金钗石斛遗传多样性研究的随机扩增多态DNA-PCR反应体系的建立与优化

目的 对影响金钗石斛随机扩增多态DNA(RAPD)-PCR扩增效果的一些因素进行优化,为进一步研究其遗传多样性奠定基础.方法 对金钗石斛RAPD分析中一些重要影响因素进行比较系统的构建和优化,建立金钗石斛RAPD稳定可靠的反应体系.结果 金钗石斛较适宜的RAPD-PCR反应条件为:10μl PCR反应体系中,5～20 ng模板DNA,3.0mmol·L-1Mg2+,0.34 mmol·L-1dNTPs,0.6 U Taq DNA聚合酶,1.5 μmol·L-1引物,较适宜的退火温度为36℃.结论 所建立的金钗石斛RAPD反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强等特点,可用于金钗石斛的遗传多样性研究.以该优化的RAPD条件进行重复性实验,其实验结果重复性良好.     

金钗石斛鲜品闪式提取方法的工艺研究

目的研究闪式提取法中金钗石斛鲜品的最佳提取条件.方法采用L9(34)正交试验法优选金钗石斛的最佳提取条件.考察提取次数、溶剂浓度和溶剂倍数3个因素,每个因素选取3个水平进行实验.结果最佳工艺为A2B2C3,,即用8倍量75%乙醇破碎提取3次,时间为30s/次.结论采用本工艺金钗石斛的活性成分石斛碱含量较高,工艺可行.     

金钗石斛化学成分的研究

目的 研究金钗石斛的化学成分,为阐明其活性成分提供依据.方法 利用乙醇进行提取,硅胶柱层析、制备薄层层析和Sephadex LH-20柱层析进行分离纯化,波谱分析(核磁共振氢谱、碳谱和质谱)确定结构.结果 分离并鉴定了4 个化合物,分别为: moscatin (Ⅰ),gigantol (II),batatasin III (III),stigmasterol (IV).结论 化合物Ⅰ为首次从该植物中得到.     

金钗、金钗石斛的名实考证

该文考证中药材"金钗"、"金钗石斛"的植物基原,以正本清源。结合本草描述,查阅湖北、四川、重庆、河南和陕西等5省市部分地方志及文史资料,对老河口、利川、房县、西峡、内乡、安康、万源等20余个县市的老药工和老中医进行走访调查,并采集调查区域的少量金钗植株进行活体保存和鉴定。"金钗"和"金钗石斛"之名在川东北、渝东、鄂西、鄂北、陕东南、豫西的民间应用广泛,地方志及文史资料多有记载,在民间歌谣和故事传说中亦有体现;调查和鉴定结果表明,历史上中药材名称"金钗"和"金钗石斛"为中国特有种曲茎石斛Dendrobium flexicaule,并有龙头金、人字金、环字金、龙头凤尾金等别名,所加工的干燥金钗药材称金耳环。中药材"金钗"、"金钗石斛"的植物来源为曲茎石斛D. flexicaule,而不是《中国植物志》(19卷)和《中国植物志》(英文版)(25卷),以及自1977年以来历版《中国药典》中所使用的名称石斛(D. nobile,别名金钗石斛)。尽管植物的中文名称不受植物分类学者对植物命名所必须遵循的规章《国际藻类、菌物和植物命名法规》的制约,但为避免中文名称使用混乱,特别是中药材行业药材名称的混乱,建议将石斛D. nobile的中文别名更改为扁草石斛,而D. flexicaule的中文名改为金钗石斛,别名中增加金钗、曲茎石斛。     

金钗石斛多糖提取工艺的优化及对小鼠脾细胞增殖的影响

目的:优化金钗多糖的提取工艺,并研究其对小鼠脾细胞增殖的影响。方法:采用单因素试验和L9(34)正交试验法考察了提取时间、提取温度和料液比对金钗石斛多糖得率的影响,并用MTS/PMS法测定其对小鼠脾细胞增殖的影响。结果:金钗石斛多糖的最佳提取工艺条件为液料比45∶1,提取温度90℃,提取时间2.5 h;金钗石斛精制多糖、金钗石斛粗制多糖能直接促进脾细胞的增殖,且两者能显著增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的T淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞的增殖,在此最佳工艺条件下金钗石斛粗多糖得率为2.80%。结论:金钗石斛多糖能有效的促进脾淋巴细胞的增殖,并与Con A,LPS对T,B淋巴细胞的增殖有协同刺激作用。     

