e抗原阴性重症乙型肝炎患者HBV前C区热点变异研究

目的：研究HBV信号肽区热点变异与重症乙肝炎发生及转归的关系。方法：采用错聚合酶反应（PCR）和限制性片段长度多态（RFLP）分析方法检测68例HBeAg阴性的重症乙型肝炎病人（其中急性重肝6例，亚急性重肝38例，慢性重肝24例）及44例慢乙型肝炎患者的T1862，A1896变异情况。结果：急性重肝的A1896，T1862变异分别为6６．７％（４／６），０）９／６）；亚急性重肝42．1％（16／38），15．8％（6／38）；慢性重肝25．0％（6／24），16．7％（4／24）；慢性肝炎45．5％（20／44），2．3％（1／44）。重症乙型肝炎组与乙型肝炎的重症化密切相关。而A1896变异与乙型肝炎重症化进程是否有关还不能确定。     

乙肝病毒前C区基因变异对干扰素疗效影响的研究

以错配聚合酶链反应及限制性片段长度多态性分析，研究了ＨＢＶ前Ｃ区基因变异对干成素疗效的影响，在２９例接受干扰素治疗的慢性乙型肝炎病人中，有前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变者ＨＢＶＤＮＡ阴转７例（４６．６％７／１５）追踪１年内全部复发；无变异者ＨＢＶＤＮＡ阴转７例（５０．０％，７／１４），追踪未见复发，表明ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变是影响干扰素远期疗效，导致停药后复发的重要原因之一。     

101例乙肝患者HBVDNA前C区nt1896位点基因突变的研究

用错配聚合酶链反应（Ｍ－ＰＣＲ）及限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析方法对１０１例乙肝病毒感染者ＨＢＶＤＮＡ前ＣＡ我ｎｔ１８９６（Ｇ→Ａ）点突变进行检测。结果共检出１８９６（Ｇ→Ａ）点突变株感染者２９例,检出率２６．１３％。其在电性肝炎患者及肝硬化患者中的检出率明显高于急性肝炎患者中,（Ｐ〈０．０５）,在肝硬化及慢性重症肝炎患者中的检出率又高于在慢性肝炎患者中（Ｐ〈０．０１）。同时对慢性肝炎患者中检出突变的病例和未检出突变的病例进行了ＡＬＴＡＳＴ以及ＴＢＩＬ的比较,结果差别有显著性（Ｐ〈０．０５）。以上结果说明,ＨＢＶ前Ｃ区ｎｔ１８９６位（Ｇ→Ａ）变异株感染可能是导致部分病人病情加重的原因之一,与肝脏病变的活动有关。     

122例肝病患者肝内HDV,HBV感染的研究

本文对１２２例各型肝病患者用ＡＢＣ法同时检测肝内ＨＤＶ及ＨＢＶ抗原。结果显示，ＨＢｓＡｇ和／或ＨＢｃＡｇ检出率为２７．８７％（３４例），其中ＨＢｃＡｇ为１３．２２％（１６例），ＨＢｓＡｇ为１８．１８％（２２例），两者无显著性差异（Ｐ＞０．０５）．ＨＤＡｇ检出率为４．９２％（６例），这６例丁型肝炎血中均检出ＨＢｓＡｇ和抗一ＨＢｃ，为慢性肝炎．在重肝、肝硬化和肝癌患者的肝内未检出ＨＤＡｇ．说明我国肝炎病毒感染仍以ＨＢＶ为主，ＨＤＶ感染率明显低于欧美，ＨＤＶ感染与ＨＢＶ感染关系密切，ＨＢＶ感染合并ＨＤＶ感染时易使病程慢性化。     

沈阳地区乙型肝炎病毒DNA前C区变异研究

用限制性酶切片段长度多态性分析对沈阳地区７０例血清经巢式聚合酶链反应扩增ＨＢＶ ＤＮＡ阳性的乙型肝炎患者的Ｃ基因前Ｃ区１８９６位点进行分析。结果：（１）急性乙型肝有Ｃ区变异检出率为４％（１／２０），慢性迁延肝炎为２５％（５／２０），慢性活动性肝炎为３８％（５／１３），肝硬化为３３％（４／１２）；（２）ＡＬＴ升高组中，ＨＢｅＡｇ及抗ＨＢｅ均阴性患者和ＨＢｅＡｇ阴性，抗ＨＢｅ阳性患者ＨＢＶ ＤＮＡ前Ｃ     

