,应用氚(3H)掺入法观测含药血清对卵巢癌新鲜实体瘤细胞增殖的影响,应用流式细胞仪、细胞活力测定、细胞生长曲线测定、细胞集落形成率测定的方法检测了含药血清对卵巢癌细胞株Tyk-nu细胞增殖的影响.结果:3H掺入法检测结果显示,含药血清可抑制卵巢癌新鲜实体瘤细胞的增殖,抑制率随含药血清浓度的增高而增高;流式细胞仪、细胞活力、细胞生长曲线、细胞集落形成率测定结果显示,含药血清可抑制卵巢癌细胞株Tyk-nu细胞增殖,抑制率随含药血清浓度的增高而增高.结论:含参葵汤大鼠血清可抑制卵巢癌新鲜实体瘤细胞及卵巢癌细胞株Tyk-nu细胞的增殖.     

健脾化痰方对胃癌细胞PD-L1表达的影响

目的:探讨健脾化痰方对胃癌细胞PD-L1表达的影响,初步探讨其干预肿瘤免疫逃逸的机制。方法:40只大鼠随机分为生理盐水对照组及健脾化痰方高、中、低剂量组,每组10只,采用灌胃方法,制备不同浓度含药血清。各组含药血清处理胃癌细胞(SGC-7901)24 h。采用流式表面标记技术检测SGC-7901细胞上PD-L1的表达,采用免疫荧光染色法进行验证。结果:与对照组比较,健脾化痰方低、中、高浓度含药血清处理的胃癌细胞SGC-7901,24 h后PD-L1表达明显下降,平均荧光强度表达量明显降低,P<0.01,且程剂量依赖型,免疫荧光染色法可进一步验证其结果。结论:健脾化痰方含药血清能降低胃癌细胞SGC-7901中PD-L1表达,且程剂量依赖型,其可能通过这一机制干预肿瘤的免疫逃逸,起到抗肿瘤作用。     

健脾活血解毒法拆方含药血清对人大肠癌细胞HCT-116细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的:探讨健脾活血解毒法拆方含药血清对人结直肠癌细胞系HCT-116细胞的生长、细胞凋亡率、细胞凋亡相关基因和自噬基因表达的影响.方法:实验分为对照组、健脾组、活血组、解毒组、健脾活血组、健脾解毒组和健脾活血解毒组,分别采用酸性磷酸酶法(APA)、流式细胞术(FCM)和Western blot法检测各组含药血清对肿瘤细胞的生长、细胞凋亡率的变化、凋亡相关基因Caspase-3表达以及自噬相关基因LC3表达.结果:各组10％含药血清作用24h后均能抑制HCT-116细胞增殖,但组间不具有明显差异.光镜下可见,健脾活血解毒法各组含药血清作用24 h后,细胞数量减少,且体积变小;细胞早期及中晚期凋亡率与对照组相比无显著性差异,但自噬相关蛋白LC3出现活性剪切条带.结论:健脾活血解毒法含药各拆方血清体外可抑制人结直肠癌HCT-116细胞增殖,机制可能与自噬作用通路密切相关.     

半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境中BMSCs生长增殖的影响

目的:观察半夏泻心汤及不同配伍药组含药血清对胃癌微环境中骨髓间充质干细胞(BMSCs)生长增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:设BMSCs常规培养为空白组;模型组采用transwell小室将人胃癌BCG-823细胞与大鼠BMSCs非接触共培养建立胃癌微环境;半夏泻心汤及不同配伍含药血清组(全方组、辛开组、苦降组、甘补组)在上室内加入体积浓度为10%的相应配伍药含药血清。倒置显微镜观察BMSCs细胞形态、噻唑蓝(MTT)比色法观察BMSCs的增殖率,流式细胞术(FCM)检测BMSCs的细胞周期,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测原癌基因(c-Myc)和端粒酶逆转录酶(TERT)蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测c-Myc和TERT mRNA的表达。结果:全方组、辛开组、苦降组、甘补组含药血清在4,5,6,7 d对BMSCs的增殖有明显抑制作用,全方组明显优于甘补组(P0.05);第7天的检测结果显示全方组、辛开组、苦降组、甘补组含药血清均可降低c-Myc和TERT表达水平,升高G1期细胞比例,降低S期细胞比例,全方组明显优于甘补组(P0.05)。结论:半夏泻心汤及不同配伍药组含药血可抑制胃癌微环境中BMSCs的异常增殖,半夏泻心汤全方为最佳配伍。     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞ERK1／2 MAPK信号转导途径的影响

目的运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞（Gc）细胞外调节蛋白激酶（ERKl／2MAPK）信号转导途径的影响。方法在大鼠（GC）细胞培养体系中分别加入乌萸汤大鼠含药血清、卵泡刺激素（FsH）大鼠含药血清及正常大鼠血清,培养48h后,用蛋白质印迹法（Westernblot）测定各组大鼠Gc的ERK1／2磷酸化蛋白的相对表达量。结果各用药组GCERK1／2磷酸化蛋白相对表达量均明显升高,其中乌萸汤低剂量、中剂量血清组升高多于西药组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论乌萸汤含药血清能通过提高ERK1／2蛋白磷酸化水平促进Gc增殖,可以通过使用乌萸汤调控ERK1／2促进卯泡发育、成熟及排出。     

红藤方对体外培养的大鼠子宫内膜细胞生长特性的影响

[目的]探讨红藤方对大鼠子宫内膜细胞生长特性的影响.[方法]选用SD成熟雌性大鼠建立大鼠子宫内膜细胞培养模型.用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度不同处理方式的红藤颗粒剂含药血清作用24、48、72和96 h后对大鼠子宫内膜细胞生长的影响,用达那唑含药培养液作阳性对照.[结果]不同浓度含药血清培养大鼠子宫内膜细胞相应时间后,细胞的增殖活性随含药血清浓度升高而降低,呈明显的剂量依赖性,随作用时间延长而降低,具有明显的时间依赖性.[结论]红藤方颗粒剂可显著抑制大鼠体外培养的内膜细胞的生长.