当归补血汤不同制剂对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究

[目的]通过比较当归补血汤煎剂及颗粒剂对骨髓抑制小鼠造血机能调控的影响来比较它们之间的疗效差异.[方法]本实验采用造血祖细胞培养术、外周血像的计数法、酶联免疫吸附法(ELISA)等方法对造血祖细胞集落数、外周血像的变化及造血微环境中红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)、粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)的变化进行了检测.[结果]煎剂、颗粒剂能平衡骨髓微环境中EPO、TPO、GM-CSF.的表达;促进骨髓造血细胞从G0/G1期进入G2/M期和S期;促进造血祖细胞增殖,从而提高骨髓抑制小鼠外周血像和骨髓像.[结论]当归补血汤煎剂、颗粒剂均能改善骨髓抑制小鼠的造血机能,其中配方颗粒疗效较为突出.     

生血增白汤对骨髓移植小鼠造血微环境的影响

目的:探讨生血增白汤对骨髓移植小鼠造血微环境的影响。方法:将实验动物随机分为5组:正常组,未做任何处理;对照组、G-CSF组、生血组、生血+G-CSF组,建立小鼠骨髓移植模型,生血组及生血+G-CSF组胃饲生血增白汤浓缩煎剂。骨髓移植后的第9、14、24天进行外周血细胞和骨髓单核细胞计数,并做骨髓组织学观察。结果:骨髓移植后第9、14、24天生血组外周血细胞、血红蛋白、骨髓有核细胞计数及骨髓细胞增生程度均高于其他各对照组(P﹤0.05或P﹤0.01)。结论:生血增白汤具有一定的升高外周血白细胞、红细胞、血红蛋白的作用,并且能够促进骨髓移植小鼠骨髓组织增殖分化,骨髓细胞造血组织容量和成熟红细胞容量增加,脂肪组织容量减少,骨髓造血微环境得到有效改善。     

生血丸促进骨髓抑制小鼠造血功能的机制研究

目的通过观察骨骼抑制小鼠外周血网织红细胞、造血祖/干细胞集落产率的变化,探讨生血丸对60Co合并环磷酰胺致骨髓抑制小鼠的促进造血功能的作用机制。方法雄性BalB/C小鼠随机分为对照组、模型组、生血丸组、重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)阳性对照组,除对照组外,其他3组小鼠以60Co合并环磷酰胺制备骨髓抑制模型后24 h开始给药,生血丸组每天ig 10 g/kg的生血丸1 mL,对照组和模型组ig等体积生理盐水,阳性对照组ip GM-CSF 12 5μg/kg,连续给药7 d。进行网织红细胞计数,造血干祖细胞培养术计数集落产率。结果与模型组相比,生血丸组、阳性对照组均能明显改善骨髓抑制小鼠外周血网织红细胞的计数(P<0.05),生血丸组网织红细胞的形态接近对照组;生血丸组及阳性对照组大鼠各系祖细胞集落产率均得到改善,且两组间比较无显著差异(P>0.05)。结论生血丸能提高骨髓抑制小鼠外周血网织红细胞计数,改善各系造血祖细胞集落产率,可能为生血丸促进骨髓抑制小鼠造血功能的部分机制。     

补肾生血法对化疗后骨髓抑制小鼠造血生长因子GM-CSF,EPO, TPO mRNA表达的影响

目的探讨补肾生血(BSSX)法对化疗后骨髓抑制小鼠造血生长因子基因表达的影响,明确其改善骨髓抑制的机制。方法 60只雄性昆明小鼠随机分为6组,即空白对照组,模型对照组,阳性对照组,BSSX高、中、低剂组。除空白对照组外,其余组均连续4d每日腹腔注射环磷酰胺(CTX,50 mg·kg~(-1))1次,制备化疗后骨髓抑制模型。造模完成次日,阳性对照组皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF,30μg·kg~(-1)),BSSX高、中、低剂组分别按16 g·kg~(-1)、8 g·kg~(-1)、4 g·kg~(-1)给予左归丸联合当归补血丸,均每日1次,连续9d。造模前后记录小鼠体重,并观测外周血白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、血小板计数(PLT)变化,以评价造模成功与否。用药结束后,采用实时荧光定量PCR检测小鼠骨髓细胞中粒-单细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)mRNA表达水平。结果造模前各组小鼠体重、外周血WBC、RBC、HGB、PLT值无明显差异(均P0.05),提示组间具有可比性。造模后注射CTX的小鼠体重、WBC、RBC、HGB明显低于正常小鼠(均P0.01),提示模型复制成功。用药干预9d后,模型对照组小鼠骨髓细胞中GM-CSF、EPO、TPO mRNA表达水平明显低于空白对照组(均P0.01);与模型对照组比较,阳性对照组GM-CSF、EPO mRNA表达水平明显升高(分别P0.01、P0.05),BSSX高剂组GM-CSF、EPO、TPO mRNA表达水平也明显升高(分别P0.01、P0.01、P0.05);在上调GM-CSF、EPO、TPO mRNA表达方面,BSSX高剂组与阳性对照组无明显差异(均P0.05)。结论补肾生血法改善化疗后骨髓抑制的机制与上调骨髓细胞造血生长因子GM-CSF、EPO、TPO mRNA表达有密切关系。     