HBV前C区1896位点变异与HBV感染者肝功能损害程度的关系

了解ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点变异与乙型肝炎病毒感染者肝功能损害程度的关系。方法：用ＰＣＲ技术，通过改变引物３’端的方法，检测ＨＢＶ感染者的前Ｃ区第１８９６位点变异株。结果：１０５例ＨＥＶ感染者中的ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点变异株总检出率为５６．２％；男性与女性患者的检出率分别为５７．０％与５００％；≤３０岁组，３１－５９岁组，≥６０岁年龄组的检率分别为６０．０％，５６．６％，２８．６％；无黄疸组，轻～中度黄疸组，重度黄疸组的检出率分别为５３．２％，６５．１％，４０．０％；在ＨＢＶ携带者、慢性肝炎（包括轻、中、重庆），重症肝炎及肝硬化患者中的检出率分别为６０．０％，５７．４％，３３．３％，７０．０％。结论：ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变株广泛存在于ＨＢＶ感染者中，而且其检出率与患者性别、年龄、ＨＢＶ感染时间长短及肝功能损害程度并无明显联系。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效评价

目的 观察拉米夫定治疗慢性乙型肝炎效果。方法 乙型肝炎患者３０例,予拉米夫定１００ｍｇ／ｄ口服,连续５２周,设置同期对照组,于治疗前后观察患者肝功能、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ等病毒复制指标。结果 治疗组第３周、２４周、５２周ＨＢＶ ＤＮＡ阴转率分别为５６．６７％（１７／３０）、８６．６７％（２６／３０）、６６．６７％（２０／３０）,第２４周、５２周ＨＢｅＡｇ阴转率分别为１６．６７％（５／３０）、２０％（６／３０）,血清丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）最终复常率６３．３％（１９／３０）。结论 拉米夫定可抑制ＨＢＶ ＤＮＡ复制,减轻肝细胞炎症,促使ＡＬＴ恢复,是治疗慢性乙型肝炎的有效药物。     

丁型肝炎病毒标志物检测的临床意义

报道在１６０例乙肝中检出３１例ＨＤＶ感染者，慢活肝、肝硬化中阳性率分别为２７．３％（２１／７７）、２５．０％（６／２４），高于慢迁肝中阳性率３．２％（１／３１）（Ｐ＜０．０５）。８例抗ＨＤＩｇＭ阳性者中ＨＤＡｇ阳性者滴度低，ＨＤＡｇ阴性者滴度高；３例抗ＨＤＩｇＧ、ＩｇＭ同时阳性者病情活动且重，单纯抗ＨＤＩｇＧ阳性者病情轻。ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ阳性中ＨＤＶ感染率分别为１９．４％（６／３１）、１０．２％（５／４９），抗ＨＢｅ阳性、ＨＢＶＤＮＡ阴性中ＨＤＶ感染率分别为３０．６％（１９／６２）、２９．３％（２２／７５），提示ＨＤＶ感染对ＨＢＶ复制有抑制作用，对肝脏慢性化起一定促进作用，抗ＨＤＩｇＭ阳性者说明肝内有ＨＤＶ复制，病情活动。     

乙型肝炎患者HBV前C区变异及临床意义

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区变异的临床意义。方法应用错配ＰＣＲ限制片段长度多态性分析,检测ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位突变。结果６２０例乙型肝炎患者ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位变异２６４例,变异率４２．５８％。在急性肝炎、慢性轻度、慢性中度、慢性重度、重型肝炎、肝硬化中,变异率分别为１２．５％、３５．０％、５５．９４％、４５．２６％、５４．７２％、４８．７６％。年龄、性别与变异无关,病程＞５年、谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、抗ＨＢｅ（＋）者变异率均明显增高。结论ＨＢＶ前Ｃ区变异与肝病严重性有一定关系。     

