RhoA/ROCK Ⅰ信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达

目的观察RhoA和Rho激酶Ⅰ(ROCKⅠ)蛋白在前列腺癌中的表达,探讨RhoA/ROCKⅠ信号传导途径在前列腺癌形成过程中的可能作用。方法选取2005年1月-2008年5月住院手术的前列腺癌患者20例(前列腺癌组),年龄57～86(73±7)岁,行根治性前列腺切除术并留取前列腺癌组织,以及良性前列腺增生患者36例(良性前列腺增生组),年龄50～83(71±7)岁,行尿道前列腺电切除术,留取增生的前列腺组织。免疫组化法测定两组前列腺癌与增生前列腺组织中RhoA和ROCKⅠ蛋白的表达。结果前列腺癌组RhoA和ROCKⅠ蛋白的表达水平(0.225±0.068、0.273±0.070)均明显高于良性前列腺增生组(0.126±0.047、0.176±0.040,P<0.01)。相关分析显示,RhoA与ROCKⅠ蛋白的表达水平呈显著正相关(r=0.487,P<0.01)。结论RhoA和ROCKⅠ蛋白在前列腺癌中表达增加,且高于良性前列腺增生组织;RhoA/ROCKⅠ信号传导途径可能参与了前列腺癌的形成。     

Rho家庭蛋白在胃癌细胞系中的表达及意义

为了研究Rho家族 5个重要成员在胃癌细胞中的表达 ,探讨Rho家族在胃癌发生、发展中的意义 ,分别利用半定量RT PCR和Westernblotting检测胃癌细胞系中RhoA、RhoB、RhoC、Rac1和Cdc4 2的mRNA和蛋白表达水平。结果发现 ,与正常对照肠上皮细胞系相比 ,5种胃癌细胞系中的RhoA、Rac1、Cdc4 2的mRNA和蛋白表达均上调 ;在所有细胞系中均无RhoB的表达 ,RhoC仅在胃粘膜组织和有转移潜能的细胞系中有表达 ,而胰岛素可以诱导肠上皮细胞表达RhoB ,进一步证实了RhoB是一个即刻反应蛋白 ;Rho家族中RhoA、Rac1、Cdc4 2在胃癌细胞系中高表达提示Rho家族可能在胃癌的发生过程中有重要的作用     

核因子-κB在正常妊娠和妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘中表达的意义

目的:探讨正常和妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎盘组织中核因子-κB(NF-κB)表达的意义。方法:采用组织微阵列技术和免疫组织化学染色方法检测正常胎盘(30例)和ICP胎盘(轻度28例,重度19例)组织中NF-κB p65蛋白的表达水平。结果:NF-κB p65在正常胎盘和ICP胎盘绒毛表面合体滋养细胞胞浆和胞核内呈阳性表达,绒毛间质的血管平滑肌和内皮细胞内表达较少;ICP重度组单位胎盘面积IOD最高(95.69±13.49),ICP轻度组次之(71.37±7.74),正常胎盘最低(57.54±4.13),三组间差异显著(P<0.01)。结论:ICP胎盘组织NF-κB表达明显增高,且与ICP的疾病程度有关,NF-κB激活与ICP发生发展过程有关。     

RhoA/ROCK/ERK-MAPK通路在高磷环境调节内皮细胞凋亡的机制

目的 研究高磷环境下内皮细胞凋亡的可能调控机制和信号通路。方法 人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）在正常磷（1.0 mmol/L）、高磷（3.0 mmol/L）、正常磷+辛伐他汀（simvastatin,SV,1.0 mmol /L+SV）及高磷+SV (3.0 mmol /L+SV）培养基中培养24 h,Western Blot评价Ras同源物基因家族成员A（ Ras homolog gene family, member A, RhoA）,Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1/2 ( rho-associated coiled coil forming protein kinase 1/2, ROCK1/2 ),细胞外信号调控激酶-丝裂原活化蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase-mitogen activated protein kinase, ERK-MAPK）、磷酸化细胞外信号调控激酶-丝裂原活化蛋白激酶（ phosphorylated-ERK-MAPK, p-ERK-MAPK）、p38丝裂原活化蛋白激酶 ( p38-Mitogen Activated Protein Kinase , p38-MAPK)、磷酸化 p38-丝裂原活化蛋白激酶 （phosphorylated-p38-MAPK, p-p38-MAPK ）、以及精氨酸酶1（arginase1,ARG1）和一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase, NOS ）蛋白的表达,比色法和膜联蛋白V/碘化丙啶双染法 ( Annexin V-FITC/ propidium iodide, Annexin V-FITC/PI ) 检测ARG活性和细胞凋亡率。结果 高磷组RhoA,ROCK1/2,p-ERK MAPK,ARG1表达均上调, ARG活性升高,NOS表达下调,细胞凋亡增加;RhoA抑制剂SV能抑制高磷环境下p-ERK MAPK的活化和ARG1 的表达,降低ARG1活性,促进NOS表达,减少内皮细胞凋亡。结论 高磷环境HUVECs可通过RhoA/ROCK途径激活p-ERK MAPK的表达, 增加ARG活性,抑制NOS表达,引起内皮细胞凋亡;SV可以通过抑制RhoA/ROCK/ERK-MAPK通路,改善内皮细胞凋亡。     

