庆大霉素及其代谢产物耳蜗毛细胞毒性比较及Ca2+、Mg2+对庆大霉素毒性的影响

目的：比较庆大霉素（GM）及其代谢产物的耳蜗毛细胞毒性，以及Ca²⁺、Mg²⁺对GM耳毒性的影响。方法：①取10只小鼠的耳蜗螺旋器（20个），随机分为2组（n=10），分别在含0.1 mol·L^-1 GM与0.1 mol·L^-1GM代谢产物的培养液中培养48 h后，记数残留的耳蜗毛细胞数；②取10只小鼠的耳蜗螺旋器（20个），随机分为2组（n=10），分别在含0.1 mol·L^-1 GM与0.1 mol·L^-1GM+3% CaCl2的培养液中培养48 h后，记数残留的耳蜗毛细胞数；③取10只小鼠的耳蜗螺旋器（20个），随机分为2组（n=10），分别在含0.1 mol·L^-1 GM与0.1 mol·L^-1GM+3% MgSO4的培养液中培养48 h后，记数残留的耳蜗毛细胞数。结果：0.1 mol·L^-1 GM与0.1 mol·L^-1肝脏 GM代谢产物相比较，毛细胞残留数差异无显著性（P>0.05）；培养液中加入3% CaCl₂、MgSO_{4< /sub>时的毛细胞残留数明显增多（P<0.01）。结论：GM的耳蜗毛细胞毒性与GM代谢产物无关；Ca²⁺、Mg²⁺可能成为GM耳蜗毛细胞毒性的拮抗剂。}     

海嘧啶对SGC—07901人胃癌细胞凋亡的影响

目的 揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机制。方法 采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i;变化时Ca^2 的来源。结果 海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡,可升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。结论 海嘧啶的抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜鲺通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i,启动细胞凋亡机制,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

脑细胞生长肽对豚鼠耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的影响

目的：观察脑细胞生长肽（Cerebrai cell growth peptide,CCGP)对庆大霉素（Gentamicin,GM)引起的耳中毒豚鼠耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶（Acid phosphatase,ACP)的影响。方法：分别用脑干听觉诱发电位（Brainstem auditory evoked potential,BAEP)和组织化学方法检测动物听阈的变化和耳蜗毛细胞溶酶体的变化。结果：CCGP能降低GM引起的BAEP反应阈的上升幅度，能保护耳蜗毛细胞溶酶体的完整性，减轻了毛细胞的损伤。结论：CCGP能降低GM的耳毒性。保护耳蜗毛细胞溶酶体的完整性，降低溶酶体水解酶逸出引起的毛细胞自溶性损伤，可能是CCGP防治GM耳毒性的机制之一。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钙激活氯通道与细胞质钙的关系及意义

目的观察大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）膜钙激活氯通道（ClCa）与细胞质钙的关系及意义。方法大鼠PASMCs获取采用急性酶分离法。荧光光度法检测细胞质内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）；全细胞膜片钳技术测定PASMCs钙激活氯电流（ICl（Ca））；等长张力测定法观察ClCa阻滞剂尼氟灭酸（NFA）和Indaryloxyacetic acid（IAA-94）对大鼠肺动脉张力的影响。结果环匹阿尼酸（CPA）和苯福林（PE）均可引起[Ca^2＋]i升高；升高的[Ca^2＋]i可以引出ICl（Ca）；NFA和IAA-94可以舒张CPA、PE引起的肺动脉环收缩。结论生理条件下大鼠PASMCs的ClCa是钙依赖性的；细胞外Ca^2＋内流及细胞质内Ca^2＋释放均可激活该通道，其参与了血管活性药诱导的肺动脉收缩。     

