大鼠弥漫性轴突损伤早期淀粉样前体蛋白(β-APP)表达的实验研究

目的 观察大鼠弥漫性轴突损伤（DAI）早期脑内各部位淀粉样前体蛋白（β-APP）表达的变化。方法 应用瞬间旋转致伤装置使16只SD大鼠发生DAI,并于伤后3h、6h分批处死（每时间点8只）,另取8只大鼠作为正常对照,在24h后处死。取各组大鼠脑标本进行免疫组织化学观察,检查损伤后早期不同时间皮质下白质、海马、胼胝体、脑干区域的病理学改变。各部位（胼胝体、海马、脑干）的切片在显微镜下（200倍）进行半定量分析。结果 损伤后3h,大脑皮质下白质、胼胝体和脑干β-APP呈弱阳性表达;损伤后6h,轴突局部免疫反应阳性较前明显增强,范围增大,半定量分析显示,胼胝体、海马、脑干的免疫反应均强于3h组。结论 β-APP在DAI早期（伤后3h）即有明确表达,并呈逐渐增强趋势,可作为DAI早期的标志物。     

大鼠弥漫性轴索损伤后Fos蛋白表达的研究

目的观察大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)后不同时间Fos蛋白在脑皮质、脑干的表达,进一步阐明脑损伤后弥漫轴索损伤的发生机制。方法45只大鼠随机分为两组,正常对照组(5只)和损伤组(40只)。损伤组复制Marmarou DAI模型,通过免疫组织化学方法,观察伤后不同时间脑皮质、脑干神经元Fos蛋白表达。结果外伤后0.5 h Fos蛋白表达开始增加,1d达到高峰,以后逐渐下降,12 d后基本消失。与正常对照组相比,损伤组伤后0.5、1、4、12 h、1、4 d Fos阳性神经元数明显增多(P<0.01)。结论DAI的形成和发展与伤后的时间存在明显相关关系。     

环氧化酶-2在小肠缺血再灌注损伤中的作用研究

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)在小肠缺血再灌注(I/R)损伤中对前列腺素12(PGI2)/血栓素A2(TXA2)系统的影响.方法 48只雄性SD大鼠随机分为3组:对照组(n=8)、I/R组(n=20)和干预组(n=20),I/R组大鼠麻醉后,取腹正中切口,钝性游离肠系膜上动脉,将其根部夹闭阻断血流45min,然后恢复血流灌注,建立大鼠小肠I/R模型.干预组术前1h用Nimeshulide灌胃,其余步骤同I/R组.手术后3,6、12、24h取血和小肠组织标本检测.酶联紫外分光光度法测定血浆D-乳酸水平;放射免疫法检测FGI2和TXA2的稳定代谢产物6-酮-前列腺素la(6-keto-PGF1a)和血栓索B2(TXB2)在血清及小肠组织中的表达;RT-PCR检测COX-2 mRNA表达.结果 与对照组比较,I/R组小肠COX-2表达明显增加,血浆D-乳酸、6-keto-PGF1a、TXB2水平均升高,以TXB2升高明显,6-keto-PGF1a/TXB2比值降低(P<0.05),与I/R组比较,干预组小肠COX-2表达明显减少,血浆D-乳酸、6-keto-PGF1a、TXB2水平均明显降低,以TXB2降低较明显,6-keto-PGF1a/TXB2比值升高(P<0.05).结论 COX-2可通过影响PGI2/TXA2的失衡加重小肠I/R损伤.     

大鼠脑弥漫性轴索损伤后bFGF神经元保护及修复作用的研究

 目的探讨大鼠脑弥漫性轴索损伤(Diffuse axonal injuries,DAI)后不同时期脑皮层组织中碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)的表达及意义,为临床治疗DAI寻求有效手段.方法选择健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组、DAI损伤组、bFGF治疗组和治疗对照组;DAI组大鼠按伤后存活时间又分为第6 h、12 h、1 d、3 d、7 d组,每组5只大鼠.用免疫组织化学方法检测大鼠脑皮层bFGF的表达,并分析其表达水平变化特点.结果 DAI后6 h出现bFGF表达,12 h表达增加,3 d达高峰,7 d后仍维持较高水平,各不同时间点DAI组之间比较差异具有显著性意义(P＜0.01).HE染色结果显示,脑皮层神经元数量也明显减少.结论 DAI时,bFGF的表达有时空效应,提示bFGF与脑损伤后神经元保护及修复有密切关系,bFGF能有效降低脑组织损伤程度.     