角质细胞生长因子及其受体在葡萄胎恶性变中的作用

目的探讨角质细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)在葡萄胎组织发生、发展及预后中的意义和作用。方法收集葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌组织,采用免疫组化、原位杂交法分别从蛋白质、mRNA水平检测KGF和KGFR在良恶性葡萄胎组织中的表达,染色强度及阳性细胞数进行统计分析。结果良性葡萄胎组织滋养细胞中KGF和KGFRmRNA、蛋白均有一定程度表达,定位于细胞滋养细胞、合体滋养细胞胞质。恶性葡萄胎组织KGF表达与良性葡萄胎无差异,但KGFR在合体滋养细胞中表达明显高于良性葡萄胎,两者之间有显著性差异(χ2=12·775,P<0·01)。KGFR在侵蚀性葡萄胎及绒癌组织中的表达也明显高于良性葡萄胎(χ2=19·542,χ2=24·723,P<0·001)。结论KGF及KGFR的表达与滋养细胞肿瘤转移密切相关,在葡萄胎恶性变及浸润、转移中起重要作用。     

参芪颗粒对大鼠运动能力和神经元线粒体超微结构的影响

观察了服用参芪颗粒对游泳大鼠运动能力和脊髓前角运动神经元线粒体超微结构的影响.结果显示:游泳结合喂参芪颗粒组大鼠的体重增长率、耐缺氧能力、力竭游泳时间与单纯游泳组大鼠比较显著提高,与游泳结合喂葡萄糖组大鼠比较亦有所提高;脊髓前角运动神经元线粒体的三项立体学参数(Vv、Sv、Nv)均明显大于对照组,而小于(P＞0.05)单纯游泳组和游泳结合喂葡萄糖组,其中Vv、Nv显著小于单纯游泳组,提示参芪颗粒对于保护线粒体、抗疲劳等具有一定作用.     

肥胖合并妊娠期糖尿病产妇胎盘滋养层细胞凋亡机制

目的 探究在肥胖合并妊娠期糖尿病产妇中,高血糖、高血脂促进胎盘滋养层细胞凋亡的机制。方法留取天津医科大学第二医院产科2020年1月至2023年1月收治的健康（NC）产妇、妊娠期糖尿病（GDM）产妇、肥胖（OB）产妇和肥胖合并妊娠期糖尿病（OB+GDM）产妇各20例的胎盘,分别予HE染色、免疫组化检测胎盘病理变化及凋亡相关蛋白的表达,通过Western印迹检测哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、c?Jun氨基末端激酶（JNK）、Bcl?2相关X蛋白（BAX）、B细胞淋巴瘤?2基因（BCL?2）、半胱氨酸蛋白水解酶3(CASP3)等凋亡相关蛋白的表达。结果 胎盘HE染色发现,高血糖、高血脂可导致胎盘合体滋养细胞和细胞滋养细胞相对减少且大小不一;TUNEL法发现,高血糖和高血脂导致滋养层细胞凋亡增加,以合体滋养细胞凋亡为主,OB+GDM组凋亡最为严重;免疫组化检测发现,高血糖、高血脂可以诱导胎盘凋亡相关蛋白MST1、JNK的表达增加;Western印迹检测发现,MST1?JNK?BAX?CASP3凋亡调控通路可能参与胎盘滋养层细胞凋亡过程。结论 肥胖合并妊娠期糖尿病产妇的胎盘滋养层细胞可...     

