亚低温对大鼠缺血性脑损伤后SOCS3表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同时间点细胞因子信号转导抑制因子-3(supressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达情况及实施亚低温后的变化,进一步探讨亚低温的脑保护作用。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血再灌注模型,同时给予亚低温治疗。HE染色观察病理形态改变,免疫组化法检测SOCS3的表达,TUNEL法检测凋亡细胞。结果与假手术组相比,常温缺血组于再灌注3 h后SOCS3的表达开始增强,至24 h达高峰,7天时仍有表达;亚低温缺血组各时间点表达均明显高于常温缺血组(P<0.05);常温缺血组凋亡阳性细胞数随再灌注时间的延长而逐渐增多,至72h达高峰;亚低温缺血组各时间点的表达均明显少于常温缺血组(P<0.05)。结论脑缺血再灌注损伤后SOCS3的表达增强,亚低温可能通过促进SOCS3的表达发挥缺血后抗神经元凋亡的作用。     

复方丹参对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA表达的影响

为了探讨中药复方丹参对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞凋亡及Bcl-2mRNA表达的影响和保护作用,本研究采用大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术检测大鼠大脑皮层神经细胞凋亡和神经细胞Bcl-2mRNA的表达,并进行图像分析。结果显示:缺血再灌注组凋亡神经细胞主要位于缺血侧大脑皮层缺血边缘区(半暗区);缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞Bcl-2mRNA的表达在缺血再灌注2h后升高,随着缺血再灌注时间的延长逐渐增强;复方丹参保护组神经细胞Bcl-2mRNA的表达明显强于缺血再灌组(P<0.01),凋亡神经细胞数明显低于缺血再灌组(P<0.01)。上述结果说明复方丹参可通过上调神经细胞Bcl-2mRNA的表达,抑制神经细胞凋亡,减轻缺血再灌注对大鼠大脑皮层神经细胞的损伤。     

亚低温对脑缺血再灌注后大鼠海马齿状回MAP-2表达的影响

目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回微管相关蛋白(MAP-2)变化规律及其意义;探讨亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:制备大鼠缺血再灌注动物模型,将大鼠分为亚低温组、常温组、假手术对照组,分别在不同时间点断头取脑,取材前应用神经功能等级评分观察脑缺血再灌注后行为功能的恢复,连续切片作MAP-2的免疫组化染色和HE染色,应用透射电镜观察大鼠海马齿状回超微结构的改变.结果:亚低温组于4d、6d、8d神经功能评分减低与常温组相应时间点比较有显著性差异(P＜0.05);常温组缺血侧海马齿状回再灌注12h MAP-2的光密度值较假手术组明显减低(P＜0.01),4d时逐渐增强,8d达高峰,14d恢复至假手术组水平.亚低温组MAP-2各时间点(1d～6d)其光密度值较常温组明显增强(P＜0.05);亚低温组神经元超微结构损伤较常温组相应时间点明显减轻.结论:脑缺血再灌注后早期MAP-2表达减弱,后持续上升.缺血早期应用亚低温可减轻脑组织损伤,促进脑缺血后神经功能恢复,其机理可能与增强脑组织中MAP-2表达有关.     

局部亚低温对大鼠全脑缺血再灌注小脑神经细胞凋亡的影响

目的:观察局部亚低温对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡的影响.方法:采用闭塞大鼠四动脉建立全脑缺血模型,应用电镜及末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)观察常温组和亚低温组动物脑缺血30min再灌注7d小脑皮层神经细胞的凋亡情况.结果:常温组小脑皮层神经细胞电镜显示有明显形态学损伤,染色质凝聚、边集、电子密度增强,核呈新月形或不规则状,细胞体积变小,胞浆浓缩.TUNEL染色法示蒲肯野细胞凋亡明显,凋亡率为(43.08±11.27)%.亚低温组神经细胞结构损伤明显减轻,凋亡细胞明显减少,凋亡率为(11.56±3.72)%.两组有统计学显著性差异.结论:亚低温对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡有明显的抑制作用.     

