应用分子杂交和免疫组化技术检测肝外组织中的HBV—DNA和HBV抗原

在9名肝炎死亡病例尸检时,采集了多种组织,以斑点分子杂交技术及Southern吸印法检测了HBV-DNA,以免疫组织化学技术检测了各种组织细胞内的HBsAg、HBcAg和HBeAg。检测结果显示除肝脏外,HBV-DNA和/或HBV抗原常见于一些重要的肝外脏器和组织,说明了HBV的泛嗜性,并且提示可能与有些病症有关。睾丸和前列腺中检测到HBV抗原和HBV—DNA值得重视,为通过性生活可以传播及通过父亲也可以垂直传播给新生儿提供了依据。HBeAg在肝外组织中的检测尚未见报道,本组资料显示在多种肝外组织细胞内都可检出,说明在肝外组织中,HBV的复制也可以是活跃的。HBeAg大多存在于细胞核内,其意义尚待进一步探讨。     

用Blot杂交技术检测11例乙肝及肝癌患者尸解多种组织的HBV—DNA

尽管嗜肝性作为乙型肝炎病毒(HBV)的生物学活性之一已得到公认,并且HBV归属于肝DNA病毒科(HAPADNAVIRIDAE),但近年来的一些动物实验和临床研究表明:除了肝细胞之外,还可在其它组织中检测到HBV抗原和DNA,包括它的复制形式。这对于研究HBV感染的慢性持续状态、受染者的免疫异常、及感染的传播途径等具有一定价值。为此,我们采用Southern blot杂交技术,对11例乙肝及肝癌患者的尸解多种组织进行了     

聚合酶链反应对单—抗HBc阳性的飞行员血清HBV—DNA的检测

用聚合酶链反应对单－抗ＨＢｃ阳性的飞行员血清ＨＢＶ携带情况进行了调查，首先用ＥＬＩＳＡ法对１８９份血清检测了ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ和抗ＨＢｃ。ＨＢｓＡｇ阳性率为４．７６％（９／１８９），抗ＨＢｓ１７．９９％（３４／１８９），抗ＨＢｃ２４．８７％（４７／１８９），聚合酶链反应检测单－抗ＨＢｃ阳性血１９份，抗ＨＢｓ阳性／抗ＨＢｃ阳性血２０份。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为３１．５８％（６／１９）和５％（１／     

聚合酶链反应在检测HBV—DNA中的价值

为探讨乙型肝炎的检出率,1997年1～6月,我们采用聚合酶链反应(PCR法)对乙型肝炎78例的血清HBV-DNA进行检测,并与乙肝病毒血清标志物(HB-VM)的检出情况(ELISA法)进行比较,以评价PCR法在监测乙肝病毒感染者中的临床意义。1　对象和方法1.1　对象　乙肝78例,男42例,女36例;年龄14～56岁,平均38.2岁。均无HAV、HCV、HDV、HEV重叠感染。1.2　方法1.2.1　HBV-DNA检测　乙型肝炎病毒基因扩增试剂盒由中山医科大学科技开发公司提供。取患者DNA血清40μl,加40μlDNA提取液后打匀,沸水浴5min,以10000r/min离心5min,取上清液2μl行P…     

应用PCR技术检测HBsAg携带者血清中HBV DNA

应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增38例HBsAg携带者和58例正常人血清中的HBV DNA特异性片段,通过与HBsAg滴度及HBV血清标志物进行对比分析,发现HBVDNA阳性率与HBsAg滴度呈正相关(r=0.981,P<0.005)与HBeAg减低、抗-HBe产生以及其后的e系统消失过程呈相应递减趋势.并且在单项抗-HBs阳性的血清中,HBV DNA检出率可达10%.     

抗—HBe和HBV—DNA阳性慢性乙型肝炎26例临床分析

近年来，随着乙型肝炎病毒（HBV）分子生物学研究的进展，尤其是HBV前C基因突变株的发现，对慢性HBV感染中e系统的临床意义有了进一步的认识。目前趋向于将慢性乙型肝炎分为两大型[1]：乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性慢性肝炎和乙型肝炎e抗体（抗-HBe）阳性慢性肝炎（异型慢性乙型肝炎acypicalchronichepatitisB）。本文就抗-HBe和DNA阳性慢性乙型肝炎26例临床分析如下。1临床资料1．1性别与年龄男性25例，女性1例，年龄23～48岁，平均29．8岁。1．2临床症状与体征乏力和食欲不振26例，关节痛5例，低热2例，蜘蛛痣24例，肝掌18例，肝…     