海力特联合病毒唑治疗慢性乙型肝炎临床疗效观察

目的　探讨海力特联合病毒唑治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法　用海力特联合大剂量病毒唑治疗慢性乙型肝炎６０例,并与６０例用一般保肝药物治疗的慢性乙型肝炎进行了观察对比。结果　治疗组总有效率为８８．３３％,明显优于对照组（７１．６２％）,（Ｐ＜０．０５）。其ＡＬＴ,γＧＴ,Ａ／Ｇ复常率分别为９０％,９５．２５％,６８．４２％,均明显优于对照组。另外对ＨＢＶ也有一定的抑制作用。ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ阴转率分别为３８．００％和３８．４６％,均高于对照组。结论　海力特联合病毒唑对改善慢性乙型肝炎患者临床症状、肝功均有较好疗效,且具有一定的ＨＢｅＡｇ,ＨＢＶＤＮＡ转阴作用。     

乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异对HBeAg含量和HBVDNA定量及肝炎病情的影响

目的　研究乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)和前C基因变异对HBeAg含量和HBVDNA定量及肝炎病情的影响。方法　通过DNA扩增、基因序列分析检测 75例慢性乙肝、 14例慢性重型乙肝和 34例肝硬化患者的血清HBVCP和前C基因序列 ,通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量 ,通过荧光定量PCR技术检测血清HBVDNA含量。结果　 (1)中度和重度慢性乙型肝炎 (CH)患者CP双变异 (nt176 2A→T和 176 4G→A)的发生率同轻度CH组比较显著升高 (分别为 6 1 3%和 6 1 1%VS 2 3 1% ) ;肝硬化组患者CP双变异发生率同CH组比较显著升高(76 5 %VS 4 8 0 % )。前C基因终止变异 (nt1896G→A)在重型乙型肝炎患者中的发生率显著升高 (71 4 % )。 (2 )双变异组和终止变异组患者HBeAg含量均显著下降 ,但后者下降更明显。双变异组的HBeAb阳性率和对照组比较无明显差异 ,但终止变异组的HBeAb阳性率同双变异组和对照组比较差异显著。终止变异联合双变异组的HBeAg含量及HBeAb阳性率同终止变异组相似。 (3)双变异组和对照组患者HBVDNA含量间无明显差异。结论　CP双变异和前C基因终止变异均影响HBeAg表达 ,但后者影响更大 ;在对病情影响上 ,前者与肝硬化发病有关 ,后者则与重型乙肝发病有关。     

Hot spot mutations of hepatitis B virus pre-C/C gene and its promotor in Chinese patients and the clinical implications

OBJECTIVE: To study if the functions of C gene and its promotor are related to the pathogenesis of hepatitis B and to describe their hot spot mutations in Chinese patients. DATA SOURCES: We have studied this subject in recent years. A mini-review is based on some unpublished works. DATA SELECTION: The sequence data of C gene and core promotor (cp) of hepatitis B virus (HBV) were analysed in the asymptomatic carriers (AsC) and the patients of hepatitis with various severity. RESULTS: Pre-C A1896 mutation occurred in 67% of anti-HBe-positive and 38% of HBeAg-positive cases. All were chronic infections. In C gene, 8 missense mutations in the segment of codon 48-60, and 28 in codon 84-101 were found, more in severe patients. The cp mutations of nt 1762 and nt 1764 occurred more in HBeAg-negative than in positive cases (49% vs 20%), and more in patients than in AsC (56% vs 10%). CONCLUSIONS: A1896 often occurred in nature infection course. The cp and clustering C gene mutations would more frequently lead to prolonged active infection and advanced liver diseases.     

