乳腺癌组织中NHERF1、PTEN和ERα蛋白的表达及其临床意义

目的在乳腺癌及癌旁组织中研究钠氢交换子调节因子1(Na+/H+exchanger regulatory factor 1,NHERF1)、PTEN和雌激素受体亚型ERα的免疫组织化学表达情况及其与乳腺癌临床病理分型的关系。方法采用免疫组织化学(SP)法评价乳腺癌组织及癌旁组织中NHERF、PTEN和雌激素受体亚型ERα蛋白表达情况,对其进行比较研究。结果乳腺癌组织中NHERF1和PTEN均呈现弱阳性表达或者不表达,而在癌旁组织中两者均有表达,而且在癌旁组织与癌组织中的表达量的差异有统计学意义(P<0.01)。而ERα的表达量在乳腺癌组织中明显高于癌旁组织(P<0.01)。结论乳腺癌组织中PTEN蛋白的表达水平可能与乳腺癌组织中NHERF1的表达有很大的相关性,雌激素受体在乳腺癌的发生发展过程中起了很重要的作用。     

细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9和增殖细胞核抗原在人肾透明细胞癌中的表达

目的 检测人肾透明细胞癌组织中细胞凋亡相关重要因子Caspase-3、Caspase-9和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的变化,研究这些因子的表达与肾癌的关系.方法 标本离体后分成3组,①肾癌细胞组;②癌旁组织组;③正常肾组织组.均用10%福尔马林固定48 h,常规石蜡包埋、切片5 μm,应用免疫组织化学方法进行观察.结果 PCNA免疫组织化学染色结果,正常肾组织内的细胞核有弱的阳性表达,癌旁组织阳性表达增加,高于正常肾组织;肾癌组织阳性表达明显增强, 明显高于癌旁组织.Caspase-3与 Caspase-9均在正常肾组织中有弱的阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少.3组之间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01).肾癌4个期之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 癌旁组织Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显高于正常肾组织及癌组织,癌组织表达最少;癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,说明细胞凋亡减少;PCNA在正常肾组织组、癌旁组织组、肾癌组织组的表达呈明显加强趋势,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制.Caspase-3、Caspase-9和PCNA于肾透明细胞癌的表达在肿瘤分期间差异无统计学意义.Caspase-3与Caspase-9蛋白表达呈正相关.     

caveolin-1在肾癌和癌旁组织中表达的对比研究

目的 通过检测肾癌和癌旁组织中caveolin-1的表达水平,评价caveolin-1与肾癌的关系.方法 术中采集组织样本16例,其中肾癌组织8例,相应的癌旁肾组织8例,然后提取mRNA,用逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)方法检测所有样本中caveolin-1 mRNA的表达水平.结果 8例肾癌样本中有4例caveolin-1表达阳性,相应的8例癌旁组织均为阴性,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 caveolin-1在肾癌和癌旁组织中的表达明显不同,推测caveolin-1和肾癌发生发展有密切关系.     

细胞周期蛋白E及相关因子表达与肾癌发生、侵袭及转移的相关性研究

目的 探讨肾癌细胞周期蛋白E(cyclin E)、周期依赖性激酶2(CDK2)和周期依赖性激酶抑制因子P27的表达状况及其意义.方法 应用免疫组化SP法及RT-PCR检测37例肾癌组织、13例癌周正常肾组织中cyclin E、CDK2和P27蛋白及mRNA表达.并将上述指标与临床病理特征进行统计学分析.结果 肾癌组织中cyclin E、CDK2阳性表达率分别为51.4%、43.2%,明显高于癌旁正常肾组织(P<0.05),并且随肿瘤分级及分期的升高、肿瘤转移而升高;两者mRNA含量变化同蛋白表达水平相符;相反,P27在肾癌和癌旁正常肾组织中表达量分别为48.6%、69.2%,二者差异显著(P<0.05),P27表达随肿瘤分级及分期升高、肿瘤的远位转移出现降低趋势.结论 cyclinE、CDK2、P27参与了肿瘤形成及侵袭过程,是反映肾癌生物学特征有价值的标志物.     

