华蟾素诱导多发性骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡的实验研究

目的：观察华蟾素对多发性骨髓瘤细胞（MM）RPI88226抑制增殖和凋亡作用。方法：应用MTT法,检测华蟾素对多发性骨髓瘤细胞株RPI88226增殖的影响。通过Hochest33258染色、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：华蟾素明显抑制RPI88226细胞的增殖,与空白对照组相比,差别有统计学意义（P〈0．05）。华蟾素作用RPI88226细胞增殖24h的半数抑制浓度（IC50）分别为0．152μg／ml。华蟾素以0．15μg／ml及0．3μg／ml作用于RPI8822624h后细胞形态改变,可见明显的凋亡小体出现。AnnexinV-PI双标记法流式细胞仪分析结果显示,RPI88226细胞0．3μg／ml华蟾素作用6、12、24h后,早期凋亡细胞百分数分别为7．23％、12．16％、28．04％,明显高于空白对照组4．78％。结论：华蟾素对MM细胞株RPI88226有生长抑制作用,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用。     

维生素K_3和三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的协同作用

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合维生素K3对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞生长抑制及诱导凋亡作用机制。方法：采用四甲基噻唑氮蓝比色法检测As2O3联合VK3对RPMI8226细胞生长抑制作用、DNA电泳、流式细胞术Annexin V/PI标记法检测凋亡,观察As2O3联维生素K3对RPMI8226细胞的增殖抑制及促凋亡作用;同时通过RT-PCR检测VEGF表达来观察VK3、As2O3对RPMI8226细胞的凋亡诱导作用及两者是否有协同作用。结果：VK3和As2O3二者均可明显抑制RPMI8226细胞系的增殖,其作用机制可能通过降低Bcl-2mRNA的表达、诱导调亡,这种效应具有时间与剂量依赖性;二者间具有协同作用。经VK3和As2O3作用后的RPMI8226细胞出现凋亡细胞的特征;维生素K3（VK3）、As2O3单独及联用作用于RPMI8226细胞DNA凝胶电泳可见明显的梯形条带。与单用As2O3相比,As2O3联合VK3作用于RPMI8226细胞48h后,细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）,G0/G1期细胞比例升高,S期细胞减少。RT-PCR检测表明RPMI8226细胞经VK3、As2O3单独及联合作用后血管内皮生长因子VEGF表达明显降低。结论：VK3、As2O3单用及联用对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用和诱导凋亡作用,且具有一定的量效和时效关系。可能通过VEGF表达降低而起作用。VK3和As2O3在诱导RPMI8226细胞凋亡中具有明显的协同作用。     

维生素K3和三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的协同作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合维生素K3对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞生长抑制及诱导凋亡作用机制。方法:采用四甲基噻唑氮蓝比色法检测As2O3联合VK3对RPMI8226细胞生长抑制作用、DNA电泳、流式细胞术Annexin V/PI标记法检测凋亡,观察As2O3联维生素K3对RPMI8226细胞的增殖抑制及促凋亡作用;同时通过RT-PCR检测VEGF表达来观察VK3、As2O3对RPMI8226细胞的凋亡诱导作用及两者是否有协同作用。结果:VK3和As2O3二者均可明显抑制RPMI8226细胞系的增殖,其作用机制可能通过降低Bcl-2mRNA的表达、诱导调亡,这种效应具有时间与剂量依赖性;二者间具有协同作用。经VK3和As2O3作用后的RPMI8226细胞出现凋亡细胞的特征;维生素K3(VK3)、As2O3单独及联用作用于RPMI8226细胞DNA凝胶电泳可见明显的梯形条带。与单用As2O3相比,As2O3联合VK3作用于RPMI8226细胞48h后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),G0/G1期细胞比例升高,S期细胞减少。RT-PCR检测表明RPMI8226细胞经VK3、As2O3单独及联合作用后血管内皮生长因子VEGF表达明显降低。结论:VK3、As2O3单用及联用对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用和诱导凋亡作用,且具有一定的量效和时效关系。可能通过VEGF表达降低而起作用。VK3和As2O3在诱导RPMI8226细胞凋亡中具有明显的协同作用。     

