无菌大鼠与普通大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的比较

微核率是检测各种理化因子诱发染色体断裂损伤或影响细胞正常分裂中染色体行为的常用实验方法。由于实验条件的限制,生物因子对微核率影响的研究报道很少。本实验采用遗传背景和生活条件均相同的无菌大鼠和普通大鼠做对比实验(无菌大鼠由本所悉生生物室培育),以探求生物因子对骨髓嗜多染红细胞微核率的影响和无菌动物用于检测环境致突变理化因子的可能。实验分4组:(1)无菌大鼠10只;(2)无菌大鼠—丝裂霉素C(Japan)6只;(3)普通大鼠7只;(4)普通大鼠—丝裂霉素C6只。丝裂霉素C以4mg/kg腹腔注射,24小时后取骨髓细胞,用大鼠血清混匀,涂片,Giemsa染色取计数微核率:(1)无菌大鼠3/10000;(2)无菌大     

蛇床子素对碘海醇所致大鼠急性肾损伤的保护作用及可能机制

目的 观察蛇床子素对碘海醇所致肾损伤的保护作用,探讨mTOR/p70S6K信号通路的调控机制.方法 40只SPF级SD大鼠随机分为4组,分别为对照组、模型组、蛇床子素低、高剂量组,每组10只.利用静脉注射碘海醇(3g/kg)建立急性肾损伤模型,肾损伤3d后生化检测大鼠血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)的变化;ELIS...     

抑制TRAF6的E3泛素连接酶活性减轻野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重构

目的：探讨抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的E3泛素连接酶活性对野百合碱（MCT）诱导的肺动脉高压（PH）大鼠肺血管重构以及相关信号通路的影响。方法：采用随机数字表法将42只SPF级健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠分为4组：对照组（n=6）、MCT模型组（n=15）、C25-140(TRAF6特异性E3泛素连接酶活性抑制剂)组（n=6）和MCT+C25-140组（n=15）。MCT及MCT+C25-140组大鼠于实验开始时颈后皮下单次注射MCT60 mg/kg,建立PH模型,其他2组大鼠皮下注射5%DMSO作为对照。C25-140组及MCT+C25-140组大鼠于第14天、21天和28天腹腔注射9.8 mg/kg C25-140。第28天行超声心动图检测评估大鼠肺动脉压力和心室收缩力变化,之后对大鼠进行安乐死并取肺组织。通过HE染色和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色评估大鼠肺血管形态;采用免疫共沉淀检测大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中信号转导及转录激活因子3(STAT3)的K63泛素化水平;Western blot检测大鼠肺组织中TRAF6、S...     

HIE幼龄大鼠神经元自噬诱导线粒体功能障碍的研究

目的:探讨细胞自噬对缺氧缺血性脑病(HIE)幼龄大鼠神经元线粒体功能的影响。方法:随机选取10日龄SPF级SD大鼠30只,分为假手术(sham)组和HIE组,后者结扎单侧颈总动脉复制缺血缺氧模型。取脑组织行镜下病理观察,免疫组化分析活化型caspase-3和LC3B-II蛋白表达;体外实验中观察缺氧诱导的原代大鼠神经元的自噬过程,Western blot检测相关蛋白,并对大鼠神经元线粒体功能进行测试。结果:(1)与sham组相比,HIE组大鼠出现脑萎缩和脑室增宽;HIE组免疫组化显示活化型caspase-3和LC3B-II蛋白表达上调(P<0.01);(2)体外细胞实验发现,缺氧可诱导大鼠神经元出现自噬和凋亡;(3)与sham组相比,单纯缺氧的神经元内活性氧簇增加,线粒体超氧化物上调,线粒体跨膜电位降低(P<0.01)。结论:在HIE大鼠模型中,缺氧诱导的神经元线粒体功能障碍,可能与缺氧时神经元出现的自噬和凋亡有关。这一结果将为临床上开发细胞自噬因子类药物治疗HIE提供了新的思路。     

大脑中动脉栓塞模型大鼠海马组织circRNA-miRNA-mRNA三元转录网络分析

目的:探讨脑缺血模型大鼠海马组织中差异表达的环状RNAs(circRNAs)及信使RNAs(mRNAs),并进行circRNA-微小RNA(miRNA)-mRNA三元转录网络的构建.方法:将雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组,每组8只,其中每组用于神经行为学评分8只,尼氏染色4只,对照组基因芯片检测4只,模型组基因芯片...     

