低压低氧对帕金森病模型小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨低压低氧环境下帕金森病（PD）模型小鼠学习记忆能力的变化。方法 60只SPF级雄性昆明小鼠,体质量17-22 g。随机分为1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）组（PD模型组）、低压低氧（HH）组、MTPT＋HH组和对照组,每组15只。以动物实验用高原环境模拟舱模拟低压低氧环境,通过腹腔注射MPTP诱导PD模型小鼠,使用Y型-电迷宫和跳台实验评价小鼠学习记忆能力。结果与对照组比较,MPTP组、HH组和MPTP＋HH组Y型-电迷宫学习和记忆总反应时间（TRT）明显延长（P均〈0.01）,错误反应次数（EN）明显增多（P均〈0.01）;跳台实验学习和记忆TRT明显延长（P均〈0.01）,EN明显增多（P均〈0.01）。且上述各指标MPTP＋HH组分别低于MPTP组与HH组（P均〈0.05）,而MPTP组与HH组之间水平相近（P均〉0.05）。结论低压低氧加重了MPTP所致PD模型小鼠学习记忆能力的下降程度。     

不同周龄组的C57BL小鼠多巴胺神经元对MPTP敏感性的对比及其机制探讨

目的：观察不同周龄的C57BL小鼠多巴胺神经元对1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）的药物敏感性差异，探讨其差异的机制是否与热休克蛋白70（HSP70）不同表达相关。方法：将4。6周龄及15。17周龄的C57BL小鼠给予MPTP造成帕金森病模型，同时设立对照组。采用高效液相法检测纹状体内多巴胺（DA）、3，4-二羟苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）的含量。免疫组化法观察黑质中酪胺酸羟化酶（TH）阳性细胞及HSP70的表达。结果：15-17周龄小鼠在MPTP造模后纹状体中DA、DOPAC、HVA的含量，黑质中的TH阳性细胞数和HSP70的表达含量均明显低于4—6周龄模型组（P〈0．05），而两个周龄的对照组的各项指标均无明显差异。结论：15-17周龄的C57BL小鼠对于MPTP的敏感性明显高于4—6周龄小鼠。HSP70的表达量不同可能是造成敏感性差异的原因之一。     

烟酰胺对帕金森病小鼠黑质细胞凋亡的影响

目的:探讨黑质细胞凋亡在帕金森病发病机制中的作用及烟酰胺对帕金森病小鼠黑质细胞凋亡和Bax蛋白表达的影响。方法:给C57BL小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备帕金森病小鼠模型。利用原位缺口末端标记法(TUNEL)及Bax免疫组化方法观察黑质细胞凋亡情况及烟酰胺干预的影响。结果:帕金森病小鼠黑质致密带可见大量凋亡细胞犤(19.43±3.33)个/视野犦Bax蛋白表达(Bax阳性细胞平均灰度值80.59±3.73)。预先应用烟酰胺能使凋亡细胞减少犤(6.33±2.35)个/视野犦,烟酰胺 MPTP组与MPTP组间比较差异有显著性意义(q=9.23,P<0.05)。预先应用烟酰胺也能使Bax蛋白表达降低(Bax阳性细胞平均灰度值107.59±2.50),烟酰胺 MPTP组与MPTP组间比较差异有显著性意义(q=7.44,P<0.05)。结论:烟酰胺可降低MPTP诱导的C57BL小鼠黑质细胞Bax蛋白表达,减少黑质细胞凋亡。     

健行颗粒对3种拟帕金森病震颤模型小鼠的干预作用

目的建立肌肉震颤及线粒体功能障碍致3种拟帕金森病震颤小鼠模型,并在此3种模型上观察健行颗粒的药效学作用,探讨其可能的作用机理.方法经氧化震颤素和槟榔碱单次腹腔注射建立小鼠肌肉震颤模型;经MPTP 20mg/kg连续8天腹腔注射建立线粒体损伤致震颤小鼠模型.记录震颤素和槟榔碱模型小鼠震颤持续时间;观察MPTP模型小鼠爬杆行为及自主活动次数的改变,经高效液相色谱测定MPTP模型小鼠纹状体内多巴胺及其代谢产物含量的改变.结果模型组小鼠在给予震颤素或槟榔碱腹腔注射后出现明显震颤,健行颗粒用药组小鼠震颤持续时间较模型组明显缩短;对于MPTP小鼠模型,模型组小鼠爬杆时间延长,运动协调性降低,纹状体内多巴胺含量明显降低,健行颗粒用药组小鼠爬杆时间较模型组明显缩短,自主活动数增加,纹状体内多巴胺含量增高.结论槟榔碱及氧化震颤素均能制备良好的肌肉震颤小鼠模型,健行颗粒能明显减少模型动物肌肉震颤持续时间;对于MPTP腹腔注射拟帕金森小鼠模型,健行颗粒能明显缩短其爬杆时间,增强小鼠自主活动能力,提升小鼠脑纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量.     