大电导钾通道对脊髓神经元细胞内游离钙和兴奋性的影响

目的 探讨大电导钾通道(large conductance calcium-activited potassium channel,BK)对脊髓神经元细胞内游离钙 (intracellular free calcium, [Ca2 ]i) 和兴奋性的调节作用.方法 体外培养大鼠脊髓神经元细胞,应用膜片钳技术,观察生理状态下和持续电流去极化条件下BK通道特异性阻断剂Iberiotoxin对神经元[Ca2 ]i和动作电位频率的影响,并采用显微荧光测钙法观察Iberiotoxin对高钾条件下[Ca2 ]i的影响.结果 生理状态下,Iberiotoxin灌流(100 nmol/L)对神经元细胞自发动作电位的频率、[Ca2 ]i无显著影响.持续电刺激去极化后,Iberiotoxin灌流使动作电位频率增加,[Ca2 ]i显著升高.高钾溶液(20 mmol/L KCl)引起神经元[Ca2 ]i升高, 而Iberiotoxin灌流(100 nmol/L) 则使[Ca2 ]i进一步显著升高.结论 生理条件下,BK通道不参与脊髓神经元[Ca2 ]i和兴奋性的调节;但在受持续去极化刺激或在高钾条件下,BK对神经元[Ca2 ]i和兴奋性具有显著的调节作用.     

细胞内游离钙在ACEI逆转SHR血管重构中的作用

目的：探讨细胞内游离钙在血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)逆转自发性高血压大鼠(SHR)血管重构中的作用。方法：采用SHR、正常血压大鼠(WKY)配对，服药前后对比及离体血管、淋巴细胞药物处理研究。结果：①SHR与WKY比较有以下血管重构现象：血管内膜有WBC粘附和侵袭，中层血管平滑肌细胞(VSMC)排列紊乱、纤维成分增多；血管内皮细胞及VSMC线粒体增多，体密度增加、肿胀，肌浆网扩张，比表面减少。②SHR外用淋巴细胞[Ca^2 ]i，主动脉平滑肌^45Ca静息内流，血浆血管紧张素Ⅱ浓度[ATⅡ]均较WKY显增加；③ACEI治疗后SHR血管重构现象得到逆转，血浆[ATⅡ]、淋巴细胞[Ca^2 ]i、主动脉平滑肌^45Ca静息内流均降低；④离体情况下ATⅡ能使SHR、WKY主动脉平滑肌^45Ca静息内流及淋巴细胞[Ca^2 ]i增加，ACEI使以上指标下降。结论：ACEI能有效逆转高血压血管重构现象，其作用可能同有效纠正血管平滑肌细胞内皮细胞钙超负荷及调节异常细胞内游离钙代谢有关。     

SKF96365和氯化镍对环匹阿尼酸诱导的大鼠PASMC［Ca2＋］i升高的影响

目的：研究SKF96365和氯化镍（NiCl2）对环匹阿尼酸（CPA）诱导的大鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMC）内游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）变化的影响。方法培养大鼠PASMC,运用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测CPA、SKF96365和NiCl2对PASMC[Ca2＋]i的影响。结果含5μmol／L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育PASMC,10μmol／LCPA使PASMC[Ca2＋]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2＋至2．5mmol／L后,10μmol／LCPA使PASMC[Ca2＋]i迅速显著升高;50μmol／LSKF96365和500μmol／LNiCl2均能明显抑制10μmol／LCPA引起的PASMC[Ca2＋]i升高,但对高钾（60mmol／LKCl）溶液引起的PASMC[Ca2＋]i升高无影响。结论CPA可致大鼠PASMC[Ca2＋]i升高,且能被SKF96365和NiCl2阻断,提示CPA可能诱发细胞外Ca2＋经钙池操纵性钙通道（SOCC）内流,SKF96365和NiCl2能选择性抑制SOCC活性使经SOCC的Ca2＋内流减少。     

异丙酚对氯化钾和咖啡因诱发豚鼠耳蜗外毛细胞钙离子移动的影响

目的:评价异丙酚对氯化钾和咖啡因诱发豚鼠耳蜗外毛细胞钙离子移动的影响,探讨其对听觉外周感受器(耳蜗)的作用。方法:急性分离豚鼠耳蜗外毛细胞,选择30个活力较高的外毛细胞,随机分为3组(n=10):对照组(C组)、30μmol/L异丙酚组(P1组)和100μmol/L异丙酚组(P2组)。用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色后,P1组和P2组分别给予30、100μmol/L异丙酚或咖啡因处理5min,然后加入氯化钾,采用激光共聚焦显微镜测定细胞内荧光强度的峰值,反映细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果:异丙酚可抑制氯化钾诱发的[Ca2+]i增加并与浓度呈正相关,而对咖啡因诱发的[Ca2+]i增加无明显影响。结论:异丙酚可抑制豚鼠耳蜗外毛细胞Ca2+跨膜内流,降低[Ca2+]i,而对内质网功能无明显影响。     

苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙含量的影响

目的：观察苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙([Ca^2 ]i)含量的影响。方法：体外培养大鼠皮层神经细胞，加入谷氨酸观察细胞内[Ca^2 ]i,培养液一氧化氮（NO含量的变化及苯海索的干预作用。结果：加入谷氨酸后细胞内[Ca^2 ]i、细胞死亡数、NO含量显著升高，苯海索各浓度显著抑制[Ca^2 ]i及NO的升高，减少细胞死亡。结论：苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内[Ca^2 ]i、NO含量的升高具有抑制作用，其机制可能与钙拮抗作用有关。     

顺铂对豚鼠耳蜗外毛细胞钙激活的钾电流的作用的初步研究

目的：研究顺铂对豚鼠耳蜗外毛细胞的钙激活的钾电流的作用，方法：应用膜片钳技术从单离的逐鼠耳蚋外毛细胞获得钙激活的钾通道记录，并观察顺铂对它的作用，结果：结果表明该通道活动受到细胞外的浓度为10^-5M的顺铂的抑制，结论：豚鼠耳蜗外毛细胞的钙激活的钾通道是顺铂的作用位点之一。     

脑细胞生长肽对耳蜗琥珀酸脱氢酶的影响

目的：观察脑细胞生长肽（CCGP）对庆大霉素（GM）引起的耳蜗内琥珀酸脱氢酶（SDH）的影响。方法：分别用脑干听觉诱发电位（BAEP）和组织化学方法检测动物听阈的变化和耳蜗毛细胞线粒体内SDH活性变化。结果：CCGP能降低GM引起的BAEP反应阈的上升幅度和耳蜗毛细胞SDH活性；CCGP能保护耳蜗毛细胞SDH的活性，减轻了毛细胞的损伤。结论：CCGP能保护SDH的活性。保护耳蜗毛细胞SDH的活性，维持毛细胞的能量代谢，减轻毛细胞的损伤，可能是CCGP防治GM耳毒性的机制之一。     

芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖和细胞[Ca2+]i变化的影响

目的研究芦荟大黄素对植物血凝素(PHA)引起的大鼠T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2 ]i。结果芦荟大黄素对PHA引起的细胞增殖有显著抑制作用,且其抑制作用与剂量有关;加入PHA引起细胞[Ca2 ]i迅速升高,并持续维持高[Ca2 ]i水平,芦荟大黄素对PHA引起的[Ca2 ]i升高有显著抑制作用,其作用途径包括阻断胞内Ca2 释放和抑制胞外Ca2 内流。结论芦荟大黄素可抑制T淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞内[Ca2 ]i升高相关。     

环匹阿尼酸对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响

目的研究环匹阿尼酸(CPA)对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及可能机制。方法原代培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫荧光染色鉴定,利用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测高钾(60 mmol/L KCl)溶液及CPA对PVSMC的[Ca2+]i影响。结果原代培养的PVSMC表现出典型血管平滑肌细胞生长特征,并对平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应;高钾溶液使PVSMC的[Ca2+]i显著升高,5μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应;10μmol/LCPA能使含5μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA能使含5μmol/L硝苯地平的Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i迅速升高。结论 CPA能够使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与Ca2+从肌浆网释放,并诱发细胞外Ca2+通过钙池操纵性钙通道(SOCC)内流有关。     