纤维素酶提取金钗石斛多糖工艺研究

目的:对纤维素酶用于金钗石斛多糖提取工艺的酶解参数进行优选。方法:通过正交实验,以多糖提取率为指标,采用紫外分光光度法测定多糖含量,以此评价酶解工艺的优劣。结果:最佳酶解条件为:料液比1∶50,pH值5.0,提取时间170min,酶用量4500U/g,酶解温度55℃,此时金钗石斛多糖提取率为7.71%,比常规热回流提取方法高43.84%。结论:本方法装置简单,提取率高,为金钗石斛深入研究奠定基础,在中药有效成分的提取方面具有潜在的工业应用价值。     

金钗石斛研究进展

金钗石斛是多年生草本植物,为天门冬目,兰科,石斛属植物金钗石斛新鲜或干燥茎,因其酷似古代妇女头上所戴饰物金钗得其名,因其广泛和卓越的药用价值而被誉为“民间仙草、植物黄金”[1].金钗石斛味甘、微咸、无毒.其作用在《神农本草经》及《本草纲目》所述甚广,《中国药典》2010年版记载石斛对其功能进行综合,最终确定主治为“益胃生津、滋阴清热,用于阴伤津亏,口干烦渴,食少干呕,病后虚热,目暗不明[2],另外,还有抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、增强免疫等作用[3].     

气相色谱法测定金钗石斛药材中石斛碱的含量

金钗石斛为兰科植物Dendrobium nobileLindl·的茎,是我国常用的名贵中药材之一,《本草纲目》称之有“强阴益精、厚肠胃、补内绝不足、轻身延年”的功效,因此常被中医用于治疗热病伤津、口干烦渴、病后虚热、舌光少苔、食少干呕、目暗不明等症。现代研究也证实它对咽喉疾病、肠     

金钗石斛培养初步研究

目的筛选金钗石斛的适宜培养基,探索金钗石斛快速繁殖的途径。方法以取材部位、基本培养基、激素比例三因素进行正交试验。结果取材部位是最敏感的因素,其次是激素比例,基本培养基的影响相对较小。结论金钗石斛的适宜培养方案为MS培养基,附加6-BA2～5mg*L-1,NAA0.1～0.5mg*L-1,2000Lx光照10h*d-1,30d左右继代一次。     

金钗石斛生物学特性研究

对金钗石斛根的生长习性、开花结果、植株生长等进行了观察。在自然野生状态下,金钗石斛既有有性繁殖,又有无性繁殖。野生条件下,主要靠无性繁殖;不同生长年限的假鳞茎承担着不同的任务:当年生假鳞茎进行物质积垒,当年就停止生长。2年生假鳞茎进行笋芽萌发及笋芽的养分供给,3年生假鳞茎进行开花结果,4年生假鳞茎进行萌发高位芽苗,随着无性系分株的生长,假鳞茎必须进行自疏或觅养,年限长的假鳞茎逐渐枯萎死去;金钗石斛从花芽出现到末花,需要约50d左右,一个花序的花期为10~13 d。挂果可长达近1年的时间。种子成熟期为11~翌年2月份。人工条件下,种子从播种到出瓶炼苗,需培养9~10个月的时间;金钗石斛的成活根在一年中有两次明显的生长旺盛期,第1次在2~4月,第2次在9~10月。     

青葙SRAP体系的建立和优化

目的 探讨影响青葙SRAP(sequence-related amplified polymorphism)扩增的各种因素,建立并优化青葙SRAP反应体系,为分子水平鉴定青葙子及其伪品,探讨青葙不同种质问的亲缘关系奠定基础.方法 用CTAB法提取青葙DAN,设计Taq酶浓度(0.02、0.04、0.06 U/μL)、dNTP浓度(0.10、0.20、0.30 mmol/L)、Primer浓度(0.15、0.30、0.45μmol/L)3水平3因素试验和Mg2 浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mmol/L)8水平单因素试验.在25 μL体系中加入模板DNA 20 ng,对体系进行优化,用琼脂糖进行检测.结果 建立了适合青葙的SRAP体系,在25 μL体系中,DNA为20 ng,Taq酶浓度为0.04 U/μL,dNTP浓度为0.30 mmol/L,Primer浓度为0.30 μmol/L,Mg2 浓度为2.5 mmol/L,优化后的体系目标条带增多,且比较稳定,重现性好,得到了较好的扩增效果.结论 本研究建立的反应体系适合青葙SRAP的研究.为从分子水平鉴定青葙子正品与伪品以及鉴定青葙不同种质资源奠定了基础.     

