中国仓鼠肺细胞胞质分裂阻滞法微核试验灵敏性初探

作者测试了断裂剂与非整倍剂对细胞松驰素Ｂ诱发中国仓鼠肺细胞（ＣＨＬ）双核细胞率的影响；对诱变剂诱发常规法单核细胞，胞质分裂阻滞法单、双核细胞微核率进行比较研究。结果显示：丝裂霉素Ｃ对细胞松驰素Ｂ诱发双核细胞率有降低作用，而秋水仙素有增加作用；诱变剂诱发的双核细胞微核率并不显著高于常规法核细胞微核率。该结果胞质分裂阻滞法微核试验不能显著提高微核试验的灵敏性。作者并分析了其影响因素。     

体外双核淋巴细胞微核试验方法的改进

胞质分裂阻断微核法是一种新的致突变检测方法。首先在 1985年Ｆｅｎｅｃｈ和Ｍｏｒｌｃｙ提出细胞松弛素Ｂ(简称ＣＢ)阻断胞质分裂 ,经过 1次分裂的细胞就能形成双核细胞 ,经过 2次分裂时可形成 3个或 4个核的细胞。所以检测微核时只要统计双核细胞的微核率 ,就可剔除未经分裂和分裂 1次以上的细胞[1] 。现将此方法要点和本人的初步经验介绍如下。1　 实验部分1 1　人淋巴细胞微量全血培养方法　肝素抗凝外周血 0 6ｍｌ加 5ｍｌＲＰＭＩ 16 40完全培养液 (含 2 0 %小牛血清、青霉素10 0ＫＵ/Ｌ)用ＰＨＡ植物血凝素刺激淋巴细胞有丝分裂。…     

甲状腺素对甲亢女性患者淋巴细胞的遗传毒性研究

目的：研究甲状腺素对甲亢女性患者的遗传学毒性作用。方法：利用细胞松弛素－B抑制细胞的胞质分裂的实验方法,促使体外培养的血细胞产生双核淋巴细胞微核。结果：甲亢缓解患者的培养淋巴细胞经激素诱导和未经激素诱导两组的双核淋巴细胞的微核率相比较具有显著性的差异（P＜001）且激素诱导组有异常微核的为25例。结论：甲状腺素可诱导患者淋巴细胞的微核率升高,全血培养的双核淋巴细胞微核率能反映出甲状腺素对细胞内DNA的毒性作用。     

γ—射线诱发人淋巴细胞微核形成与细胞周期关系的初步研究

本研究用γ－射线诱发人外周血淋巴细胞微核，使用细胞周期控制、ＢｒｄＵ免疫荧光染色、松胞素阻滞胞质分裂等技术，研究淋巴细胞微核形成与细胞周期的定量关系。     

全血培养胞质分裂阻断微核(CBMN)实验方法的改进

 目的  改良全血培养胞质分裂阻断微核(cytokinesis-block micronucleus,CBMN)实验制片法及探讨细胞松弛素B(cytochalasin B,cyt-B)的最佳浓度。方法  依据常规微核试验制片法,在低渗液的温度、固定液比例和操作手法等方面改进实验方法;设置不同浓度cyt B组(4、5、6、7 μg/mL),常规外周血淋巴培养至44 h加入cyt-B,继续培养至68 h或72 h,收获细胞。按人类微核计划(HUMN Project)中的识别标准识别双核、多核细胞和微核(micronuclei,MN),确定cyt B最适浓度,并分析cyt-B对自发微核率的影响。结果  改良法所获的双核淋巴细胞的胞膜完整,边界清晰,微核易于辨认。培养72 h后,cyt B浓度≥5 μg /mL时,双核细胞比例较4 μg /mL 组显著增加(P=0.001);cyt-B浓度≥6 μg/mL时,三核以上细胞比例显著增加(P=0.01)。培养68 h后,cyt-B浓度为6 μg/mL时,双核细胞比例较高(58.4%)。各浓度组淋巴细胞自发微核率的差异无统计学意义(P=0.32)。结论  改良法选用cyt-B浓度为5 μg/mL、培养72 h或cyt-B浓度为6 μg/mL、培养68 h时收获的细胞,可获得大量双核细胞,且胞膜完整,染色清晰;cyt-B对淋巴细胞自发微核率无显著影响。     

