复合质控血清研制及临床应用评价

目的制备乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)、丙型肝炎病毒(HCV)抗体、人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体弱阳性对照复合质控血清,用于日常室内质量控制。方法用HBs Ag、HCV抗体、HIV抗体阳性血清分别与健康人血清进行倍比稀释,选S/CO在2~3之间的稀释度制备室内质控血清。结果自制的复合质控血清变异系数(CV)在15%以内,有很好的稳定性、精密度。结论自制复合质控血清能作为HBs Ag、HCV抗体、HIV抗体实验室检测的弱阳性室内质控血清。     

ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照室内质控血清的制备和保存

目的 制备ELISA法检测HIV抗体室内质控血清并探讨其保存方式.方法 对HIV抗体阳性混合血清进行倍比稀释,选S/CO值2～3之间的稀释度制备室内质控,分装后分别保存于4℃和-20℃冰箱中备用.结果 两种保存方式的质控血清连续测定3mo并绘制质控图,-20℃冻存质控品结果稳定,4℃保存质控品,第一月稳定,第二、三月出现明显失控.结论 自制HIV抗体弱阳性血清作为室内质控是可行的.     

初筛实验室抗-HIV临界值质控血清的制备及应用

目的掌握抗-HIV弱阳性外部对照质控血清(临界值质控血清)的制备方法。方法用抗-HIV抗体阴性的血清倍比稀释试剂盒中的抗-HIV阳性对照血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各稀释度血清,计算s/A值。依据所需外部对照质控血清的抗-HIV强弱来确定某一稀释度为配制稀释度,按配制稀释度的年需求量来配制抗-HIV弱阳性外部对照质控血清。结果采用倍比稀释法可获得均匀、无菌、稳定的抗-HIV弱阳性外部对照质控血清。结论倍比稀释法是制备抗-HIV弱阳性外部对照质控血清质控物经济方便、快捷、可靠的方法。     

HIV抗体外部对照质控血清的制备及评估

目的 制备HIV抗体弱阳性外部对照质控血清并进行评估.方法 利用HIV抗体试剂盒中的阳性对照与正常人血清按一定比例混合,制备质控血清.ELISA法进行质控效果和稳定性检验.结果 ①在室内质控方面:自制质控血清与万泰公司质控血清有相似的效果.②稳定性检验:质控血清在4℃保存至少稳定2 mo,室温保存稳定1 mo,-20℃冻存至少稳定1 y.③反复冻融和加入硫柳汞对检测结果没有影响.结论 质控血清制备方法简便,易于保存,从质控效果和稳定性两方面评估符合国家质控物要求,可用于HIV抗体检测的室内质控.     

巨细胞病毒IgM抗体自制室内质控血清的应用及评价

目的自制巨细胞病毒IgM抗体(HCMV-IgM)弱阳性外部对照质控血清,评价其临床应用的可行性。方法收集我院HCMV-IgM抗体阳性血清分别与健康人血清混合进行倍比稀释,选择S/CO在1.5~3之间稀释度制备室内质控血清,连续检测20批次,采用"即刻法"分析检测结果,20批次后结果绘制Levey-Jennings质控图,监测室内质控动态。结果自制HCMV-IgM质控血清与北京贝尔有限公司提供的质控血清,两者结果进行对比,CV值比较无统计学差异(P0.05),自制HCMV-IgM质控血清变异系数(CV)均小于20%,稳定性符合国家质控物要求。结论自制HCMV-IgM质控血清有很好的稳定性和精密度,可作为实验室检测HCMV-IgM抗体的室内质控血清。     

乙肝表面抗原室内弱阳性质控物的制备及其应用评价

目的制备长期使用且稳定性好的HBsAg室内弱阳性质控血清。方法以小牛血清磷酸盐缓冲液按不同稀释倍数1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32等比例梯度稀释HBsAg阳性血清;以2种厂家提供不同批号的检测试剂,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法对HBsAg阳性质控血清进行连续6个月检测,以此对HBsAg阳性质控血清稳定性进行评价。结果以吸光度值/临界值(S/CO)1.0~3.0为参考标准,确定该实验室HBsAg阳性质控血清的最佳稀释度为1∶8[其S/CO值为2.42,变异系数(CV)为4.72];且该质控血清在不同试剂使用稳定性较好(其S/CO范围为2.41~2.82,CV范围为4.24%~8.68%);HBsAg阳性质控血清连续6个月检测结果CV范围为8.71%~9.86%(CV10%)。结论自制HBsAg质控血清具有很好的稳定性和精密度,可作为临床常规HBsAg检测中的室内质控血清。     