人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的:探索人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型建立的方法。方法:Balb/c裸鼠进行3GyX线照射预处理后24h,于其皮下接种2×107人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226,每2~3d观察裸鼠体重的变化、肿瘤生长的情况、裸鼠的生存时间等,待裸鼠濒死或死亡,或者超过观察时间仍未死亡时,处死裸鼠,取其皮下结节及器官进行病理检测,同时摘眼球取血行血清免疫固定电泳检测。结果:荷瘤裸鼠出现皮下结节的高峰为荷瘤后第2~3周,结节体积基本达到高峰为荷瘤后第5~6周;裸鼠死亡高峰出现在荷瘤后第7周,荷瘤小鼠中位生存时间为荷瘤后52d;裸鼠处死后血清中未检测到人源单克隆免疫球蛋白;皮下结节HE染色证实瘤组织为浆细胞来源,器官HE染色显示肝脏部分炎性损伤。结论:采用RPMI8226人骨髓瘤细胞于Balb/c裸鼠皮下接种(接种细胞数为2×107个细胞)造模的方法,具有操作过程较简单、技术要求低,观察肿瘤生长较为直观等优点;同时采用X线照射预处理的方法可降低裸鼠免疫力,明显提高模型的成瘤率;人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226皮下接种于裸鼠,肿瘤生长过程中很难有人源单克隆免疫球蛋白分泌入血;荷瘤裸鼠出现肝脏的损伤,也许可作为今后抗肿瘤药物疗效研究的指标之一。     

丹参酮诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡并降低其VEGF表达

目的 观察丹参酮抑制多发性骨髓瘤(MM)RPMI8226细胞生长及其对VEGF表达的影响.方法 将丹参酮与RPMI8226细胞共培育,采用MTT法观察细胞生长,AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞膜表面VEGF的表达.结果 丹参酮对RPMI8226细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效关系;丹参酮诱导8226细胞凋亡,丹参酮作用于RPMI8226细胞48 h导致VEGF表达减少.结论 丹参酮抑制RPMI8226细胞的生长诱导其凋亡,同时降低VEGF表达.     

褐藻糖胶对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226中Wnt/β-catenin通路的影响研究

目的探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡过程中Wnt/β-catenin通路的变化。方法应用褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPM18226的凋亡,观察多发性骨髓瘤细胞株经10,25,50,100μg/m L浓度褐藻糖胶分别作用24,48,72 h后细胞增殖抑制率。将细胞分为3组:空白组不予药物干预,褐藻糖胶组给予25μg/m L褐藻糖胶培养,Wnt通道抑制剂(DKK-1)组给予DKK-1培养。用Annexin V-FITC/PI双染法检测3组RPMI822细胞凋亡率,通过Western blot方法检测3组β-catenin与c-myc蛋白表达情况。结果随褐藻糖胶浓度的增高和作用时间的延长,细胞增殖抑制率明显增高(P均<0.05)。褐藻糖胶组细胞凋亡率明显高于空白组;褐藻糖胶组和DKK-1组β-catenin和c-myc蛋白表达水平均明显低于空白组(P均<0.05),褐藻糖胶组与DKK-1组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论褐藻糖胶能够诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226发生凋亡,与DKK-1作用相当,并且褐藻糖胶能够有效抑制多发性骨髓瘤细胞株中Wnt/β-catenin通路的活化状态,为有效治疗多发性骨髓瘤患者提供了理论依据。     

