低能体外冲击波对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

[目的]探讨低能体外冲击波(ESW)对体外培养鼠成骨细胞(ROB)增殖、成骨分化的作用及其细胞内信号转导.[方法]每次取6只大乳鼠,取颅盖骨细胞分2瓶培养至第3代备用.取培养第3代ROB,用0.18 mJ/mm2低能ESW不同次数(0,30,60,90,120,150次)刺激ROB,用细胞计数、MTT和流式细胞法检测R...     

高原蜂胶对成骨细胞增殖分化影响的体外实验研究

目的探索云南高原蜂胶的浸提方法,研究其对体外培养成骨细胞增殖分化的影响．方法（1）蜂胶粗品（500g）以20L95％乙醇提取,减压浓缩成2L,用乙酸乙酯（1L×5）萃取、减压浓缩得浸膏（FJ—E）56g,经硅胶柱层析（100～200目）分离,以石油醚-乙酸乙酯（90：10,80：20,60：40,10：90）洗脱．不同比例洗脱后流分经减压浓缩、干燥得到组分FJ-00（3．4g）和FJ-01（5．6g）．     

大鼠脑内成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究大鼠脑组织固有成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响，探讨合并脑外伤骨折愈合加快的可能原因。方法提取大鼠全脑、灰质、白质、垂体、肌肉、肝脏、大鼠血清等．制成匀浆提取液．体外培养大鼠成骨细胞．与空白培养液作对照观察大鼠各组织提取液对成骨细胞增殖、分化和矿化的作用。结果对成骨细胞增殖的影响：脑内灰质和白质成分较其他提取液显著促进成骨细胞增殖（P〈0．01）。其中灰质成分最为明显；对成骨细胞分化的影响：灰质，白质，血清成分对成骨细胞ALP活性的影响明显较其它各组高（P〈0．01），其中灰质成分为最高（P〈0．01）；对成骨细胞矿化的影响：肌肉组轻度抑制成骨细胞矿化结节形成（P〈0．05），其他各组无显著性差别。结论大鼠脑组织中灰质和白质能显著促进成骨细胞增殖和分化．尤以灰质为最强，但并不能明显促进成骨细胞矿化。脑外伤后脑组织内固有成分释放入血可能和合并脑外伤的骨折愈合加速有一定关系。     

低频正弦交变磁场磁力线方向对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响

目的研究磁场强度1.8mT、频率50Hz,正弦交变磁场磁力线方向对体外培养大鼠成骨细胞(ratsosteoblasts,ROB)的影响。方法原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为3组,对照组、平行组和垂直组,平行组和垂直组分别暴露在磁场中,磁场强度1.8mT、频率50Hz、磁力线方向分别与培养皿平行和垂直,30min/次/d。倒置相差显微镜下观察细胞形态;MTT法测定细胞增殖;第3d、6d、9d、12d测定碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性和钙盐沉积量;第10d进行ALP组织化学染色,第12d进行茜素红钙化结节染色;在正弦交变磁场(sinusoidal electromagnetic fields,SEMFs)处理0h、24h、48h和96h后,Real-time RT-PCR检测ALP、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和Osterix(OSX)mRNA表达平行变化。结果成骨细胞于磁场暴露处理3～4d后呈漩涡样分布;与对照组相比,磁场组均抑制细胞增殖(P<0.01或P<0.05),其中与垂直组比较平行组显著抑制细胞增殖;与对照组比较,磁场组均促进细胞分化成熟,表现为提高细胞的ALP活性,促进钙盐沉积量,增加钙化结节数量,提高ALP、BMP-2和OSX mRNA表达水平,尤以平行组最为明显。结论 1.8mT、50Hz,磁力线方向与培养皿平行和垂直放置的正弦交变磁场均抑制体外培养成骨细胞的增殖,但能促进其分化成熟,此作用与磁力线方向有关,尤以平行组促分化效果最为明显。     

大豆异黄酮对体外原代大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的 :研究大豆异黄酮对体外培养原代大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法 :采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞 ,培养液中加入不同浓度的大豆异黄酮 ,以17- β 雌二醇 (E2)作为阳性对照组 ,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶 (ALP)活性及骨钙素 (BGP)含量。结果 :与正常对照组相比 ,大豆异黄酮可增加成骨细胞数量(P<0.01) ,提高细胞的ALP活性和BGP含量(P<0.01)。除ALP外 ,这些作用均低于E2(P<0.01)。结论 :大豆异黄酮可促进体外培养成骨细胞的增殖、分化 ,其作用与雌激素相似 ,但低于雌激素     