组蛋白乙酰化酶hMOF在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的：检测组蛋白乙酰化酶hMOF蛋白在肾透明细胞癌(RCC)组织中的表达,探讨其与肾癌患者临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学、qRT-PCR方法检测正常肾组织与肾癌组织中hMOF的表达,分析hMOF表达与肾癌患者临床病理特征的关系。结果：qRT-PCR结果显示,9例肾癌患者中有4例（44.4%）hMOF的mRNA水平显著下降。免疫组织化学结果显示,39例（62.1%,39/66）肾癌组织中hMOF蛋白表达为阴性或弱阳性,而癌旁正常组织仅4例（6.1%,4/66） hMOF蛋白的表达为阴性或弱阳性,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中肾癌组织FuhrmanⅢ 中hMOF表达明显低于FuhrmanⅠ～Ⅱ,差异有统计学意义(P<0.05)。中低分化肾癌组织hMOF表达明显低于高分化组,差异有统计学意义(P<0.05)。hMOF蛋白表达水平降低的肾癌患者其区域淋巴结及远处器官转移的风险增高。结论：hMOF蛋白在肾癌组织、尤其病理分期及Fuhrman分级增高的肾癌组织中的表达显著下降,提示hMOF蛋白可能与肾癌的发生、发展及恶性程度有关。     

Bcl-2、Bcl-xL 和Bax在结直肠癌中的表达

目的:观察结直肠癌与癌旁组织中Bcl-2、Bcl-xL 和Bax的表达,探讨它们在结直肠癌发生发展中的可能作用.方法:RT-PCR、免疫组化MaxVision一步法分别检测40例结直肠癌组织与癌旁组织中Bcl-2、Bcl-xL 和Bax mRNA表达及其相应蛋白表达水平.结果:癌组织和癌旁组织的Bcl-2 mRNA及其蛋白表达水平都很低,两者之间无显著差异;两者Bcl-xL mRNA及蛋白表达水平均较高,且癌组织明显高于癌旁组织(P<0.05);两者Bax mRNA及蛋白表达水平均较Bcl-2、Bcl-xL高,但两者间无显著差异.两者Bcl-2/Bax和Bcl-xL/Bax的比值间无显著差异.Bcl-2蛋白表达与Dukes分期和TNM分期都呈负相关(P<0.05),与其他临床病理相关因素(性别、年龄、肿瘤大小、发生部位、组织学类型、分化程度)无明显相关;而Bcl-xL 、Bax在基因及蛋白水平的表达均与临床病理相关因素无关.结论:结直肠癌中Bcl-xL在基因及蛋白表达水平明显强于Bcl-2,且明显高于癌旁组织;前者可能促进了肿瘤的发生发展.Bcl-2蛋白表达与肿瘤分期呈负相关,可作为评价结直肠癌临床预后的参考指标.     

KLF6基因在原发性肝癌中的表达

目的 通过研究潜在抑癌基因KLF6在肝细胞癌的表达,探讨KLF6基因作为肝癌抑制基因的可能性.方法 分别用荧光定量PCR、半定量RT-PCR和Western blot方法检测肝细胞癌及癌旁组织中KLF6基因在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 实时荧光定量PCR显示经过看家基因GAPDH标化的KLF6 cDNA 起始浓度,在配对癌旁组织约为肝癌组织的3倍.26例肝癌组织的KLF6 mRNA表达水平与配对癌旁组织相比,差异具有显著性意义(P<0.01).在肝癌细胞株HepG2及Hep3B,KLF6 mRNA的表达亦显著低于正常对照细胞L02(P<0.01).实验还发现,在肝细胞癌中KLF6蛋白表达变化与mRNA表达变化一致,即KLF6蛋白在癌组织及肝癌细胞的表达明显低于癌旁组织及L02(P<0.01).结论 KLF6表达下调可能是肝细胞癌的遗传学改变之一, KLF6基因可能为新的肝癌相关抑癌基因.     

survivin基因在人原发性肝癌组织中的表达及其意义

目的： 探讨survivin基因在人原发性肝癌发生发展中的作用及可能的机制。方法：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测15例原发性肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织及肝正常组survivin基因及相关基因c-myc、p53、STAT3和VEGF的mRNA表达水平，应用Western blotting法及免疫组织化学染色法检测上述组织中survivin基因的蛋白表达水平及其定位。结果： 肝癌组织及癌旁组织中survivin基因mRNA的表达量均显著高于正常肝组织（P<0.01）, 肝癌组织中survivin基因mRNA的表达量明显高于癌旁组织（P<0.01），肝癌及癌旁组织中c-myc、 STAT3、VEGF基因mRNA的表达量均显著高于正常肝组织（P<0.01），而p53基因mRNA的表达量显著低于正常肝组织（P<0.01）。肝癌组织及癌旁组织中survivin基因的蛋白表达水平均显著高于正常肝组织（P<0.01），且肝癌组织中survivin基因的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。结论:survivin基因的异常表达在肝癌的发生发展中起促进作用，可作为治疗的理想靶点。     