Ras同源物基因家族成员B对肾透明细胞癌细胞生长及迁移能力的影响

目的研究干扰Ras同源物基因家族成员B（Ras homolog gene family member B,RhoB）表达后对肾透明细胞癌（renal clear cell carcinoma,RCCC）细胞生长及迁移能力的影响。方法检测RhoB在RCCC细胞中的蛋白表达水平,采用脂质体转染方法转染RhoB真核表达载体pcDNA3.0-Flag-RhoB和沉默RhoB的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）即si-RhoB序列及相应空载体和对照序列,应用Western Blot法检测转染后RhoB的蛋白表达情况,通过3-（4,5-二甲基吡啶-2-基）-5-（3-羧基甲氧基苯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,MTS]法、平板克隆和Transwell小室细胞迁移实验检测细胞生长和细胞迁移能力的变化。结果RhoB在RCCC细胞中表达降低。与转染空载体组比较,转染pcDNA3.0-Flag-RhoB重组质粒组RhoB的蛋白表达水平明显上调;与转染对照组比较,si-RhoB转染组RhoB的蛋白表达水平明显下调。在RCCC细胞786-O和Caki-1中,上调RhoB的表达后,在4、5、6 d经MTS法测定光密度值明显降低（P＜0.05）;在786-O细胞中上调RhoB表达后细胞克隆数明显减少;转染48 h后Transwell细胞迁移数明显减少（P＜0.05）。而下调RhoB表达后,细胞生长和Transwell细胞迁移数没有明显变化。在相对高表达RhoB的正常人肾小管上皮细胞中下调RhoB表达后细胞生长和细胞迁移数明显增多。结论过表达RhoB后明显抑制RCCC细胞生长和迁移能力。     

Rho激酶抑制剂对大鼠血管内皮的保护作用及eNOS表达的影响

目的探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠血管内皮的保护作用及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为5组(每组6只),即空白对照组(Control组,腹腔注射0.9%生理盐水),高同型半胱氨酸血症(HHcy)模型组(HHcy组,腹腔注射0.9%生理盐水),低、中、高剂量法舒地尔干预组[L-、M-、H-干预组,分别经腹腔注射法舒地尔1、5、15mg/(kg.d)]。HHcy组及法舒地尔干预组均采用1.5%蛋氨酸饮用水持续饲养大鼠4周,构建HHcy血管内皮损伤模型;空白对照组大鼠以饮用水喂养。建模成功后采用酶法检测大鼠血清一氧化氮(NO)含量;分别用免疫组织化学法和Western blotting检测主动脉中eNOS、Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK2)和Ras基因家族成员A(RhoA)蛋白的表达。结果与空白对照组比较,HHcy组大鼠血清中NO含量明显下降,主动脉中eNOS蛋白表达也明显下降(P<0.05)。与HHcy组相比,M-干预组和H-干预组大鼠血清NO浓度明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而L-干预组则无明显变化(P>0.05);H-干预组主动脉血管内皮细胞eNOS表达明显高于HHcy组和L-干预组,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,HHcy组RhoA和ROCK2表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与HHcy组比较,H-干预组RhoA和ROCK2表达明显降低(P<0.05),而L-干预组和M-干预组则无明显差异(P>0.05)。结论高剂量法舒地尔可能通过抑制Rho/Rho激酶信号通路,增加NO和eNOS的表达,发挥对大鼠血管内皮的保护作用。     

ROCK蛋白在肝癌中的表达及临床意义

目的了解肝癌组织中Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）表达水平,探讨其在肝癌组织中表达的临床意义。方法在60例肝癌标本中,采用ROCK蛋白特异标记物抗体进行免疫组化染色,了解肝癌组织中ROCK的表达及分布情况,结合病例的年龄、性别、分期、转移情况,了解ROCK蛋白表达情况与不同临床病例参数之间的关系。结果肝癌组织中ROCK蛋白表达明显高于正常肝组织,ROCK蛋白的表达在分期较晚及有转移的病例中较高,并具有统计学意义（P〈0.05）。结论肝癌组织中,ROCK蛋白的高表达对肿瘤的浸润和转移起到一定作用。     

代谢综合征和自发性高血压大鼠血管结构及功能差异的研究

目的观察代谢综合征（MS）大鼠大、中、小动脉结构和功能的改变,明确MS的血管损害特征。方法将实验大鼠分为MS组、正常对照组（NC）、自发性高血压组（SHR）、高血压对照组（WKY）。以HE染色进行形态学观察,并检测离体主动脉环反应性和主动脉eNOS、iNOS、RhoA／ROCK蛋白含量。结果除血管壁增厚、内膜和平滑肌细胞增生外,MS大鼠的大、中动脉有明显炎细胞浸润,小动脉出现玻璃样变性,与SHR形成区别。MS大鼠血管环舒张功能较NC组明显减弱,而SHR的收缩反应较WKY组显著增强。MS大鼠主动脉的RhoA、ROCK表达增多,但较SHR少,eNOS和iNOS表达两组均减少,组间无明显差异。结论MS时动脉结构和功能的损害较SHR更为严重和广泛,其分子机制与RhoA、ROCK系统的激活和NOS表达减少有关。     

