大鼠口腔黏膜角质形成细胞体外连续培养的研究

目的探讨SD大鼠口腔黏膜角质形成细胞的培养方法及生物学特性。方法取SD大鼠口腔黏膜,用Dispase酶分离后经胰酶消化,接种无血清培养基,观察细胞存活率和生长情况,传代并签定细胞来源,绘制二代细胞生长曲线。结果获取的细胞呈"铺路石"状,为上皮细胞的典型形态,角蛋白免疫组化染色阳性,证明为单一的角质形成细胞。结论应用Dis-pase酶和胰酶联合消化并采用无血清培养液培养的方法,可成功地在体外对角质形成细胞进行培养和传代。     

调节性T细胞研究进展及其对OLP研究的启示

调节性T细胞是一类具有免疫抑制功能的细胞,最新的研究表明,它在自身免疫性疾病中发挥重要作用。越来越多的证据表明,口腔扁平苔藓(OLP)是一种自身免疫性疾病,病因尚不明确,有研究表明,其发病过程中存在可能和调节性T细胞有关的免疫抑制力不足。通过借鉴调节性T细胞在自身免疫性疾病中的研究进展,有助于阐明OLP的发病机制,并为其治疗提供新的思路和方法。     

口腔扁平苔藓患者CD4+T细胞中miR-155功能调控对CD4+T细胞和角质形成细胞的影响

目的 探讨糜烂型口腔扁平苔藓(erosive oral lichen planus,EOLP)患者 CD4+T 细胞中miR-155功能调控对CD4+T 细胞及角质形成细胞的影响.方法 选择EOLP 患者和健康志愿者各6名,用磁珠分离技术从外周血单个核细胞中分离 CD4 + T 细胞.以 Lipofectamin2000为载体,通过人 miR-155 agomir 和人 miR-155 antagomir及其相应阴性对照的修饰作用,实现CD4+T细胞中miR-155的功能性调控,使用ELISA检测上清中IFN-γ水平,同时用CCK8检测CD4+T细胞和角质形成细胞增殖活性.结果 EOLP患者CD4+T细胞中miR-155分别经agomir和antagomir修饰后,上清中IFN-γ含量较其阴性对照组下降(P<0.05);CD4+T细胞中miR-155功能无论上调或下调,均可以提高角质形成细胞的增殖活性,而共培养体系中角质形成细胞的细胞形态和增殖活性都会发生改变.结论 miR-155功能上调会使EOLP CD4+T细胞和角质形成细胞的增殖活性增加,而miR-155功能下调则会使EOLP CD4+T细胞增殖活性下降而角质形成细胞的增殖活性增加.     

系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎与OLP自身抗原的研究进展

自身免疫性疾病是一组病因未明的慢性炎症性疾病。针对自身抗原的自身抗体大量产生,自身反应T细胞、B细胞过度活化,导致多系统多器官广泛损害。因此,自身抗原的产生是引起自身免疫性疾病发生的始动因素。虽然关于引起系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎与口腔扁平苔藓的自身抗原的研究颇多,但确定的自身抗原目前仍不清楚。本文就引起系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎与口腔扁平苔藓的自身抗原的研究进展作一综述。     

槟榔碱诱导口腔角质形成细胞凋亡研究

目的:了解槟榔碱(arecoline)对体外培养的人口腔黏膜角质形成细胞(keratinocyte,KC)凋亡的影响。方法:不同浓度的槟榔碱以及在不同时间处理体外培养的KC,在荧光显微镜下观察KC凋亡形态学改变并计算凋亡百分率,用比色法检测Caspase-3活性的改变。结果:1)槟榔碱能以一定时间和浓度依赖方式诱导培养的KC发生凋亡,其细胞凋亡率较正常对照组明显增高(P<0.05)。2)槟榔碱作用KC,其Caspase-3活性较正常对照组明显增高(P<0.05)。结论:槟榔碱可诱导KC凋亡,Caspase-3可能参与了这一细胞凋亡过程的调控。KC凋亡异常可能是口腔黏膜下纤维性变的重要发病机理之一。     

口腔扁平苔藓相关细胞模型的建立

目的:建立相关角质形成细胞/T细胞共培养模型,以模拟口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)局部损害的免疫应答环境,为进一步体外研究OLP提供较可靠的细胞模型。方法:采用酶消化法培养正常口腔黏膜角质形成细胞,利用磁珠阴性分选法获取正常人外周血T淋巴细胞,共培养后,利用MTT法测定T细胞增殖,利用ELISA法测定细胞因子IFN-γ的表达。采用SAS.6.12软件包中的成组设计资料的t检验进行统计学分析。结果:表达PD-L1、PD-L2的角质形成细胞/T细胞共培养组T细胞的增殖程度比T细胞单独培养组高(P<0.05),共培养组较T细胞单独培养组IFN-γ分泌水平升高(P<0.01)。结论:表达PD-L1、PD-L2的角质形成细胞/T细胞共培养模型能在一定程度上模拟OLP局部损害的免疫应答环境。     