γ－射线诱发人淋巴细胞微核形成与细胞周期关系的初步研究

本研究用γ－射线诱发人外周血淋巴细胞微核（ＭＮ），使用细胞周期控制、ＢｒｄＵ免疫荧光染色、松胞素Ｂ（ＣＢ）阻滞胞质分裂等技术，研究人淋巴细胞微核形成与细胞周期间的定量关系。结果：①Ｇ０期和Ｇ１期淋巴细胞照射组和对照组相比，微核率（ＭＮＦ）和微核细胞率（ＭＮＣＦ）均无明显变化（Ｐ＞０．０５）。②Ｓ期和Ｇ２期淋巴细胞照射组和对照组相比，ＭＮＣＦ均明显增加（Ｐ＜０．０１）。（３）Ｍ期淋巴细胞照射组与对照组相比，ＭＮＦ与ＭＮＣＦ分别增加９０多倍和７０多倍。结论：在人淋巴细胞周期中Ｓ期和Ｇ２期可形成ＭＮ，但Ｍ期是形成ＭＮ的主要阶段。     

放射治疗对鼻咽癌患者遗传细胞学损伤的初步研究

目的　评价放射治疗对鼻咽癌患者遗传细胞学的损伤。方法　对 15例病例在累积照射剂量为 0、4、10、2 8、48、68Gy时采取口腔粘膜上皮脱落细胞和外周血 ,分别用微核试验检测方法及染色体畸变方法检测鼻咽癌放疗患者口腔粘膜上皮脱落细胞、外周血淋巴细胞微核率和染色体畸变率。结果　鼻咽癌患者接受放射治疗后 ,双核淋巴细胞微核细胞数在累积照射剂量为 4Gy时就表现为明显上升 (P <0 .0 1) ,口腔粘膜上皮脱落细胞微核细胞数在累积照射剂量达到 2 8Gy时才表现出明显上升趋势 (P <0 .0 5 ) ,而未分化淋巴细胞微核数与未照射前相比没有明显差异 (P >0 .0 5 )。外周血淋巴细胞染色体畸变率在 10Gy时明显上升 (P <0 .0 1)。结论　放射治疗对鼻咽癌患者细胞有显著性遗传损伤作用。胞质分裂阻滞微核检测法和染色体畸变法是评价鼻咽癌患者遗传学损伤较为敏感的指标 ,而口腔粘膜上皮脱落细胞微核试验方法最简单 ,具有较大的应用潜力     

胞质分裂阻滞微核法的优化探讨

目的改进胞质分裂阻滞微核法(cytokinesis-block micronucleus test,CBMNT),并检验改进后的方法在微核检测中的可行性。方法培养人肝肿瘤细胞Hep G2,分别以苯并芘和二甲基亚砜为阳性对照和溶剂对照,以二溴乙腈染毒,细胞松弛素B阻滞,收集细胞,氯化钾低渗,反复固定,滴片,显微镜下阅片。结果伴随低渗时间的延长,显微镜下Hep G2细胞体积逐渐增大,胞浆染色逐渐变淡,进而细胞膜破裂和部分细胞内容物丢失。伴随传代次数的增多,Hep G2细胞出现不良的生长状态和异常的细胞生长动力学,影响微核试验的重现性。鉴于此,试验中应选择最佳低渗时间60 s和传代2代的Hep G2细胞。在改进后的CBMNT中,与溶剂对照比较,30μmol/L二溴乙腈可诱导Hep G2细胞微核率增加,核分裂指数(NDI)降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论改进后CBMNT实验体系可有效检出化学毒物的遗传毒性,适于染色体断裂作用的筛检。     