超声辐照微泡对肝细胞生长因子转染大鼠损伤面神经的促进作用

目的 观察超声微泡介导肝细胞生长因子(HGF)基因促进大鼠受损面神经修复的可行性及有效性.方法 将40只SD大鼠随机分成4组,A组:单纯手术组(PBS);B组:HGF+微泡组;C组:HGF+超声组;D组:HGF+超声+微泡组,每组10只.建立大鼠面神经损伤模型,以HGF作为治疗基因.基因转染后28 d,观察各组大鼠的一般情况,检测面神经传导速度、潜伏期及神经电位波幅的变化.处死各组大鼠,采用Westem blot和RT-PCR检测损伤面神经HGF蛋白和mRNA的表达.结果 经行为学检测,D组大鼠在触须摆动及鼻尖位置均明显优于其余3组.D组面神经传导速度、神经电位波幅明显高于其余3组,潜伏期明显低于其余3组(p＜0.05).D组中HGF蛋白和mRNA的表达量明显高于其他3组(P＜0.05).结论 微泡在一定频率和强度的超声作用下能够安全、有效的将目的基因转染进入损伤后的面神经,有利于受损面神经的修复.     

寒冷应激对大鼠肾上腺髓质亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响

目的 探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)在大鼠肾上腺髓质的超微结构定位,以及寒冷应激对大鼠肾上腺髓质HAP1表达的影响. 方法 成年雄性Wistar大鼠14只,2只用于免疫电镜研究,12只用于寒冷实验研究.寒冷实验中,将动物随机分为对照组和寒冷组,每组6只,寒冷组动物放置4℃环境下,12h后用免疫组织化学和Western blotting方法 检测大鼠肾上腺髓质HAP1表达的变化. 结果 免疫电镜结果 显示,HAP1免疫反应产物分布在肾上腺髓质细胞分泌颗粒外膜及分泌颗粒间的膜性细胞器上.寒冷组大鼠肾上腺髓质HAP1的表达明显减少,和对照组比较有显著性差异( P <0.01). 结论 HAP1可能与肾上腺髓质细胞内分泌颗粒及位于分泌颗粒内的肾上腺素/去甲肾上腺素的运输和释放有关.     

血清反应因子参与单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质转分化

目的:探讨血清反应因子(SRF)在肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)过程中的作用和可能机制。方法:将54只清洁级(SPF级)SD大鼠中36只行单侧输尿管结扎(UUO组),另外18只为假手术组(Sham组)。在UUO术后3 d和14 d分别处死18只大鼠并留取肾脏组织,应用免疫组织化学方法检测肾小管上皮细胞中SRF、E-cadherin、α-SMA和Snail的表达变化。结果:UUO组3 d和14 d的肾组织中SRF、α-SMA和Snail表达显著增高(P<0.05),其中SRF在3 d和14 d的阳性率分别为83.3%、94.4%,假手术组为5.56%;E-cadherin表达显著下降(P<0.05)。结论:SRF可能参与了单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质细胞转分化的过程。     

自发性高血压大鼠淋巴微循环功能受损

目的:观察自发性高血压大鼠(SHRs)淋巴微循环功能变化.方法:8周龄雄性SHR大鼠(SHR组)和WKY大鼠(WKY组),每组各10只.应用VasT rack测量两组大鼠微淋巴管自律运动;取胸导管分离原代淋巴管内皮细胞(LECs).应用免疫荧光和Western Blot检测LECs血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)...     