当归补血汤不同剂型及配伍对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究

 目的本实验通过比较当归补血汤煎剂及颗粒剂对骨髓抑制小鼠造血机能调控的影响来比较它们之间的疗效差异。旨在为中药颗粒剂的疗效提供实验室依据。方法本实验用高效液相色谱仪检测了当归补血汤不同制剂中阿魏酸、黄芪甲苷的含量差异;采用造血祖细胞培养术、外周血像计数法、ELISA等方法对造血祖细胞集落数、外周血像的变化及造血微环境中EPO,TPO,G-CSF的变化进行检测。结果当归补血汤煎剂、颗粒剂能通过平衡骨髓微环境中EPO,TPO,GM-CSF的表达;促进骨髓造血细胞从G_{0/G1期进入G2/M期和S期;促进造血祖细胞增殖,从而提高骨髓抑制小鼠外周血像和骨髓像。结论当归补血汤煎剂、颗粒剂均能改善骨髓抑制小鼠的造血机能,其中配方颗粒剂疗效较为突出。}     

生血增白汤对骨髓移植后小鼠骨髓细胞周期和细胞凋亡的影响

目的探讨生血增白汤对骨髓移植后小鼠骨髓中细胞周期和细胞凋亡的影响及其促进骨髓造血重建的机制。方法将实验动物随机分为5组:正常组、模型组、粒细胞-集落刺激因子组(G-CSF组)、生血组、生血+G-CSF组(联合组);建立小鼠骨髓移植模型,生血组及联合组胃饲生血增白汤浓缩煎剂。骨髓移植后第9、14、24天,采用流式细胞仪检测骨髓单核细胞凋亡率(APO)并分析细胞周期变化,进行外周血细胞和骨髓单核细胞计数,并做骨髓组织学观察。结果骨髓移植后第14天,生血组外周血细胞中血红蛋白高于模型组及G-CSF组(P<0.05),联合组高于模型组(P<0.05);骨髓移植后第24天,生血组外周血细胞中白细胞高于模型组(P<0.05)。骨髓移植后第24天时,G-CSF组、生血组和联合组骨髓单核细胞计数均高于模型组(P<0.01)。骨髓移植后第24天,生血组第24天APO明显低于同期模型组及G-CSF组(P<0.01)。结论生血增白汤能促进骨髓造血细胞的增殖分化,抑制骨髓细胞凋亡,可能是生血增白汤重建造血的机制之一。     

八珍汤对骨髓抑制小鼠血发生的影响

本研究从外周血细胞、骨髓有核细胞、造血祖细胞及细胞周期等方面探讨八珍汤对骨髓抑制小鼠造血系统的作用及其机制。结果显示：①八珍汤能明显促进骨髓抑制小鼠外周血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）、血红蛋白（HB）以及骨髓有核细胞（BMC）的增加;②体内用药能明显促进红系（BFU—E,CFU—E）、粒系（CFU-GM）和巨核系（CFU—Meg）三系造血祖细胞集落形成;③能明显促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞进入细胞周期,使G0／G1期细胞比例减少,S期和G2／M期细胞比例增加。     

十全大补汤对骨髓抑制小鼠造血的影响

本研究从外周血细胞、骨髓有核细胞、造血祖细胞及细胞周期等方面探讨十全大补汤对骨髓抑制小鼠造血系统的作用及其机制。结果显示：①十全大补汤能明显促进骨髓抑制小鼠外周血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）、血红蛋白（HB）以及骨髓有核细胞（BMC）的增加；②体内用药能明显促进红系（BFU-E，CFU-E）、粒系（CFU-GM）和巨核系（CFU-Meg）三系造血祖细胞集落形成；③能明显促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞进入细胞周期，使G0／G1期细胞比例减少，S期和G2／M期细胞比例增加。     