大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞NOS表达与细胞凋亡及复方丹参的保护作用

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞一氧化氮合酶(NOS)的表达与神经细胞凋亡的关系及中药复方丹参的保护作用.方法:采用大脑中动脉内栓线法造模,应用原位细胞凋亡检测方法观察神经细胞凋亡,用免疫组织化学方法检测大鼠大脑皮层神经细胞nNOS、iNOS的表达并做图像分析.结果:与假手术组比较,脑缺血冉灌注2 h后缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞nNOS、iNOS表达升高,并出现神经细胞凋亡,随着再灌注时间的延长,缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞iNOS表达明显增强,凋亡神经细胞数逐渐增多,至24 h达高峰,但神经细胞nNOS的表达增强不如iNOS表达明显.复方丹参保护组神经细胞nNOS、iNOS的表达和凋亡神经细胞数明显低于缺血再灌组.结论:脑缺血再灌注后缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞nNOS的表达增强,尤其是iNOS的表达显著升高,使NO产生增加可能是介导脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一,复方丹参具有下调神经细胞nNOS、iNOS表达,减少NO生成,抑制细胞凋亡,减轻缺血再灌注对大鼠大脑皮层神经细胞损伤的作用.     

亚低温对脑缺血再灌注后大鼠海马齿状回S100β蛋白表达的影响及临床意义

目的:研究大鼠脑缺血再灌注损伤后海马齿状回S100β蛋白的变化规律,探讨亚低温对脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:采用线栓法制备大鼠缺血再灌注动物模型,将大鼠分为亚低温组、常温组,假手术对照组.分别在不同时间点断头取脑,取材前应用神经功能等级评分观察脑缺血再灌注后行为功能的恢复,连续切片作S100β的免疫组化染色,行S100β阳性细胞计数,应用透射电镜观察大鼠海马齿状回超微结构的改变.结果:常温组再灌注4d开始、亚低温组于再灌注2d开始神经功能等级评分逐渐减低,亚低温组于6d、8d、10d评分减低与常温组相应时间点比较有显著性差异(P＜0.05);常温组缺血侧再灌注1d～4d S100β阳性细胞数明显增多,4d时达高峰,此后逐渐减少,10d时降至假手术组水平.亚低温组缺血侧S100β蛋白其阳性细胞数在2d、4d、6d、8d均显著高于常温组的相应时间点(P＜0.01);亚低温组脑组织超微结构损伤较常温组相应时间点明显减轻.结论:脑缺血过程中早期应用亚低温可减轻脑组织损伤,促进脑缺血后神经功能恢复,其机理可能与增加脑组织中S100β表达有关.     

亚低温对急性脑缺血再灌注大鼠TNF-α表达的影响

目的：探讨亚低温对大鼠急性脑缺血／再灌注损伤后神经功能及缺血脑组织中TNF—α表达的影响。方法：取健康成年雄性SD大鼠150只。随机均分为假手术组、脑缺血再灌注常温组、脑缺血再灌注亚低温组；根据再灌注时间不同，每组分别于再灌注8h，24h，3d，7d，30d各处死10只大鼠，并取其缺血脑组织，其中5只用于免疫组化染色，另外5只用于RT—PCR检测TNF—αmRNA。结果：脑缺血再灌注后，TNF—α阳性细胞数在再灌注1d时即达高峰，3d后迅速下降，再灌注7d时即降到较低水平，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。TNF—α及其mRNA表达假手术组很弱，缺血再灌注后TNF—α及其mRNA在8h表达为顶峰，随后有所下降，但直到再灌注7d仍然保持相对高的表达水平，一个月基本恢复正常；其表达在亚低温组较常温脑缺血组有显著地下降（P〈0．05），但仍较假手术组高（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注损伤后TNF—α明显升高，应用亚低温可以降低TNF—α升高的程度；亚低温可以明显减少缺血再灌注后脑梗死的区域，并能明显改善缺血再灌注大鼠的神经功能。提示亚低温治疗对脑的保护作用有可能通过降低TNF—α水平来实现的。     

复方丹参对脑缺血再灌注后大鼠海马和齿状回神经细胞凋亡及Bcl-2 mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方丹参对大鼠脑缺血再灌注后海马和齿状回神经细胞凋亡及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法:采用大脑中动脉内栓线法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,应用原位细胞凋亡检测和原位杂交技术检测大鼠海马和齿状回神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA的表达并做图像分析。结果:与假手术对照组比较,缺血再灌注组凋亡神经细胞主要位于缺血侧海马CA1、CA3区,齿状回凋亡细胞较少。3个区神经细胞Bcl-2mRNA的表达在缺血再灌注2 h后升高,随时间的延长逐渐增强。复方丹参组神经细胞Bcl-2 mRNA的表达明显强于缺血再灌组,而凋亡神经细胞数明显较低。结论:复方丹参可通过上调神经细胞Bcl-2 mRNA的表达,抑制神经细胞凋亡,从而减轻缺血再灌注对大鼠海马和齿状回的损伤。     