氧化应激-NLRP3-TGF-β3通路参与糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌细胞外基质的重构

目的：观察糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃平滑肌细胞外基质(ECM)的变化，探讨氧化应激-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 3(NLRP3)-转化生长因子 β₃(TGF-β₃)通路在该变化中的作用。方法：SPF 级 4周龄雄性 SD 大鼠 40 只。将 20 只大鼠以链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型，并随机分为 2 组(diabitic 1、2 组)，每组各 10 只；另 20 只正常大鼠随机分为 2 个正常对照组(NC 1、2 组)，每组各 10 只。检测胃内色素残留率与胃肠推进率，确定DGP 大鼠模型建立。从 diabitic 1、2 组成功建立 DGP 模型的大鼠中选取 10 只作为 DGP 组，从 NC 1、2 组中随机选取10 只作为 NC 组。生化检测胃平滑肌组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量；Masson染色和免疫组织化学染色观察胃平滑肌 ECM 及 I型胶原蛋白(Col I)和 III型胶原蛋白(Col III)表达变化；Western blot检测Col I、Col III、caspa...     

1,25(OH)2VD3 对大鼠肺纤维化中IL-9 及PU-1 表达水平的影响

目的:探讨肺纤维化发生发展中IL-9 及PU.1 的作用以及活性维生素D3 [1,25(OH)2 VD3 ]在纤维化过程中对两种因子表达水平的影响。方法:90 只SPF 级雄性SD 大鼠随机分成三个组:对照组、模型组和治疗组(n =30)。模型组和治疗组经气管注入博来霉素(5 mg/ kg)建立肺纤维化模型,对照组注入等体积生理盐水。治疗组于手术后第2 天腹腔注射活性维生素D3 ,模型组注射等量的活性维生素D3 溶剂(丙二醇),对照组注射等量的生理盐水。各种处理均为两天一次。分别于手术后第14、21 和28 天处死大鼠取材,各小组每个时间点10 只大鼠。HE 染色法观察各组实验大鼠肺部病理变化,Masson染色法观察胶原纤维的差异,碱水解法检测羟脯氨酸含量的变化。应用Real-time PCR 和免疫组化技术分别从mRNA 水平和蛋白质水平检测大鼠肺组织中IL-9 及PU.1 的表达,ELISA 法检测血清中IL-9 的表达水平。结果:博来霉素处理后,第14 天大鼠肺部已经出现纤维化,随着时间推移,纤维化进一步加重。在三个时间点,模型组和治疗组的羟脯氨酸含量明显高于对照组,而治疗组明显低于模型组。在三个时间点,治疗组和模型组中IL-9 及PU.1 的表达量均逐渐增高,且都显著高于对照组;第14、21 天治疗组两种因子的表达量均明显低于相应时间点的模型组,第28 天时治疗组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。第21 天模型组和治疗组IL鄄9 和PU郾1 的表达水平明显高于第14 天,第28 天与第21 天比较差异无统计学意义。结论:IL-9 和PU.1 在博来霉素引起的大鼠肺纤维化早期可能发挥促纤维化作用。活性维生素D3 可能通过降低PU.1 的表达水平,进而减少IL-9 的分泌,从而对大鼠肺纤维化的发生发展起一定的抑制作用。     

基于JAK2-STAT3信号通路探讨硫酸羟氯喹治疗佐剂性类风湿性关节炎大鼠的作用机制

目的 观察硫酸羟氯喹对胶原诱导性关节炎大鼠(CIA)的治疗作用及其可能的作用机制.方法 24只SPF级SD大鼠,随机分为对照组、模型组及硫酸羟氯喹组,每组8只.给药前(0 d)和给药10、20及30 d后进行关节炎指数评分;HE染色观察各组大鼠膝关节滑膜病理损伤;ELISA检测大鼠血清中IL-1β、TNF-α及IL-6...     

光刺激移植视网膜诱导脑内c-fos的表达

<正> 本实验将妊娠14天的SD大鼠胚胎视网膜移植至新生第一天大鼠的中脑(宿主鼠),摘除宿主鼠的右眼,存活四周后,用FDS蛋白免疫组化方法观察移植视网膜与脑的功能联系.本实验设实验组及对照组,实验组(6只),接受光刺激前三天摘除宿主鼠左眼,闪烁光反复刺激移植视网膜部位一小时,停止刺激二小时后,灌注固定取材.对照组SD大鼠与宿主鼠龄相同,分摘除右眼组(3只)、摘除左眼组(3只)和摘除双眼组(3只),其实验条件与实验组相同.结果显示正常对照组摘除右眼组及摘除左眼组的大鼠均在对侧上丘出现明显的c-fos表达;摘除双眼组大鼠上丘末见阳性结果.宿主鼠     