羟自由基、低密度脂蛋白和胆固醇对血管内皮细胞钙响应能力的影响

目的：探讨分别经羟自由基、低密度脂蛋白和胆固醇处理后，血管内皮细胞对外钙浓度增加的响应能力的改变，为研究动脉粥样硬化的发生发展机制提供新线索。方法：用人脐静脉内皮细胞作为模型细胞，分别用羟自由基、低密度脂蛋白、胆固醇和氧化胆固醇进行单独或组合处理，利用Fluo—3荧光标记细胞内游离Ca^2 ，以激光共聚焦手段考察了当细胞外液[Ca^2 ]增加时胞内[Ca^2 ]的变化。结果：正常血管内皮细胞对胞外[Ca^2 ]增加响应灵敏，胞内[Ca^2 ]升高到一定程度后，迅速下降至初始水平；细胞经羟自由基处理后，对Ca^2 的响应明显迟钝，胞内[Ca^2 ]达到峰值的时间延长了350s，细胞形态也有损伤迹象；细胞经低密度脂蛋白处理后，胞内[Ca^2 ]达到峰值的时间延长了250s，且对[Ca^2 ]的调节作用明显失常，使细胞处于高钙水平；而细胞经羟自由基和低密度脂蛋白依次处理后，细胞内[Ca^2 ]达到峰值的时间延长了500s，损伤程度更大，当胞外[Ca^2 ]增加时细胞破裂死亡；细胞经胆固醇处理后，当胞外[Ca^2 ]突然升高时，胞内[Ca^2 ]不仅没有升高，反而缓慢降低；细胞经羟自由基和胆固醇依次处理后，对胞外[Ca^2 ]的突然升高反应紊乱。结论：羟自由基、低密度脂蛋白和胆固醇可干扰血管内皮细胞对钙离子的响应，致内皮细胞损伤，这可能是此类致病因子引起动脉粥样硬化的机制之一。     

普罗托品对大鼠血管平滑肌收缩反应及细胞内游离钙浓度的影响

目的探讨普罗托品(protopine, Pro)对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响.方法采用无Ca2 -复Ca2 的实验法,间接观察Pro对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的可能影响,再利用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载的培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,直接观察在Pro存在下,对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的 [Ca2 ]i的升高的影响.结果在无钙Krebs液中,Pro 10、30、100 μmol/L对NA所致血管条的短暂收缩均有明显的浓度依赖性抑制作用,对复Ca2 后NA所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用.在Fura-2/AM负载血管平滑肌细胞的实验表明,Pro (50 μmol/L, 100 μmol/L) 对静息时的 [Ca2 ]i无明显影响;在有外钙存在条件下,Pro 50 μmol/L能明显降低NA所致[Ca2 ]i的升高,对KCl引起的 [Ca2 ]i 升高有降低趋势;当Pro的浓度增加到100 μmol/L时,对NA和KCl引起的 [Ca2 ]i升高均有明显的抑制作用.结论 Pro可能通过抑制Ca2 释放和(或)Ca2 内流来降低NA和高钾所致血管平滑肌[Ca2 ]i的升高,从而抑制血管平滑肌的收缩反应.     

苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙含量的影响

目的：观察苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙含量的影响。方法：体外培养大鼠皮层神经细胞。加入谷氨酸观察细胞内[Ca^2 ]i，培养液一氧化氮含量的变化及苯海索的干预作用。结果：加入谷氨酸后细胞内[Ca^2 ]i、细胞死亡数、一氧化氮含量显著升高，苯海索各浓度显著抑制[Ca^2 ]i及一氧化氮的升高，减少细胞死亡。结论：苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内[Ca^2 ]i、一氧化氮含量的升高具有抑制作用，其机制可能与钙桔抗作用有关。     

银杏叶提取物对庆大霉素耳毒性保护作用的实验研究

目的:研究银杏叶提取物(Egb)对庆大霉素(GM)所致耳毒性的拮抗作用,探讨庆大霉素耳毒性作用机制。方法:健康豚鼠15只,随机分为3组,I组为生理盐水组;II组为庆大霉素(GM)组,造成损伤模型;III组为银杏叶提取物(Egb)和庆大霉素(Egb GM)组,观测3组豚鼠不同时期畸变产物耳声发射(DPOAE)的改变,TUNEL法检测3组豚鼠毛细胞凋亡。结果:Egb可以减轻耳蜗外毛细胞的损伤率(P<0.05),较少凋亡,降低庆大霉素所致的耳毒性。结论:Egh对庆大霉素所致的耳毒性具有拮抗作用。     