氟化钠对成骨细胞增殖及分化影响的实验研究

观察不同剂量氟化钠(NaF)对大鼠成骨细胞增殖分化的影响。成骨细胞经酶消化法从新生24hSprague-Dawlev(SD)种乳鼠头盖骨分离得到。在10-7mol／L～5×10-4mol／LNaF中培养。用MTT测定细胞增殖,并经生化法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)及放免法测定培养液中骨钙素含量反映细胞分化。结果表明NaF对成骨细胞增殖率的影响呈双向调节,表现为小剂量NaF(10-mol／L,10-6mol／L,10-5mol／L)刺激细胞增殖,其提高增殖率分别达到11．3％、10．9％、10.6％,(P<0.05),大剂量反之,与对照组相比,10-4mol／L及5×10-4mol／LNaF降低细胞增殖率为9．6％与9．7％。细胞分化对NaF的反应表现为多样性。ALP活性的改变基本与细胞增殖率的变化相同,即小剂量刺激,大剂量抑制。然而骨钙素分泌的改变则呈单向作用,各浓度NaF均刺激细胞骨钙素分泌,其中5×10-4mo1／L组骨钙素水平最高达67.14％(P<o.05)。NaF对大鼠颅骨成骨细胞增殖的影响呈双向调节,但对细胞分化的作用成多样性。     

素尔松对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 研究中成药素尔松对大鼠成骨细胞增殖分化的影响.方法 应用不同浓度素尔松处理大鼠成骨细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,并计数绘制生长曲线;免疫组织化学染色碱性磷酸酶活性变化;茜素红S染色观察成骨细胞钙化灶的形成和变化:透射电镜观察细胞内部结构的变化.结果 镜下观察成骨细胞数量与对照组相比,随素尔松浓度加大而增多,碱性磷酸酶表达增强,钙化灶增多.电镜下观察细胞器未见明显变化.结论 素尔松能促进成骨细胞的增殖、分化;增强成骨细胞的合成代谢,促进成骨活动增加,钙盐的分泌增加.     

成骨细胞分化及增殖调控的研究进展

在骨代谢与骨改建过程中,间充质细胞在一定条件下分化为成骨细胞,使新骨生成,正常骨改建和部分骨病理性改变与成骨细胞的分化和增殖功能的关系密切。成骨细胞在分化和增殖过程中受许多全身和局部调节因子的精细调控,本文就成骨细胞分化和增殖过程调控因素的研究进展作一综述。     

鲑鱼降钙素对体外培养鼠成骨细胞增殖及IGF-I表达的影响

目的观察鲑鱼降钙素（calcitonin,CT）对离体培养数成骨细胞（osteoblast,OB）的作用,初步探讨CT对OB增殖以及胰岛素样生长因子I（Insulin-like Growth Factor-I,IGF-I）表达的影响,为促进骨修复和再生的临床治疗提供一定的理论依据。方法取新生24hSD乳鼠颅盖骨,采用酶消化法培养OB,经酶解消化后得到原代OB,进行体外培养并鉴定。将体外培养的OB用不同浓度（1×10-12～1×10-8mol/L）的CT处理,采用MTT法（噻唑蓝染色法）观察OB的增殖;Gomori钙-钻法检测碱性磷酸酶（ALP）的表达;RT-PCR方法观察胰岛素样生长因子-I（IGF-I）mRNA的表达。结果经细胞鉴定后证实其系OB;MTT法检测表明,CT浓度为1×10-12mol/L时就可以刺激OB增殖,且随CT浓度升高其增殖能力增加,呈剂量依赖关系;Gomori钙-钻法检测结果表明随着CT浓度的升高OB分化能力增强;经RT-PCR法检测表明,IGF-I mRNA可在乳鼠OB内稳定表达,半定量分析表明,随着CT浓度的升高,IGF-ImRNA的表达量逐渐增加。结论适当浓度的CT可以促进体外培养OB的增殖;部分机制可能与CT促进IGF-ImRNA表达的增加有关。     