仙茅属植物7个国产种的SRAP遗传关系研究

目的:研究仙茅属植物7个国产种亲缘关系。方法:通过SRAP分析,利用TREECONW软件分析遗传距离,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图。结果:25对引物组合共得到923条扩增条带,其中有910条呈现多态性,占98.6%。遗传距离0.631~0.912。聚类结果显示仙茅属植物7个国产种分类结果与传统形态分类结果基本一致。结论:仙茅属植物7个国产种的多态性水平高,SRAP用于其分类是可行的。     

栽培黄连群体遗传关系的SRAP分析

目的揭示栽培黄连Coptis chinensis群体的遗传关系。方法以24个不同来源地的栽培黄连群体为试材,采用SRAP分子标记技术,用Treeconw软件分析遗传相似系数,UPGMA方法聚类,构建遗传系统树。结果36对引物共得到276条扩增条带,其中有120条呈现多态性,占43.48%,从DNA分子水平显示出供试种质遗传多样性并不丰富。遗传相似系数变化范围在0.877 0~0.951 9。聚类结果显示栽培黄连群体遗传关系与来源地无明显相关性,仅在小分支中表现出一定的地域相关性。结论栽培黄连群体的遗传多样性水平较低,显示遗传背景较为单一。     

不同来源丹参种质遗传多样性的SRAP标记分析

目的 解决丹参育种工作中的丹参种质资源的鉴别与分类.方法 利用SRAP分子标记技术对48个不同来源的丹参种质进行了遗传多态性的分析,并对其进行了类群的划分.结果 利用筛选到的15对SRAP引物组合从材料中检测到了120个等位位点.利用不加权成对群算术平均法(UPGMA)对丹参种质进行聚类分析可以将其分为两大类群,每一类群包含3个亚群.结论 不同丹参种群间遗传距离与空间距离之间的关系较为复杂,不同地区间丹参种质的遗传分化不均衡.随着丹参种质驯化程度的增加,种质问的遗传距离有所增加.     

金钗石斛化学成分的研究

 目的　对金钗石斛 (Dendrobium nobile Lindl)茎的化学成分进行研究。方法　使用硅胶柱色谱进行分离纯化,理化性质和光谱分析鉴定结构。结果　分离并鉴定了5个单体化合物及2个系列混合物。分别为海松二烯,3-甲氧基-4-羟基反式肉桂酸二十二烷酯,3-甲氧基-4-羟基反式肉桂酸二十四烷酯,豆甾醇,对羟基顺式肉桂酸三十烷酯,对羟基反式肉桂酸直链烷酯的4个系列化合物的混合物,直链烷醇的5个系列化合物的混合物。结论　以上成分均为首次从该种植物中分得,其中海松二烯为首次从该属植物中分得。     

石斛属4种植物的AFLP分析

目的 研究石斛属植物DNA指纹图谱,初步探讨AFLP分子标记技术在石斛地道性鉴别上的应用。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对石斛属内石斛组4个种和一个外类群种进行基因组DNA多态性分析。结果从64对引物组合中选出5对引物组合构建了5个种的DNA指纹图谱。通过聚类分析,石斛属4种植物聚成一个大类,彼此关系得到了很好的分辨,并获得bootstrap校验的有力支持。结论AFLP技术可用于药用石斛DNA指纹图谱研究。     

