黄芪延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩细胞凋亡机制研究

目的探讨黄芪对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白活性的影响。方法 54只SD大鼠,♂,建立右下肢腓肠肌失神经支配模型,随机分为失神经对照组（n=18）,失神经黄芪干预组（n=18）和阴性对照组（n=18）。采用TUNEL技术和分光光度计检测术后2,14,28 d时大鼠腓肠肌骨骼肌细胞凋亡细胞核和凋亡相关蛋白Caspase-8,Caspase-9的活性,并结合肌肉湿重比分析其相关性。结果大鼠腓肠肌失神经支配后凋亡增加（P〈0.05）。失神经后14 d和28 d黄芪干预组腓肠肌湿重比高于同期失神经对照组（P〈0.05）,而其凋亡细胞核以及Caspase-8,Caspase-9的活性则低于相应失神经对照组（P〈0.05）。结论黄芪可以有效延缓去神经早期骨骼肌的萎缩,其作用机制与抑制骨骼肌细胞凋亡有关。     

大鼠失神经不同时相的骨骼肌形态和MyoD表达变化

目的 研究大鼠失坐骨神经后Myo D在腓肠肌中不同时相的表达变化,进一步探讨骨骼肌失神经后再生修复机制。方法 将48只2月龄SD雄性大鼠随机分为八组,每组6只。其中正常对照和失神经各四组,于术后2、7、14、28 d取材,分别标记为Z1、Z2、Z3、Z4组和S1、S2、S3、S4组。在相应的时相内取各组大鼠左、右后肢的腓肠肌测肌湿重后冻存以备后续实验。计算各组腓肠肌湿重比及其肌腹段HE染色后的横截面积,Western blotting检测Myo D在腓肠肌的表达。结果 手术组失神经侧(S1F右、S2F右、S3F右、S4F右)大鼠腓肠肌湿重逐渐减小,且各时相肌湿重比比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HE染色后腓肠肌的各时相平均横截面积逐渐减小,即各时相组内与组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blotting检测各时相失神经侧较正常对照组腓肠肌的Myo D表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠腓肠肌失坐骨神经后第1周内出现明显肌萎缩现象,且萎缩速度在失神经前2周较快;Myo D蛋白在大鼠失坐骨神经后的表达增加,在失神经第2周时其表达量最高,随后开始降低,但仍高于正常大鼠。     

失神经支配面肌超微结构及形态学变化的研究

目的研究大鼠失神经支配眼轮匝肌超微结构及胶原纤维含量变化,为选择最佳修复时机和制定治疗方案提供理论依据。方法制作大鼠失神经支配眼轮匝肌模型,分正常组,术后1、3d,1、2、4、6周组标本,透射电镜观察超微结构,Masson染色检测胶原纤维与肌细胞面积比的变化。结果 (1)不同时间组肌组织中胶原纤维与骨骼肌细胞面积比总体有差异(P0.05),并且随着失面神经时间的延长呈递增趋势;(2)失神经肌组织超微结构由正常的结构功能,随时间的延长,肌纤维膜系统肿胀、排列紊乱、核固缩、线粒体肿胀变性、溶酶体增生等并进一步加重。结论随着失神经时间的延长,胶原纤维增多、肌肉萎缩越明显,肌组织失神经损伤时间越长,损伤越严重,应在发现损伤后尽早修复,以恢复面神经支配功能。     

神经肌肉电刺激对失神经肌萎缩的防治作用

目的:探究神经肌肉电刺激对失神经肌萎缩的防治作用。方法:选取50只雄性大鼠作为实验对象,制成标准的腓肠肌失神经支配模型后,随机分为两组即对照组与电刺激组各25只,对照组大鼠给予被动活动治疗,观察组大鼠给予神经肌肉电刺激,对比观察两组患者的肌湿重比。结果:电刺激组大鼠于7d、14d及28d的肌湿重比高于对照组,组间比较存在统计学差异,P0.05。结论:神经肌肉电刺激在失神经肌萎缩防治方面具有重要临床应用价值,值得推广普及。     

