内皮素受体拮抗剂对肝硬化、门静脉高压大鼠内皮素受体mRNA表达的影响

内皮素(ET) 1是强力缩血管物质,在门静脉压力升高和维持中起重要作用[1] ,ET 1通过与其受体结合而发挥作用。ET受体至少可分为两种亚型,即ETA受体(ETRA)和ETB受体(ETRB) ,其中ETRB根据介导的舒张和收缩作用又分为ETRB1和ETRB2 [2 ] 。本实验旨在观察CCl4诱导的肝硬化、门静脉高压大鼠门静脉压力、肝组织ET受体mRNA表达的变化以及ETA受体拮抗剂(BQ 12 3 )、ETB受体拮抗剂(BQ 788)及两者联合应用对研究结果的影响。一、材料与方法1.实验对象:雄性SD大鼠,体重3 70～40 0 g ,参照文献[3 ]方法制备肝硬化、门静脉高压模型…     

内皮素-1对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌影响的可能作用机理

目的 :了解内皮素 1(ET 1)影响大鼠睾丸离体间质细胞睾酮分泌的可能作用机理 ,为男性不育症治疗提供一定的理论基础。　方法 :采用大鼠睾丸间质细胞体外孵育技术以及12 5I 睾酮放射免疫法 ,观察ET 1对间质细胞睾酮分泌的影响及其可能作用机理。　结果 :内皮素受体A(ETA)、内皮素受体B(ETB)受体拮抗剂均可逆转ET 1对大鼠离体间质细胞睾酮分泌的抑制作用 ,但Ca2 +通道阻滞剂维拉帕米 (VER)未表现此作用。　结论 :ET 1通过与ETA及ETB结合而发挥作用。其Ca2 +的动员可能不是细胞外Ca2 +进入细胞内。     

内皮素受体亚型非选择拮抗剂(TAK-044)对移植肝的保护作用

作者报道在肝缺血模型上发现肝组织再灌注后血浆内皮素－1（ET－1）水平明显增高。而且ET－1单克隆抗体或内皮素A／B（ETA＼ETB）受体非选择性拮抗剂TAK－044能显著改善缺血一再灌注所致的肝功能损害和形态学的异常。人肝移植后，患者血浆ET－1水平显著升高，由此可见，ETA／ETB受体拮抗剂可能对移植肝起保护作用。本实验的目的就是为了观察TAK－044对猪的肝移植是否具有肝保护作用。方法：从供体猪体内取出肝脏，存放于冷的Eurocolling溶液待用，采用原位吻合术将供体肝移植于受体诸体内。在肝上静脉—腔静脉吻合完成前，分成两…     

内皮素在肝外型门静脉高压症发病机制中的作用

目的 探讨内皮素在门静脉高压症发病机制中的作用及其可能的机制。方法 参照Benoit方法建立大鼠门静脉高压症模型,应用放射免疫学方法分别测定门静脉高压症组、正常对照组和假手术组大鼠血浆及肝组织中ET－1的含量,并观察ET－1和ETA受体拮抗剂对门静脉高压症大鼠FPP以及体外培养的门静脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和蛋白质合成的影响。结果 ①门静脉高压症大鼠血浆和肝组织ET－1含量显著高于正常对照组和假手术组（P＜0．01）;②静脉注ET－1可以显著提高门静脉高压症大鼠的自由门静脉压（P＝0．002）,静注ETA受体拮抗剂则可以显著降低门静脉高压症大鼠的FPP（P＝0．047）;③ET－1可以显著剂量依赖性地促进门静静脉VSMC对^3H-TdR和^3H-Leu的掺入,这种作用可以被ETA受体拮抗剂所抑制。结论 ①ET－1可以通过ETA受体介民垢缩血管作用,增加肝内门静脉系统血流阻力的功能性部分;②ET－1可以显著促进体外培养的大鼠门静脉血管平滑肌细胞的增殖和蛋白质合成,参与门静脉系统的血管增生－血管重构,并影响门静脉系统血流阻力的器质性部分;③门静脉高压症大鼠体内ET－1的过量表达通过影响门静脉系统血流阻力的功能性部分和器质性部分,在门静脉高压症的发病机理中具有重要作用。     

