实时荧光定量HCV RNA与ALT检测在丙肝筛查中临床价值的研究

目的 探讨抗-HCV抗体阳性时,实时荧光定量HCV RNA与ALT检测在丙肝筛查中临床价值的研究.方法 回顾选择2019年1月至2019年12月首都医科大学附属房山区良乡医院收治的患者109例为研究对象,均留取外周静脉血,测定血清抗-HCV抗体、HCV RNA,丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平.结果 在收集的109例抗-HCV抗体阳性患者样本中,以HCV RNA为金标准作为丙型肝炎的诊断,HCV RNA阳性患者占20.2％(22/109),HCV RNA阴性患者占79.8％(87/109),两组样本经独立样本配对t检验,P值为0.006,差异有统计学意义(P<0.05),以HCV RNA检测为金标准,用SPSS 23.0软件对抗-HCV的S/CO值及ALT进行ROC曲线处理,HCV抗体S/CO值对丙型肝炎的ROC曲线下面积(AUC)为0.851,ALT对丙型肝炎的ROC曲线下面积(AUC)为0.831.结论 HCV RNA阳性患者ALT平均值明显高于HCV RNA阴性患者的ALT平均值.抗-HCV的S/CO值及ALT对于丙型肝炎的筛查都有一定的价值,且抗-HCV抗体优于ALT的筛查.临床上,患者筛查丙型肝炎抗体阳性时,可同时进行ALT的检测,可为丙型肝炎早期诊断提供依据,以免延误治疗时机.     

检测丙型肝炎病毒实验研究

目的探讨丙型肝炎患者血清丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）结果与丙型肝炎病毒核糖核酸（HCV—RNA）定量的相关性。方法采用酶联免疫吸咐实验（ELISA）和实时荧光定量PCR（FQ—PCR）技术,对621例同时做抗-HCV和HCV—RNA的丙型肝炎患者检测。结果621份标本中有115份HCV—RNA含量高于1000拷贝／ml,124份抗-HCV阳性。经统计分析,两者有明显的相关性。结论血清抗-HCV与血清HCV—RNA之间有较好的一致性;抗-HCV检测和HCV—RNA检测均有一定的局限性,同时检测抗-HCV和HCV-RNA可提高丙型肝炎患者的检出率．为其诊断和治疗提供帮助。     

丙型肝炎病毒核酸定量检测的临床应用

本文采用实时荧光定量PCR方法对158例丙型肝炎抗体阳性患者的血清HCV RNA进行检测,探讨血清HCV RNA水平与患者肝功能损害情况的关系。1对象和方法1.1对象丙型肝炎抗体检测结果为阳性的病例标本共158例(男88,女70),均来自我院门诊或住院病人,年龄(15～88)岁,平均(46.13±17.24)岁。以上病例血清的乙型肝炎、甲型肝炎、戊型肝炎及丁型肝炎病毒标志物均为阴性。     

常州地区丙型肝炎病毒基因分型及临床分析

目的:了解常州地区丙型肝炎病毒基因型分布、病毒复制与肝功能损害的关系。方法:对150例丙型肝炎病毒抗体检测为阳性的患者,采用荧光定量聚合酶链反应技术检测血清丙型肝炎病毒核糖核酸(HCVRNA)水平,并检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)等肝功能相关指标,HCV基因分型采用基因芯片法。结果:150例患者中,HCV RNA阳性患者130例(>1×103IU/ml),HCV RNA阴性患者20例(<1×103IU/ml)。经相关性检验,HCV RNA阳性患者血清ALT、AST水平与HCV RNA含量表明无显著的相关性(P>0.05),HCV RNA阳性患者血清ALT和AST指标明显高于HCV RNA阴性患者(P<0.05)。对其中54例HCV RNA阳性标本进行HCV基因分型,1型有46例(85.19%),非1型8例(14.81%)。1型与非1型相比较,两组的血清ALT和AST水平没有明显差异(P>0.05)。结论:常州地区丙型肝炎病毒感染以1型病毒为主;持续的丙型肝炎病毒复制与肝功能损害密切相关;病毒载量与肝功能检测对丙型肝炎的治疗有重要意义。     