人胚胎干细胞源角质形成细胞用于药物毒理检测的探讨

目的 探讨人胚胎干细胞源角质形成细胞（keratinocytes derived from human embryonic stem cells, K-hESCs）用于药物细胞毒理检测反应的可行性,为建立新的生物安全性评价模型提供依据。方法 应用CCK-8法检测细胞活性和细胞毒性。观察维A酸（RA）、5氟尿嘧啶（5-FU）、地塞米松（DEX）和青霉素G（PG）对K-hESCs、人原代牙龈上皮细胞（human gingival epithelial cells, HGECs）和人永生化口腔上皮细胞系（human immortalized oral epithelial cells, HIOEC）的细胞毒性反应。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果 RA作用于HGECs、HIOEC和K-hESCs 3种角质形成细胞后,其药物半数抑制浓度（IC₅₀）分别为6.1±0.03、5.62±0.05和6.58±0.02;5-FU作用于3种细胞后,IC₅₀分别为1.65±0.02、3.00±0.02和1.72±0.04;DEX作用于3种细胞后,IC₅₀分别为113.67±0.014、328±0.002和126.17±0.05;PG作用于3种细胞后,IC₅₀分别为2200±1.34、3795±2.42和2880±1.5。4种药物对HIOEC和HGECs的IC₅₀有统计学差异（P<0.05）。对K-hESCs和HIOEC的IC₅₀差异也有统计学意义（P<0.05）,但对K-hESCs和HGECs的IC₅₀差异无统计学意义（P>0.05）。结论 在一般细胞毒性上, K-hESCs的药物半数抑制浓度比HIOEC更接近HGECs,可模拟人体正常细胞的反应。     

槟榔碱对口腔角质形成细胞端粒酶逆转录酶表达的影响

目的：观察槟榔碱对人口腔角质形成细胞（KC）端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA及蛋白表达的影响，进一步探讨hTERT在口腔黏膜下纤维性变（OSF）癌变过程中的作用机制。方法：体外培养正常口腔黏膜的上皮细胞，将实验细胞分为0．03、0．06、0．09g／L槟榔碱组、空白对照组。采用Western印迹法和RT-PCR方法观察槟榔碱对KC hTERT mRNA及蛋白表达的影响。结果：槟榔碱能呈剂量依赖性增加KC hTERT mRNA及蛋白表达，0．03、0．06、0．09g／L槟榔碱组hTERT mRNA及蛋白表达均高于空白对照组（P〈0．05）。结论：槟榔碱对KChTERT mRNA与蛋白表达有明显诱导作用，且在一定范围内呈剂量依赖关系，槟榔碱诱导KChTERT过度表达可能在OSF癌变过程中起重要作用。     

体外培养细胞机械加力装置研究进展

细胞力学是现代生物学发展的前沿领域，细胞力学研究的基础和关键是体外培养细胞机械加力装置的研制。目前已研制出多种体外培养细胞机械加力装置，按加载力的不同性质分为离心力加载装置，流体剪切力加载装置，空气液体传导静压力加载装置和基底形变加载装置四类。     

牙乳头细胞体外培养研究

在牙齿发育形成过程中,由神经嵴细胞迁移分化而来的牙乳头细胞,作为牙胚发育过程中唯一具有分化为成牙本质细胞的间充质细胞群体,扮演着重要的调节作用,受到口腔医学研究者的高度重视。由于体内原位研究的困难性,许多学者通过体外培养的方法来弥补这一缺憾。现将有关牙乳头细胞体外培养研究的资料综述回顾如下。１　牙乳头细胞培养类型和方法文献报告的牙乳头细胞体外培养主要有两种类型,一种是单层细胞培养,一种是组织器官培养。Ｋｏｌｌａｒ［１］在１９７２年就报道成功地进行了牙乳头细胞的单层培养,但未对细胞的表型特征进行描…     

免疫反应和细胞凋亡在OLP发病中的作用

口腔扁平苔藓（OLP）的病因和发病机理目前仍不明确,近几年来对其大量研究表明淋巴细胞介导的免疫反应、局部释放的细胞因子的作用以及角质细胞的凋亡在OLP的发生、发展中起重要作用。     

体外培养细胞机械加力装置研究进展

细胞力学是现代生物学发展的前沿领域,细胞力学研究的基础和关键是体外培养细胞机械加力装置的研制。目前已研制出多种体外培养细胞机械加力装置,按加载力的不同性质分为离心力加载装置,流体剪切力加载装置,空气液体传导静压力加载装置和基底形变加载装置四类。     

颌下腺细胞体外培养的研究进展

颌下腺缺失或功能丧失,可导致口干、咀嚼吞咽困难、语言等功能障碍,并引起一些继发疾病,严重影响患者的消化功能及生活质量.因此有必要通过颌下腺细胞体外培养,进而深入探讨颌下腺的生理和病理机制,为组织工程化修复重建颌下腺奠定实验基础.     