耐力训练后脊髓前角细胞线粒体的电镜定量研究

观察了游泳耐力训练后大鼠脊髓前角外侧群细胞的超微结构变化，发现此群运动神经元线粒体的数量明显地增多，嵴致密，基质电子密度增高。但未见线粒体肿胀、嵴断裂和空泡化等变性现象。用体视学方法测量了线粒体的数密度和比表面。训练组和对照组大鼠前角细胞线粒体的数密度分别为０．６７５±０．１９个／μｍ~３和０．４４５±０．０４个／μｍ~３（Ｐ＜０．０５），比表面分别为６．３５±０．１７μｍ~２μｍ~（－３）和６．６４±０．１８μｍ~２μｍ~（－３）（Ｐ＜０．０２）。据此提出，耐力训练可引起前角细胞的超微结构变化。     

红景天对急性低压缺氧大鼠内皮素分泌的干预

目的：观察急性中，生度缺氧对大鼠内皮素（ET）的影响及红景天类药物的干预，初步探讨红景天类药物抗缺氧机制，方法：36只雄性SD大鼠，随机分成盐水组，（5000米和8000米）低压缺氧组，三组又各分红景天组和盐水组，盐水组，红景天组每天灌胃生理盐水，红景天浓缩深，共7天。检测盐水和低压暴露5h后缺氧组血浆，脑组织ET含量。结果；急性5000米，8000米缺氧盐水组与地面盐水组比较血浆ET含量显著升高（P＜0．05，P＜0．01），地面药牧组与其盐水组相比血浆ET含量无生差异，急性5000米，80000米缺氧药物组与其盐水组相比血浆ET含量上降（P＜0．05，P＜0．01），急性8000米缺氧药物组与其盐水组相比脑组织ET含量显著下急性中，重度低压缺氧引起机体内皮素的异常升高。     

锁阳对耐力训练大鼠小脑Purkinje氏细胞线粒体超微结构的影响

采用形态计量学的方法分析了游泳耐力训练后中药锁阳对大鼠小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ细胞线粒体超微结构的影响,探讨了锁阳提高机体运动能力方面的作用。方法：ＳＤ雄性大鼠３２只,随机分成４组,即对照组,游泳组,锁阳对照组,游泳兼喂锁阳组。游泳的两组进行连续１２周的游泳耐力训练。结果：游泳的两组大鼠小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ氏细胞线粒体发生了明显的形态学变化,数目增多,体积增大,嵴致密,基质电子密度增高,但游泳组大鼠线粒体部份发生了损伤性变化。而游泳兼喂锁阳的大鼠小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ氏细胞线粒体未见有退行性变化。进一步形态计量学分析游泳组和游泳兼喂锁阳组大鼠小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ氏细胞线粒体体密度、面密度、数密度均比对照组和锁阳对照组增大Ｐ＜０．０５,而游泳兼喂锁阳组的体密度比游泳组降低,比表面比游泳组的增大Ｐ＜０．０５。结论：中药锁阳能够改善小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ氏细胞线粒体的损伤性变化,进一步提高细胞的整体能量代谢水平,防止运动性疲劳的过早出现。     