积雪草酸诱导大鼠肝星状细胞凋亡

目的 探讨积雪草酸诱导大鼠肝星状细胞系 HSC-T6 凋亡的作用。方法 用乳酸脱氢酶 (LDH) 法和 MTT 法检测积雪草酸对 HSC-T6 细胞的细胞毒性和增殖的影响。不同浓度积雪草酸作用外源性β-转化生长因子 (TGF-β) 激活的 HSC-T6 细胞,通过 Western blotting 方法检测 HSC-T6 细胞凋亡信号分子 Caspase-3 以及Ⅰ型胶原蛋白表达。结果 积雪草酸 (≤30 μmol/L) 对 HSC-T6 细胞无显著的细胞毒性且对细胞增殖无明显作用。积雪草酸可上调 HSC-T6 细胞 cleaved-caspase-3,同时抑制Ⅰ型胶原蛋白表达。结论 积雪草酸可通过诱导 HSC-T6 细胞凋亡达到抑制肝纤维化的作用。     

白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞的体外抗癌作用

目的研究白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对骨髓瘤细胞系RPMI-8226和KM3增殖的影响;Annexin-V/PI双标流式细胞术检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞凋亡的影响;PI单标流式细胞术测定白藜芦醇对RPMI-8226、KM3细胞DNA分布的影响;Western-blotting方法检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞Bcl-2、Bax、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2蛋白表达的影响。结果白藜芦醇对RPMI-8226和KM3细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑制增殖作用呈时效和量效关系。25～100μmol/L白藜芦醇作用24h可诱导RPMI-8226细胞凋亡,100μmol/L作用24h时KM3细胞凋亡率达(26.5±2.7)%。白藜芦醇处理组RPMI-8226及KM3细胞周期均发生变化,细胞周期被阻滞于S期和G0/G1期。白藜芦醇以时间依赖方式下调抗凋亡蛋白Bcl-2、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2的表达,并可上调促凋亡蛋白Bax的表达,但白藜芦醇对各蛋白作用的动力学不同。结论白藜芦醇可通过调控细胞周期进程、诱导细胞凋亡而有效抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡与调节Bcl-2和IAP家族蛋白的表达有关。     

甘草甜素调控多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡机制研究

目的:探讨甘草甜素调控miR-4651表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、凋亡的影响机制。方法:将多发性骨髓瘤RPMI8226细胞随机分为对照组、甘草甜素低、中、高浓度组、miR-4651组、miR-NC组、甘草甜素+anti-miR-4651组、甘草甜素+anti-miR-NC组;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-4651表达水平。结果:与对照组比较,甘草甜素低、中、高浓度组骨髓瘤RPMI8226细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和miR-4651表达水平均逐渐升高(P<0.05),呈剂量依赖性。上调miR-4651表达后,骨髓瘤RPMI8226细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均升高(P<0.05),而抑制miR-4651的表达则逆转了甘草甜素对骨髓瘤RPMI8226细胞增殖和凋亡的作用。结论:甘草甜素通过上调miR-4651表达可抑制多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖,促进细胞凋亡。     

积雪草酸及其衍生物的生物活性研究概况

积雪草酸(asiaticacid)是传统药用植物积雪草中量较高的乌苏烷型五环三萜酸。生物活性研究表明积雪草酸及其衍生物具有治疗皮肤创伤、抗抑郁、抗阿尔茨海默病以及保肝、保护心脑血管和诱导肿瘤细胞凋亡等多种作用。综述近年来积雪草酸及其衍生物生物活性的研究概况并就开发积雪草酸及相关衍生物提出建议。     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤U266细胞组蛋白去甲基化酶的调节作用

目的 研究雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤U266细胞组蛋白去甲基化酶的影响,探讨其表观遗传调控作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖活性:Annexin V-FITC/PI双标法流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR法检测U266细胞组蛋白赖氨酸去甲基化酶1 (LSDI) mRNA、组蛋白去甲基化酶(JMJD2B)mRNA表达的变化;激光共聚焦显微技术观察LSDI亚细胞定位情况及蛋白量的变化;Western blotting法检测在雷公藤内酯醇干预下LSD1和JMJD2B蛋白表达的变化.结果 雷公藤内酯醇以剂量、时间相关方式抑制U266细胞增殖,与细胞培养24 h的IC50为153.2 nmol/L;以剂量相关方式诱导U266细胞凋亡,雷公藤内酯醇80 nmol/L作用U266细胞24 h后,细胞出现典型的凋亡形态学改变,总凋亡率达32.9％.;以剂量相关方式抑制JMJD2B蛋白的表达,同时促进LSD1蛋白表达.结论 雷公藤内酯醇在抑制U266细胞增殖、诱导其凋亡的同时,明显改变LSD1、JMJD2B的表达,其诱导U266细胞凋亡和抗肿瘤效应可能与其调节LSD1、JMJD2B表达有关.     