骨髓基质细胞体外培养成骨的研究进展

骨髓具有成骨潜能的现象在一百年前人们就观察到了。近年来,随着对成骨细胞来源和骨髓成骨潜能研究的深入,通过体内外培养骨髓基质细胞证实了骨髓成骨的细胞学基础是骨髓基质细胞中含有向成骨细胞系转化的骨祖细胞及基质干细胞,为临床研究及应用骨髓或骨髓基质细胞提供...     

口腔扁平苔藓的免疫发病机制研究进展

免疫因素在口腔扁平苔藓 (OLP)的发生、发展过程中占主要地位 ,目前认为OLP是一种细胞介导的、由外来抗原或改变的自身抗原导致的口腔黏膜基底角质细胞的免疫破坏性慢性疾病     

OLP损害T细胞受体β链可变区基因取用的研究

越来越多的证据表明,口腔扁平苔藓是T细胞介导的自身免疫性疾病。T细胞对特异抗原的识别主要是通过T细胞受体发挥作用。口腔扁平苔藓损害组织中T细胞受体Vβ链基因存在优势取用,而且,某些T细胞克隆呈现寡克隆增殖。这些研究成果为应用T细胞受体多肽特异性免疫调控手段治疗口腔扁平苔藓提供了理论基础。     

人牙髓细胞体外培养的方法学研究

作者观察了组织块法和酶消化法以及ＤＭＥＭ和ＲＰＭＩ１６４０二种常用培养液在人牙髓细胞体外培养中的效果。结果表明，组织块法培养出的牙髓细胞为单一的成纤维细胞样细胞，用ＤＭＥＭ时，其传代成功率明显高于用ＲＰＭＩ１６４０；胰蛋白酶消化法、胰蛋白酶和胶原酶联用可培养出成纤维细胞样细胞，少量地梭形细胞和内皮样细胞，钽细胞数量较少，生长缓慢，达不到传代要求。ＤＭＥＭ的培养板和组织培养瓶中均较适合牙髓细胞的生长     

缺氧对口腔扁平苔藓角质形成细胞增殖及缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶9表达的影响

目的 探讨缺氧对人口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)角质形成细胞增殖及缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1 α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,以期为OLP发病机制的研究提供新思路.方法 体外分离培养OLP角质形成细胞;使用密闭培养箱模拟缺氧环境,分为常氧组和缺氧组,两组细胞分别培养12、24、36及48 h,采用细胞计数试剂盒8的方法监测缺氧各时点细胞增殖状况,并确定进一步实验干预时间点,每组实验均重复3次;SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测各组细胞HIF-1α、VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平,并采用相关性分析研究VEGF、MMP-9与HIF-1α的相关性.结果 24、36、48 h缺氧组OLP角质形成细胞增殖力(A值)(分别为0.340±0.002、0.415±0.006、0.546±0.006)均显著低于同时间点常氧组(分别为0.431 ±0.001、0.620±0.004、1.022±0.005),P＜0.01; 24、36、48 h缺氧组VEGF(2.087±0.291、3.189±0.573、5.402±0.563)及MMP-9(2.936±0.500、4.083±0.300、6.374±0.858)的mRNA表达量均显著高于常氧组(P＜0.05),HIF-1α (0.414±0.093、0.751±0.056、0.875±0.040)、VEGF (0.393±0.046、0.557±0.078、0.767±0.045)及MMP-9 (0.250±0.053、0.384±0.038、0.611 ±0.092)的蛋白表达量均显著高于常氧组(P＜0.05).HIF-1α与VEGF(r =0.905,P=0.000)及MMP-9(r =0.881,P=0.000)的蛋白表达水平均呈显著正相关.结论 缺氧在一定时间内可抑制OLP角质形成细胞增殖,上调细胞中HIF-1α蛋白、VEGF及MMP-9 mRNA和蛋白的表达;缺氧环境下HIF-1α可能通过调控下游靶基因参与OLP的病情进展.     

生物标记物在OLP癌变中的研究进展

口腔扁平苔藓(OLP)是一种具有恶性转变风险的慢性口腔黏膜病,临床上判断癌变可能性的主要依据是通过病理切片来观察组织学形态,但存在主观性较强的技术瓶颈。近年来,生物标记物的发展有助于更加客观地判断OLP患者所处的疾病阶段,并预测癌变的潜在危险性,但是如何提高生物标记物的特异性和可靠性是该领域研究的难点之一。本文就近5年来生物标记物在OLP癌变中的研究进展做一综述。