血清血浆对成骨细胞增殖和分化的影响

目的 观察大鼠血清和血浆对大鼠成骨细胞的增殖和分化的影响。方法 取出生24h SD大鼠头颅骨,Ⅰ型胶原酶多次消化后获得成骨细胞,DMEM加10%FBS进行常规培养,同时细胞免疫荧光鉴定Col1a1的表达,传代后分别用10%血清（rat serum,RS）和10%血浆（rat plasma,RP）进行培养,分别命名为血清组和血浆组。培养24h,镜下观察细胞形态变化及检测增殖蛋白PCNA的表达;CCK8方法检测成骨细胞增殖。成骨诱导刺激1周后,检测（alkaline phosphatase,ALP）染色、ALP活性,同时定量PCR检测ALP、Runx2、Col1a1和OCN基因的表达。分化3周后,进行矿化结节染色。成骨细胞经过血清和血浆处理6h后,标记钙离子探针检测钙离子内流。结果 几乎所有的细胞均表达Ⅰ型胶原。血清组成骨细胞明显变得细长,失去成骨细胞原有的特征;大鼠血浆组的PCNA表达水平低于大鼠血清组,CCK8检测表明血清组细胞增殖速度高于血浆组细胞;大鼠血浆组碱性磷酸酶活性及染色显著强于大鼠血清组;成骨性基因ALP、Runx2、OCN和Col1a1在大鼠血浆刺激下,表达明显高于血清组。大鼠血浆组的钙离子内流和矿化结节明显优于大鼠血清组。结论 大鼠血清刺激大鼠成骨细胞的增殖,在促进成骨分化方面的作用弱于大鼠血浆的作用。     

高压氧对体外培养成骨细胞分化的影响

目的探讨高压氧治疗对成骨细胞分化的影响。方法将体外培养的成骨细胞接种于96孔培养皿中，每孔10000个细胞，正常培养3d后，改用成骨化培养基，24h后，成骨细胞接受2．4个大气压90min和1．5个大气压90min的高压氧和高压空气的治疗，每天1次，共19次。结果高压氧治疗组第3d可以检测出钙沉积的出现，而对照组直到第7d才能检测出钙沉积的出现。钙沉积分析表明，从第3d开始到第19d，高压氧治疗组的钙沉积都显著高于对照组。在成骨化培养条件下，高压空气治疗后，钙沉积没有明显增加。在高压氧治疗后的第5、9、13d进行的碱性磷酸酶的活性分析显示，高压氧治疗组的碱性磷酸酶活性也显著高于对照组。Von-Kossa染色和显微镜下观察显示，高压氧治疗增加了骨结节的形成。结论高压氧治疗能够明显刺激成骨细胞的成骨分化。     

葛根素对大鼠MSCs增殖及骨向分化中BMP-2 mRNA表达的影响

目的:通过观察葛根素(Puerarin,Pue)对骨髓间充质干细胞(marrow pluripotent stromal stem cells,MSCs)增殖和向成骨细胞(osteoblasts,OB)分化过程中BMP-2 mRNA表达的影响,从分子生物学角度探讨中药防治骨质疏松症的可能机制。方法:采用全骨髓贴壁法,提取MSCs,通过形态学观察及流式细胞仪等方法鉴定所提取的细胞。实验分为空白组、Pue组、经典诱导组。采用MTT法检测Pue最佳促增殖浓度;通过RT-PCR技术检测Pue对MSCs向OB分化时BMP-2 mRNA表达的影响。结果:MTT比色法检测示10-7mol/L、10~(-8)mol/L Pue能够促进MSCs增殖;ALP染色细胞阳性率显示10~(-6)mol/L Pue能够促进MSCs向OB分化;10~(-6)mol/L Pue能够促进MSCs向OB分化过程中BMP-2 mRNA的表达增强。结论:Pue具有促进体外培养MSCs增殖及提高其向OB分化中BMP-2 mRNA的表达能力。     

硅酸二钙离子溶出液体外促进成骨细胞早期增殖及对细胞周期的影响

目的探讨硅酸二钙涂层离子溶出液对成骨细胞早期增殖和细胞周期的影响及其机制。方法含有硅酸二钙离子溶出液的DMEM培养基作为实验组,正常DMEM培养基作为对照组,分别接种人成骨细胞株MG63细胞培养。MTT法测定细胞增殖情况;流式细胞仪测定成骨细胞G0/G1、S、G2/M期变化,并进行比较。结果与对照组比较,实验组MG63细胞增殖在各时间点增强,其中24、72h的差异有统计学意义（P〈0.05）;在48、72h,处在S期和G2/M期的细胞增多;而G0/G1期细胞降低,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;结论硅酸二钙涂层离子溶出液能加速成骨细胞周期,进而促进细胞增殖,促进新骨的形成。因此,该材料是一种较理想的生物活性涂层材料。     

接骨中药对培养成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响

目的:为比较常用接骨单味中药对体外培养成骨细胞的作用.方法:应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察常用接骨单味中药对体外培养成骨细胞的增殖、ALP表达及矿化结节形成的影响. 结果:这8个单味中药对早期增殖期的成骨细胞除当归外均无明显的促增殖和分化的作用;而当归组和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成.结论:单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖及分化的功能.     