肝硬化大鼠肝脏内皮素受体基因的表达与门静脉压力的关系

目的　研究四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝脏内皮素(endothelin, ET)受体基因的表达,并探讨其与门静脉压力的关系。方法　采用逆转录多聚酶链反应(RT PCR)测定大鼠肝组织 ETA受体和ETB受体mRNA的表达水平, 并测量门静脉压力。结果　肝硬化大鼠肝组织 ETA受体(0 4245±0 0612 vs 0 2792±0 1115,P<0 05) 和 ETB受体(0 5984±0 1047 vs 0 2938±0 1399,P< 0 05) mRNA 的表达均较对照组均显著升高;肝硬化大鼠门静脉压力较正常大鼠明显升高(16 08±2 19 vs8 25±2 56 cmH2O,P<0 05),并且ETA受体mRNA的表达与门静脉压力显著正相关(r=0 8074,P<0 05)。结论　四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝组织ET受体 mRNA的表达显著升高,并且 ETA受体 mRNA的表达与门静脉压力显著正相关, 表明 ET受体的高表达在门静脉高压症的发病机制中起重要作用。     

内皮素受体拮抗剂对前列腺癌细胞PC3和成骨细胞相互作用的影响

目的 在细胞共培养微环境下,观察内皮素(ET)受体拮抗剂阻断内皮素轴对前列腺癌细胞PC3和成骨细胞SaOS_2相互作用的影响.方法 利用细胞体外共培养系统,比较前列腺癌细胞PC3和成骨细胞SaOS_2在共培养微环境下和单独培养环境下细胞增殖的差异.共培养微环境下,分别以ET_A受体(ET_AR)拮抗剂BQ123和ET_B受体(ET_BR)拮抗剂BQ788阻断相应的ET受体,观察其对前列腺癌细胞和成骨细胞增殖的影响.同时,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组培养液中的ET-I浓度,通过逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)测定PC3细胞、SaOS_2:细胞ET-I及其受体的mRNA表达,比较它们的表达差异.结果 与单独培养比较,共培养微环境下的PC3细胞和SaOS_2细胞的增殖数量均显著升高(P均＜0.05).ET_AR拮抗剂BQ123能阻断共培养微环境对SeOS:细胞的生长促进作用,部分阻断共培养微环境对PC3细胞的生长促进作用,而ETBR拮抗剂BQ788则无显著的干预作用.EUSA结果显示共培养组培养液中ET-1浓度[(14.26±1.06)βg/L/10~5个细胞]显著高于单独培养组[(6.58±0.74)pc/L/105个细胞,P＜0.05].RT-PCR结果显示PC3细胞表达ET-1和ET_AR,SaOS_2细胞只表达ET_AR;与单独培养比较,共培养微环境下PC3细胞ET-l的表达显著升高(P＜0.05),而PC3细胞和SaOS2细胞ET_AR的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ET-1及ET_AR构成的内皮素轴是共培养微环境中前列腺癌细胞PC3和成骨细胞之间相互作用促进增殖的重要链接因子,而ETAR拮抗剂能有效地抑制两者间的相互作用,抑制PC3细胞增殖.     

烧伤后肾组织内皮素-1及其受体基因的表达

目的探讨烧伤后肾组织内皮素-1(ET-1)升高的效应部位以及效应的 ETR 亚型。方法采用斑点杂交和原位杂交技术对大鼠30％体表面积Ⅲ度烧伤模型的 ET-1及其受体亚型(ETA、ETB)的基因表达进行了研究。结果烧伤后1小时,ET-1、ETA、ETB、mRNA 均明显升高;烧伤后24小时仍维持较高水平。ET-1和 ETA mRNA 杂交信号于烧伤后3小时达高峰。ET-1mRNA 主要分布肾皮质小血管内皮细胞、髓质肾小管和集合管,ETA 受体 mRNA 则分布于上述小血管的平滑肌细胞。ETB 受体mRNA 于烧伤后6小时达高峰,主要分布髓质肾小管、集合管。结论烧伤后肾脏内皮素受体亚型上调在皮质以 ETA 为主,在髓质以 ETB 为主,它们分别与增强表达的 ET-1结合可能导致肾皮质缺血和水钠代谢异常,是烧伤后肾功能障碍的重要因素。     

法舒地尔对前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察法舒地尔对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 不同浓度法舒地尔、顺铂及两药联合干预PC3细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot法检测Rock Ⅰ、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,法舒地尔、顺铂单独或联合作用PC3细胞均可抑制细胞增殖,两药联合后抑制效果更显著;法舒地尔、顺铂联合用药可明显增强PC3细胞的凋亡;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Caspase-3表达上调,法舒地尔可明显下调Rock Ⅰ蛋白表达.结论 法舒地尔可促进PC3细胞凋亡,其作用机制可能与法舒地尔抑制Rho激酶的表达有关.     