柴胡生血方和逍遥散对辐照后骨髓抑制小鼠造血的影响

目的:研究柴胡生血方和逍遥散促进骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用。方法:方采用60Co-γ射线一次性全身照射小鼠制作骨髓抑制模型,观察柴胡生血方和逍遥散对小鼠外周血象,血清EPO、TPO、GM-CSF,骨髓CD34+等方面的影响。结果:与模型组比较,两方均能不同程度的提高外周血象;两方均能有效调控TPO、EPO、GM-CSF水平,但柴胡生血方的调控作用较逍遥散组更明显;两方均能不同程度提高骨髓CD34+的含量,但逍遥散的提升作用更显著。结论:柴胡生血方和逍遥散均促进辐照后骨髓抑制小鼠造血功能的恢复。     

圣愈汤不同剂型对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期和凋亡影响的研究

目的:观察圣愈汤配方颗粒与煎剂对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,比较两者的功效。方法:采用60Coγ照射和注射环磷酰胺制备骨髓抑制小鼠模型,应用血液学、流式细胞术等方法探讨圣愈汤不同剂型对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数、骨髓细胞周期和凋亡率的影响。结果:圣愈汤煎剂和配方颗粒剂均能促进骨髓造血细胞从G0/G1期进入G2/M期和S期,抑制造血细胞凋亡,提高骨髓抑制小鼠外周血中的白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板数和骨髓有核细胞数。结论:圣愈汤煎剂、配方颗粒剂均能改善骨髓抑制小鼠的造血机能,两种剂型在促进骨髓造血细胞进入细胞增殖周期和抑制骨髓造血细胞凋亡等方面无明显差异。     

抗瘤升白超微饮片对骨髓抑制小鼠造血细胞因子的影响

目的：探讨抗瘤升白超微饮片对骨髓抑制小鼠造血细胞因子的影响。同时比较抗瘤升白超微饮片、抗瘤升白片与地榆升白片的疗效。方法：将60只雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、地榆升白组、抗瘤升白组、抗瘤升白超微软片组,分别给予相应药物灌胃,连续21d。给药第11天,对除正常组外的其余组小鼠连续3d腹腔注射环磷酰胺制备骨髓抑制模型,再将每组随机分为2小组。分别于造模开始后第4、11天分小组通过外周血常规的计数法、酶联免疫吸附法（ELISA）对外周血常规的变化及造血微环境中红细胞生成素（EPO）、血小板生成素（TP0）、粒细胞集落刺激因子（GM—CSF）的变化进行检测。结果：抗瘤升白超微饮片、抗瘤升白片均能促进骨髓抑制模型小鼠骨髓微环境中EPO、TPO、GM—CSF的表达,提高骨髓抑制小鼠外周血白细胞、红细胞和血小板计数。结论：抗瘤升白超微饮片、抗瘤升白片均能改善骨髓抑制小鼠的造血功能,疗效与地榆升白片相当,抗瘤升白超微饮片早期疗效优于地榆升白片。     

补髓生血丸对再生障碍性贫血小鼠造血功能及骨髓VEGF、TPO、VCAM-1 水平的影响

目的 观察补髓生血丸(熟地黄、鹿角胶、黄芪、当归等)对再生障碍性贫血(AA)小鼠的防治作用,并从改善骨髓造血微环境角度分析相关作用机制。方法 将昆明种雄性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(再造生血片,2.70 g·kg^-1)及补髓生血丸低、中、高剂量组(2.25,4.50,9.00 g·kg^-1),每组15只。采用白消安(10 mg·kg^-1)及环磷酰胺(20 mg·kg^-1)交替腹腔注射给药12 d,制备AA小鼠模型。造模同时灌胃给药,每日1次,连续30 d。检测小鼠外周血象;采用瑞士-姬姆萨染色法观察小鼠骨髓涂片;进行骨髓有核细胞计数;HE染色法观察骨髓病理变化;ELISA法检测小鼠血清及骨髓中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板生成素(TPO)、血管细胞黏附因子1(VCAM-1)的水平。结果 各组间的血清及骨髓TPO水平无明显差异(P>0.05)。与正常组比较,模型组小鼠的红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)和血小板(PLT)水平均明显下降(P<0.05);血...     