酶联免疫吸附试验0.5倍临界值阴性质控物的自制与评价

目的 配制酶联免疫吸附试验(ELISA)测定的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗HIV)、梅毒螺旋体抗体(抗TP)、丙型肝炎病毒抗体(抗H CV)0.5倍临界值左右的阴性质控物,并对其均一性和稳定性进行评价.方法 对弱阳性质控物进行倍比稀释,取吸光度值/临界值(S/CO值)在0.5倍临界值左右的稀释水平作为阴性质控物的目标水平,以此制作阴性质控物.阴性质控物均一性评价:每批次抽检20个质控物,均分为两组,对其S/CO值进行单因子方差分析.稳定性评价:将分装的自制质控物置于-70℃以下冰箱冻存1、3、6个月,按期随机取出10份进行检测,将其S/CO值与均一性评价结果进行比较.结果 阴性质控物的目标水平分别为HbsAg 0.06 IU/mL、HbsAb 5 mIU/mL、HBeAg 0.3 NCU/mL、抗HCV 0.1 NCU/mL、抗HIV 0.05 NCU/mL、抗TP 0.7 mIU/mL.均一性评价:两组6项阴性质控物检测数据比较,差异无统计学意义(P>0.05),均一性评价通过.稳定性评价:6项阴性质控物第1、3、6个月的S/CO值与均一性评价结果比较,第1、6个月的差异无统计学意义(P>0.05),第3个月的差异有统计学意义(P<0.05),稳定性符合要求.结论 自制的HbsAg、HbsAb、HBeAg、抗HCV、抗HIV、抗TP阴性质控物的均一性和稳定性均符合ISO15189:2012质量管理体系CNAS-CL02-A004《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》要求,可用于临床实验室的质量控制.     

艾滋病抗体初筛室内质控分析

目的提高HIV抗体检测工作质量,保证HIV抗体初筛实验室检测结果的准确性.方法 用ELISA法检测HIV抗体,对弱阳性质控血清的S/CO值绘制质量控制图.结果 通过HIV抗体检测室内质量控制工作,可以发现检测过程中出现的如水浴箱温度失控,加样不准等一些问题,及时分析和解决.结论 弱阳性外部对照质控品S/CO值可监控HIV抗体初筛实验的重复性和稳定性,对监测实验室结果的准确性和可信度方面起了重要作用.ELISA检测手工操作步骤比较多,操作细节都对实验结果有很大影响,因此需要规范实验操作,并严格按照要求进行.     

自制人类免疫缺陷病毒抗体等质控血清及室内质控方法建立研究

目的用人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体阴性血清梯度稀释HIV抗体酶联免疫试剂盒中阳性对照,制备室内质控血清。建立艾滋病酶联免疫检测的室内质控方法。进行方法可靠性和质控血清稳定性的评价,同时比较两个厂家生产的HIV抗体试剂盒进行自制质控血清室内质控结果以及自制丙型肝炎抗体、乙型肝炎表面抗原血清的室内质控结果的评价。方法将自制的HIV质控品与卫生部HIV质控品按照HIV抗体检测的SOP文件用HIV抗体试剂随患者进行检测,每天测定吸光度,计算S/CO値。连续检测20次计算S/CO值和s,以x±2s为控制限,以x±3s为失控限绘制质量控制框架图。每天随患者标本各加入1份自制质控品和1份卫生部购质控品进行质控将其各自的S/CO描在质控图上,应用多规则质量控制原则分析以发现当天测定批的误差以及误差原因。控制每批次检测的重复性,观察试剂盒间的差异进行两种质控血清质控结果的比对研究。结果自制HIV抗体质控血清方法科学可靠,减少了基质效应,能确保结果的准确性和可靠性。结论稀释阳性对照制备质控品,建立酶联免疫室内质控方法也适用于乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体等其他免疫项目的酶联免疫室内质控。不同厂家试剂用自制质控品进行质控结果无差异。     