亚低温减少大鼠短暂性全脑缺血后皮质iNOS诱导的神经元凋亡

为研究亚低温对大鼠脑缺血再灌注后皮质iNOS表达、NO产生及神经元凋亡的影响及探讨亚低温的神经保护机制,用大鼠短暂全脑缺血模型,采用Nissl染色观察存活神经元、免疫组化法检测iNOS、硝酸还原酶法检测NOx-水平和TUNEL染色结合电子显微镜观察检测凋亡神经元。结果显示:常温缺血组额叶皮质iNOS表达、NOx-水平增高,出现凋亡神经元;低温缺血组iNOS表达、NOx-水平明显低于常温缺血组,未检测到凋亡神经元。上述结果提示,脑缺血后iNOS来源的NO参与了神经元的凋亡过程,亚低温可减少大鼠短暂性全脑缺血后iNOS诱导的神经元凋亡。     

亚低温对大鼠缺血性脑损伤后JAK1-STAT1通路的作用

目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同时间点JAK1和STAT1的表达情况及实施亚低温后两者的变化,进一步探讨亚低温的脑保护作用.方法 用线栓法制做大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,同时给予亚低温治疗.免疫组化检测JAK1和STAT1的表达,Western blot检测STAT1蛋白的表达.结果 与假手术组相比,常温缺血再灌注后6 h JAK1和STAT1的表达开始增强,至24 h达高峰;亚低温缺血组各时间点表达均明显少于常温缺血组(P<0.05).结论 脑缺血再灌注损伤激活了具有促凋亡作用的JAK1-STAT1通路,亚低温可能通过抑制JAK1和STAT1的表达发挥缺血后抗神经元凋亡的作用.     

局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型NKCC1 mRNA水平的影响

目的:观察局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型NKCC1 mRNA表达水平的影响,探索局部亚低温的脑保护机制.方法:雄性Wistar大鼠50只,随机分成常温组和亚低温组.应用"线栓法"实现大鼠右侧大脑中动脉阻塞,2h后拔出线栓进行再灌注,于再灌注3h、12h、24h和72h处死大鼠.应用RT-PCR方法观察NKCC1 mRNA水平的变化.结果:与假手术亚组相比,缺血-再灌注亚组大鼠缺血区皮质NKCC1 mRNA水平明显升高,开始于再灌注3h,12h～24h达到高峰,72h开始下降,亚低温组各再灌注时间点NKCC1 mRNA水平均低于常温组中相应亚组的水平.结论:局部亚低温通过抑制缺血-再灌注过程中NKCC1 mRNA水平的上调发挥脑保护作用.     

A new method of inducing selective brain hypothermia with saline perfusion into the subdural space: effects on transient cerebral ischemia in cats

In this study, we tested brain surface cooling as a new method of inducing selective brain hypothermia, and evaluated its effects on focal cerebral ischemia using a cat model of transient middle cerebral artery (MCA) occlusion. Cats underwent 1 h of MCA occlusion followed by 5 h of reperfusion. Brain surface cooling was induced for 4 h during and after MCA occlusion in the hypothermia group, but not in the normothermia group. Brain surface cooling was performed using saline perfusion into the subdural space. Rectal temperature, brain surface temperature, and deep brain temperature were monitored, and regional cerebral blood flow (rCBF) and somatosensory evoked potential (SEP) were serially measured. After 5 h of reperfusion, water content was also measured. Although the rectal temperature was maintained at about 37 degrees C, the brain surface temperature decreased rapidly to 33 degrees C and was maintained at that temperature. For 3 h following reperfusion, the rCBF was lower in the hypothermia group than in the normothermia group. At 4 and 5 h after reperfusion, the recovery of SEP amplitude was significantly more enhanced in the hypothermia group than in the normothermia group. In the gray matter, the water content was significantly more diminished in the hypothermia group than in the normothermia group. These results demonstrate that our method is useful for protecting the ischemic brain from a transient MCA occlusion. This method may be adapted for neurological surgery.     

黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:采用线栓法构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型,取30只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和黄角颗粒组,并按分组给予相应处理。采用Zea Longa评分法对各组大鼠进行神经功能评分,TTC染色检测各组大鼠脑梗死体积百分比,HE染色观察各组大鼠脑组织病理形态,TUNEL染色法检测各组大鼠脑细胞凋亡率,Western blot检测各组大鼠脑组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠的神经功能缺损程度和神经细胞损伤程度明显加重(P0.05);脑梗死体积百分比和脑细胞凋亡率显著上升(P0.05);脑组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平显著上调(P0.05)。与模型组相比,黄角颗粒组大鼠的神经功能缺损程度和神经细胞损伤程度明显减轻(P0.05);脑梗死体积百分比和脑细胞凋亡率显著下降(P0.05);脑组织中p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平显著下调(P0.05)。结论:黄角颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活相关。     

黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响

目的:探讨黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响。方法:选取清洁级雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、脑缺血/再灌注组、溶剂对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。观察大鼠神经缺损症状,根据Zea Longa评分标准挑选模型成功的大鼠;采用TTC染色法检测大鼠脑梗死体积;尼氏染色观察大鼠神经细胞形态学变化;透射电子显微镜观察细胞自噬现象;Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达量的变化。结果:假手术组无神经缺损症状,未出现脑梗死灶,尼氏体丰富、染色均匀。与假手术组相比,脑缺血/再灌注组出现明显的脑梗死灶,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少、着色较浅,透射电镜下可见典型的自噬体,自噬标志蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ表达增加(P 0. 05)。与脑缺血/再灌注组相比,黄芪甲苷组和自噬激活剂组可明显减小脑梗死体积,神经细胞有不同程度的恢复,尼氏体稍增多,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均增加(P 0. 05);自噬抑制剂组脑梗死体积增大,神经细胞坏死严重,尼氏体减少,着色变浅,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均减少(P 0. 05);溶剂对照组无明显变化。与黄芪甲苷组比较,黄芪甲苷+自噬抑制剂组和自噬抑制剂组脑梗死体积增加,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量降低(P 0. 05)。结论:黄芪甲苷可通过激活自噬而减轻脑缺血/再灌注损伤,从而发挥神经保护作用。     

ApoE肽段预处理通过调节c-jun氨基端激酶阻抑小鼠脑缺血再灌后神经细胞的凋亡

目的:为探讨外源性载脂蛋白E(apoE)肽段对局灶性脑缺血再灌(I/R)的保护机制,观察apoE-1410拟肽对I/R小鼠脑组织磷酸化c-jun氨基端激酶(JNK)表达变化的影响。方法:实验选用160只雄性ICR小鼠,随机分为3组:假手术对照组(sham组),模型组(I/R组),apoE治疗组(apoE组),采用可逆性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,术后行神经功能评分。I/R3、6、12、24、48h行HE染色观察皮质区神经细胞的形态变化,并计算存活神经元的数目。利用WesternBlot法、免疫组织化学法检测p-c-jun的表达,行TUNEL法检测凋亡细胞数。结果:与对照组比较,模型组小鼠神经功能评分均降低,I/R12h后存活神经元数目明显减少;p-c-jun阳性反应术后3、6、12、24h显著增高(P0.05);随缺血时间延长,凋亡细胞增多,并于48h达高峰(P0.05)。与模型组比较,治疗组小鼠神经功能评分增加,各时相点p-c-jun和TUNEL表达均不同程度下调(P0.05)。I/R3h至48h皮质区p-c-jun表达与TUNEL呈正相关(r=0.716,P0.01)。结论:缺血侧皮质区p-c-jun表达的增强可诱导I/R后神经细胞凋亡;拟apoE-1410肽对I/R具有一定的治疗作用,其机制之一可能是通过抑制JNK活化实现的。     