针刺对注射型坐骨神经损伤肌萎缩的影响

目的研究针刺对注射型坐骨神经损伤肌萎缩的影响。方法选家兔15只,建立双侧注射型坐骨神经损伤模型,左侧为对照侧,右侧为针刺治疗实验侧,术后1、2、4周观察肌肉的大体形态,测量肌湿重、肌纤维直径和横切面积的变化。结果 1周后实验侧肌肉比对照侧色泽红润,肌块丰满,湿重、肌纤维直径和横切面积均有显著差异。结论针刺治疗可以延缓注射型神经损伤肌萎缩,是其治疗的一种方法。     

肌内注射肉毒杆菌毒素A对兔咬肌组织形态学的影响

目的：探讨肉毒杆菌毒素A对骨骼肌形态和组织学的影响.方法：25只成年新西兰白兔随机分为5组,每组5只,分别进行2,4,8,12和24周观察,每只实验兔一侧咬肌内注射肉毒杆菌毒素A,另一侧注射生理氯化钠溶液作自身对照,另取5只正常白兔不作任何处理,作为正常对照组.用B超测松弛状态下咬肌厚度,完整切除双侧咬肌称咬肌湿重,并留取部分肌组织做切片进行HE染色、ATP酶染色和NADH-TR（烟酰胺腺嘌呤二核苷四唑还原酶）染色,光镜下观察并进行图像分析.结果：注射肉毒杆菌毒素A的给药侧咬肌湿重减轻,厚度变薄,与正常对照与自身对照咬肌比较差异有显著性.给药侧咬肌萎缩程度逐渐加重,至第12周达到最重,第24周时维持与第12周时相近似的水平.切片光镜检查显示给药侧咬肌肌纤维面积减小.ATP酶和NADH-TR染色见给药侧咬肌Ⅱ型肌纤维减小,Ⅱb型纤维更加明显,Ⅰ型纤维无明显变化.正常对照与自身对照侧咬肌的各项指标均无明显差异.结论：肉毒杆菌毒素A有肯定的诱导肌萎缩的作用,其肌萎缩主要为Ⅱ型肌纤维,对Ⅰ型肌纤维无明显影响.     

胰岛素样生长因子通过NF-kappaB/MuRF1通路延缓失神经骨骼肌萎缩

目的：研究胰岛素样生长因子（IGF-1）对核转录因子kappaB（nuclear factor of kappaB,NF-κB）p65活性的影响,探讨胰岛素样生长因子防治肌萎缩的作用及其机制。方法：Wistar大鼠48只,随机分为失神经对照组和实验组（药物组）,取各组不同时段腓肠肌（gastrocnemius,GAS）样本,测定肌肉萎缩程度并采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）与Western Blot技术检测NF-κB mRNA和蛋白质的表达量。结果：去神经骨骼肌萎缩时,药物各组与失神经组的腓肠肌NF-κB的mRNA和蛋白质的表达在去神经支配后第2、7、14、28天同时段比较均下调,P〈0.01。结论：大鼠失神经骨骼肌萎缩早期,胰岛素样生长因子是通过NF-κB途径来防治失神经早期的骨骼肌萎缩的。     

神经端侧及侧侧吻合对防治失神经肌肉萎缩的疗效比较

目的研究周围神经端侧和侧侧吻合法对防治失神经肌萎缩的作用,并比较两种神经吻合方式的效果。方法SD雌性大白鼠28只随机分成4组,每组7只。A组(端侧缝合组):右侧腓总神经切断后将远断端以端侧吻合法45°缝合于胫神经开窗处。B组(侧侧缝合组):右侧腓总神经切断与胫神经作侧侧吻合。C组(失神经组):将腓总神经切断后两断端均结扎并翻转缝于邻近肌肉上。D组(正常对照组):右侧坐骨神经未行特殊处理。术后3个月行组织学检查、电生理检查、各组胫前肌称肌湿重,检测肌纤维横截面积。结果①端侧吻合组与侧侧吻合组均可记录到神经传导速度、肌湿重和肌纤维横截面积值差异无统计学意义(P>0.05)。②端侧吻合组与侧侧吻合组神经传导速度均慢于正常对照组,肌湿重和肌纤维横截面积值均小于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。③失神经组测不出神经传导速度,其肌湿重和肌纤维横截面积值与端侧吻合组、侧侧吻合组和正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论①神经端侧及侧侧吻合法均是防治失神经肌肉萎缩的有效方法。②神经端侧及侧侧吻合后再生的神经在支配肌肉功能上不足以替代原支配神经的功能。     