微波辐射对大鼠睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的影响

目的 探讨微波辐射对睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷(cAMP)-反应元件结合蛋白(pCREB)、cAMP反应元件调节因子(CREM)及CREB结合蛋白(CBP)表达的影响及其意义.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和辐射组(n=25).辐射组接受30mW/cm2微波辐射5min,分别于辐射后6h,1、3、7、14d处死5只大鼠.对照组不接受辐射,于ld时活杀.采用免疫组织化学及Western blotting检测睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的变化.结果 pCREB、CREM和CBP均主要表达于睾丸生精小管精子细胞核.微波辐射后6h～14d(pCREB在1d时除外),pCREB和CBP蛋白表达明显下调(P＜0.05或P＜0.01),辐射后6h～7d CREM表达亦明显下调(P＜0.05或P＜0.01).结论 pCREB、CREM及CBP表达下调在微波辐射致生精细胞损伤中可能发挥重要作用.     

有氧运动对肥胖小鼠胃组织Ghrelin和下丘脑GHSR-1a表达的影响

目的:探讨有氧运动对肥胖小鼠胃组织Ghrelin-下丘脑组织GHSR通路相关基因表达的影响,明确运动改善胃功能以抵抗肥胖的可能机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠40只随机分为普通对照组(NC组,n=8),饲喂普通饲料;高脂膳食组(H组,n=32),饲喂高脂饲料8周以建立肥胖模型。建模成功后的小鼠随机分为高脂对照组(HC组,n=8)和高脂运动组(HE组,n=8),均继续饲喂高脂饲料,同时HE组进行速度12 m/min、1 h/次/天、6次/周的4周跑台训练。结束后取血清、胃和下丘脑组织。测试血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)、血糖(GLU)和总Ghrelin水平;RT-PCR和Western blotting测试胃组织Ghrelin、Goat和下丘脑GHSR-1a mRNA和蛋白表达水平。结果:(1)运动干预后,HE组体重较HC组降低(P<0.05);运动干预2周后,HE组每周摄食量较HC组下降,但运动4周后又趋于接近。(2)HC组血脂血糖各指标均高于NC组(P<0.05),HE组GLU水平较HC组下降(P<0.05)。(3)在胃组织,HC组Ghrelin和Goat mRNA水平与NC组相比下降(P<0.01),HE组Ghrelin mRNA(P<0.01)和蛋白水平(P<0.05)、Goat m RNA和蛋白水平(P<0.05)高于HC组。(4)在下丘脑,HC组GHSR-1αm RNA水平较NC组下降(P<0.01),HE组GHSR-1a蛋白水平较HC组升高(P<0.05)。结论:有氧运动可能通过上调肥胖小鼠胃组织Ghrelin-下丘脑GHSR信号通路而改善血脂血糖水平以抵抗肥胖。     

高原不同海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肾组织细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达

目的 探讨高原不同海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肾脏组织Bcl-2蛋白的表达及其与肾组织细胞凋亡的关系.方法 雄性Wistar大鼠240只,分别在1 517m和3 848m两个海拔高度建立30%TBSAⅢ度高原烫伤模型,随机分为即时复苏组(IFR组,伤后即刻腹腔注射等渗盐水4ml/kg,n=60)、延迟复苏组(DFR组,伤后6h开始按4ml/kg补液,n=50)和假烫对照组(NC组,n=10),分别于伤后1、6、12、24、72和168h取材.采用组织芯片技术和原位末端标记法(TUNEL)检测肾组织细胞的凋亡,免疫组织化学染色与图像分析技术检测肾组织Bcl-2蛋白的表达.结果 随着海拔梯度上升,肾小管上皮细胞发生水肿、颗粒变性、坏死及崩解;肾小球毛细血管出现不同程度扩张、充血,内皮细胞变性及坏死,肾间质充血、水肿及炎性细胞浸润.病变程度DFR组较IFR组加重,高海拔地区较低海拔地区加重.肾组织细胞凋亡率和Bcl-2蛋白表达水平DFR组高于IFR组,高海拔地区高于低海拔地区(P＜0.001),且二者呈明显正相关(r=0.516,P＜0.001).结论 高原严重烧伤导致的肾损伤与肾小管细胞凋亡有关,而凋亡抑制因子Bcl-2的高表达反映了损伤过程中细胞自我保护机制的增强.     