PCR测定乙型肝炎病毒DNA弱阳性质控血清的适用性研究

为确定目前国内PCR测定乙型肝炎病毒 (HBV)DNA弱阳性质控血清的浓度水平 ,将已知浓度的 10倍系列稀释的 5份质控血清寄发给全国 91个临床和试剂生产厂家实验室 ,让其以室内常规方法检测 ,回报测定结果由我处统计分析。结果表明 ,目前全国PCR测定HBVDNA灵敏度不高 ,当样品HBVDNA含量低于 5× 10 5拷贝 /ml时 ,大部分实验室 (5 6 0 % )测不出来 ,不同厂家试剂对上述样品的检出差异较大。因此 ,目前国内PCR测定HBVDNA弱阳性质控血清的浓度以 10 5拷贝 /ml为宜     

抗链球菌溶血素O抗体及类风湿因子试验中液态弱阳性质控血清的研制

目的　研制抗链球菌溶血素 O抗体 ( Antistreptolysin- O antibody,ASO)、类风湿因子 ( Rheuma-toid factor,RF)胶乳凝集试验中液态弱阳性质控血清。方法　根据试验选定 ASO、RF胶乳凝集试验中液态弱阳性质控血清的稀释滴度 ,乙二醇防冻的最终浓度。用统计学处理 ,观察液态弱阳性质控血清的瓶间差。结果　 ASO、RF阳性血清稀释度分别为 1∶ 4和 1∶ 1 6,乙二醇防冻的最终浓度为 2 0 % ( v/v) ;室温、4℃、- 2 0℃存放时间分别为 2 mo、6mo和 1 y;各瓶间测定结果无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。结论　建立了ASO、RF胶乳凝集试验中室内质量控制用液态弱阳性质控血清的制备方法 ,同时按设计的方法制备不同浓度的质控血清可应用到室间质量评价活动 ,具有推广应用的前景。     

介绍一种RPHA测HBsAg的稀释液

检测HBsAg 的RPHA 常规所用稀释液为含0.5%正常兔血清的pH7.2 0.01mol/L PBS.由于基层实验室较难获得正常兔血清,我们用含0.3%鸡蛋清、0.5%吐温80的PBS(每100ml 中加100g/L NaN_3 0.5ml)作稀释液,经对23份HBsAg 阳     

自制HIV抗体外部对照质控血清探讨与评估

目的:自制HIV抗体质控血清并评估.方法:利用HIV抗体试剂的阳性对照与正常人血清按比例混合制备质控血清.ELISA法进行质控效果和稳定性检验.结果:与万泰公司质控血清有相似的效果.结论:质控血清制备方法简便,易于保存,质控效果和稳定性评估符合国家要求,可用于HIV抗体检测的室内质控.     

用香红O染色的抗原微量凝集试验检测布氏菌抗体

本文介绍用番红O(Safranine O)染色的抗原微量凝集试验(MAT)来检测布氏菌抗体,并与试管凝集试验(TAT)作了比较。 TAT是检测人体抗布氏菌抗体的应用最广泛的试验方法。使用的抗原浓度是,将原液用0.5%石碳酸盐水作1∶50稀释。将血清在含0.85%盐水的试管内作2倍稀释,从1∶10稀释开始,至1∶5120为止,包括已知高、低滴度和阴性参考血清对照。每管含0.5ml稀释血清,加入等量的1∶50稀释抗原(0.5ml),混匀后置37℃水浴孵育48小时,观察结果。 MAT法系采用Ganltney等改良法使用的抗原浓度是将原液用pH7.2的磷酸盐缓冲盐水(含最终浓度为0.005%的番红O)作1∶50稀释。番红O-磷酸盐缓冲盐水稀释液是取1 ml 0.5%番红O水溶液     

溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体的影响

目的:探讨溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体的影响.方法:制备HIV抗体阴性非溶血和配对溶血(Hb 2～7 g/L)血清48份.另制备HIV抗体阴性非溶血和重度溶血(Hb 80 g/L)血清1份、HIV抗体阳性非溶血和重度溶血(Hb 108 g/L)血清1份,用HIV抗体阴性血清对HIV抗体阴性重度溶血血清、HIV抗体阳性非溶血和配对重度溶血血清进行倍比稀释,得到不同溶血程度的样品.测定HIV抗体,检测溶血及不同溶血程度对HIV抗体的影响.结果:48份HIV抗体阴性非溶血和溶血血清比较,差异无统计学意义(t=0.078,P=0.938);对HIV抗体阴性重度溶血倍比稀释血清的A值和Hb浓度做相关性分析,两组间无相关性(r=-0.382,P=0.221);对HIV抗体阳性溶血、非溶血倍比稀释血清的A值进行比较,差异无统计学意义(t=0.236,P=0.817).△A(溶血血清A-非溶血血清A)与Hb浓度作相关性分析,两组间无相关性(r=0.149,P=0.644).结论:溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体无影响.但是如果试剂反应孔包被、封闭的质量差可能引起Hb的非特异吸附而造成假阳性,故日常工作中要尽量避免样品溶血,严格按照全国艾滋病检测技术规范操作.     