针刺激活轴抑制蛋白1、腺苷酸活化蛋白激酶、丝/苏氨酸蛋白激酶信号通路对失神经骨骼肌萎缩大鼠的保护作用

目的研究针刺对失神经骨骼肌萎缩大鼠骨骼肌细胞丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、轴抑制蛋白1(Axin1)表达水平的影响。方法将48只SD大鼠采用简单随机分组分为空白对照组、假手术组、模型组和针刺组各12只。模型组和针刺组大鼠采用手术切断坐骨神经制备失神经骨骼肌萎缩大鼠模型,假手术组只暴露坐骨神经,空白对照组不做任何处理。针刺组在造模后进行电针治疗(“足三里”和“承山”穴),每次10 min,连续治疗3周。治疗后,检测各组大鼠绯肠肌组织的湿重比、肌纤维横截面积及肌细胞直径比;HE染色检测各组大鼠绯肠肌损伤;TUNEL染色检测各组大鼠绯肠肌细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blotting)检测p-AKT、AKT、p-AMPK、AMPK、Axin1、B 细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl 相关X 蛋白(Bax)、活化胱天蛋白酶(cleaved caspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。结果与空白对照组和假手术组相比,模型组大鼠腓肠肌湿重比(0.38±0.06)、肌纤维截面积比(0.52±0.12)和肌纤维直径比(0.53±0.16)均明显下降(P<0.05),细胞凋亡率(30.85±5.74)%明显升高(P<0.05),Bcl-2(0.40±0.03)、Bax(0.53±0.05)、cleaved caspase-3(0.58±0.06)、PCNA(0.44±0.05)、p-AKT/AKT(0.54±0.06)、p-AMPK/AMPK(0.73±0.04)和Axin1(0.41±0.05)的表达明显上调(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠腓肠肌湿重比(0.52±0.07)、肌纤维截面积比(0.64±0.11)和肌纤维直径比(0.66±0.15)均明显增加(P<0.05),细胞凋亡率(21.39±3.87)%明显下降(P<0.05),Bcl-2(0.61±0.05)、PCNA(0.72±0.08)、p-AKT/AKT(0.82±0.09)和Axin1(0.62±0.06)的表达明显上调(P<0.05),Bax(0.33±0.04)、cleaved caspase-3(0.34±0.04)和p-AMPK/AMPK(0.51±0.03)的表达明显下调(P<0.05)。结论针刺可能通过调控Axin1/AMPK/AKT的表达,延缓失神经大鼠骨骼肌的萎缩。     

失神经骨骼肌萎缩的机制及康复治疗

周围神经损伤后,骨骼肌失神经支配将不可避免的发生萎缩,失神经骨骼肌萎缩的发生使得神经修复后的功能恢复仍难以令人满意.因此,揭示失神经肌萎缩的机制,探索失神经支配骨骼肌萎缩的防治方法,一直是周围神经领域内神经修复和康复治疗的研究热点.该文对近年来失神经骨骼肌萎缩的机制及康复治疗的研究进展作一综述.     