FBP1在肾透明细胞癌组织中的表达变化及意义

目的 探讨果糖1,6二磷酸酶1(FBP1)在人肾透明细胞癌(RCCC)及其癌旁组织中的表达,以及在肾癌发生、发展及预后中的作用和临床意义.方法 选取手术切除的118例RCCC患者的石蜡切片和40例RCCC患者的新鲜标本,分别采用免疫组织化学方法、Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾癌及对应癌旁组织(阴性切缘)中FBP1蛋白及mRNA的表达,分析其与患者临床病理特征及预后的相关性.结果 免疫组织化学发现78.81％ (93/118)的癌旁组织中可见FBP1蛋白呈强阳性表达,仅39.83％(47/118)的肾癌组织中FBP1蛋白表达阳性.Western blot发现肾癌组织中FBP1的表达阳性率较其相应癌旁组织明显下降(P＜0.01).RT-PCR法发现癌旁组织FBP1 mRNA表达水平亦明显高于肾癌组织(P＜0.05).FBP1低表达与临床分期、病理分级、危险系数及是否复发明显相关(P＜0.05),与年龄、性别、症状及肿瘤大小、部位、是否有坏死、是否有血管侵犯和肾上腺是否有累及无关(P＞0.05).FBP1阳性表达的肾癌患者的5年生存率高于FBP1阴性表达者(P＜0.05).结论 FBP1及其蛋白在人肾癌组织中低表达,与肾癌的发生、发展相关,可能成为肾癌预后的侯选标志物之一.     

膜细胞骨架蛋白-ezrin差异表达与肾癌转移、侵袭的关系

目的:探讨细胞骨架连接埃兹蛋白(Ezrin)在肾细胞癌中的表达及与肿瘤转移、侵袭的关系.方法:收集50例肾癌组织及40例相应癌旁正常肾组织,按肾癌组织(有无淋巴结转移,有无腔静脉瘤栓形成),癌旁正常肾组织,伴有淋巴结转移的肾癌组织,伴有腔静脉瘤栓形成的肾癌组织分组.采用RT-PCR,Western Blot,免疫组化检测ezrin的表达.结果:RT-PCR,Western Blot结果显示,在肾癌组织及癌旁正常肾组织中均可检测到ezrin mRNA及蛋白,且肾癌组织表达水平显著高于癌旁正常肾组织.免疫组化检测ezrin蛋白阳性表达率在肾癌组织中为96%(48/50),癌旁正常肾组织组为75%(30/40)(X2=10.350,P=0.002);ezrin mRNA表达阳性率肾癌组为82%(41/50),癌旁正常肾组织组为62.5%(25/40)(X2=4.321,P=0.038),肾痛组均显著高于癌旁正常肾组织组.免疫组化评分及ezrin mRNA阳性表达率,淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组[(9.500±2.502)vs(7.232±3.045),13/14 vs 16/36,P<0.05];腔静脉瘤栓形成组显著高于无腔静脉瘤栓形成组[(9.315±3.027)vs(7.563±2.991),14/14 vs 22/36,P<0.05].肾癌组织中ezrin蛋白,ezrin mBNA表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤分期、分级、肿瘤大小及肿瘤病理类型无关(P>0.05).结论:ezrin在肾癌组织中表达及其强度与肾痛淋巴结转移及腔静脉瘤栓形成有关,ezrin可能参与了肾癌的发生、侵袭和转移,测定肾癌组织中ezrin mRNA及蛋白有助于进一步评估肾细胞癌的预后和制定合理的治疗方案.     

FBXO11蛋白在透明细胞性肾细胞癌中表达的意义

目的 探讨FBXO11在透明细胞性肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,CCRCC）中表达的意义。方法 采用免疫组织化学方法检测77例CCRCC患者肿瘤及35例癌旁组织FBXO11蛋白的表达,分析FBXO11蛋白表达与患者临床病理特征的关系。将CCRCC患者临床病理特征及FBXO11蛋白表达进行COX单因素分析。将单因素分析中有统计学意义的因素引入COX多因素模型,分析影响CCRCC患者总生存期（overall survival,OS）缩短的独立危险因素。结果 FBXO11蛋白阳性表达率在CCRCC中为48.1%,明显高于癌旁组织的25.7%（P<0.05）。FBXO11蛋白阳性表达率在无静脉内癌栓组明显低于有静脉内癌栓组（P<0.05）。COX单因素分析显示高组织学分级、伴有远处转移和高表达FBXO11蛋白是CCRCC患者OS缩短的危险因素（P<0.05）。COX多因素分析显示高表达FBXO11蛋白是CCRCC患者OS缩短的独立预后因素。结论 FBXO11蛋白的高表达可能与CCRCC进展快及患者生存时间短密切相关,检测FBXO11蛋白对CCRCC患者的预后判断有参考价值。     