用原位聚合酶链反应检测肝癌石蜡包埋组织中的HBV—DNA

为研究乙型肝炎病毒(HBV)感染和肝细胞癌(HCC)之间的关系,我们建立了原位聚合酶链反应(ISPCR)并检测26例HCC石蜡包埋组织中的HBV—DNA。结果显示,HBV DNA在肝癌组织和癌旁肝组织的阳性率分别为84.6％(22/26)、91.3％(21/23)。ISPCR技术既显示了PCR技术的高敏性和特异性,又能在细胞内定位,是研究HBV与HCC关系的一项有价值的技术。     

HBV DNA疫苗诱导健康及HBV转基因小鼠细胞免疫应答

采用HBVCTL表位多肽体外刺激或冲击免疫效 (E)、靶(T)细胞 ,以观察DNA疫苗诱导健康及HBV转基因 (Tg)小鼠细胞免疫效果。结果发现 ,DNA疫苗能有效诱导健康BALB/c小鼠CTL活性 ,活性强弱与E/T比值及其上清液中IFN γ分泌水平有一定关系。HBsAg表位多肽(pp2 0 )体外刺激DNA疫苗免疫组效应细胞 ,培养上清IL 1 2释放水平 (2 1 1 3± 39 8pg/ml)明显较对照组 (86 7±2 7 1 pg/ml)高(P <0 0 5 ,t=4 4 82 )。DNA疫苗免疫HBVTg小鼠诱导CTL活性 (1 2 7%± 6 7% )较蛋白疫苗免疫对照组(1 7%±3 2 % )高(P <0 0 1 ,t=3 6 2 9) ;其效应细胞体外受 pp2 0刺激后分泌IL 1 2水平 (4 0 0± 30 1pg/ml)明显高于同期空载体免疫对照组 (3 8±3 0 pg/ml,P <0 0 5 ,t=2 376 )。采用在体电脉冲法DNA疫苗接种的 5只HBVTg小鼠中 ,于 4周时有 2只血清HBsAg阴转 ,并于 8周时出现抗 HBs阳性 ,而对照组中无一例血清HBsAg发生变化。表明HBVDNA疫苗能有效诱导健康及HBVTg小鼠细胞免疫应答 ,提示其通过增强细胞免疫功能作为抗HBV免疫治疗的可行性     

应用PCR检测4种消毒剂对HBV—DNA的灭活效果

我们应用聚合酶键反应（PCR）技术，检测碘伏、高锰酸钾、来苏尔和84消毒液对HBV－DNA的灭活效果。报告如下。材料与方法一、材料碘伏，南京大学消毒剂厂生产（批号19931204）。高锰酸钾，广东梅县锰化厂生产（批号19920201）。来苏尔，南昌医药比工厂生产（批号19921024）。84消毒液，南昌健宝防疫用品厂生产（批号19930720）。HBV－DNAPCR试剂盒，由南通宏达生物技术有限公司提供（批号19930509HBV－DNA强阳性血清，采集于住我院的慢性乙型肝炎患者。中和剂：碘伏用2．5％硫代硫酸钠，高锰酸钾用0．2％硫酸亚铁该，来苏尔用2％…     

不同肝病患者血清抗—HCV检测的意义

1989年美国加州Choo等应用分子克隆技术,成功地从受感染的黑猩猩的血液标本中获得了丙型肝炎病毒(HCV)的基因克隆,以后又相继建立了抗-HCV放射免疫试验(RIA)和酶免疫试验(EIA),极大地推进了丙型肝炎(HC)的防治和研究工作。为了了解不同肝病HCV感染情况和输血后肝炎的病因,我们对72例不同肝病患者的血清进行了抗-HCV检测,现将结果报告如下。     

原位杂交检测肝病患者肝组织中TTV DNA及其与病变的关系

采用ｃＤＮＡ探针，用原位杂交法对１５例病原不明肝炎和４４例慢性乙型肝炎肝组织标本进行ＴＴＶ ＤＮＡ检测，同时用巢式多聚酶链反应法检测其血清中ＴＴＶ ＤＮＡ，结合两组患进肝脏酶学改变、肝组织、ＨＡＩ积分以及慢性乙型肝炎中层得血清的ＨＢＶ ＤＡＮ水平进行分析。     

乙肝病毒前S1抗原、乙肝病毒血清标志物和HBV—DNA联合检测的临床应用

目的探讨乙肝病毒前S1抗原（PreS1）、乙肝病毒标志物（HBVM）与乙肝病毒DNA（HBV—DNA）检测三者之间的关系，判断乙肝病毒在体内的复制情况。方法对550例乙型肝炎患者血清，用ELISA方法检测PreS1、两对半标志物，用荧光定量PCR方法定量检测HBV—DNA并分析3者之间的关系。结果HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）的模式中，PreS1与HBV-DNA检出率分别为5213％与88．4％，HBsAg（＋）、HbeAb（＋）、HBcAb（＋）的模式中PreS1和HBV—DNA检出率分别为31．1％和47．5％，HBsAg（＋）、HBcAb（＋）的模式中PreS1和HBV-DNA检出率分别为47.3％和63．4％。结论PreS1能较好的反映HBV病毒感染及复制情况，可作为一种新的HBV血清标志物和监测指标，三者联合检测互相补充，更有助于临床疾病的诊治。     

