阿魏酸钠对SNP诱导的凋亡海马神经元NF-кB、par-4基因表达的影响

目的 探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡及NF-кB P65、par-4基因表达的影响.方法 采用SD大鼠海马神经元原代培养,经终浓度分别为10、20、40、80、120、160 ìmol/L的SF预处理后,用50 ìmol/L的SNP处理24 h,采用MTT法检测细胞存活率,Hochest 33258荧光染色检测凋亡,Western blot及RT-PCR检测NF-кB P65、par-4基因表达.结果 不同剂量SF (10～160 ìmol/L)预处理6 h可显著提高神经元的存活率,减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象;降低NF-кB P65、par-4 mRNA及蛋白的表达.结论 SF 抑制NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡,其机制可能与降低促凋亡基因NF-кB P65、par-4表达有关.     

(-)黄皮酰胺对硝普钠诱导的海马神经元凋亡的影响

目的 探讨黄皮叶分离物（-）黄皮酰胺对硝普钠诱导的体外培养大鼠海马神经元凋亡的影响及其可能机制。方法 在硝普钠诱导体外培养的海马神经元凋亡模型的基础上，采用MTT比色分析检测细胞存活率，Western blot及RT-PCR等方法检测捌．2和bax基因表达。结果不同剂量（-）黄皮酰胺预处理6h可提高神经元的存活率，增加bcl-2的表达，降低bax的表达。结论 （-）黄皮酰胺可剂量依赖性地对抗硝普钠的神经毒性作用，其机制可能与增加抗凋亡基因bcl-2的表达，降低促凋亡基因bax表达，增高Bcl-2／Bax的比值有关。     

阿魏酸钠对SNP诱导的凋亡海马神经元NF—kB、par-4基因表达的影响

目的探讨阿魏酸钠（sodium ferulate，SF）对一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）引起的大鼠海马神经元凋亡及NF-KBP65、par-4基因表达的影响。方法采用sD大鼠海马神经元原代培养，经终浓度分别为10、20、40、80、120、160μmol／L的sF预处理后，用50μmol／L的SNP处理24h，采用MTr法检测细胞存活率，Hochest33258荧光染色检测凋亡，Western blot及RT—PCR检测NF．KBP65、par-4基因表达。结果不同剂量sF（10～160μmol／L）预处理6h可显著提高神经元的存活率，减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象；降低NF—KBP65、par-4mRNA及蛋白的表达。结论sF抑制NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡，其机制可能与降低促凋亡基因NF—KBP65、par-4表达有关。     

牛蒡子苷元抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨牛蒡子苷元(ATG)抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响。方法通过脑内注射Ⅲ型肺炎链球菌建立脑膜炎大鼠模型,并随机分为模型组、ATG低(ATG-L)、中(ATG-M)、高(ATG-H)剂量组以及ATG-H+重组高迁移率组蛋白B1(rHMGB1)组,另取正常大鼠为对照组,10只/组。治疗结束后,对各组大鼠进行神经系统评分;分离大鼠脑组织,检测其病理变化、含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及神经元细胞凋亡,同时检测HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05);ATG-L组、ATG-M组、ATG-H组小鼠神经系统评分均较模型组显著增加(均P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TUNEL荧光染色阳性细胞数量、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65均较对照组显著下降(均P<0.05);ATG-H+rHMGB1组较ATG-H组神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05)。结论ATG可抑制肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡,减轻炎症反应,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

吡格列酮对培养大鼠大脑皮质神经元氧-葡萄糖剥夺/复氧后PPARγ、NF-κB c-Rel和Bcl-xL表达的影响

目的 探讨吡格列酮(pioglitazone,PIO)对Wistar大鼠大脑皮质神经元氧-葡萄糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptors γ,PPARγ)、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)亚基c-Rel以及抗凋亡因子Bcl-xL表达的影响.方法 大鼠大脑皮质神经元体外原代培养,建立OGD/R模型,分为正常组、OGD4 h/R6 h组、OGD4 h/R12 h、OGD4 h/R6 h+PIO组、OGD4 h/R6 h+PPARγ抑制剂T0070907 (TIO)组、OGD4 h/R12 h+PIO组以及OGD4 h/R12 h+TIO组.采用蛋白质印迹法检测神经元内PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达,采用逆转录-聚合酶链反应检测神经元内Bcl-xL mRNA表达.结果 蛋白质印迹分析显示,OGD/R后PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达水平较正常组显著性增高(P＜0.01),给予PIO后PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达水平进一步增加,显著高于单纯OGD4 h/R6 h组和OGD4 h/R12 h组(P＜0.01),而给予TIO后PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达减少,显著性低于单纯OGD/R组(P＜0.05)以及相应PIO组(P＜0.01).逆转录-聚合酶链反应分析显示,OGD4 h/R6 h组Bcl-xL mRNA表达水平较正常组显著性增高(P＜0.01),PIO组Bcl-xL mRNA表达水平显著性高于单纯OGD4 h/R6 h组和OGD4 h/R12 h组(P＜0.01),给予TIO后Bcl-xL mRNA表达减少,显著性低于单纯OGD/R组(P＜0.05)以及相应PIO组(P＜0.01).结论 PIO可上调培养大脑皮质神经元OGD/R后PPARγ蛋白表达,进而增加NF-κB亚基c-Rel调控的抗凋亡因子Bcl-xLmRNA表达,这可能是PPARγ神经保护作用的部分机制.     