两种帕金森病模型黑质一氧化氮合酶mRNA的表达及灵芝孢子油的调控作用

目的：对比研究1-甲基-4苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）小鼠模型和6-羟基多巴（6-OHDA）大鼠模型黑质区诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达水平的变化，探讨灵芝孢子油对两种帕金森病模型黑质区iNOS mRNA表达的调节作用.方法：分别建立MPTP小鼠模型，C57BL小鼠分为MPTP组、灵芝孢子油＋MPTP组、正常对照组.MPTP组皮下注射MPTP共6 d，灵芝孢子油＋MPTP组在注射MPTP前2 d开始鼻饲灵芝孢子油，连续8 d，MPTP组喂食生理盐水做对照，2周后断头取中脑腹侧组织.6-OHDA大鼠模型，SD大鼠分为6-OHDA组、灵芝孢子油＋6-OHDA组、正常对照组.用脑部立体定向法将6-OHDA注射到SD大鼠一侧黑质致密部建立大鼠帕金森病模型，灵芝孢子油组在造模前3 d开始给药，连续10 d.6-OHDA组喂食生理盐水做对照.造模后第13天取各组大鼠中脑腹侧组织，用荧光半定量RT-PCR法检测各组中脑腹侧iNOS mRNA表达量.结果：MPTP模型中，MPTP组的iNOS mRNA表达量比正常对照组增高，灵芝孢子油组iNOS mRNA表达量比正常对照组减少，组间两两比较差异有显著性.6-OHDA模型中，6-OHDA组的iNOS mRNA表达量比正常对照组略增多，灵芝孢子油组iNOS mRNA的表达量无明显改变.两处理组组间比较无明显差异.结论：MPTP模型黑质区iNOS mRNA表达量明显增高，提示iNOS mRNA的过度表达可能与MPTP的发病机制有关，灵芝孢子油能有效下调iNOS mRNA的高表达.     

PINK1基因突变增强帕金森病相关毒物神经毒性作用的线粒体机制

目的:研究PINK1基因突变对帕金森病相关毒物对于神经元线粒体功能的影响。方法:用N27细胞系构建可稳定表达PINK1-L347p突变基因的可诱导型细胞系,Western Blot方法测定PINK1-L347p的表达。Image J软件测定稳定表达PINK1-L347p突变基因的N27细胞内线粒体的长宽比和圆形度。MTT比色法检测不同浓度的1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)或百草枯(PQ)对空质粒对照组(EV组)和稳定表达PINK1-L347p组(L347p组)细胞存活率的影响。结果:流式细胞术和Western Blot验证了PINK1-L347p突变基因稳定表达的N27细胞系构建成功。L347p组的线粒体形态明显过度断裂,与EV组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与EV组比较,L347p组对MPP+或PQ的敏感性增强(P<0.05);PINK1-L347p细胞系中诱导剂ponA干预组细胞死亡率明显高于无诱导剂PonA干预组(P<0.05)。结论:PINK1突变可导致线粒体形态学改变和功能异常,PINK1-L347p突变可增加哺乳动物多巴胺神经元对于MPP+和PQ的敏感性,更易导致细胞死亡。     