生血增白汤对骨髓移植后小鼠造血重建中黏附分子表达水平的影响

目的探讨生血增白汤对骨髓移植后小鼠骨髓中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达水平的影响及其促进骨髓造血重建的机制。方法将实验动物随机分为5组：正常组、对照组、G-CSF组、生血增白汤组、G-CSF＋生血增白汤组,建立小鼠骨髓移植模型,生血增白汤组及G-CSF＋生血增白汤组胃饲生血增白汤浓缩煎剂。骨髓移植后第9天、第14天、第24天,采用免疫组化方法检测ICAM-1表达水平,进行外周血细胞和骨髓单核细胞计数,并做骨髓组织学观察。结果骨髓移植后第9天、第14天、第24天,生血增白汤组ICAM-1的表达水平、外周血细胞、血红蛋白、骨髓有核细胞计数及骨髓细胞增生程度均高于其他各组（P〈0.05或P〈0.01）。结论生血增白汤能促进骨髓移植后骨髓中ICAM-1的表达,可能是生血增白汤重建造血的机制之一。     

圣愈汤及其拆方对血虚小鼠骨髓细胞凋亡及增殖周期的影响

目的:研究圣愈汤及其拆方对γ射线照射致血虚小鼠造血系统的影响,探讨圣愈汤补血作用及配伍机制。方法:采用3.5Gy60Coγ射线照射制作放射损伤性血虚小鼠模型,取股骨测定骨髓有核细胞数量,流式细胞仪测定骨髓细胞周期,骨髓组织切片观察骨髓损伤修复情况。结果:圣愈汤及其各拆方药组能明显提高血虚小鼠骨髓有核细胞数量,抑制骨髓细胞凋亡,促进骨髓造血细胞由相对静止时相(G0/G1期)进入细胞增殖活跃时相(S期+G2/M期),明显提高细胞增殖指数(PI),促进骨髓造血组织的修复,以全方效果最佳。结论:抑制骨髓细胞凋亡,诱导骨髓细胞由相对静止期进入增殖活跃期,促进骨髓造血干/祖细胞的增殖、分化,刺激血细胞的生成和释放,可能是圣愈汤补血作用的主要机制之一。     

四物汤对环磷酰胺所致小鼠贫血的影响

目的：探讨四物汤抑制环磷酰胺(CY)所致小鼠贫血的作用机制。方法：用CY腹腔注射建立小鼠贫血模型．同时给小鼠灌服四物汤，采用骨髓细胞培养测定小鼠骨髓干细胞增殖能力、ELISA方法检测小鼠血清促红细胞生成素(EPO)的含量。结果：四物汤能明显促进骨髓干细胞的增殖和升高血清EPO的含量。结论：四物汤能明显抑制环磷酰胺所致的小鼠贫血，其作用机制可能是通过减轻CY对骨髓的抑制、促进红系细胞生长，并促进肾脏合成EPO而实现的。     

左归丸对骨髓抑制小鼠造血调控的影响

目的 观察左归丸对骨髓抑制小鼠外周血、造血干细胞增殖能力、骨髓细胞周期和凋亡的影响,并探讨其可能的造血调控机制.方法 将48只大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型组、阳性对照组和左归丸低、中、高剂量组,各8只,除正常对照组外,其余各组采用60Coγ射线和环磷酰胺联合制作骨髓抑制大鼠模型,于造模结束后第2 d开始给药,模型组、正常对照组予0.9%氯化钠注射液,左归丸低、中、高剂量组予相应浓度左归丸,阳性对照组予重组人粒细胞集落刺激因子注射液.各组均给药7 d.用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、造血祖细胞培养和流式细胞术分别检测左归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数、体外培养各系造血祖细胞的集落数以及骨髓细胞周期和调亡的影响.结果 左归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞、血红蛋白、骨髓有核细胞(P＜0.05,P＜0.01),左归丸中剂量对血小板和左归丸高剂量对白细胞有明显升高作用(P＜0.05).左归丸中剂量组和阳性对照组能提高体外培养各系造血祖细胞的集落数(P＜0.05,P＜0.01),左归丸高剂量组粒单系细胞集落生成单位、红系细胞集落生成单位和爆增型红细胞集落生成单位数提高显著(P＜0.05,P＜0.01).左归丸各剂量组均能促进骨髓G0/G1 期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2/M期细胞的转化,从而导致G2/M期细胞比例和增殖指数(PI)明显升高(P＜0.05,P＜0.01).左归丸各剂量组的骨髓细胞凋亡比例与模型组比较均显著下降(P＜0.01),与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 左归丸可能通过促进G0期造血干细胞进入细胞周期,进行增殖;加速骨髓细胞修复受损的DNA,通过G1/S和S期监测点;抑制造血细胞的凋亡等机制,从而促进损伤骨髓造血功能恢复.     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用,用60 Coγ射线身全照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例,细胞固定后PI染色测定细胞周期,Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡,结果：四物汤对小鼠骨髓造 血干祖细胞,外周血细胞的恢复有明显促进作用,有保护骨髓和促进骨髓细胞由G1期进入S期的效应,四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡,促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一。     