JAK2/STAT3信号通路在重症急性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用

目的探讨JAK2/STAT 3信号通路在实验性重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤中的作用。方法以4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠SAP模型。32只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组(NC组)和SAP 6h、12h、18h组,每组8只。动态测定各组血清淀粉酶(AMY)水平;光镜下观察胰腺及肺组织病理变化,并计算肺湿/干重比;ELISA法检测血清IL-6及IL-18表达情况;West-ern blotting检测肺组织中JAK2和STAT 3蛋白的表达水平。结果与NC组比较,SAP各组AMY水平均明显升高(P<0.01);光镜下胰腺和肺组织损伤随病情进展而逐渐加重;SAP组肺湿/干重比与NC组比较显著升高(P<0.01)。各组血清中均有IL-6及IL-18表达,与NC组比较,SAP各组IL-6及IL-18表达水平均显著上调(P<0.01)。NC组有极少量的JAK2和STAT 3表达,SAP各组JAK2和STAT 3蛋白表达明显高于NC组,且随造模时间延长逐渐增高(P<0.01);JAK2和STAT 3表达变化与肺组织的严重程度一致。结论 JAK2/STAT 3信号通路的激活可诱导IL-6及IL-18过度表达,可能加重SAP时的炎症反应和肺损伤。     

IL-1β及其受体在机械性脑损伤大鼠大脑皮质及海马中的表达

 目的通过复制Marmarou大鼠机械性脑损伤模型,研究脑损伤后白细胞介素1β(interlukin-1β,IL-1β)及其受体IL-1RI在大脑皮质和海马中表达的时序性特点及二者之间的相互关系.方法将60只清洁级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、手术对照组及损伤后1h组、2 h组、4 h组、8 h组、12 h组、24h组、2 d组、3 d组、5 d组.采用组织芯片及免疫组化技术检测大脑皮质和海马中IL-1β、IL-1RI的表达情况.结果对照组大脑皮质、海马部位均表达少量IL-1β及IL-1RI.与对照组相比,损伤组皮质和海马中IL-1β的表达在损伤后30 min～12 h组显著升高(P＜0.01),并在2 h达高峰,然后逐渐降低,损伤后24 h降至正常水平,而皮质和海马中IL-1RI的表达在损伤后1～12 h组显著升高(P＜0.01),并在4 h达高峰,然后逐渐降低,损伤后72 h降至正常水平.结论IL-1β及IL-1RI的表达在闭合性脑损伤早期即显著升高,后期逐渐恢复正常,两者在损伤后表达的时序性变化特点基本一致,共同参与脑损伤的病理生理过程.     

CD28基因在爆震致肠道损伤中作用及机制

目的 探讨CD28基因在爆震致肠道损伤中的作用及机制。方法 将16只健康雄性C577BL/6小鼠随机分入正常对照组(n=8)和爆震伤模型组(n=8),将16只健康雄性CD28基因敲除小鼠随机分入CD28基因缺失组(n=8)和PI3K抑制剂组(n=8)。通过自主研发的爆震伤模型装置建立爆震致肠道损伤模型。每日观察小鼠情况,测量体质量变化;HE染色观察各组肠道损伤情况;TUNEL检测组织细胞凋亡损伤;Western-blot检测肠道组织氧化应激相关蛋白丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)-1、SOD-2及PI3K、AKT、Nrf2通路蛋白表达情况。结果 爆震伤模型组小鼠活动度降低,体质量明显减轻(P<0.05)。爆震48 h后,爆震伤模型组小鼠HE染色可见肠道组织形态结构紊乱、坏死严重,TUNEL染色可见肠道组织细胞发生凋亡损伤。与正常对照组小鼠比较,爆震伤模型组肠道组织中MDA蛋白表达升高,SOD-1和SOD-2蛋白表达降低(P<0.05);与爆震伤模型组小鼠比较,CD28基因缺失组MDA蛋白表达降低,SOD-1和SOD-2蛋白表达升高(P<0.05);PI3K抑...     