环氧合酶2表达对帕金森病模型小鼠黑质细胞凋亡的影响

目的:观察环氧合酶2表达对帕金森病模型小鼠中脑黑质细胞凋亡的影响。方法:实验于2005-01/08在华北煤炭医学院解剖学教研室实验室完成。健康雄性C57BL/6N小鼠45只随机分为3组,每组15只。①模型组:皮下注射神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyri-dine,MPTP)(30mg/kg,盐水溶),1次/d,连续5d。②环氧合酶2抑制剂组:在MPTP注射前3d经口给予环氧合酶2抑制剂Celecoxib(250mg/kg),1次/d,连续3d,随后在每天注射MPTP前3.0h给予1次Celecoxib,连续5d。③对照组:注射与模型组等体积生理盐水。所有动物于最后一次注射后24h处死。通过免疫组织化学和免疫蛋白印记法,观察帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元数量和黑质环氧合酶2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和多(ADP-核糖)聚合酶免疫反应阳性细胞数量的变化及腹侧中脑环氧合酶2、凋亡蛋白酶活化因子1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达水平的变化;观察给予环氧合酶2抑制剂Celecoxib后对上述变化的影响。结果:与对照小鼠相比,模型组小鼠多巴胺能神经元数量下降约63%(P<0.01),黑质环氧合酶2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和多(ADP-核糖)聚合酶免疫反应阳性细胞数量增加(P<0.01),腹侧中脑环氧合酶2、凋亡蛋白酶活化因子1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达水平大幅升高(P<0.01)。环氧合酶2抑制剂组小鼠黑质多巴胺能神经元数量仅较对照组下降约37%(P<0.01)。与模型组小鼠比较,黑质环氧合酶2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和多(ADP-核糖)聚合酶免疫反应阳性细胞数量减少(P<0.01),腹侧中脑环氧合酶2、凋亡蛋白酶活化因子1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达水平明显下降(P<0.01)。结论:帕金森病小鼠黑质细胞凋亡可能与环氧合酶2表达有关;环氧合酶2抑制剂Celecoxib对帕金森病小鼠具有神经保护作用。     

线粒体自噬参与帕金森病发病机制的研究进展

帕金森病是中老年人常见的中枢神经系统退行性疾病,近年的研究表明线粒体自噬是帕金森病的发病机制之一。目前已知帕金森病相关基因PINK1、PARKIN、SNCA、DJ-1、LRRK2以及ATP13A2和GBA均参与线粒体自噬的调节。其中PINK1参与线粒体代谢、线粒体动力和异常蛋白的降解过程,并参与PARKIN移位至受损线粒体触发线粒体自噬;PARKIN参与泛素-蛋白降解途径,调节自噬小体吞噬、降解陈旧线粒体,以保护线粒体DNA、维持线粒体呼吸链活性来发挥细胞保护作用;DJ-1参与细胞应激环境下线粒体活性和形态的调节;SNCA编码的α-突触核蛋白通过影响自噬小体的形成、调节线粒体动力和保持线粒体的钙平衡来调控线粒体自噬;LRRK2基因突变也可以引发线粒体自噬。此外,环境因素也可能直接或间接地对线粒体自噬产生调控。本文将对线粒体自噬与帕金森病之间的关联作一简要综述。     

帕金森病模型小鼠的行为学特征及其检测方法研究

帕金森病是一种常见的神经系统退变性疾病,其主要是由于黑质多巴胺能神经元坏死、凋亡,细胞数目减少,使黑质-纹状体通路多巴胺释放减少,患者出现静止性震颤、肌张力增高、运动减少等一系列症状。目前已建立多种帕金森病动物模型,其中1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致帕金森病小鼠模型是目前最常用的帕金森病动物模型之一,其许多行为学特征与帕金森病患者临床表现类似,通过多种方法对其行为学特征进行检测,了解其行为学特征与生理病理的关系,将为帕金森病的病因病理研究提供有效的途径。     

穿心莲内酯通过诱导线粒体自噬对实验性帕金森病小鼠改善作用研究

目的探讨穿心莲内酯(AG)对实验性帕金森病小鼠的改善作用及其机制是否与诱导线粒体自噬有关。方法 C57BL/6雄性小鼠,10～12周龄,体重22～25 g,均购于辽宁成大生物股份有限公司。共将40只小鼠按照实验目的分为5组:对照组、模型组、AG低剂量组、AG中剂量组和AG高剂量组,各8只。除对照组外,模型组、AG低剂量组、AG中剂量组和AG高剂量组均通过腹腔注射MPTP诱导C57BL/6小鼠发生实验性帕金森病。AG低、中、高剂量组依次分别给予2.5、5.0、10.0 mg·kg^-1·d^-1的AG灌胃,对照组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,每日1次,连续14 d。测试各组小鼠的神经行为学功能;实时荧光定量PCR检测各组小鼠脑SNpc区域IL-1β、NLRP3的mRNA表达;蛋白质免疫印迹检测其parkin、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62的蛋白表达情况;免疫组织化学检测其parkin表达情况。结果与对照组相比,模型组小鼠神经行为学受损,表现为爬杆时间延长和转棒停留时间下降,其脑SNpc区域IL-1β、NLRP3的mRNA表达水平显著升高,...     