99Tcm-MDP全身骨显像受检者外照射剂量的研究

目的 研究99Tcm-亚甲基二膦酸盐（MDP）全身骨显像受检者对非核医学科人员的外照射剂量,以有效减少非受检者的受照辐射剂量。 方法 选取 2018年8月至2019年1月在中国科学技术大学附属第一医院行99Tcm-MDP全身骨显像的51例受检者进行回顾性研究,其中男性26例、女性25例,年龄22~91（62.23±13.36）岁。所有受检者注射925 MBq 99Tcm-MDP后,根据饮水1000 mL后0.5 h内有无排尿分为排尿组（n=39）和未排尿组（n=12）,检测注射药物后0.5、1、2、3、4、6 h时受检者腹部和头部水平距离0.5、1、2、4、6 m处的辐射剂量当量率和累积剂量当量。2组间比较采用两独立样本的Mann-Whitney U检验,多次测量的不同时间、不同距离辐射剂量当量率的比较采用重复测量方差分析,配对样本采用非参数Wilcoxon检验。 结果 排尿组受检者在腹部水平距离0.5、1、2、4、6 m处的辐射剂量当量率均低于未排尿组[（40.29±4.67）μSv/h对（77.29±10.71）μSv/h、（15.22±1.64）μSv/h对（29.48±4.56）μSv/h、（4.15±0.47）μSv/h对（7.45±1.07）μSv/h、（1.32±0.10）μSv/h对（2.63±0.31）μSv/h、（0.45±0.05）μSv/h对（0.78±0.15）μSv/h],且差异均有统计学意义（Z=5.148~5.251,均P<0.001）。排尿组受检者腹部和头部的辐射剂量当量率均随着时间和距离的增加而迅速降低,且差异有统计学意义（F=3105.426~5397.675,均P<0.001）;排尿组受检者的辐射剂量当量率随着药物注射后时间的延长而显著下降。与排尿组受检者腹部水平距离0.5 m处6 h的累积剂量当量[（148.51±13.83）μSv]相比,1 m处6 h的累积剂量当量[（55.85±5.22）μSv]显著下降,且差异有统计学意义（Z=5.610,P<0.001）;与排尿组受检者头部水平距离0.5 m处6 h的累积剂量当量[（132.74±12.95）μSv]相比,1 m处6 h的累积剂量当量[（49.88±4.72）μSv]显著下降,且差异有统计学意义（Z=5.438,P<0.001）;排尿组受检者的累积剂量当量随着照射时间的延长而增加、随着距离的增加而减少。 结论 99Tcm-MDP全身骨显像对于非核医学科人员的照射剂量远远小于国内、国际法律规定限值（个人年有效剂量当量≤1 mSv）,与注射药物后3 h的受检者距离1 m以上即可避免大部分额外辐射。     

Effect of tail suspension on mitochondrial Ca2+ and Mg2+ and parameters of electron microscopic morphometry in rats' skeletal muscle]

Changes of mitochondrial Ca2+, mitochondrial Mg2+ and parameters of electron microscopic morphometry in rats' skeletal muscle after 15 or 30 d tail suspension were observed. The results showed that mitochondrial Ca2+ [correction of Ma2+] mitochondrial Mg2+ increased and morphometry of mitochondrial in skeletal muscle showed that volume density (Vv), surface density (Sv), numerical density (Nv) increased. Mean volume (V) decreased. Specific surface increased in soleus muscle, while that parameter remain unchanged in gastrocnemus musles. It suggests that these changes may be denoted to the decrease of muscular contractive function in simulated weightlessness.     

银杏叶提取物对活化血小板诱导HCAECs氧化应激的作用及其机制

目的：利用活化血小板诱导血小板刺激人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells, HCAECs),建立离体氧化应激模型。探讨不同剂量的银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract,EGb）对细胞内NADPH氧化酶4（NOX4）及RhoA的表达及对细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生所形成的影响。方法用内皮细胞培养基特供胎牛血清（加入内皮细胞生长添加剂）于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养细胞,用第6代细胞进行实验。将HCAECs随机分为5组：生理盐水对照组,活化血小板组,4、40、400μg/ml EGb实验组。除对照组外,其他4组细胞用2×108/ml的活化血小板刺激12 h后,实验组细胞再分别用不同剂量的EGb干预12 h。用DCFH-DA探针检测细胞内ROS的产生,用荧光显微镜观察;用Western Blot技术检测细胞内NOX4和RhoA的表达。结果荧光显微镜观察结果显示,活化血小板刺激HCAECs后,与生理盐水对照组相比,ROS产生明显增加（P＜0.05）;与活化血小板组相比,EGb对ROS产生的抑制作用呈剂量相关（P＜0.05）。Western Blot结果显示,与生理盐水对照组相比,活化血小板刺激HCAECs后,NOX4和RhoA的表达量增加（P＜0.05）;与活化血小板组相比,EGb对NOX4表达的抑制作用呈剂量相关性（P＜0.05）,对RhoA表达有抑制作用（P＜0.05）,但不呈剂量相关性。结论 EGb能抑制体外培养的活化血小板诱导的HCAECs内ROS、NOX4和RhoA的表达,EGb治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的机制可能是通过协同抑制NOX4和RhoA的表达,从而使ROS表达量减少,抑制细胞内的氧化应激反应。