CD47和Cdc42蛋白在透明细胞性肾细胞癌中表达的意义

目的 分析CD47和Cdc42蛋白在透明细胞性肾细胞癌(clear cell renalcellcarcinoma,CCRCC)中表达的意义,探讨CCRCC转移的机制.方法 采用免疫组织化学方法(IHC)检测75例CCRCC及31例癌旁组织CD47和Cdc42蛋白的表达,分析两种蛋白表达与患者临床病理特征的关系及这两种...     

新抑癌基因WTX在肾肿瘤中的表达及意义

目的 探讨定位于X染色体的新抑癌基因WTX mRNA及其蛋白在肾肿瘤及对应正常肾组织中的表达及意义。方法 采用地高辛标记cDNA探针原位杂交及免疫组织化学S-P法检测40例肾细胞癌、10例肾母细胞瘤以及对应正常肾组织中WTX mRNA及其蛋白的表达情况。结果 WTX mRNA及其蛋白在正常肾组织普遍高表达,而在肾母细胞瘤中表达明显降低,差异具有统计学意义（P<0.001）,在肾细胞癌中表达降低,也具有统计学意义（P<0.05）。WTX mRNA与蛋白表达具有较好的一致性。结论 WTX抗体的应用为WTX蛋白的生物学功能研究奠定了实验基础。WTX表达降低与肾肿瘤高度相关,可能在肾肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。     

Aurora-A在食管鳞癌及癌前病变中的表达特点和研究意义

目的 探讨极光激酶(aurora kinases A,Aurora-A)在食管鳞癌及癌前病变(主要为癌旁癌前病变)组织样本中的表达特征及其在食管鳞癌发生、发展过程中的作用。 方法 应用组织芯片技术和免疫组织化学方法(S-P法)检测Aurora-A在9例重度不典型增生组织和122例食管鳞癌组织以及它们的癌旁癌前病变组织中的表达情况;并使用实时荧光定量PCR法检测Aurora-A基因在8对癌前病变组织和5对早期食管癌组织中的表达水平;同时运用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR法检测Aurora-A基因在各细胞株(人食管上皮永生化细胞株及食管鳞癌细胞株)中的差异性表达情况。 结果 免疫组化结果显示Aurora-A在正常食管黏膜上皮、轻度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生及食管鳞癌组织中的阳性率分别为17.2%、27.6%、50.0%、71.2%和84.3%,其表达率随病变程度加重而递增。Aurora-A基因mRNA水平在8例癌前病变组织和5例早期食管癌组织中的表达程度也明显高于其相应正常组织,其中病变组织存在Aurora-A显著性高表达的比率分别为75.0%(6/8)和60.0%(3/5)。与人食管上皮永生化细胞株相比,Aurora-A在ESCC细胞株中的表达水平也明显升高。 结论 Aurora-A激酶表达水平与食管癌癌前病变严重程度呈正相关(r=0.548,P=0.000),提示Aurora-A可能参与食管鳞癌的发生与发展,有望为食管鳞癌的早期诊断及治疗提供新的方向。     

巨噬细胞移动抑制因子在肾癌中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响.方法 以内蒙古自治区人民医院和包头市肿瘤医院2013年3月至2015年3月病理室确诊的49例肾癌患者为研究对象,采用蛋白质印迹法(West-ern blot)及反转录(RT)-PCR法检测肾癌组织及癌旁正常组织、肾癌细胞株及正常肾小管上皮细胞HK 2中MIF蛋白及mRNA表达;利用脂质体将siRNA MIF及siRNA NC转染到肾癌细胞中,Western blot及RT-PCR检测转染效果,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达.结果 肾癌组织中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(0.89±0.09 vs.0.18±0.02,1.19±0.04 vs.0.19±0.01,P＜0.05),肾癌细胞株ACHN、769-p、786-O、Caki-1中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于肾小管上皮细胞HK-2(P＜0.05).与siRNA NC组比较,siRNA MIF组中MIF蛋白及mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),细胞活力及侵袭能力降低(P＜0.05),HIF-1α及MMP9表达水平下调(P＜0.05).结论 MIF在肾癌中高表达,下调MIF表达能明显抑制肾癌细胞的侵袭能力,可能与抑制HIF-1α/MMP9信号通路有关.     