人参皂甙Rgl对帕金森病小鼠神经保护作用初探

目的 研究人参皂甙Rg1在对帕金森病(PD)黑质多巴胺能神经元凋亡的可能机制及其神经保护作用. 方法 采用神经毒素1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备PD小鼠模型,免疫组织化学法与蛋白印迹法观察各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)和促凋亡基因Caspase-3表达变化;原位末端标记法(TUNEL)观察黑质细胞凋亡数量变化. 结果 人参皂甙Rg1干预组黑质TH阳性神经元细胞丢失明显减轻(31% vs.55%)(P相似文献   

转录因子EN1在帕金森病模型小鼠中脑表达中的变化

目的:研究小鼠帕金森病(PD)模型急性期中脑转录因子EN1表达变化的特点及小鼠的自发性活动改变。方法:应用6-羟多巴胺(6-OHDA)纹状体注射制备小鼠PD模型;旷场试验观察其行为学变化;免疫组织化学/荧光染色检测注药后24h内中脑EN1、酪氨酸羟化酶(TH)的表达变化。结果:与对照组相比,模型组运动方式明显异常,7d内基本恢复正常;运动总量随注药后时间延长呈恢复趋势,但与对照组对比无显著差异;中央区域活动时间逐渐减少,反映了焦虑指数增高。与对照侧相比,实验侧中脑EN1免疫阳性细胞数在3—9h时已出现减少,12—18h时已较显著,18h为65.2±22.3%(P<0.05),21h时减少非常显著。TH阳性的多巴胺能(DA)神经元数目也随时间逐渐减少,但时间上略晚于EN1,15h才可见减少,18h时减少明显,为68.3±1.2%(P<0.05)。EN1在中脑主要定位于细胞核,但也可见于细胞浆。结论:注射6-OHDA后,小鼠出现行为学改变,焦虑指数增高;实验侧中脑EN1和TH阳性细胞数均随时间逐渐减少且EN1变化早于TH,提示转录因子EN1的减少可能是诱导DA神经元凋亡及PD部分症状出现的重要原因。     

不同强度的耐力运动对糖尿病大鼠骨骼肌 GLUT4 mRNA表达的影响

目的探讨不同强度的耐力运动对糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4 mRNA表达的影响.方法雄性SD大鼠,其中36只大鼠经尾静脉注射链脲霉素,建立糖尿病模型.然后随机分为低强度运动组(EL)、高强度运动组(EH)、低强度运动加胰岛素治疗组(LI)、高强度运动加胰岛素治疗组(HI)、胰岛素治疗非运动组(DI)和非胰岛素治疗非运动组(DM).6只SD大鼠为非运动正常血糖组(CN).耐力训练采用活动平板,胰岛素采用皮下注射,共8周.运用RT-PCR法测定骨骼肌GLUT4 mRNA.结果DM组骨骼肌GLUT4 mRNA表达水平显著低于其它各组(P＜0.05).LI组骨骼肌GLUT4 mRNA表达水平明显增高接近CN组,并且显著高于DI组.DI组GLUT4 mRNA含量与EL、EH、HI各组相当,差异无显著性意义.结论运动可以促进GLUT4 mRNA的表达,而运动强度对GLUT4 mRNA表达量无显著影响;低强度运动加胰岛素所具有最佳的GLUT4 mRNA表达水平是其它单独干预措施所无法替代的.     

Voltage-gated calcium channels and Parkinson's disease

A complex interaction of environmental, genetic and epigenetic factors combine with ageing to cause the most prevalent of movement disorders Parkinson's disease. Current pharmacological treatments only tackle the symptoms and do not stop progression of the disease or reverse the neurodegenerative process. While some incidences of Parkinson's disease arise through heritable genetic defects, the cause of the majority of cases remains unknown. Likewise, why some neuronal populations are more susceptible to neurodegeneration than others is not clear, but as the molecular pathways responsible for the process of cell death are unravelled, it is increasingly apparent that disrupted cellular energy metabolism plays a central role. Precise control of cellular calcium concentrations is crucial for maintenance of energy homeostasis. Recently, differential cellular expression of neuronal voltage-gated calcium channel (Ca_V) isoforms has been implicated in the susceptibility of vulnerable neurons to neurodegeneration in Parkinson's disease. Ca_V channels are also involved in the synaptic plasticity response to the denervation that occurs in Parkinson's disease and following chronic treatment with anti-parkinsonian drugs. This review will examine the putative role neuronal Ca_V channels have in the pathogenesis and treatment of Parkinson's disease.     