定量竞争核糖核酸（RNA）多聚酶反应法检测丙型肝炎病毒RNA水平：高滴度病毒血症与疾病进展期相关

目前认为丙型肝炎病毒(HC)感染是慢性肝炎肝硬化及终末期肝病的主要原因.此外,新近认为HCV至少与两种肝外综合征有关,包括原发性混合性冷沉淀球蛋白血症和膜增生性肾小球肾炎.有症状或无症状的HCV感染者的血浆或血清中,用RNA多聚酶链反应法(RNA—PCR)检测HCV—RNA基因组是HCV感染的最敏感标志物.在用干扰素治疗慢性丙型肝炎时,病毒RNA阴转与临床反应有很好的相关.而病毒RNA再阳预示复发.精确检测病毒血症患者的HCV—RNA水平能增进我们对HCV感染、传播和发病机理的了解,亦有助于对慢性丙型肝炎患者进行临床分期和治疗.因此,建立了一种定量竟争(QC)RNA—PCR检测法来检测临床样本中的HCV—RNA实际水平.该方法在RNA提取,cDNA合成和PCR扩增过程中的一个合成的HCV—RNA分子作为内对照物.由于HCV分溶物的HCV—RNA 5’端核苷酸高度保守,故选该区做为靶序列.PCR对该编码区要比HCV基因组的其他区更加灵敏,而且与5’端编码区相对稳定,易于处理和贮存,可能与该区有丰富的二级结构有关.应用定量竞争PCR检测法.检测了121例病毒血症患者的HCV—RNA水平,包括无症状的供血员,慢性肝炎病人及将行肝移植的晚期肝病病人.     

酶联法抗-HCV和HCV-cAg联检对丙型肝炎实验室诊断的应用价值

目的 探讨联合丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)及抗-HCV抗体酶联免疫检测对丙型肝炎实验室诊断的应用价值.方法 289份血清标本按抗-HCV阳性、弱阳性、阴性及HCV-cAg阳性、弱阳性及阴性分组,用PCR扩增法检测其HCV RNA含量.结果 单项抗-HCV阳性及弱阳性标本其HCV RNA检测阳性符合率分别为87...     

379例HCV感染者丙型肝炎病毒载量与抗HCV及肝功能指标的相关性分析

目的 探讨丙型肝炎患者HCV RNA载量与抗HCV及肝功能指标的相关性.方法 回顾分析2011年1月至2013年12月间在本院门诊,住院,体检中丙型肝炎抗体阳性病人,男150人,女229人,年龄32-87岁,应用实时荧光定量PCR检测HCV RNA病毒,全自动生化分析仪检测肝功能8项指标,按HCV RNA病毒载量数分HCV RNA阴性组,HCV RNA低中水平组,HCV RNA高水平组.结果 三组年龄分布比例经统计学检验无明显差异（P＞0.05）,但低中水平女性比例比男性略高;三组肝功能生化指标检测结果不完全相同（P ＜0.05或P＜0.01）,其中HCV RNA低中水平组和高水平组血清ALT、AST、GGT、ALP、TBIL与阴性组比较均有差异（P＜0.05或P＜0.01）;TP、ALB、DBIL三组间比较虽无明显统计学差异,但低中水平组和高水平组结果呈下降趋势,低中水平组和高水平组比较ALT、AST、TBIL也有明显差异（P＜0.05）,病毒载量越高ALT、AST的结果越高,经干扰素治疗后随载量的下降肝功能酶类指标也随之下降.结论 不论病毒载量的高低只要HCV RNA持续阳性,都可导致肝细胞的损害和肝功能的异常,临床应尽早进行抗病毒治疗.PCR实时荧光探针技术方法先进,技术成熟,结果稳定,能早期诊断HCV感染者,有助于临床早期抗病毒治疗,防止HCV传播和发展.     

丙肝患者HCV病毒载量、HCV抗体与ALT、AST、前白蛋白的相关性分析

目的 探讨丙肝患者HCV抗体和HCV病毒核酸定量与ALT、AST、前白蛋白水平的相关性.方法 分别采用ELISA、RT-PCR法、速率法和免疫比浊法检测133例丙型肝炎患者血清抗HCV、HCV-RNA定量、ALT、AST和PA.数据处理采用Spss 13.0统计软件.结果 ALT、AST阳性率分别为69.9％和70.7％,组间比较x2=18.05,P＜0.01.PA浓度在HCV-RNA不同含量组别方差分析F=129.92,P＜0.001.前白蛋白水平随HCV核酸含量增高而逐渐降低,而ALT、AST阳性率则增高,组间PA比较,除1.0×10^5组和≥1.0×10^6组无差异外,其它各组差异均有统计学意义.结论 同时检测HCV抗体和HCV病毒核酸定量有助于丙型肝炎诊断;与转氨酶相比,血清PA水平的变化能更加灵敏、快速地反映肝脏损害程度.     