黄芪注射液与缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的关系

目的探讨黄芪注射液与缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因caspase-3表达的关系。方法取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5h再复氧复糖。各组于复氧复糖后0、0.5、2、6、24、48、72 h和120 h采用Western印迹检测caspase-3蛋白的表达,采用RT-PCR方法检测caspase-3 mRNA的表达。结果除0 h和0.5 h外,各时间点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元caspase-3蛋白的平均灰度值均较正常对照组明显增加(P0.05),复氧复糖24h平均灰度值最高;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时间点caspase-3蛋白的平均灰度值无明显变化(P0.05),而黄芪注射液组除0h和0.5h外,在各个时间点caspase-3蛋白的平均灰度值明显降低(P0.05)。RT-PCR结果显示:除0h和0.5h外,各时间点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元caspase-3 mRNA的平均光密度值均较正常对照组明显增加(P0.05),24h平均光密度值最高;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时间点caspase-3 mRNA的平均光密度值无明显变化(P0.05),而黄芪注射液组在除0 h和0.5 h外的各个时间点caspase-3 mRNA的平均光密度值均明显降低(P0.05)。结论黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元的凋亡作用,是通过抑制海马神经元凋亡相关基因caspase-3的表达来实现的。     

丁苯酞对大鼠海马神经元磷酸化环磷酸腺苷反应原件结合蛋白和Bcl-2表达的影响

目的探讨丁苯酞对氧糖剥夺/复氧的原代大鼠海马神经元磷酸化环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)和Bcl-2表达的影响。方法以原代大鼠海马神经元设立对照组、模型组、丁苯酞组。丁苯酞组复氧8h后应用终浓度为0.1、1、10μmol/L的丁苯酞干预,通过Western blot法检测磷酸化CREB蛋白、RT-PCR法测定Bcl-2mRNA的表达。结果与对照组比较,模型组和不同浓度丁苯酞组大鼠海马神经元磷酸CREB蛋白、Bcl-2mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,不同浓度丁苯酞组磷酸化CREB蛋白、Bcl-2mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在实验剂量范围内,丁苯酞呈剂量依赖性地抑制海马神经元的凋亡,其作用机制可能是通过上调磷酸化CREB表达,提高Bcl-2活性,抑制海马神经元凋亡。     

雷公藤氯内酯醇对拟阿尔茨海默病样大鼠海马神经元的保护作用

目的 研究雷公藤氯内酯醇(T4)对拟阿尔茨海默病(AD)样大鼠海马神经元的保护作用及可能机制.方法 应用脑立体定向技术向SD大鼠海马背侧注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35建立具有拟AD样AB沉积病理变化的大鼠模型.35只大鼠随机分为正常对照组、假注射组、模型组、T4低剂量(5μg/kg)组、T4高剂量(20μg/kg)组,每组7只.于模型制作后7 d收集脑组织标本,采用Western blot方法观察海马组织核因子(NF-κB)激活情况;酶联免疫吸附法检测海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)水平;TUNEL染色观察海马神经元凋亡情况.结果 与模型组相比,T4高、低剂量组海马组织NF-κB表达减少,TNF-α、IL-1β水平降低,凋亡神经元减少,高剂量组作用更明显(P＜0.01).结论 T4可能通过阻断NF-κB信号通路,发挥对拟AD样大鼠海马神经元的保护作用.     

依西美坦对异位子宫内膜间质细胞caspase-3表达的影响和意义

目的探讨芳香化酶抑制剂依西美坦对异位子宫内膜间质细胞半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响及其临床意义。方法体外培养正常和异位子宫内膜间质细胞.应用RT-PCR检测芳香化酶mRNA的表达.用SABC免疫组织化学法检测caspase-3的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与正常内膜间质细胞相比,异位内膜间质细胞可以利用芳香化酶合成雌激素,caspase-3表达和细胞凋亡减少(P均<0.05);依西美坦灭活芳香化酶,降低雌激素水平,caspase-3表达和细胞凋亡升高(P均<0.05);反向添加雌激素可阻断依西美坦的作用。结论caspase-3调控异位内膜间质细胞的凋亡;依西美坦增加caspase-3的表达,促进异位内膜间质细胞凋亡。     

11beta-hydroxylase and aldosterone synthase expression in fetal rat hippocampal neurons

The central nervous system produces many of the enzymes responsible for corticosteroid synthesis. A model system to study the regulation of this local system would be valuable. Previously, we have shown that primary cultures of hippocampal neurons isolated from the fetal rat can perform the biochemical reactions associated with the enzymes 11beta-hydroxylase and aldosterone synthase. Here, we demonstrate directly that these enzymes are present within primary cultures of fetal rat hippocampal neurons.     