正交试验设计优选九节龙皂苷Ⅰ聚乳酸微球的制备工艺

目的 筛选溶剂蒸发法制备九节龙皂苷Ⅰ聚乳酸微球(ADS-Ⅰ-PLA-MS)最佳工艺.方法 采用HPLC-ELSD测定方法,以包封率和载药量为评价指标,W/O/W溶剂蒸发法制备微球;通过单因素和正交试验设计,考察内水相九节龙皂苷Ⅰ (ADS-Ⅰ)甲醇溶液的质量浓度、ADS-Ⅰ甲醇溶液与聚乳酸(PLA)二氯甲烷溶液体积比、PLA二氯甲烷溶液质量浓度和聚乙烯醇(PVA)体积等因素对ADS-Ⅰ-PLA-MS包封率及载药量的影响.结果 溶剂蒸发法制备ADS-Ⅰ-PLA-MS的最佳工艺条件为ADS-Ⅰ甲醇溶液质量浓度为8 mg/mL、ADS-Ⅰ甲醇溶液与PLA二氯甲烷溶液体积比为1∶13、PLA二氯甲烷溶液质量浓度为90 mg/mL、PVA体积为500 mL.结论 优选出的ADS-Ⅰ-PLA-MS制备工艺合理可行.     

UPLC-Q-TOF法分析金钗石斛化学成分

目的:通过超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF),对金钗石斛的乙酸乙酯萃取部位的主要化学成分进行定性分析研究。方法:采用UPLC C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.6μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱;流速0.4 mL/min;柱温30℃。质谱分析采用电喷雾(ESI)离子源,独立数据采集(IDA)、正负离子模式下分别采集数据。针对保留时间、测得的精确相对分子质量,应用MassHunter软件Formula Calculator等功能、天然产物数据库,分析比较各色谱峰的一级二级质谱裂解碎片。结果:从金钗石斛的乙酸乙酯萃取部位共鉴定了45个天然化合物,其主要化学成分包括生物碱类、联苄类、菲类、倍半萜类等。结论:该方法准确、可靠,适用于金钗石斛化学成分的鉴定研究,为金钗石斛的药效物质基础、资源开发利用提供参考。     

石斛属几种植物遗传关系的SRAP和RAPD比较分析

目的 利用SRAP和RAPD两种分子标记技术对9份石斛种质进行遗传多样性研究.方法 用40对SRAP引物组合和36个RAPD引物分别对供试石斛的基因组DNA进行扩增.结果 SRAP引物组合共扩增条带1 977条,多态性比率为90.2%,遗传相似系数GS值变化范围为0.330 2～0.789 2.RAPD引物共扩增出281条带,多态性比率为87.1%,GS值变化范围为0.494 2～0.773 1.利用两种标记得到的聚类结果存在一定的差异,SRAP聚类结果与传统的基于形态特征建立的分类结果比较一致,较好地体现了供试品种的亲缘关系、地域特性.在9个石斛供试种间,SRAP的标记指数MI值(16.46)是RAPD标记MI值(3.67)的4.5倍,表明SRAP具有更大的标记效率.结论 两种标记皆可有效应用于该属植物种质资源的遗传多样性分析.而SRAP标记在石斛的遗传多样性与亲缘关系的研究中,则表现出了极大的优越性.     

金钗石斛提取物抗白内障的体外实验研究

目的研究金钗石斛总生物碱和粗多糖对白内障的抑制作用。方法采用溶剂提取法分离提取金钗石斛总生物碱和粗多糖;DMEM低糖培养基体外培养Wistar大鼠晶状体,将晶状体分为7个组,分别在培养后6、12、18、24 h四个时段观察并记录晶状体混浊度的改变;最后,检测各组晶状体水溶性蛋白、GSH的含量、及T-SOD和MDA的活性。结果在培养的各个时段,正常对照组晶状体始终保持透明,各药物组晶状体混浊度与模型组相比明显较轻（P〈0.05）,而石斛总生物碱高剂量组和阳性对照组混浊程度最轻;金钗石斛总生物碱组、粗多糖组晶状体水溶性蛋白、GSH含量及T-SOD活性均升高,同时MDA的活性降低;其中总生物碱高剂量组晶状体水溶性蛋白含量显著高于阳性对照组水平（P〈0.05）,其MDA活性则显著低于阳性对照组（P〈0.05）。结论金钗石斛总生物碱和粗多糖在体外均有一定的抗白内障之效,而总生物碱的效果优于粗多糖。