丙型肝炎实验室诊断研究进展

丙型肝炎的诊断包括证实HCV感染和评价肝病变程度及研究预后和疗效的预测因素。l丙型肝炎的试验：分两类①血清学检测；②分于水平检测。至今为止，血清学的检测方法已研究出第三代抗一HCV的检测方法。且敏感性及特异性不断提高．第三代试验（EIA。和RIB．A。）包括HCV的C区，NS。，NS。，NS。区抗原。目前最敏感的HCV的P（：检查可测出每毫升血浆和血清中小于100个拷贝。定量PCR可确定HCV拷贝数量，而分支DNA（bDNA）技术是最精确的检测方法。分子水平检测已发展到区分HCV基因型，其；l＄床重要性还将有待于继续研究。抗…     

丙型肝炎IgM的检测及对丙型肝炎患者血清的分析研究

用丙型肝炎病毒(HCV)结构区(C区)和非结构区(Ms3区)制备固相抗原,建立了检测HCV IgM抗体的间接ELISA,并用此法检测了101份丙型肝炎病人血清。检测结果表明,急性输血后丙型肝炎病人和HCV抗体阳性伴ALT升高者,其抗C区IgM阳性者所占比例明显大于抗Ns3区。单独用C区抗原检测IgM抗体,其阳性率大于用C区和Ns3区抗原共同检测的结果。前者Cut off指数(COI)>2者占阳性例数的71.5％,后者仅占26％。因而显示了HCV结构区抗原在IgM检测中的重要意义以及抗C区IgM阳性有可能成为新近感染或活动性丙型肝炎的标志。     

探讨三种检测方法在丙型肝炎诊断中的应用价值

目的探讨ELISA法检测丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)、病毒抗体(抗-HCV)及RT-PCR法检测丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)3种方法在丙型肝炎诊断的应用价值。方法采用HCVcAg ELISA试剂盒,抗-HCV ELISA试剂盒及HCV-RNA PCR试剂盒,对临床200例疑似丙肝病毒感染的样本进行HCVcAg、抗-HCV和HCV-RNA检测。结果 HCVcAg阳性检出率为42%;HCV-RNA阳性检出率最高,为61%;抗-HCV阳性检出率为52%。Kappa检验示3种检测方法结果阳性吻合度基本一致。HCVcAg阳性检出率随着HCV病毒含量的升高而升高。结论 3种方法中,RT-PCR检测HCV-RNA仍是判断丙肝感染最准确方法。HCV核心抗原检测可以有效缩短窗口期,联合运用抗-HCV和HCVcAg或抗-HCV和HCV-RNA,能有效降低单独使用抗-HCV检测的漏检风险。HCVcAg可作为HCV抗体常规检测的补充指标,提高检出率。     

丙型肝炎患者干扰素治疗前血清HCV RNA水平对疗效的影响

丙型肝炎(丙肝)是由丙型肝炎病毒(HCV)感染机体后引起的肝脏炎症，约85％的急性丙肝可转变为慢性肝炎，20％演变为肝硬化，1％～5％发展为肝细胞癌。干扰素(IFN)能抑制HCV RNA复制、蛋白合成及病毒从细胞中的释放，是目前认为疗效惟一确切的抗-HCV药物，但报道在丙肝治疗中的稳定应答率仅为15％～25％。本研究选择16例丙肝患者应用α-1b IFN治疗前后血清中HCV RNA水平的变化及同时检测抗-HCV和ALT来探讨丙肝患者IFN治疗前血清中HCV RNA水平对疗效的影响。     

聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析

目的 应用丙型肝炎病毒（HCV）聚合酶链反应杂交酶联法（HCV－PCR－H ELISA）152份各型肝炎血清进行HCV RNA测定和分析。方法 利用标记生物素的寡核苷酸引物对患者血清进行PCR扩增，扩增产物与结合在微孔反应板的HCV特异探针快速杂交，通过抗生物素－酶联反应判定结果。结果 152份肝炎患者中，HCV RNA的检出率为57．9％（88／152），其中抗－HCV阳性组的检出率为81．8％（72／88）。抗－HCV与HCV RNA的总符合率为78．9％（120／152）。对5例丙型肝炎患者应用α干扰素治疗者追访显示，HCVRNA的消长与抗病毒药物疗效一致。结论 HCV－PCR－H ELISA方法简便、稳定、敏感、特异，为半定量指标，可应用于HCV感染的临床诊断和抗病毒药物疗效判定。     