辛伐他汀及oxLDL对人脐静脉内皮细胞蛋白激酶C活性和胞质内游离钙水平的影响

目的：探讨氧化低密度脂蛋白（oxLDL)及3-羟基-3甲基戊二酰酶A（HMG-CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）蛋白激酶C（PKC）活性和胞质内游离钙浓度（[Ca^2 ]）i的影响。方法：HUVEC的PKC活性采用γ-^32P-ATP磷酸转移法,细胞内游离钙采用Fluo-3/Am荧光负式,流式细胞术检测。结果：oxLDL呈剂量依赖方式促进HU-VECＰＫＣ活性增加,１２min时达峰值,然后缓慢下降,３０min时仍维持较高水平;胞质内［（Ｃa^2 ]i升高分快速相和持续相２个时相;移去细胞外液钙,oxＬＤＬ仍引起快速相,但持续相消失;辛伐他湘则能明显抑制oxLDL引起的ＨＵＶＥＣＰＫＣ活性增加,并显降低持续相胞质内钙水平,而对快速相无影响。结论：oxＬＤＬ能引起ＨＵＶＥＣ内信号通路ＰＫＣ及［（Ｃa^2 ]i的动态变化,二密切相关。oxLDL刺激ＨＵＶＥＣ［Ｃa^2 ]i升高的快速相是由胞质钙池释放引起,持续相升高主要由胞外钙内流引起,辛伐他汀抑制ＨＵＶＥＣＰＫＣ活性可能是通过胞内［（Ｃa^2 ]i变化起作用。     

一氧化氮合酶抑制剂对培养人分泌中期子宫内膜细胞内钙的影响

目的：探讨已受雌，孕激素影响的人子宫内膜细胞受一氧化氮作用引起细胞生理变化的机制。方法：取人分泌中期子宫内膜，体外原代培养24－28小时，用钙荧光探剂Fluo-3-AM负荷钙离子，采用激光扫描共聚焦显微镜测定加入一氧化氮合酶抑制剂L－NAME后，子宫内膜细胞内游离钙离子[Ca^2 ]i浓度的动脉变化。结果：加和L－NAME后，腺上皮细胞和间质细胞[Ca^2 ]i立即开始升高，约在加入后400秒上升到高峰，加入后900秒稍有下降，然后继承升高并保持在高水平。同时发现腺上皮细胞和间质细胞对L－NAME的反应不同，其中腺上皮细胞[Ca^2 ]i升高的幅度显著高于间持细胞。结论：在雌，孕激素作用的基础上，NO通过改变子宫内膜细胞[Ca^2 ]i进行信号转导，实现其生理效应。     

重组人透明带3肽段rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发顶体反应及其机制

目的探讨大肠杆菌重组表达的rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348生物学特性和功能，研究rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348能否诱发人精子顶体反应及其相关机制。方法rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发人精子顶体反应用金霉素染色法进行评价，同时研究了G特异蛋白抑制剂白日咳毒素（PTX）、钙离子螯合剂EGTA和T型钙通道抑制剂pimozide对rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发人精子顶体反应的影响；同时用荧光分光光度计监测rhuZP3a^22-176或rhuZP3b^177-348刺激获能精子胞内钙（[Ca^2＋]i）浓度的变化。结果不同浓度的rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348均能诱导人精子AR，其中rhuZP3a^22-176诱导人精子AR呈浓度依赖方式。PTX、EGTA和pimozide可以分别抑制rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发的顶体反应。rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发的顶体反应是由于刺激获能人精子[Ca^2＋]i升高所致，但rhuZP3a^22-176诱发[Ca^2＋]i升高的方式与rhuZP3b^177-348诱发[Ca^2＋]i升高方式不尽相同，rhuZP3a^22-176只能引起[Ca^2＋]i升高，而rhuZP3b^177-348既有[Ca^2＋]i升高，又伴有持续升高。上述精子[Ca^2＋]i升高可被EGTA和pimozide抑制。结论rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348通过激活G蛋白使胞外钙通过T型钙通道内流促使[Ca^2＋]i上升，从而引起精子顶体反应，这与人类天然ZP3诱导顶体反应作用相似。