晚期糖化蛋白刺激系膜细胞合成和分泌内皮素的研究

目的　观察晚期糖化蛋白对系膜细胞合成和分泌内皮素 (ET)的影响。方法　体外正常培养系膜细胞 ,将系膜细胞分泌的基质与 6 磷酸葡萄糖孵育 ,快速制备晚期糖化基质蛋白 ;进而检测该糖化终产物作用后 ,系膜细胞中ET 1和内皮素A受体 (ET AR)mRNA表达的改变 (采用RT PCR) ,以及细胞上清液中内皮素浓度的变化 [用放射免疫法 (放免法 )测定 ]。同时 ,观察高糖对系膜细胞中内皮素表达产生的效应。结果　经晚期糖化蛋白作用的系膜细胞 ,与对照相比 ,其对ET 1和ET AR的mRNA表达明显增加 ,分别为对照组的 1.74倍和 1.47倍。加入氨基胍 (AG)抑制系膜基质糖化和交联后 ,系膜细胞中ET 1和ET AR的mRNA表达随之下降 ,以ET 1mRNA表达下降明显 ,约 5 3% ,ET ARmRNA表达仅下降 18%。系膜细胞对内皮素的分泌亦受糖化基质的作用而显著增加 ,为对照组的 7.15倍 ,氨基胍干预后 ,其分泌明显减少 ,内皮素浓度下降 73.49%。用高糖干预的系膜细胞组 ,却以高糖产生的高渗效应最为明显 ,细胞中ET 1mRNA水平为对照组的 10 .1倍。结论　高糖状态下 ,转变为糖化终产物的细胞外基质对系膜细胞合成和分泌内皮素有直接的上调作用 ,且不依赖于高糖环境。     

前列腺雄激素调节基因:一个新的雄激素非依赖性前列腺癌治疗的潜在靶点(英文)

目的:初步研究前列腺雄激素调节基因(PAR)与雄激素—雄激素受体信号转导通路的关系及其在前列腺癌细胞恶性转化过程中的作用,探讨通过抑制 PAR 基因治疗雄激素非依赖性前列腺癌的可能性。方法:用 RT-PCR 检测 LNCaP、PC3细胞中 PAR 基因 mRNA 表达水平的差异。分别用 RT-PCR 检测双氢睾酮对LNCaP、PC3及稳定转染了 pcDNA3-AR 的 PC3细胞株 PC3-AR 的 PAR 基因 mRNA 表达的调节作用,并观察这一调节作用是否可被雄激素受体拮抗剂氟他胺阻断。进一步用 RNA 干扰技术下调 PC3细胞 PAR 的表达,用细胞计数、软琼脂克隆形成实验、流式细胞术研究 PAR 基囚表达下调对 PC3细胞生长的抑制作用。结果:PC3细胞 PAR 基因 mRNA 的表达是 LNCaP 细胞的3倍;双氢睾酮可调节 LNCaP 和 PC3-AR 细胞株PAR 基因 mRNA 表达水平,此种对 PAR 表达的调节作用可被氟他胺阻断:双氢睾酮对 PC3细胞 PAR 基因mRNA 表达无明显影响。RNA 干扰可抑制 PC3细胞 PAR 基因表达,使细胞增殖受抑制,细胞周期阻滞于G_2-M 期,凋亡增加。结论:PAR 可能是雄激素—雄激素受体信号转导通路下游的与雄激素非依赖性前列腺癌恶性表型密切相关的癌基因,有望成为其基冈和药物治疗的靶点。     

缺血再灌流肾组织内皮素—1及其受体基因表达的实验研究

为了探究内皮素１（ＥＴ１）对肾功能的影响和作用方式，采用斑点杂交和原位杂交方法对大鼠缺血６０分钟再灌注肾组织ＥＴ１及其受体亚型（ＥＴＡ、ＥＴＢ）的基因表达进行了研究。结果发现：再灌流１小时，ＥＴ１、ＥＴＡ、ＥＴＢｍＲＮＡ均明显升高；再灌流２４小时仍维持较高水平。ＥＴ１和ＥＴＡｍＲＮＡ杂交信号再灌流３小时达高峰。ＥＴ１ｍＲＮＡ主要分布肾皮质小血管内皮细胞、髓质肾小管和集合管，ＥＴＡ受体ｍＲＮＡ则分布于上述小血管的平滑肌细胞。ＥＴＢ受体ｍＲＮＡ于再灌流６小时达高峰，主要分布髓质肾小管、集合管。说明缺血再灌流肾内皮素受体亚型上调在皮质以ＥＴＡ为主，在髓质以ＥＴＢ为主，分别与增强表达的ＥＴ１结合导致肾皮质缺血和水钠代谢异常。     