大鼠局灶脑缺血预处理对caspase-3表达影响的研究

目的观察对比caspase-3在大鼠局灶脑缺血预处理和脑缺血再灌注中的表达。方法采用线栓法局灶脑缺血模型，ABC免疫组化方法检测caspase-3表达。结果caspase-3免疫反应阳性细胞数缺血预处理组(IPC MCAO)明显低于单纯局灶缺血组(SS MCAO)，阳性细胞呈棕褐色，清晰可辨，IPC MCAO组caspase-3蛋白阳性细胞在缺血6h表达开始增多，24h达高峰，72h下降；SS MCAO组caspase-3蛋白阳性细胞表达时相一致，但增高明显。结论缺血预处理可能通过降低caspase-3表达，对缺血引起的神经损伤起到保护作用。     

氨基胍对糖尿病大鼠视网膜神经细胞改变及caspase-3表达的影响

目的观察早期糖尿病大鼠视网膜神经细胞结构变化、caspase-3表达及氨基胍的治疗作用。方法健康成年Wistar大鼠50只,12只作为正常对照组,其他大鼠链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射建立糖尿病(DM)大鼠模型,并随机分为氨基胍治疗组及DM模型组,每组又按时间分为1、3、6个月组。透射电镜下观察视网膜超微结构改变,免疫组织化学法检测视网膜组织caspase-3蛋白的表达变化。结果电镜变化:模型1个月组内核层细胞胞质出现不均匀现象;3个月组内核层细胞核个别染色质出现浓缩现象,神经节细胞亦出现超微结构的变化;6个月组上述变化进一步加重,并可在内核层及神经节细胞层发现个别凋亡小体,氨基胍治疗组变化较糖尿病组轻微。免疫组织化学表达:模型3个月组caspase-3蛋白开始表达,主要见于神经节细胞层;模型6个月组阳性表达进一步增加,扩展到内核层。氨基胍组caspase-3表达变化规律与模型组基本一致,治疗组3个月、6个月阳性表达均分别低于未治疗组(P<0·05)。结论早期DM大鼠视网膜出现了电镜组织学改变,caspase-3参与了糖尿病视网膜病变的发病机制。氨基胍对糖尿病视网膜病变有一定的治疗作用。     

Effect of fluoride on expression of phosphorylated NMDAR protein in rat hippocampal neurons

<正>Objective To observe the expression of phosphorylated N-methyl-D-aspartate receptor (P-NMDAR) protein in hippocampal neurons of rats with fluorosis and explore the mechanism of neuronal damage caused by fluorosis.Methods Sixteen Sprague-Dawley rats within 24 h after     

Ethanol withdrawal influences survival and morphology of developing rat hippocampal neurons in vitro

BACKGROUND: Previous studies in this laboratory have shown that, like their counterparts in vivo, fetal rat hippocampal pyramidal neurons in culture develop abnormally small dendritic arbors when exposed to ethanol. This study asked whether ethanol's inhibitory effects on dendritic development differ when the duration of ethanol exposure and timing of withdrawal are varied to correspond with early versus later stages of development and whether ethanol withdrawal influences survival of these neurons. METHODS: We compared neurons exposed continuously for 6 or 14 days to ethanol (70 mM) with neurons transferred from ethanol-containing medium to control medium either 1 day after adding ethanol (before dendrites elongated) or 6 days after adding ethanol (after dendrites began elongating). We then performed morphometric and cell density analyses at 6 and 14 days using digital images of neurons immunostained with microtubule-associated protein 2 (MAP2) to visualize dendrites. RESULTS: Continuous exposure to ethanol decreased the length and number of dendrites formed but had no effect on neuron survival compared with controls without ethanol. Dendritic length was less inhibited when ethanol was withdrawn after 1 day, but the number of dendrites per cell was unchanged compared with neurons continuously exposed to ethanol. Withdrawal from ethanol at 1 day slightly enhanced the survival of neurons assessed at 14 days compared with neurons in control medium and with neurons exposed continuously to ethanol. In contrast, withdrawal from ethanol at 6 days severely decreased the number of neurons at 14 days. CONCLUSIONS: These results suggest that dendrites can achieve normal length when ethanol exposure is limited to only 1 day and withdrawal occurs before dendrites begin elongating. However, a persistent reduction in dendrite number results in smaller overall dendritic arbor size. Although continuous exposure to ethanol has little effect on neuron survival in these cultures, and exposure limited to 1 day followed by withdrawal can be neuroprotective against cell death associated with increased time in culture, longer exposure before withdrawal can trigger cell death.