闭合性颅脑损伤大鼠血清和海马SAX2蛋白质谱的表达

 目的 研究闭合性颅脑损伤大鼠血清和海马SAX2蛋白质表达谱,探寻脑损伤生物标志蛋白。方法 选72只雄性SD大鼠随机分为手术对照组及损伤后4、8、12、24、48 h组,复制Marmarou落体打击大鼠脑损伤模型,分别进行常规HE染色、尼氏染色;并用强阴离子交换芯片(SAX2)质谱技术分析大鼠闭合性脑损伤后不同时间血清和海马中蛋白质表达谱的改变。结果 (1)SAX2芯片共获得530个血清蛋白质峰,147个海马蛋白质峰,6个组中,SAX2芯片在血清和海马中都能捕获的蛋白质数是14个。(2)血清中检测到的差异蛋白质,损伤后共有45个蛋白质峰的相对强度与手术对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);另有97个蛋白质峰在对照组中未检测到。(3)海马中检测到的差异蛋白质,损伤后共有18个蛋白质峰的相对强度与手术对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);另有40个蛋白质峰在对照组中未检测到。(4)在SAX2芯片上,血清和海马中均能检测到3656Da这一蛋白质,该蛋白质在血清中于损伤后4 h可以检测到,在海马中于损伤后12 h可检测到。结论 脑损伤可引起血清和海马SAX2蛋白质表达谱变化;血清和海马SAX2蛋白质表达谱存在差异,提示血清中出现的部分蛋白质可能为脑损伤诱导的血细胞基因表达产物;在血清和海马中检测到的差异蛋白质以及损伤后新出现的蛋白质峰,可能是脑损伤生物标志蛋白。     

大鼠头颅侧向旋转致脑弥漫性轴索损伤的NF68免疫组化形态学观察

目的探讨大鼠头颅侧向旋转后脑弥漫性轴索损伤(DAI)的形态学改变。方法大鼠12只,随机均分为损伤后30min、2h、24h及对照组,制作头颅侧向旋转脑DAI模型。脑矢状切片经用小鼠抗神经纤维丝(NF)蛋白NF68亚单位的血清、免疫组化ABC法与DAB+H2O2显色技术等处理。选延髓部分,薄片间包埋,光镜定位,阳性区超薄切片,电镜观察。结果伤后30min光镜下延髓轴索迂曲肿胀;电镜下髓鞘轻度分离,轴浆NF结构紊乱。伤后2～24h,轴索破坏随时间渐重,光镜下轴索明显肿胀、断裂并形成轴缩球;电镜下髓鞘显著分离,局部断裂,线粒体空泡变并移向周边,部分胞浆溶解。和正常对照比,伤后轴索轴浆NF68染色也明显增强;伴随轴索结构的变化,NF68阳性轴索染色强度和数量逐步递增。结论大鼠头颅侧向旋转后脑神经轴索内NF蛋白的NF68亚单位免疫活性显著增强,引起NF结构紊乱,终致轴索肿胀、断裂并形成轴缩球。     

绞股蓝总皂苷对全脑缺血再灌注大鼠海马区c-jun蛋白表达的抑制作用

 目的 探讨绞股蓝总皂苷(GP)对全脑缺血再灌注大鼠海马区c-jun蛋白表达的影响.方法 用改良的Pulsinelli 4-血管阻断(4-VO)法制做大鼠急性全脑缺血再灌注损伤模型,分别按照再灌注6 h、24 h、72 h取材,应用免疫组织化学法标记各实验组大鼠脑组织海马区c-jun蛋白表达数量.结果 与对照组比较,模型组Jun蛋白表达最高.各组海马区的Jun蛋白表达随着缺血再灌注时间的延长呈递减趋势(再灌注6 h＞再灌注24 h＞再灌注72 h).再灌注6 h各实验组的Jun蛋白表达结果是:模型组＞GP低剂量给药组＞GP高剂量给药组.与模型组相比,绞股蓝总皂苷2个剂量组在不同灌注时间(6 h、24 h、72 h)均具有显著的抑制JUN蛋白表达的作用.结论 绞股蓝总皂苷可明显下调JUN蛋白的表达,具有抑制全脑脑缺血再灌注时神经细胞凋亡作用,从而改善受损的神经功能.GP对急性全脑缺血模型大鼠的脑损伤的预防保护有一定的剂量相关趋势.     