茶多酚对1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的：探讨茶多酚（TP）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP^＋）诱导的帕金森病细胞模型的保护作用及机制。方法：将MPP＋或TP加入培养的PCI2细胞,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性及代谢状态,荧光法测定细胞内活性氧（ROS）水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测bcl-2基因mRNA表达,比较各组的差异。结果：与MPP＋组相比TP＋MPP＋组细胞存活率明显升高,凋亡率、ROS水平明显降低,bcl．2mRNA表达升高。结论：TP可通过抗氧化及抗凋亡机制保护PCI2细胞免于MPP^＋的损伤     

强化肌力训练联合经颅直流电刺激对帕金森患者的影响

目的探讨强化肌力训练联合经颅直流电刺激对帕金森患者的影响。方法选取2016年6月至2019年6月收入我院治疗的帕金森患者80例,将其随机等分为对照组和研究组。对照组实施常规护理干预,研究组在对照组的基础上加以肌力训练联合经颅直流电刺激护理干预,比较两组步态冻结(FGQ)、功能独立(FIM)评分和5次坐到站测试计时(FTSST)、起立行走计时(TUGT)与Berg平衡能力(BBS)评分及认知功能障碍评分。结果实施护理干预后,研究组患者FGQ评分低于对照组(P<0.05),FIM,BBS评分高于对照组(P<0.05),FTSST,TUGT短于对照组(P<0.05)。研究组视空间/执行功能、命名、注意、语言、抽象、延迟记忆、定向等各认知领域评分均高于对照组(P<0.05)。结论强化肌力训练联合经颅直流电刺激可有效改善帕金森步态冻结以及认知功能障碍,提高远期治疗效果,值得临床推广应用。     

肢体协调训练对早期原发性帕金森病患者肺功能的效果北大核心CSCD

目的 观察肢体协调训练对早期原发性帕金森患者肺功能的效果。方法 2021年2月至2022年2月,本院原发性帕金森患者60例根据治疗方案分为对照组(n=30)和试验组(n=30),分别接受常规药物治疗和常规药物联合肢体协调训练治疗,共12周。治疗前后,采用肺功能仪测量患者第1秒用力呼气容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(PEF)和肺活量(VC),采用心肺运动试验(CPET)测量峰值摄氧量(VO_(2peak))、无氧阈(AT)、峰值功率(WR_(peak)),采用呼吸驱动仪测量最大吸气压(MIP)和最大呼气压(MEP)。结果 治疗后,试验组FEV_(1)、FVC、PEF、VC、VO_(2peak)、AT、WR_(peak)、MIP、MEP均提高(t> 2.087, P <0.05),且均优于对照组(t> 2.079, P <0.05)。结论 肢体协调训练可改善早期原发性帕金森患者肺功能,提高有氧运动能力,增强呼吸肌肌力。     

A proteomic approach in the study of an animal model of Parkinson's disease

BACKGROUND: The aetiology of Parkinson's disease (PD), an age-related disorder characterized by a progressive degeneration of dopaminergic neurons of the substantia nigra (SN) pars compacta, remains unclear. Current treatments, such as administration of L-DOPA, are only symptomatic and do not stop or delay the progressive loss of neurons. In fact, it has been suggested that the dopamine precursor L-DOPA, increases generation of reactive oxygen species (ROS) leading to further neuronal damage. A similar loss in nigrostriatal dopaminergic neurons is produced on intracerebral administration of the catecholaminergic neurotoxin 6-hydroxydopamine (6-OHDA). In an animal model of PD, termed 'the hemiparkinsonian rat', unilateral injection of 6-OHDA into the nigrostriatal pathway results in extensive loss of dopaminergic cells in the ipsolateral SN. In an attempt to identify some of the proteins that are involved in dopaminergic neuronal death, we used the proteomic methods to analyze this animal model of PD. METHODS: Five hemiparkinsonian rats were obtained by intranigral stereotaxic injection of 6-OHDA.The right 6-OHDA-lesioned substantia nigra and striatum tissues along with the left, unlesioned controlateral tissues, were excised and homogenized, using urea-based buffer, to extract the tissues protein. The separation of the protein mixtures and the visualization of the protein patterns obtained were performed using two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE). Protein profiles of control and treated tissues were compare by the PDQuest 2D-gel analysis software (BIO-Rad laboratory). The protein spots showing differential expression were analysed by matrix assisted laser desorption/ionizing time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry. RESULTS: The brain protein extraction and solubilization protocol was validated obtaining a satisfactory protein profile. In comparison to the normal rats, hemiparkinsonian animals exhibited a different expression in alpha-enolase and beta-actin in substantia nigra and striatum, respectively. CONCLUSION: The proteomic study of 6-OHDA-induced lesions in the nigrostriatial pathway allowed us to identify two proteins, alpha-enolase and beta-actin, showing increased levels in the 6-OHDA-lesioned brain tissues compared to control. Previous studies described the same proteins as oxidized and proteins in Alzheimer's disease (AD) brain. Our preliminary data could mirror those results pointing out a common mechanism of neurodegenerative diseases.