慢性HBV感染患者bcp/pc区点突变模式、pres区缺失及其临床意义

目的阐明HBV(hepatitis B virus,HBV)感染患者不同临床阶段bcp/pc(basic core promoter,BCP/precore,PC)点突变模式及pres区缺失突变规律,并探讨其临床意义。方法慢性HBV感染患者180例,其中,无症状HBV携带者13例,慢性乙型肝炎者75例,HBV相关肝硬化及肝癌分别为62、30例。Qiagen法提取血清HBV-DNA,常规PCR扩增目的基因,纯化PCR产物ABI377DNA自动测序仪直接双向测序。直接测序失败者,回收目的 DNA与PMD-18T载体连接,克隆质粒双向测序。DNAStar软件包的SeqMan软件进行生物信息分析。结果 Bcp/pc区点突变包括nt1753、nt1762、nt1764、nt1776、nt1803、nt1846、nt1896。HBV携带者、慢性乙型肝炎、HBV相关肝硬化及肝癌患者nt 1762(nt 1764)点突变率分别为7.7%、68.0%、72.7%(68.0%)及90.9%(81.8%),肝癌患者G1896A突变频率占54.6%。A1762T+G1764A联合突变占36%;A1762T、G1764A、G1896A联合突变占11%;T1753A/C、A1762T、G1764A、G1896A发生率为7%。克隆测序显示,肝硬化及肝癌患者bcp区起始点A1727G点突变率分别为72%、63%。HBeAg阴性患者存在更多的基因变异(P=0.022),G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素(P<0.05)。Bcp区点突变与HBeAg阴性无明显关系。肝硬化和肝癌患者pres基因缺失突变频率最高,肝癌及肝硬化患者pres1、pres2及pres1+s2缺失频率分别为7.1%、71.4%、7.1%及41.2%、58.8%、29.4%(P<0.05)。结论 A1727G、A1762T、G1764A及A1762T/G1764A联合突变、pres缺失在HBV相关肝硬化及肝癌患者多见,可能是肝脏疾病进展的危险因素,G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素。Bcp/pc点突变及pres区缺失可能为肝癌发生的早期预测因素,值得进一步研究。     

乙型肝炎患者血清HBV前C区A1896变异的检测分析

目的了解HBsAg（＋）/HBcAb（＋）/HBeAb（＋）的慢性乙肝病人血清乙肝病毒（HBV）DNA前C区A1896的变异情况及其与临床关系。方法对所有试验对象检测肝功能指标,根据检测结果分为丙氨酸氨基转移酶（ALT）升高组和ALT正常组。用聚合酶链反应杂交（PCR-ELISA）定量检测HBV-DNA并进一步检测HBV前C区A1896位点的变异情况。结果 38例患者中有18例HBV-DNA阳性,其中15例发生A1896位点变异,变异率为83.3%（15/18）。ALT升高组的18例中,血清HBV-DNA阳性13例,阳性率72.2%,平均浓度为9.62×106（1.10×103～1.09×108）拷贝/ml,A1896变异13例,变异率为100%（13/13）。ALT正常组的20例中,HBV-DNA阳性5例,阳性率25.00%,平均浓度2.55×104（3.28×103～4.61×104）拷贝/ml。A1896变异2例,变异率为40%（2/5）。两组比较无论在HBV-DNA阳性率,还是A1896位变异率都具有统计学差异（P〈0.05）。结论 HBsAg（＋）/HBcAb（＋）/HBeAb（＋）的慢性乙肝患者存在较高的A1896变异率,ALT升高组HBV-DNA阳性率和变异率均高于ALT正常组（P〈0.05）,提示HBV A1896位点变异与肝脏病变活动加重和ALT升高有关。     

乙型肝炎病毒C基因启动子变异与基因型和肝硬化的关系

目的 研究HBV C基因启动子(CP)和前C基因变异与HBV基因型和病情的关系。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测44例慢性乙型肝炎(CH)，29例肝硬化(LC)患者的血清HBV S基因序列以确定其基因型，测定HBVCP和前C区序列以确定其变异状况。结果 (1)CP双变异(nt 1762A→T和1764G→A)的发生率肝硬化组为75．9％，慢性乙型肝炎组为45.5%，两组间差别有显著性意义(P＜0.05)。(2)LC患者的C基因型检出率为69．0%，CH患者的C基因型检出率为43.2％，二者间差别有显著性意义(P＜0.05)。(3)C基因型HBV感染者CP双变异发生率为69.2％，B基因型HBV感染者CP双变异发生率为44．1％，二者间差别有显著性意义(P＜0.05)。结论 CP双变异与C基因型密切相关，并且导致病情向肝硬化发展。     