机动车尾气诱发大鼠慢性阻塞性肺疾病并上调气道上皮细胞COX-2/PGE2/EP受体信号通路

目的：探究机动车尾气(MVE)长期暴露引起大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生时,气道上皮细胞中环加氧酶2(COX-2)/前列腺素E₂(PGE₂)/E-前列腺素类激素(EP)受体信号通路成员的表达变化。方法：(1)动物实验：健康雄性SD纯系大鼠(SPF级)16只,随机分为2组：MVE暴露组(n=8)和空白对照(CTL)组(n=8)。采用MVE暴露6个月的方法建立COPD大鼠模型。造模结束后,使用Buxco小动物有创肺功能仪检测大鼠肺功能;肺组织切片行HE染色并评估肺组织病理变化;ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和PGE₂的水平,评估大鼠肺部炎症情况;采用免疫荧光及Western blot法检测肺组织COX-2及EP受体蛋白水平;提取肺组织核蛋白,Western blot检测MVE对肺组织NF-κB核转位的影响。(2)细胞实验：采用MVE细颗粒物(PM2.5)标准品刺激人正常支气管上皮细胞BEAS-2B。ELISA法检测细胞培养液中PGE     

神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区NLRP3炎症小体激活水平研究

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区(vlPAG)的表达水平及其作用。方法选取SPF级SD大鼠20只,采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)与慢性坐骨神经压迫性损伤组(CCI组),每组10只。于手术前后测定2组机械痛阈与热痛阈;Western blot检测2组NLRP3炎症小体各组分蛋白表达水平;RT-PCR检测2组NLRP3炎症小体各组分基因mRNA表达水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测2组炎症因子白介素-lβ(IL^-1β)及白介素-18(IL^-18)表达水平;免疫荧光检测2组中NLRP3炎症小体在vlPAG的分布情况,并与小胶质细胞标志物IBA1进行共定位分析。结果与Sham组相比,CCI组术后3 d、7 d、14 d、21 d机械痛阈与热痛阈均明显降低(P<0.001);与Sham组相比,CCI组核心蛋白NLRP3、效应蛋白Caspase-1 p10及前体蛋白pro-Caspase-1表达水平均明显升高(P<0.001);与Sham组相比,CCI组NLRP3(P<0.001)、Caspase-1(P<0.001)及IL^-1β(P<0.01)mRNA表达水平均明显升高,炎症因子IL^-1β(P<0.001)与IL^-18(P<0.01)表达水平也明显升高;与Sham组相比,CCI组在vlPAG的NLRP3阳性细胞数增加,且与IBA1存在共表达。结论神经病理性疼痛大鼠vlPAG中NLRP3炎症小体被激活且表达水平增高,提示NLRP3炎症小体激活水平与神经病理性疼痛大鼠痛阈下降相关。     

IL-33修饰的BMSCs通过MyD88减轻脓毒症所致大鼠急性肾损伤的疗效观察

目的:探讨白细胞介素33(IL-33)修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗脓毒症所致急性肾损伤(AKI)大鼠的效果及对髓样分化因子88(MyD88)表达水平的影响。方法:采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症大鼠模型。80只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、阴性转染组(移植未转染的BMSCs)和IL-33转染组(移植转染IL-33的BMSCs),每组20只。比较4组大鼠72 h内存活率;移植前及移植后24、48和72 h检测血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平。移植72 h后,用HE染色观察肾脏病理损伤;用TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;Western blot检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Toll样受体4(TLR4)和MyD88蛋白表达水平。结果:模型组大鼠生存率显著低于对照组(P<0.05);IL-33转染组大鼠的生存率高于模型组和阴性转染组(P<0.05)。模型组大鼠SCr和BUN水平均高于对照组(P<0.05);IL-33转染组大鼠移植后SCr和BUN水平均显著降低,且低于模型组和阴性转染组(P<0.0...     