外源性小分子双链RNA激活肾癌细胞野生型P53蛋白表达作用的研究

目的 通过转染外源性低分子双链RNA （dsRNA） dsP53~285至人肾癌细胞系ACHN和786-O,观察其激活肾癌细胞中抑癌蛋白野生型P53的表达作用。方法 根据对肾癌细胞的不同处理分为3组,即空白对照（mock）组、阴性对照（转染dsControl）组和实验（dsP53-285）组。荧光实时定量聚合酶链反应（QPCR）和免疫印迹法（Western blot）分别检测P53 mRNA、P21 mRNA和相应蛋白的表达水平。MTT法和集落形成实验检测各组细胞活力及增殖能力。结果 QPCR检测显示dsP53-285能明显促进两种肾癌细胞中P53 mRNA和P21 mRNA水平的升高;与阴性对照组dsControl组相比,dsP53-285分别上调ACHN和786-O细胞中P53 mRNA的表达2.84倍（P<0.01）和3.20倍（P<0.01）,dsP53-285分别上调ACHN和786-O细胞中P21 mRNA的表达2.33倍（P<0.01）和2.59倍（P<0.01）;mock组与dsControl组相比,两种细胞系中P53 mRNA和P21 mRNA的表达差异均没有统计学意义（P>0.05）。Western blot法检测显示在两种细胞系中,P53蛋白、P21蛋白表达水平的上调与相应的P53 mRNA、P21 mRNA水平的上调一致。MTT检测结果显示,与dsControl组相比,转染dsP53-285后,ACHN和786-O细胞活力显著降低（P<0.01）,mock组与dsControl组无明显差异（P>0.05）。集落形成实验显示,dsP53-285组的集落数数量显著较少（P<0.05）,mock组与dsControl组无明显差异（P>0.05）。结论 外源性dsP53-285能显著激活肾癌细胞中P53基因的表达,激活的P53蛋白为野生型而非突变型,并可以显著抑制肾癌细胞的生长。     

PDE5基因沉默对肾透明细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨PDE5基因对肾透明细胞癌细胞株786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成PDE5 siRNA序列,按照HiPerFect转染试剂盒操作手册转染786-O细胞.采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)和Western blot法检测转染后PDE5 基因的表达,通过WST-1法检测细胞增殖情况,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性.结果 与空白对照组和阴性对照组相比较,PDE5 siRNA转染组的mRNA及蛋白表达水平显著降低,786-O细胞增殖能力明显受到抑制,caspase-3活性明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 siRNA干扰PDE5基因表达可抑制肾透明细胞癌细胞株786-O细胞的增殖并促进凋亡.     

S100A4基因差异表达与肾癌细胞分化、转移的关系

目的 探讨S100A4基因mRNA表达与肾癌细胞分化、转移的关系。方法 提取31例肾癌及正常组织配对标本的总RNA,用RT-PCR方法测定S100A4基因表达,并结合临床资料,对S100A4基因差异表达与肾癌病人临床表现的相关性进行分析研究。结果 31例配对标本采用RT-PCR方法分别进行S100A4mRNA荧光检测比较,29例标本肿瘤组织中S100A4基因mRNA表达明显高于癌旁正常肾组织。其中低分化肿瘤组病人的S100A4指数高于高分化组(7.94vs5.06,P<0.001);发生转移(包括淋巴结转移和远处转移)者高于无转移者(9.61vs5.53,P<0.001);低年龄组病人(≤50岁)S100A4指数与高年龄组无明显差异(6.31vs6.66,P>0.05);肾颗粒细胞癌组与透明细胞癌组无明显差异(6.98vs6.02,P>0.05);肿瘤直径≤5cm组与>5cm组无明显差异(5.95vs6.93,P>0.05)。结论 肾癌组织中S100A4基因mRNA可望作为肾细胞癌的病情发展及指导临床治疗的标记物之一;S100A4基因表达与肾细胞癌分化有关,癌组织S100A4mRNA测定有助于判定肿瘤的预后;S100A4基因差异表达与肾细胞癌转移明显相关。