人源抗丙型肝炎病毒噬菌体抗体库的构建及筛选

目的　构建人丙型肝炎病毒 (HCV)特异性噬菌体抗体库 ,制备人源抗HCV单克隆抗体 (mAb)。方法　用常规RT PCR法 ,直接从 5例丙型肝炎患者外周血混合淋巴细胞中 ,扩增抗体重链Fd基因和κ轻链基因 ,与噬菌体载体pComb3连接 ,构建噬菌体抗体Fab库。对抗体库进行 5轮吸附 -洗脱 -扩增的亲和选择后 ,以ELISA法鉴定抗HCV噬菌体抗体。结果　RT PCR可有效地扩增出Fd和κ基因 ,并以此构建成容量为 1 2× 10 7的噬菌体抗体库。经 5轮亲和选择可使特异性噬菌体抗体得到高度富集 ,抗HCV噬菌体抗体阳性克隆达 96 %。结论　抗HCV噬菌体抗体库的构建和人源抗HCVmAb的制备 ,为HCV感染的诊断、治疗和发病机制的研究提供有效的分子工具     

血清中丙型肝炎NS3抗原ELISA检测方法的建立和初步应用

目的 评价血清中丙型肝炎病毒(HCV)游离NS3抗原的酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的特异性和灵敏度,初步探讨该方法在临床应用中的意义.方法 对77例正常人血清标本,173例抗-HCV阳性标本和3708例抗-HCV阴性的其他类型肝炎血清标本检测HCV游离NS3抗原;对部分HCV NS3抗原阳性标本进行验证,包括HCV RNA测定、中和试验和免疫斑点试验;对11例患者的25份系列血清标本进行了HCV游离NS3抗原、HCV RNA和HCV抗体的联合检测,并结合临床资料综合分析.结果 3708例抗-HCV阴性的其他类型肝炎血清标本中有48例为HCV NS3抗原阳性,其中3030例单纯乙型肝炎和445例其他类型肝炎血清标本中分别有44例和4例为HCV NS3抗原阳性;173例HCV抗体阳性标本中有42例为HCV NS3抗原阳性;77例正常人血清标本的HCV NS3抗原检测结果均为阴性;15例HCV NS3抗原阳性标本中有9例为HCV RNA阳性;23例HCV NS3抗原阳性标本的中和率和免疫斑点试验的阳性率分别为87.0%和69.6%;25份系列血清标本的检测结果显示其HCV NS3抗原的吸光度值与时间呈负相关,并有2例HCV NS3抗原阳性标本随着血清中HCV NS3抗原的吸光度值下降,其HCV抗体转阳.结论 血清中HCV游离NS3抗原的ELISA检测方法有较好的特异性和敏感度,在发展中国家应用此方法进行HCV感染的早期诊断有一定的临床意义和推广价值.     

丙型肝炎患者血清HSP70水平的检测及HSP70-HCV肽诱导CTL作用

目的 :检测丙型肝炎患者及正常人血清中HSP70的水平 ,探讨HSP70 HCV肽体外诱导特异性CTL的作用。方法 :先用ELISA法筛选出丙型肝炎患者及正常人血清 ,再用双夹心ELISA法检测血清HSP70 ,并分析抗HCV抗体和HSP70之间的关系。用HSP70 HCV肽激活外周血单个核细胞后 ,通过51Cr释放试验测定CTL的杀伤活性。结果 :76份血清 (抗HCV抗体阳性 2 8例 ,正常人血清 4 8例 )中 ,抗HCV抗体阳性患者HSP70的检出率为 82 .1% ,正常人血清中HSP70的检出率为18.8%。HSP70的检出率与HCV感染呈显著相关 ( χ2 =2 8.77,P <0 .0 1)。HCV感染者血清HSP70的含量显著高于正常人。HSP70与HCVC区肽 (DLMGYIPAV)的混合物 ,可诱导 1例患者的CTL对自体HCV肽致敏靶细胞的杀伤率达 37.8% ,而用HCV肽单独作用则不显著。结论 :HCV感染可刺激机体过表达HSP70 ,同时HSP70可能有增强HCV表位肽递呈促进CTL特异性杀伤HCV感染细胞的作用     