猕猴桃果汁抗环磷酰胺致突变作用及其机制

目的；研究猕猴桃果汁抗环磷酰胺（ＣＰ）的致为作用及其可能的作用机制。方法：测定大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率及肝中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性，还原型谷光甘肽（ＧＳＨ）、丙二醛（ＭＤＡ）含量。结果；猕猴桃果汁对ＣＰ诱发的大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率有显抑制作用，能明显诱导大鼠肝ＳＯＤ活性增强，以及ＧＳＨ的含量增加，降低ＭＤＡ含量。大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率与ＳＯＤ活性及ＧＳＨ含量呈明     

桑椹对环磷酰胺诱发小鼠骨髓细胞微核的抑制作用

用小鼠骨髓细胞微核试验方法，观察新鲜桑椹汁对环磷酰胺诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的抑制作用。结果发现新鲜桑椹汁具有抑制ＣＰ诱发骨髓微核率升高的作用，各实验组与阳性对照组间差异有显著性，且有明显的剂量反应关系。     

丝裂霉素C与C2-神经酰胺协同抑制人膀胱癌细胞生长及其机制的研究

目的评价丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺联合应用对人膀胱癌细胞的作用效果, 并探讨其机制。方法不同浓度丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合作用于人膀胱癌 BIU- 87 细胞后, 应用噻唑蓝( MTT) 法检测药物细胞毒性, 通过计算合用指数( CI) 分析协同作用, 流式细胞术( FCM) 检测 BIU- 87 细胞凋亡率, 吖啶橙( AO) 荧光染色观察凋亡形态学变化, Western blot 检测细胞色素 C 在细胞内分布变化, 并检测半胱天冬氨酸蛋白酶 3 ( Caspase- 3) 活性改变。结果单独应用时丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺的中效浓度分别是 159μmol/L 和 28 μmol/L, 联合用药时下降为 55 μmol/L 和 11 μmol/L, CI=0.74。丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合应用均可导致 BIU- 87 细胞出现凋亡的形态学变化。两种药物联合应用时的凋亡率高于各自单用( P <0.05) 。线粒体细胞色素 C 含量在丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合应用时均较对照组减少, 联合用药时减少最为明显, 细胞浆内细胞色素 C 含量在联合用药时增加也最为明显( P <0.05) 。Caspase- 3 活性在丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合应用时均较对照组升高, 联合用药时升高最为明显( P <0.05) 。结论丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡, 协同抑制膀胱癌细胞生长。线粒体细胞色素 C释放和 Caspase- 3 活性变化可能发挥重要作用。     

Effects of cortisone, cytochalasin B and cycloheximide on strains of Chlamydia psittaci in cell cultures

Vero and McCoy cell cultures were tested for their susceptibility to Chlamydia psittaci in the presence of several antimetabolites, such as cortisone acetate, cytochalasin B and cycloheximide. Vero cells were more susceptible than the McCoy cell cultures as demonstrated by cytopathic changes, fluorescent antibody activity, and titer of C. psittaci. Although all of the antimetabolites increased these parameters, a mixture of cortisone and cytochalasin B was the most effective.     

Smac/DIABLO Promotes Mitomycin C-induced Apoptosis of Bladder Cancer T24 Cells

Thesecondmitochondria derivedactivatorofcaspase(Smac)ordirectIAPbindingproteinwithlowpl(DIABLO),amitochondrialproteinthatisreleasedtogetherwithcytochromeCfromthemi tochondriainresponsetoapoptoticstimuli,wasrecentlyfoundtopromotecaspaseactivationbybindingandneutralizingtheinhibitorofapoptosisproteins(IAPs)[1-3].Inthisstudy,inordertoex plorethepossibilityofSmac/DIABLOasanoveltargetofgenetherapyforbladdercancer,theeffectoftheSmacexpressiononthemitomycinC(MMC)inducedapoptosisofthebladder…     