积雪草酸药理作用及其结构修饰的研究进展

积雪草酸是伞形科植物积雪草中的一种重要的五环三萜酸类化合物,具有广泛的生物学活性,如抗肿瘤、改善认知、抗糖尿病、抗炎、抑菌、促进伤口愈合等作用。积雪草酸及其衍生物的药理作用及结构修饰已成为研究的热点。对积雪草酸的药理活性及结构修饰研究进展进行综述并进行展望。     

水仙提取物对人类多发性骨髓瘤细胞系ARH-77增殖和凋亡的作用

目的研究水仙提取物对人类多发性骨髓瘤细胞系ARH-77的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法检测水仙提取物(1.25、2.5、5、10、20μg/mL)作用ARH-77细胞3d后细胞存活率的变化;采用荧光染色法观察水仙提取物(10μg/mL)作用3d对ARH-77细胞凋亡的影响;流式细胞仪分析细胞周期时相变化和检测细胞凋亡率;核仁组织区(NOR)相关嗜银蛋白(AgNOR)染色法检测细胞NOR的改变;透射电镜观察细胞亚微结构变化。结果水仙提取物能明显抑制ARH-77细胞增殖,降低细胞存活率(P<0.01),其IC50为4.8μg/mL;促进肿瘤细胞凋亡(P<0.05),阻滞细胞周期于G2/M期(P<0.01);降低AgNOR的数目(P<0.001)和促进AgNOR的融合(P<0.01);引起细胞亚微结构改变。结论水仙提取物能抑制ARH-77细胞增殖,诱导ARH-77细胞凋亡。     

鱼藤素对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖和凋亡的影响及对核受体共激活因子-3的调控作用

目的 观察鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞增殖和凋亡的影响及其对核受体共激活因子-3(SRC-3)的调控作用,研究鱼藤素诱导凋亡作用与其调节SRC_3的相互关系.方法 采用MTT法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI双标法及Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变,RT-PCR法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞内SRC-3基因表达的影响;免疫组化法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞SRC-3蛋白的影响和分布情况.结果 鱼藤素能明显抑制RPMI-8226细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其作用24 h的IC50为(54.55±0.40)nmol/L.此外,鱼藤素具有较强的诱导RPMI-8226细胞凋亡的效应,25 nmol/L即能诱导(17.04±0.73)%的RPMI-8226细胞发生凋亡;当药物浓度达到100 nmol/L时,总凋亡率达(63.57±1.36)%.在RPMI-8226细胞中SRC-3高表达,且主要分布于细胞核,经鱼藤素干预后,SRC-3的mRNA和蛋白表达水平明显下降.结论 鱼藤素能明显抑制RPMI-8226细胞的增殖,并诱导其凋亡.而鱼藤素诱导的SRC-3表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.     