丙型肝炎病毒血清型基因型与抗HCV抗体类别的关系

采用EIA法检测丙型肝炎患者血清IgG、IgM、IgA类抗HCV抗体;以丙型肝炎病毒核心区2个型特异性合成多肽对抗HCV进行血清学分型,对已确定血清型的血清进行5′非编码区逆转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)和限制性片段长度多态性(RFlp)分析以确定基因型.结果:23例HCV RNA阳性的丙型肝炎患者中19例抗HCV阳性(IgG、IgM、IgA三者中至少一种阳性);12例可行血清学分型,其中1型8例,2型2例,1、2混合型2例;11例未能分型.12例已知血清型的HCV中,基因型Ⅰ型9例,Ⅱ型2例,Ⅰ、Ⅱ混合型1例.两种分型方法一致率为91.7%(11/12).提示:血清学分型具有一定应用价值,联合IgA、IgM抗HCV检测可提高血清学分型的检出率.     

丙肝病毒核心抗原的检测与RNA定量和谷丙转氨酶的相关性及临床意义

目的 探索丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)与RNA定量及谷丙转氨酶(ALT)的相关性,以指导临床应用.方法 检测本院98例疑似丙型病毒性肝炎患者血清中HCV-cAg,RNA定量及ALT水平,评估检测结果的准确性及相关性.结果 所有疑似患者血清中检测到HCV-RNA的患者87.76％(86/98),检测到HCV-cAg患者有82.65％(81/98),P＞0.05.相对于HCV-RNA检测,HCV-cAg检测的灵敏度为94.19％.所有检测到HCV-cAg患者的血清中均能检测到RNA,HCV-cAg检测的特异性为100％.当病毒载量大于1.0×103IU/mL时,HCV-RNA定量与HCV-cAg水平高度正相关,r = 0.93,P＜0.0001.HCV-RNA定量或HCV-cAg水平分别与ALT水平高度正相关,r值分别为0.83、0.80,P＜0.0001.结论 HCV-cAg或HCV-RNA水平对于诊断丙型肝炎有相似诊断价值.HCV-cAg检测特异性高,灵敏度不及HCV-RNA.当病毒载量高时,HCV-RNA及HCV-cAg水平高度正相关,且分别与ALT水平均有高度正相关性.     

丙型肝炎患者抗黏病毒A基因的表达

目的:分析急性、慢性丙型肝炎患者抗黏病毒基因A(MxA)mRNA表达。方法:选择丙型肝炎病毒(HCV)感染者149例,其中,急性丙型肝炎(AHC)患者71例(AHC组),慢性丙型肝炎(CHC)患者78例(CHC组);另选体检健康人群69例为正常对照组。采用实时荧光定量PCR检测MxA mRNA表达水平及HCV RNA载量,统计分析组间各指标的差异和相关性。结果:AHC组和CHC组MxA mRNA相对表达量均明显高于正常对照组(P0.01),且AHC组MxA mRNA的表达水平低于CHC组,差异有统计学意义(P0.01)。AHC组MxA mRNA表达量与HCV RNA载量呈负相关(r=-0.865,P0.001),CHC组MxA mRNA表达量与HCV RNA载量无明显相关性(r=0.174,P0.05)。结论:急性、慢性丙型肝炎患者MxA mRNA表达水平明显增高,可以作为HCV感染的辅助诊断指标。     

反转录PCR和免疫学方法检测丙型肝炎病毒感染的比较

本文应用反转录多聚酶链反应(cPCR)和酶联联免疫吸附试验(ELISA)方法检测18例经多次输血并有肝功能改变的急性白血病患者血清中丙型肝炎病毒基因(HCV RNA)和抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV).HCV RNA 阳性率77.8%;抗-HCV 阳性率66.1%;单项或两项阳性者16例,联合判定 HCV 感染率88.9%。cPCR 检出 HCV RNA 时间早于抗-HCV 阳转时间,而且敏感性高于后者,是一种早期、灵敏及特异的 HCV 感染诊断方法。同时检测 HCV RNA 和抗—HCV,两项互补判定可望提高 IICV 感染的诊断率。