大鼠局灶性脑缺血/再灌注后缺血脑区缓激肽含量的变化

目的研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注后缺血脑区缓激肽含量的变化。方法用线栓法制作SD大鼠大脑中动脉阻塞的脑缺血/再灌注动物模型,用免疫细胞化学法结合图像分析技术,检测缺血脑区缓激肽样免疫反应阳性物的平均光密度(A)值作为缓激肽的相对含量,比较局灶性脑缺血3h组、假手术对照组、正常对照组和再灌注30min、2h、4h、16h组缓激肽的相对含量。结果缺血脑区缓激肽样免疫反应阳性物的A值于脑缺血3h/再灌注2h后明显增高(P<0.05),随后下降至增高前水平。结论大鼠局灶性脑缺血/再灌注后,缺血脑区缓激肽含量于再灌注2h后明显增高,其可能在脑缺血后脑水肿的发生中起着重要作用。     

地塞米松对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型TNF-α和IL-1β的影响

目的:探讨地塞米松(dexamethasone,dexasone DEX)对大鼠脑缺血再灌注损伤的干预作用及其作用机制.方法:建立SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,参照改良Nagasawa大脑中动脉线栓法,随机将50只雄性SD大鼠分为5个组(n=10),分别为假手术组、脑缺血再灌注模型组、DEX注射液小剂量治疗组、DEX...     

UCF‐101, A Novel Omi/HtrA2 Inhibitor,Protects Against Cerebral Ischemia/Reperfusion Injury in Rats

The aim of this study was to investigate the therapeutic efficacy and neuroprotective mechanisms of UCF‐101, a novel Omi/HtrA2 inhibitor, following ischemia/reperfusion brain injury. Male Wistar rats were subjected to 2 hr of middle cerebral artery occlusion followed by reperfusion. Animals were divided into 3 groups: sham, vehicle‐treated ischemia/reperfusion, and UCF‐101 treatment. In the UCF‐101 treatment group, rats were intraperitoneally administered UCF‐101 (1.5 μmol/kg) 10 min prior to reperfusion. The rats were evaluated for neurological deficits, and brain infarct volume was assessed by 2,3,5‐triphenyl tetrazolium chloride. TUNEL staining was utilized to evaluate the amount of apoptosis. In addition, expressions of protein caspase‐8, caspase‐3, FasL, and FLIP were examined by Western blot analysis. Results demonstrated that UCF‐101 treatment significantly decreased cerebral infarct size by about 16.27% (P < 0.05) and also improved neurological behavior. TUNEL staining revealed that UCF‐101 treatment significantly reduced TUNEL‐positive cells in the cerebral cortex. Furthermore, the upregulation in the expression of FasL and the cleavage products of active caspase‐8 and caspase‐3 induced by ischemia was attenuated in mice treated with UCF‐101, whereas upregulation of FLIP levels was increased. The present results demonstrated that UCF‐101 protects against cerebral ischemia/reperfusion injury in mice. UCF‐101 provided neuroprotection in vivo, and this was correlated with regulation of Fas‐mediated apoptotic proteins. Taken together, the use of UCF‐101 is a potent, neuroprotective factor for the treatment of focal cerebral ischemia. Anat Rec, 292:849–856, 2009. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

高迁移率族蛋白B1对大鼠局灶脑缺血/再灌注后大脑皮质梗死周围区神经干细胞增殖的影响

 目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对局灶脑缺血/再灌注大脑皮质梗死周围区神经干细胞增殖的影响。方法：选取雄性SD大鼠48只,分为假手术组、模型组、RNA干扰组和阴性干扰组。采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,缺血1 h再灌注7 d时观测。用携带大鼠HMGB1 shRNA的慢病毒载体介导RNA干扰抑制脑内HMGB1的表达,通过免疫荧光双标记HMGB1/GFAP和Western blotting法检测RNA干扰效果。通过免疫荧光双标记5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）/神经巢蛋白（nestin）检测大脑皮质梗死周围区神经干细胞的增殖。结果：与假手术比较,再灌注7 d时,模型组大脑皮质梗死周围区HMGB1蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,RNA干扰有效抑制HMGB1蛋白的表达（P<0.05）。与假手术组比较,模型组的BrdU/nestin双标记细胞明显增多（P<0.05）;与模型组比较,RNA干扰组的BrdU/nestin双标记细胞明显减少（P<0.05）。结论：局灶脑缺血/再灌注后大脑皮质梗死周围区HMGB1蛋白表达水平升高可促进该部位的神经干细胞增殖。