龙葵总碱对骨髓瘤细胞凋亡及NF-KB表达的影响

目的：探讨龙葵总碱对人骨髓瘤RPMI-8226细胞的凋亡作用以及对NF-KB表达的影响。方法：选用人骨髓瘤RPMI-8226细胞株为研究对象,以龙葵总碱为被试对象,采用MTT法检测细胞增殖活性,AnnexinV-FITC/PI双标记法分析细胞凋亡的改变;免疫荧光细胞化学染色分析NF-KB的表达情况。结果：在25mg/L龙葵总碱处理RPMI-8226细胞48h后,RPMI-8226细胞的生长出现明显的抑制作用,且随着浓度加大及时间延长,其抑制作用逐步增强;药物浓度〈25mg/L时,诱导凋亡作用不明显,当药物浓度达到25mg/L时,早期凋亡明显增多;当药物浓度达25mg/L（此时细胞凋亡明显）时,NF-KB表达水平的降低具有统计学意义。结论：龙葵总碱可抑制骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖,促进骨髓瘤细胞凋亡,并且表现为剂量和时间依赖性;NF-KB表迭量在人多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞株随龙葵总碱的药物浓度增大而降低。     

积雪草酸对MPTP诱导小鼠帕金森样运动症状的影响

目的考察积雪草酸(AA)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导小鼠帕金森(PD)样运动症状的影响及其神经保护机制。方法取雄性C57BL/6小鼠45只,除对照组9只小鼠外,其余用25 mg/kg MPTP腹腔注射7 d建立帕金森病模型,随机分为模型组,积雪草酸低、高剂量组,阳性对照组。造模同时开始连续11 d灌胃给予相应药物或溶剂(0.5%羧甲基纤维素钠),第12天进行行为学测试。ELISA试剂盒检测血清白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组织化学法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞;检测中脑IL-1β、TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2(COX-2)的mRNA表达,以及丙二醛(MDA)含有量。结果与模型组相比,给予积雪草酸的小鼠在行为学测试中表现更好(P<0.05,P<0.01)。而且,积雪草酸通过上调TH表达、增加TH阳性细胞数量来有效保护黑质多巴胺能神经元(P<0.05);抑制中脑i NOS、COX-2、IL-1β、TNF-α的mRNA表达(P<0.05,P<0.01);降低中脑MDA水平(P<0.01);降低血清IL-1β、TNF-α含有量(P<0.05,P<0.01)。结论积雪草酸能缓解PD小鼠运动障碍和多巴胺能神经元损伤,抗炎、抗氧化是其可能的神经保护机制。     

甘草次酸对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的 研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制作用,分析其引起细胞周期的变化及探讨其可能的抗癌机制.方法 MTT法检测甘草次酸对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期的变化以及cyclin D1和cyclin E蛋白表达的变化;RT-PCR测定细胞中cyclin D1和cyclin E mRNA表达的改变.结果 甘草次酸对K562有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为量效和时效依赖性,作用48 h的IC50值为(93.1±3.7)μmol/L.甘草次酸可以诱导细胞发生凋亡,Hoechst染色可见细胞核内凋亡小体.甘草次酸可以诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期,同时G2/M期细胞比例减小,S期变化不明显,仅在最大浓度组稍有降低.甘草次酸可以同时下调K562细胞内cylin D1和cyclin E蛋白和基因的表达,下调作用与剂量呈正相关.结论 甘草次酸能明显抑制K562细胞增殖,并诱导其周期阻滞于G0/G1期.该效应可能与其下调周期蛋白cyclin D1和cyclin E表达有关,有望成为新型抗肿瘤中药.     

土槿甲酸对3种细胞系增殖抑制作用的比较

 目的比较土槿甲酸(PAA)对人胃癌细胞(MGC80-3),人肝癌细胞(SMMC-7721)和人红白血病细胞(K562)的增殖抑制作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度PAA对体外培养的MGC80-3细胞,SMMC-7721细胞和K562细胞的细胞毒作用。Hoechst33342/PI荧光双染色方法检测细胞凋亡。琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞DNA裂解。结果PAA明显抑制MGC80-3,SMMC-7721和K562细胞系的增殖,其IC₅₀值分别为12.500,3.125,12.500μmol·L^-1。凋亡细胞比例在用药48h分别达83.50%,44.50%和63.20%。琼脂糖凝胶电泳呈典型的"DNA Ladder"。结论PAA能有效抑制MGC80-3,SMMC-7721和K562细胞增殖并诱导凋亡。