七氟烷预处理对大鼠肢体远端缺血再灌注诱导肺损伤的保护作用

目的探讨七氟烷预处理对大鼠肢体远端缺血再灌注(IR)所诱发肺损伤的保护作用及其机制。方法选用28只成年健康雄性SD大鼠, 按数字表法随机分为4组, 每组7只。假手术组(Sham组):仅分离出大鼠双侧股动静脉, 不夹闭, 暴露5 h后取材;七氟烷预处理+假手术组(S-S组):大鼠吸入2.5%七氟烷30 min后, 同Sham组操作;肢体远端缺血再灌注组(IR组):建立大鼠下肢IR模型, 分离出大鼠双侧股静脉和股动脉, 夹闭双侧股动脉3 h, 恢复血供再灌注2 h后取材;S-IR组:先进行七氟烷预处理, 方法同S-S组, 七氟烷预处理后操作同IR组。实验结束后, 收集各组大鼠左心室血液和双侧肺组织, 观察以下项目:(1)测定各组大鼠肺组织的湿重与干重的比值(W/D)、总肺含水量(TLW);(2)光镜下观察各组大鼠肺组织病理变化;(3)采用相应试剂盒检测各组大鼠肺组织和血清中氧化应激因子脂质氧化(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量及炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;(4)蛋白质印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织中磷酸化p38a丝...     

谷氨酰胺对急性肝损伤大鼠肠黏膜屏障的作用

目的 探讨谷氨酰胺(glutamine,GLN)对急性肝损伤大鼠肠黏膜屏障的作用.方法 61只清洁级Wistar大鼠随机分为3组:对照组、模型组、GLN干预组.采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和D-半乳糖胺(D-galactosamine,D-Gal)腹腔注射法建立急性肝损伤大鼠模型.检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和总胆红素(TBiL)水平;光镜下及电镜下观察大鼠肝脏及肠道病理学改变;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;高压液相离子色谱仪(HPLC-PED)检测大鼠肠黏膜通透性的改变.结果 模型组及GLN干预组大鼠死亡率差异无统计学意义(P>0.05);模型组及GLN干预组大鼠血清ALT、AST和TBIL水平差异无统计学意义(P>0.05);三组肠黏膜通透性差异无统计学意义(P>0.05);光镜下GLN干预组与模型组大鼠肝脏损伤程度差异无统计学意义;肠道未见明显病变;透射电镜下模型组和GLN干预组大鼠肝脏和肠道出现线粒体和细胞核等损伤,GLN干预组较模型组大鼠损伤轻;GLN干预组肝脏和肠道的凋亡指数(Apoptosis index,AI)显著低于模型组(P<0.05).结论 脂多糖可以造成D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝损伤模型,造模前给予谷胺酰胺干预可能对于改善肝功能,保护肠黏膜的通透性,降低死亡率没有显著性作用.     

FOXO3a蛋白在缺氧小鼠脑组织中的表达

目的:探讨叉头框蛋白O3a(FOXO3a)在缺氧小鼠大脑组织中的表达.方法:16只SPF级3月龄C57小鼠随机分为对照组(control)和缺氧组(hypoxia).两组小鼠分别接受常氧浓度环境及低氧环境处理1 h,应用Western Blot法定量检测FOXO3a蛋白的表达水平;应用免疫荧光染色技术检测FOXO3a蛋...     

苹果多酚通过调控Keap1/Nrf2通路减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的：探讨苹果多酚(AP)调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)通路对脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法：按照随机数字表法将SD大鼠分为对照(control)组、模型(model)组、低剂量(25 mg/kg)AP组(AP-L组)、高剂量(100 mg/kg)AP组(AP-H组)、地塞米松(DEX)组和AP-H+ML385(Nrf2抑制剂)组,每组12只。各组大鼠根据分组给药,每天腹腔注射给药1次,持续给药14天,control组、model组大鼠腹腔注射等量的生理盐水。末次给药1 h后,除control组外,其它组大鼠均向气管内注射LPS以构建ALI模型,control组大鼠的气管内注射等体积的生理盐水,造模24 h后,收集大鼠肺泡灌洗液、血清及双侧肺组织用于实验。检测肺泡灌洗液中细胞总数、中性粒细胞数;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;HE染色观察大鼠肺组织病理损伤情况;检测大鼠肺组织湿重/干重比;试剂盒检测大鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化...