归脾丸对苯中毒小鼠骨髓细胞周期的影响

目的 观察归脾丸对苯中毒小鼠骨髓细胞周期的影响,并探讨其造血调控作用的可能机制。方法 72只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、西药组以及归脾丸大、中、小剂量组,每组12只。将小鼠置于人工模拟高苯浓度环境每天8 h,连续14天,复制苯中毒模型。造模后,归脾丸大、中、小剂量组分别给予归脾丸溶液8、4、2 mg/（kg·d）灌胃;西药组给予利血生1.5 mg/（kg·d）和鲨肝醇5 mg/（kg·d）混悬液灌胃;正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,均每天1次,连续3周。应用流式细胞仪检测小鼠骨髓有核细胞计数及骨髓细胞周期。结果 与正常对照组比较,模型组骨髓有核细胞计数明显减少（P<0.05）;与模型组比较,归脾丸大、小剂量组及西药组骨髓有核细胞计数均明显增加（P<0.01）。与正常对照组比较,模型组S期细胞比例和细胞增殖指数（proliferation index, PI）增加,G0/G1期细胞比例下降,差异均有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较,归脾丸大剂量组G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例和PI增加,归脾丸中剂量组S期细胞比例下降,差异均有统计学意义（P<0.01,P<0.05）。与西药组比较,归脾丸大剂量组在G2/M期细胞比例和PI增加而在G0/G1期细胞比例下降,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论 归脾丸可能通过调节苯中毒小鼠骨髓细胞周期的G1或G2期检查点,而使细胞进入细胞增殖周期,加速骨髓G0/G1期细胞向S期细胞、S期细胞向G2/M期细胞的转化,促进骨髓造血细胞增殖,提高外周血象,促进骨髓造血功能的恢复。     

肉苁蓉多糖对骨髓抑制性贫血小鼠造血调控的实验研究

目的：观察肉苁蓉多糖对骨髓抑制贫血小鼠造血功能的影响,探讨其造血调控作用机制。方法：采用Co^60照射和注射环磷酰胺复合制备贫血小鼠模型。应用流式细胞术（FCM）检测肉苁蓉多糖对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期的影响,采用造血祖细胞培养术观察三系造血祖细胞集落数。结果：低剂量和高剂量肉苁蓉多糖能明显促进骨髓G0/G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2/M期细胞的转化,G2/M期细胞比例明显升高,增殖指数（PI）也明显升高。给药组CFU-E,BFU-E,CFU-MeG与贫血对照组集落数有显著差异。结论：肉苁蓉多糖可能通过促使骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞细胞周期的转化,促进骨髓造血功能的恢复,并促进红系巨核系造血。     

补髓生血丸对再生障碍性贫血模型小鼠骨髓VEGF及 Notch-1蛋白表达的影响

目的:研究补髓生血丸对再生障碍性贫血模型小鼠的改善作用，并从调控骨髓造血微环境角度探讨其作用机制。方法:取昆明种雄性小鼠，随机分为正常对照组、模型对照组、补髓生血丸2.3、4.5、9 g/kg组和再造生血片2.7 g/kg组，每组15只。除正常对照组外，其余各组采用白消安10 mg/kg和环磷酰胺20 mg/kg交替腹腔注射给药，连续12 d,制备再生障碍性贫血小鼠模型。造模同时各组小鼠按剂量灌胃给药，连续30 d。末次给药禁食不禁水12 h,颈椎脱臼法处死小鼠，分离双侧股骨，采用瑞士-姬姆萨法观察小鼠骨髓涂片；HE法观察骨髓病理情况；采用ELISA法检测小鼠骨髓上清中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板生成素(TPO)、血管细胞粘附因子-1(VCAM-1)的含量；采用免疫组化法检测小鼠骨髓微血管密度(MVD)、小鼠血管VEGF和Notch-1的蛋白表达。结果:与正常对照组比较，模型对照组小鼠外周血红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)数量、血红蛋白(HGB)含量明显降低(P<0.05);骨髓腔空虚，大量脂肪细胞代替造血细胞，未见巨核细胞，骨髓上清中VCAM-1含量...