细胞松弛素B对K562细胞脱核作用的观察

目的：观察细胞松驰素B(cytochalasinB,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响。方法：以人红白血病K562细胞为细胞模型，经不同浓度的CB作用不同时间（4-48h），通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变。细胞计数法绘制细胞不同条件下的生长曲线。结果：细胞形态发生显著变化，处理组细胞出现不同程度的脱核，细胞生长受到显著抑制。结论：CB对K562细胞的脱核作用与其浓度呈正相关，随作用时间延长而增强；秋水仙素有显著提高CB诱发细胞脱核的作用；CB对细胞的增殖能力有显著抑制作用。     

三分群血细胞分析仪显微镜复检标准探讨

目的比较三分群血细胞分析仪和显微镜下白细胞分类结果,探讨三分群血细胞分析仪中间细胞群(mononnuclear,Mo)的显微镜复检标准,以保证血液常规的检验质量。方法应用KX-21三分群血细胞分析仪和普通光学显微镜分别对302例临床血液常规标本进行白细胞分类,并进行对比分析。结果Mo<8%时,仪器分类结果与显微镜分类结果无显著性差异,且有良好的相关性。Mo>8%时,仪器分类结果与显微镜分类结果有显著性差异,其中有8.6%的标本显微镜分类出现异常情况。结论三分群血细胞分析仪仅作为白细胞分类的初筛,尚不能完全替代人工显微镜分类方法。临床应用中引入显微镜复检标准,可为临床提供有价值的诊断信息。     

B淋巴细胞膜表面IgM在抗原提呈中的作用

Previous studies showed that both resting and lipopolysaccharide activated B cells were very effective accessory cells and antigen presenting cells in T cell responding to mitogens and antigens. This paper discusses the role of B cell surface IgM in antigen presentation. Splenic B cells obtained from C57BL/6 mouse were depleted of macrophages, dendritic cells and T cells. The purified B cells were prepulsed with sheep anti-mouse IgM antibody (SaM) at 4 degrees C for 60 min or with tetanus toxoid antigen (TT-Ag) at 37 degrees C for 12 h before pulsing with TT-Ag or SaM. Then B cells (2 x 10(5)/well) were used as antigen presenting cells without further addition of TT-Ag in TT-Ag primed T cells (2 x 10(5)/well, obtained from TT-Ag immunized C57BL/6 mouse lymph node) proliferation. The results showed that antigen presentation of B cells prepulsed with SaM before pulsing with TT-Ag was blocked. But if B cells were preincubated with TT-Ag before pulsing with SaM, antigen presentation of B cells was not blocked by SaM. These results have suggested that B cell surface IgM can take up antigen and can present the antigen to antigen specific T cells. It has also been revealed that B cell surface IgM by taking up antigen plays an important role in antigen presentation. Also, the biological significance of the role on B cell surface IgM in antigen presentation is discussed.     

慢性丙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的检测

应用单克隆抗体和ＡＰＡＡＰ法对３５例慢性丙型肝炎患者的外周血Ｔ淋巴细胞亚群的分布进行了检测。结果表明慢性丙肝患者ＯＫＴ＿３￣＋细胞与正常对照无显著差异，而ＯＫＴ＿４￣＋、ＯＫＴ＿８￣＋细胞及ＯＫＴ＿４／ＯＫＴ＿８比值均低于正常对照。结果还表明ＨＢｓＡｇ阴性的丙肝患者细胞和ＯＫＴ＿４／ＯＫＴ＿８比值明显低于正常对照，而ＯＫＴ＿８￣＋细胞差别不显著。合并ＨＢｓＡｇ阳性的丙肝患者ＯＫＴ＿４￣＋、ＯＫＴ＿８￣＋细胞均显著低于正常对照和慢性活动性乙型肝炎患者，而ＯＫＴ＿４／ＯＫＴ＿８比值的差异则不显著，ＯＫＴ＿８￣＋细胞还显著低于ＨＢｓＡｇ阴性的丙肝患者。提示慢性丙型肝炎患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群分布存在明显的失衡现象；合并ＨＢｓＡｇ阳性对ＯＫＴ＿８￣＋细胞有明显影响。