HBV多基因位点变异与肝细胞癌相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒前C区和C基因启动子基因变异与肝细胞癌发生的关系。方法采用实时荧光PCR检测29例慢性乙型肝炎（CHB）,27例乙型肝炎肝硬化（LC）,26例HBV相关肝细胞癌（HCC）患者血清HBV前C区G1896A和BCP区A1762T／G1764A的变异情况。结果HCC组和LC组前c区G1896A和BCP区A1762T／G1764A变异率均显著高于CHB组（P≤0．005）,HCC组和LC组间无显著差异（P〉0．05）。结论乙型肝炎病毒C基因启动子和前c区基因变异与肝细胞癌、肝硬化的发生密切相关。     

基因芯片检测慢性乙肝患者HBV-DNA变异的临床研究

目的应用新型基因芯片研究乙肝病毒多点基因变异在慢性乙肝患者中的意义，为临床诊断和治疗提供依据。方法对132例慢性乙肝患者采用DNA芯片技术，检测HBV—DNA基因6个位点的变异。结果132例慢性乙型肝炎患者均存在HBV—DNA位点的变异，其中前C区1896G—A变异率为23．5％。e抗原阳性者占4．O％（4／74）。e抗体阳性者占48．3％（28／58），后者变异株显著高于前者，此突变有助于HBV逃避免疫攻击而形成慢性感染状态；前C区1814变异率为3．8％；C区启动子1762变异率为56．1％，1764变异率为53．8％，且两种变异常同时出现，与重型肝炎、肝硬化和肝癌的发生相关；P区528变异率为9．8％，552M—I变异率38．6％，552M—V变异率为10．6％，552变异与核苷类似物耐药相关。结论HBV—DNA位点变异对于判定疾病的稳定与进展有重要作用。     

慢性乙型肝炎患者IFN治疗与HBV DNA前C区变异关系的研究

目的：通过检测慢性乙型肝炎患者干扰素（IFN）治疗前后HBVDNA前C区1896位变异,探讨其与IFN治疗之间的关系。方法：采用PCR—RFLP法检测慢性乙型肝炎患者前C区1896位变异,观察IFN治疗前后变异株的变化及IFN疗效。结果：200例慢性乙型肝炎患者IFN治疗前变异株检出率为19％,IFN治疗后未检出新出现的变异株;变异株、野毒株感染的慢性乙型肝炎患者IFN治疗有效率分别为60％与50％,均显著高于对照组（P=0．007,P〈0．001）,变异株、野毒株感染的慢性乙型肝炎患者IFN治疗有效率比较无差异（P〉0．05）。结论：IFN治疗无诱导前C区1896位变异的作用;干扰素治疗变异株病毒感染的慢性乙型肝炎有效,其近期疗效与野毒株感染的慢性乙型肝炎基本相同。     

乙型肝炎病毒前-C区1896和基本C区启动子区1762、1764 双突变及YMDD变异对拉米呋啶治疗的影响

目的:研究乙型肝炎病毒前-C区G1896A突变和基本C区启动子区A1762T、G1764A双突变对拉米呋啶治疗的影响。 方法:采用直接测序法对服药前、中、后的血清标本的逆转录多聚酶区及前-C、基本C区启动子区进行检测。 结果:①前-C区G1896A和基本C区启动子区A1762T、G1764A双突变在出现治疗中病毒学反弹与未出现治疗中病毒学反弹患者间及发生血清学转移与未发生血清学转换患者间差异无显著性(P>0.05);②G1896A突变在发生YMDD变异和未发生YMDD变异的患者间差异有显著性(P<0.05),发生YMDD变异的患者很少伴有G1896A突变率低(9%);③出现治疗中病毒学反弹的患者YMDD变异增加,与未出现治疗中病毒学反弹的患者比较差异有显著性(P<0.05)。 结论:前-C区G1896A和基本C区启动子区A1762T、G1764A双突变对拉米呋啶治疗后出现的治疗中病毒学反弹和血清学转换没有影响;在G1896A突变株YMDD变异减少;YMDD变异株的出现对治疗后出现的治疗中病毒学反弹有影响;YMDD变异可能是加剧肝细胞损伤引起治疗中病毒学反弹的因素之一。