地高辛对前列腺癌LNCaP和PC3细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨地高辛对雄激素依赖和去势抵抗性前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制.方法 设立地高辛的浓度和时间梯度,分别作用于正常前列腺细胞株、雄激素依赖性及去势抵抗性前列腺癌细胞株LNCaP和PC3,流式细胞仪检测凋亡指数,MTT法检测细胞增殖速率;应用Western Blot技术检测HIF-1 α和VEGF的蛋白水平.结果 地高辛对LN-CaP和PC3细胞均有良好的抑制增殖及促进凋亡的作用(P＜0.05);Western Blot法检测提示地高辛干预组HIF-1α和VEGF的蛋白水平较未干预组明显降低(P＜0.05).结论 地高辛可抑制雄激素依赖及去势抵抗性前列腺癌细胞增殖并促进其凋亡,作用机制可能是通过抑制HIF-1 α/VEGF这一信号通路来发挥作用.     

Effects of endothelin receptor antagonists on the progression of diabetic nephropathy

BACKGROUND: Diabetic nephropathy is the leading cause of end-stage renal disease in European countries and is associated with an enhanced renal synthesis of endothelin (ET)-1. ETs are - beside their potent vasoconstrictor properties - very potent profibrotic acting paracrine hormones especially in the kidney. METHODS: We analyzed in rats with streptozotocin-induced diabetes the effects of an ETA-type (ETA) receptor antagonist (LU 135252) in comparison to a combined ETA/ETB receptor antagonist (LU 224332) on the expression of interstitial and glomerular collagen type I, III and IV as well as on fibronectin and laminin by quantitative immunohistochemistry using a computer-aided image analysis system. Global glomerular matrix deposition was analyzed after PAS staining. In addition to the morphometric examination of the kidneys, we also investigated GFR, urinary albumin and total protein excretion. The diabetic rats were treated for 36 weeks. RESULTS: Treatment with either LU 135252 or LU 224332 normalized the amount of PAS-positive material within the glomeruli. The expression of glomerular fibronectin and type IV collagen was increased 36 weeks after induction of diabetes. The overexpression of these two matrix proteins within the glomeruli of diabetic rats was completely abolished by both ET receptor antagonists, whereas protein excretion was only reduced by about 50% as compared to diabetic rats without treatment. CONCLUSION: The present study indicates that ETA receptor antagonists as well as combined ETA/ETB receptor antagonists reduce proteinuria and completely normalize the renal matrix protein expression in hyperglycemic rats with streptozotocin-induced diabetes. The antifibrotic effect seems to be mediated via the ETA receptor. ET receptor antagonists might be a new approach in the treatment of diabetic nephropathy.     

Endothelin A receptor blockade does not alter PSA secretion in prostate cancer cell lines

BACKGROUND: Some men treated with atrasentan (ABT-627), an endothelin A (ETA) receptor inhibitor, had declines in their serum PSA levels. It is our hypothesis that this decrease is due to anti-tumoral activity and not a reduction in PSA secretion at the cellular level. METHODS: Two PSA secreting prostate cancer cell lines (LAPC4 and LNCaP) were treated with atrasentan and an ETB receptor antagonist (A192621) in varying concentrations (10(-6)-10(-10) M) and PSA levels were measured in the culture media. RESULTS: LNCaP and LAPC4 cells both express ETA receptors. Neither the ETA or ETB antagonist altered PSA secretion, while addition of DHT, a positive control, produced a marked increase in PSA secretion. CONCLUSIONS: Blockade of the ETA receptor does not affect the secretion of PSA in prostate cancer cell lines.     

Identification of endothelin receptors in normal and hyperplasic human prostate tissues

Specific endothelin-1 (ET1) binding sites have been demonstrated in membranes derived from normal (NP) and benign hyperplasic (BPH) human prostate using an ¹²⁵I-ET1 binding assay. ¹²⁵I saturation experiments and Scatchard analysis demonstrated the existence of a homogeneous population of binding sites with high affinity (Kd_app) and density (B_max), respectively, 106 ± 15 pM and 1086 ± 399 fmol/mg protein for NP (n = 5) and 168 ± 26 pM and 964 ± 445 fmol/mg protein for BPH (n = 5). We demonstrated the presence of two subtypes of ET1 receptors, ETA and ETB, by means of the following ET1 competitors: ET2, ET3, and BQ123 (which is selective for the ETA receptor), and IRL1620 and sarafotoxine c (S6c) (which are selective for the ETB receptor). The displacement curves allowed us to conclude that the large majority (85%) of the ET1 receptors in normal and hyperplasic human prostate are of the A subtype. © 1996 Wiley-Liss, Inc.