HIV抗体弱阳性外部对照质控血清的制备及应用

获得性免疫缺陷综合征（AIDS）是一种由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的传染性疾病。随着AIDS患者的不断增多，国家对AIDS的监测越来越重视。为加强全国HIV抗体检测工作的质量控制，确保检测结果的准确性和可靠性，按照全国AIDS检测技术规范，每次试验必须包含内部对照质控血清和外部对照质控血清，以外部对照质控血清进行室内质量控制。外部对照质控血清价格昂贵，基层医院又很难得到HIV抗体阳性标本而自制。我们根据工作中的实际情况，利用HIV抗体试剂盒中的阳性对照制备了HIV抗体弱阳性外部对照质控血清，经过2年的应用，效果满意。     

双对数曲线在制备抗-HIV弱阳性外部对照质控血清中的应用

目的 应用双对数曲线制备ELISA试验中抗-HIV弱阳性外部质控血清.方法 用抗-HIV阴性的血清倍比稀释试剂盒中抗-HIV阳性对照血清,用ELISA法检测并计算各稀释度血清的S/CO值.以稀释倍数的对数为横坐标,以相应S/CO值的对数为纵坐标进行线性回归,制作双对数曲线.结果 由所得双对数曲线可反推出所需S/CO值弱阳性质控血清的稀释倍数,可按此稀释倍数配制所需质控血清.结论 与单一倍比稀释法相比,将双对数曲线应用到抗-HIV弱阳性质控血清的制备中,可更加快速、简便、可靠地制备出所需弱阳性质控血清.     

EDTA-K2对双抗原夹心ELISA检测HIV抗体的影响

目的探讨乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)对双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的影响。方法用HIV抗体阴性和阳性静脉血分别制备EDTA-K2浓度为1.5、2.5、5、10、15、20、25、30、35、40 mg/mL的抗凝血并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,测定各样本HIV抗体,读取吸光度(A)值,对A值与EDTA-K2浓度进行相关性分析;制备EDTA-K2最终浓度分别为1.5、2.5、5、10 mg/mL的HIV抗体阳性和阴性抗凝血各20份并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,平行测定各样本HIV抗体,血浆与血清样本进行配对t检验。结果 EDTA-K2浓度与HIV抗体阴性样本A值无相关关系(P=0.933),与HIV抗体阳性样本A值呈明显负相关(P<0.01);当EDTA-K2≥5 mg/mL时,HIV抗体阳性血浆样本A值明显低于血清样本(P<0.01),当EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,血浆与血清样本A值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论EDTA-K2对HIV抗体阴性样本测定无干扰;血浆EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定无干扰,EDTA-K2≥5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定呈明显负干扰。     

四川省30个血站2000年度HIV抗体检验室间质评

HIV抗体检验室间质量评价是主持单位发放HIV抗体质控血清,对参加的各实验室进行HIV抗体检验质量考评。本质评组于2000年度对四川省30个血站每季度发放一套抗-HIV-1室间质控品,每套含质控血清3份(包括HIV-1抗体阳性和阴性)。要求各血站在收到质控品后,尽快将质控血清随同常规检验的献血者血清标本一起检测,并将结果按表格规定填写完整后,尽早将表格寄回主持单位,以便进行室间检验质量评价。四川省30个血站在2000年度获得满分的占60％(18/30),其他血站未获得满分有多种原因,其中操作技术和试剂质量问题是重要因素。     

人类免疫缺陷病毒抗体检测的质量控制

目的探讨影响人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测结果质量的因素,采取质控措施,保证其检测结果的准确性与可靠性。方法将HIV抗体阳性血清稀释至OD/CO值为1.5～2.5,以此作为室内外部对照质控血清,检测中加入该血清,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定。结果20次检测OD/CO值的平均值(x)为2.620,标准差(s)为0.846,x±2s为0.928～4.316。结论在20次测定中出现1次失控,6次漂移。通过查核原因及更换检验人员,严格质控措施,使误差减少到允许的最低范围,提高了结果的准确性与可靠性。