治疗型双质粒HBV DNA疫苗的构建及其鉴定

为构建以人白细胞介素 2 /γ干扰素(hIL 2 /hIFN γ)融合基因为佐剂的治疗型HBVDNA疫苗 ,采用DNA重组技术分别构建含有HBV包膜中蛋白 (preS2 ·S)抗原和hIL 2 /hIFN γ融合蛋白的真核表达质粒即pcDNAS2 ·S和pcDNAIIF ,酶谱和测序分析表明克隆的preS2 ·S和hIL 2 /hIFN γ融合蛋白基因片段的方向、序列与预期相符。用脂质体转染试剂转染COS 7细胞 ,并用ELISA检测转染细胞培养上清中目的基因表达水平。结果显示 ,质粒转染后 4 8h达峰值 ,分别为HBsAg(P/N) =7.6 3、IL 2 =1 0 .35ng/ml、IFN γ =7.90ng/ml。以CTLL 2依赖细胞株/MTT比色法和微量细胞病变抑制法 (WISH VSV)检测pcDNAIIF转染后 4 8h培养上清中IL 2及IFN γ活性 ,结果分别为 998U/ml和 2 4 9U/ml。证明构建的重组质粒pcDNAS2 ·S和pcDNAIIF结构正确 ,在体外转染细胞其质粒得到分泌表达并保留生物学活性     

肝组织活检1839例分析

我们自1983年1月～1995年6月，共进行经皮肝穿刺活检术（肝穿）1839例，现将其临床与病理资料进行分析，以探讨临床诊断与病理报告之间的差异。回临床资料1．1一般情况全部病例均为我院因肝病而就诊的住院患者。其中男1613例，女226例，男女之比7．14：玉。年龄14～7且岁（4卫．07士12．38岁）。1．2方法大多数患者人院后半个月内，行肝穿，采用单人快速穿刺法”’。肝脏标本经10％甲醛液固定，石蜡包埋切片，常规HE染色后光镜下观察。1．3诊断标准病毒性肝炎的临床及病理标准均参照《病毒性肝炎防治方案护‘’。脂肪肝的病理诊断，目前尚…     

肝病患者血清脂蛋白及载脂蛋白的变化及意义

目的:了解血清脂蛋白及载脂蛋白在肝病中的变化及意义。方法:对151例各型肝病患者血脂、脂蛋白和载脂蛋白进行监测,与45例正常人作对比观察。结果:各型肝病血清TC、HDL-C、apoA1均明显降低,急性肝炎TG变化不明显(P>0.05),而其他肝病组显著下降(P<0.05),apoB100在急、慢性肝炎无明显变化(P>0.05),肝硬化、肝癌、重症肝炎下降显著(P<0.01)。结论:各型肝病患者血清胆固醇和甘油三酯均明显降低,尤以肝硬化、肝癌和重症肝炎为甚。载脂蛋白的变化,更能敏感的反映肝病病情的变化。     

治疗型HBV DNA疫苗的研究与应用

综述治疗型乙型肝炎病毒(HBV)疫苗研究概况,重点阐述治疗型HBV DNA疫苗研究进展、治疗乙型肝炎的依据、作用机制和与传统疫苗的比较等。同时对我们自行研制的治疗型双质粒HBV DNA疫苗的特色做了较客观的评价。     

乙型肝炎患者不同血清标志物HBV DNA的表达及意义

 目的探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBVM)表现模式的相关性.方法血清HBV DNA定量检测采用PCR ELISA法,HBVM采用ELISA法.结果在HBVM阳性的366例血清中,有199例HBV DNA阳性,占54.4%.血清HB-/ml占65.2%;HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者HBV DNA-HBc阳性者HBV DNA阳性率占95.2%,≥106 copiessAg、HBeAg、抗阳性率占29.1%,≥106 copies/ml占17.6%.结论血清HBVM阳性患者中约55.0%的血清HBV DNA阳性,且HBeAg阳性患者中HBV DNA含量及阳性率均明显高于抗-HBe阳性者;在抗-HBs、抗-HBc阳性或HBsAg阴性者血清内也有HBV DNA阳性者.     

肝病患者血清透明质酸含量检测及其临床意义

肝病患者血清透明质酸含量检测及其临床意义马清光，韩淑芳，蒋英姿１９８５年Ｉ。ａｕｒｅｎｔ等’‘’，首先报告了肝硬化时血清透明质酸（ＨｙａｌｕｒｏｎｉｃＡｃｉｄ．ＨＡ）明显升高，此后许多学者也证实’“’，并提出血清ＨＡ反映了活动性肝纤维化和肝功能衰竭，...