经皮电刺激作用于失神经骨骼肌萎缩分子机制的研究

目的探讨电刺激作用于失神经骨骼肌萎缩的分子机制。方法选用Wista大鼠54只,随机分为A,B,C,D,E,F,G,H,I 9组,每组6只。48只大鼠制作成标准的右侧坐骨神经离断、腓肠肌失神经支配模型,A组为对照组(假手术组),B,C,D,E组为去神经组,F,G,H,I组为电刺激组。术后2、7、14、28 d选取腓肠肌样本,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时段的MuRF1和MyoD基因转录,应用和West blotting检测MuRF1不同时段的蛋白质表达水平,各组均以GAPDH为内参,应用免疫组织化学检测MyoD不同时段的蛋白质表达变化。结果去神经组与对照组比较,2、7、14、28 d MuRF1的mRNA持续增加(P<0.05),但2 d组增加不明显(P>0.05)。蛋白质水平先降低(7 d最低),随后增加(P<0.05)。干预组和去神经组比较,mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。去神经组和干预组与对照组对比,MyoD的mRNA和蛋白持续增加(P<0.05),去神经组和干预组对比,mRNA和蛋白持续减少(P<0.05)。结论电刺激通过抑制蛋白酶体途径和增加成肌因子,起到延缓失神经骨骼肌萎缩的作用。     

p38 MAPK Participates in Muscle-Specific RING Finger 1-Mediated Atrophy in Cast-Immobilized Rat Gastrocnemius Muscle

Skeletal muscle atrophy is a common phenomenon during the prolonged muscle disuse caused by cast immobilization, extended aging states, bed rest, space flight, or other factors. However, the cellular mechanisms of the atrophic process are poorly understood. In this study, we investigated the involvement of mitogen-activated protein kinase (MAPK) in the expression of muscle-specific RING finger 1 (MuRF1) during atrophy of the rat gastrocnemius muscle. Histological analysis revealed that cast immobilization induced the atrophy of the gastrocnemius muscle, with diminution of muscle weight and cross-sectional area after 14 days. Cast immobilization significantly elevated the expression of MuRF1 and the phosphorylation of p38 MAPK. The starvation of L6 rat skeletal myoblasts under serum-free conditions induced the phosphorylation of p38 MAPK and the characteristics typical of cast-immobilized gastrocnemius muscle. The expression of MuRF1 was also elevated in serum-starved L6 myoblasts, but was significantly attenuated by SB203580, an inhibitor of p38 MAPK. Changes in the sizes of L6 myoblasts in response to starvation were also reversed by their transfection with MuRF1 small interfering RNA or treatment with SB203580. From these results, we suggest that the expression of MuRF1 in cast-immobilized atrophy is regulated by p38 MAPK in rat gastrocnemius muscles.     

Skeletal muscle glucocorticoid receptor and glutamine synthetase activity in the wasting syndrome in rats treated with 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin

This study demonstrated specific changes in rat skeletal muscles after a single oral dose (100 micrograms/kg) of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD). The development of the wasting syndrome was characterized by marked body weight loss, as well as atrophy of plantaris and gastrocnemius muscles. Fourteen days after administration of TCDD, gastrocnemius muscle cytosolic glucocorticoid receptor binding, measured at a single saturating concentration of [3H]triamcinolone acetonide, was significantly diminished, while plantaris muscle glutamine synthetase activity was strikingly elevated, indicating that specific biochemical alterations occur in skeletal muscle in the wasting syndrome.     

Change in fiber type in partially-denervated soleus muscle of the rat

In 30% or less partially denervated muscle, the reinnervation of denervated muscle fiber may give rise to a change in motor unit size or number of muscle fibers innervated by a single motor neuron. This study was designed to evaluate changes in fiber type and contractibility of partially denervated rat soleus muscle. Partial denervation (by 30% or less) of the soleus nerve does not cause a decrease in the number of muscle fibers. A histochemical study was performed on frozen sections of the muscle. The total number of muscle fibers, atrophied fibers and type II fibers were counted. In the muscle 4 weeks after partial denervation, the number of type II fibers was fewer with a decrease of about 40% which was not significant. The twitch time to peak and half-relaxation time were not changed. The number of type II fibers was significantly decreased (p less than 0.01) after 8 weeks. There was a prolongation of contraction time. The decrease of type II fibers was extensive involving not only the denervated area but also the rest of the muscle area. The transformation of fiber type observed in partially denervated muscle may be attributed to a possible diminution of neurotrophic substances in intact motor neurons.