Conspicuity of diffuse axonal injury lesions on diffusion-weighted MR imaging

OBJECTIVE: (1) To detect diffuse axonal injury (DAI) lesions by diffusion-weighted imaging (DWI), as compared with fluid-attenuated inversion recovery (FLAIR) imaging and (2) to evaluate hemorrhagic DAI lesions by b0 images obtained from DWI, as compared with gradient-echo (GRE) imaging. METHODS: We reviewed MR images of 36 patients with a diagnosis of DAI. MR imaging was performed 20 h to 14 days (mean, 3.7 days) after traumatic brain injury. We evaluated: (1) conspicuity of lesions on DWI and FLAIR and (2) conspicuity of hemorrhage in DAI lesions on b0 images and GRE imaging. RESULTS: DWI clearly depicted high-signal DAI lesions. The sensitivity of DWI to lesional conspicuity in DAI lesions was almost equal to that of FLAIR. The sensitivity of b0 images to identification of hemorrhagic DAI lesions was inferior to that of GRE. CONCLUSION: DWI is as useful as FLAIR in detecting DAI lesions. GRE imaging is still the superior tool for the evaluation of hemorrhagic DAI.     

大鼠创伤性脑损伤后脑组织钙周期素结合蛋白的表达及意义

目的 探讨大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后脑组织中钙周期素结合蛋白(calcyclin binding protein,CacyBP)的表达规律及意义.方法 雄性SD大鼠60只,按随机数字表法分为正常对照组(10只)和TBI组(50只);采用头颅侧向旋转致伤方法制作TBI模型,并按伤后大鼠处死时间分为6,24,72 h、7,14 d共5个亚组,每组10只.采用免疫组化方法检测CacyBP在大鼠脑组织中的表达变化规律和分布情况.CacyBP阳性结果判断标准以细胞浆内出现棕黄染色颗粒为阳性,反之为阴性.结果 大鼠脑组织中CacyBP主要分布在海马、齿状回及皮层下神经元的胞浆中.与正常对照组的CacyBP高表达比较.TBI后6 h,其表达量明显减少,为最低值(P<0.01),随后表达量逐渐递增,至损伤后14 d其表达量恢复高值,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 在TBI后,CacyBP出现一个表达低峰,提示在不同机制影响下其可能对脑损伤的发生、发展发挥重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the expression and significance of calcyclin binding protein (CacyBP)in the brain of rat model of traumatic brain injury(TBI).Methods Sixty 60 male SD rats were divided randomly into normal control group (n=10) and TBI group (n=50).The TBI model was created by using lateral head rotation device and subdivided into 6 h,24 h,72 h,7 d and 14 d group (10 rats per group).The expression and distribution of CacyBP in the rat brain was investigated immunohistochemically.The presence of the brown stained particles was considered as"positive"and lack of the stained particles ag"negative". Results CacyBP was mainly distributed in the hippocampus,dentate gyrus and cortical neuron cytoplasm.Compared with the high level expression of CacyBP in the normal control group,the expression of CacyBP was decreased to the lowest in the rat brain at 6 h post TBI (P<0.01),became stronger gradually at 24 hours and recovered to normal at day 14,with no statistical difference compared with normal control group (P>0.05). Conclusion The lowest level expression of CacyBP after TBI indicates that CacyBP may play an important role in development of brain injury under effect of difierent mechanisms.     

5-HT1A受体激动剂(8-OH-DPAT)对大鼠弥漫性轴索损伤神经保护作用的实验研究

目的探讨8-OH-DPAT[8-hydroxy-2-(di-n-propylamino)tetralin]对大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)的降低脑温及神经保护作用。方法选用SD大鼠30只,建立大鼠DAI模型。模型制成后,将大鼠随机分为三组,A组(对照组):10只,伤后15 min腹腔给予等量生理盐水;B组(恒定体温组):10只,维持体温恒定,伤后15 min腹腔给予8-OH-DPAT;C组(实验组):10只,伤后15min腹腔给予8-OH-DPAT。记录相应时点各组大鼠脑红蛋白(NGB)、热休克蛋白70(HSP70)表达量变化及脑温度值。结果与A组比较C组于给药后15 min即可引起脑温下降,至90 min达到高峰,3 h 25 min脑温恢复至A组水平。相应时点B、C组与A组比较NGB、HSP70的表达均有不同程度增高。结论 8-OH-DPAT具有降低DAI大鼠脑温的效果,伤后早期增强NGB及HSP70的表达起到神经保护的作用,且8-OH-DPAT降低脑温作用和神经保护作用是相辅相成的。