负压培养对大鼠骨髓基质干细胞增殖及分化的影响

目的探讨负压状态培养对大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)增殖及分化的影响。方法分离SD大鼠股骨骨髓中的单核细胞,常规培养,建立负压培养模型。设对照组(压力为0),低负压组(压力为-300mmHg)和高负压组(压力为-600mmHg)。观察细胞生长状况,绘制细胞生长曲线,通过倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态结构的变化,细胞免疫化学方法检测CD31受体的表达。结果低负压组细胞生长不受影响(>0.05),倒置显微镜下发现低负压组细胞形态与对照组类似,透射电镜下发现细胞内有大量线粒体和纤维束,CD31表达增加(<0.05);高负压组细胞增殖受抑制(<0.05),倒置显微镜下细胞稀少,透射电镜发现细胞内有纤维束,并且大量线粒体肿胀,呈空泡化,CD31表达明显增加(<0.05)。结论负压培养可诱导BMSCs向内皮细胞和成纤维细胞分化,但当负压增大为-600mmHg时,细胞增殖受到抑制。     

芪归合剂对体外培养的大鼠成骨细胞的影响

[目的]通过血清药理学方法观察黄芪当归合剂(芪归合剂)对体外培养的大鼠成骨细胞生物学特性的影响。[方法]制备芪归合剂含药血清,以放射免疫法和免疫放射法检测其胰岛素样生长因子-I(IGF-I)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、I型前胶原氨基端伸展肽(PINP)和骨钙素(OC)水平。分离、培养乳鼠颅骨成骨细胞,通过形态学观察、HE染色、碱性磷酸酶染色(ALP染色)、茜素红S法、V-G法胶原染色进行培养成骨细胞的鉴定,以四唑盐比色法(MTT法)测定含药血清对成骨细胞增殖功能的影响;以放射免疫法测定培养上清液PINP、OC和IGF-I浓度;用矿化结节计数法观察含药血清对成骨细胞矿化功能的影响。[结果]含药血清IGF—I、IGFBP-3、PINP和OC水平与对照血清相比,差别无统计学意义(P>0.05)。含药血清和对照血清均可促进成骨细胞增殖,且呈浓度依赖性,但200 mL/L、300 mL/L含药血清促进成骨细胞增殖的能力高于对照血清组(分别P<0.01和P<0.05);含药血清组培养上清液PINP[(4.9±1.6)μg/L]、OC[(36.7±3.8)μg/L和IGF—I[(1 677±67)μg/L]含量高于对照血清组[分别(2.8±0.5)μg/L、(27.8±7.2)μg/L、(1 284±34)μg/L](分别P<0.05,P<0.05和P<0.01);以含药血清培养的成骨细胞形成的矿化结节数(25.8±7.8)多于对照血清组(13.3     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

神经干细胞接种密度对其增生和分化的影响

为探讨神经干细胞不同接种密度对其增生和分化的影响,取10～12周龄胎儿的大脑皮质用胰酶消化获得单细胞,分别以1×10~2/mL、1×10~4/mL和1×10~6/mL的细胞密度接种,用无血清培养基DMEM/F12、上皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和白血病抑制因子(LIF)培养;用MTT法测OD值并观察神经干细胞的存活和增生情况。从培养基中剔除生长因子,继尔以10％胎牛血清诱导分化,用免疫细胞化学(ICC)方法,研究不同细胞密度培养后神经干细胞的分化能力。结果:在1×10~6/mL细胞密度下培养,神经干细胞增生活跃,形成神经球,Nestin表达阳性,10％胎牛血清诱导后神经干细胞可分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞;低细胞密度(低于1×10~4/mL)培养不利于神经干细胞的存活和增生,血清诱导未见分化的细胞。提示:适宜的神经干细胞接种密度有利于其增生和分化。     

脑梗死大鼠原位神经干细胞的增殖和分化

目的研究成年大鼠脑梗死后原位神经干细胞的增殖和分化。方法运用BrdU标记法检测脑局灶梗死大鼠侧脑室下区(SVZ)与海马齿状回颗粒细胞层下区(SGZ)原位神经干细胞的增殖情况,运用荧光双标法检测其分化的细胞表型。结果SVZ BrdU 细胞数量于脑梗死后1 d开始升高(P<0.01),而SGZ BrdU 细胞则于梗死后4 d开始升高。SVZ与SGZ BrdU 细胞均于7 d达到高峰(P<0.01),14 d开始下降(P<0.01),至28 d后与对照组差异无显著性意义(P>0.05)。半定量显示脑梗死7 d后,SVZ与SGZ BrdU 细胞数分别较假手术组升高5倍和8倍。对原位神经干细胞分化的研究发现,脑梗死后35 d在梗死侧大脑半球,BrdU 细胞总数中约(73.5±15.7)%表达神经元细胞表型NeuN,(37.6±9.9)%表达胶质细胞表型GFAP。结论大鼠脑梗死能刺激原位神经干细胞的增殖并促进了神经再生。