地中海贫血筛查与基因检测结果分析

目的探讨广东省惠州市惠城区人群地中海贫血的发生率及基因突变构成比分析。方法采用深圳迈瑞公司生产的BC-5380全自动血球计数仪测定红细胞平均体积（MCV）、镜下观察红细胞形态、美国Helena公司生产的spire3000血红蛋白电泳仪综合进行血红蛋白分析,基因确诊采用美国ABI公司生产的7500 PCR仪,PCR法或PER—RDB技术进行基因确诊分型。结果在5643例产检人群中,检出α地贫表型阳性1563例,阳性检出率是27．7％,经基因确诊699例α地贫。检出β地贫表型阳性254例,阳性检出率4．50％,经基因确诊250例β地贫。结论经过具体数据分析获得惠州市惠城区人群的地贫基因携带率以及基因突变类型的分布情况,这样能为产前检查提供科学参考。     

红细胞贫血指标和血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测在α-地中海贫血诊断中的临床价值

目的 探讨红细胞贫血指标和血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测在α-地中海贫血诊断中的临床价值。方法 回顾性分析2018年1月至2021年6月在福建医科大学附属龙岩市第一医院门诊及住院诊断为α-地中海贫血患者51例,利用全自动血液分析流水线进行红细胞贫血指标检测,全自动毛细管电泳仪进行血红蛋白电泳分析,同时运用跨越断裂点PCR技术和DNA反向点杂交芯片技术进行基因分型检测及各指标ROC曲线分析。结果 51例诊断α-地中海贫血患者中有46例有贫血症状,贫血发生率为90.20%,15例男性14例有贫血,贫血发生率为93.33%,36例女性32例有贫血,贫血发生率为88.89%。α-地中海贫血组血红蛋白（Hb）A2,血红蛋白（Hb）,红细胞平均体积（MCV）,红细胞平均血红蛋白量（MCH）及红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）均低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。51例地中海贫血血红蛋白电泳结果,有50例HbA2<2.2,α-地中海贫血表型阳性,阳性率98.04%,大部分α-地中海贫血患者同时检出Hb H、Hb Bart’s、Hb CS的一种或多种区带。33例α-地中海贫...     

175例儿童地中海贫血的基因诊断分析

目的 探讨深圳地区儿童α和β地中海贫血（简称地贫）的基因表型特征。方法 对有不同程度贫血或黄疸的儿童以红细胞休克-管定量法进行地贫筛查，并对检出的部分地贫患儿共175例进行基因分析，即采用跨断裂点（gap-PCR）PCR技术和PCR反向斑点杂交技术（PCR／RDB）分别对α地贫和β地贫进行基因检测。结果 全部病例中α地贫70例，占40．0％，其中标准型α地贫（即α地贫）54例，基因型为α α/--^SEA，HbH病16例；β地贫105例，占60．0％，共检出9种基因突变类型。其中重型β地贫14例，占β地贫患儿的13．3％。几种常见β地贫基因频率依次为CD41-42（-CTTT）0．430，IVS-2nt654（C→T）0．316，CDl7（A→T）0．105，TATA box nt-28（A→G）0．053，CD43（G→T）0．035等。结论 深圳地区儿童地贫基因频率与广东省其他地区大致相似。人群中儿童地贫检出率较高，广泛开展遗传咨询和地贫的产前基因诊断，对指导优生优育具有重大意义。     

河南省8个家系β地中海贫血基因突变类型检验

目的：探讨河南省β地中海贫血（β地贫）基因突变类型及其基因诊断方法。方法：综合应用MOEA及巢式PCR等新技术，设计了针对 中国人β地贫最常见的5种基因突变的检测方法。结果：完成了河南籍8个家系成员的基因筛查诊断，14条β地贫阳性染色体的检测结果为ⅣS-Ⅱ654(C→T)5条，CD41-42(-TTCT)3条，TATAbox-28/-292条，CD17(A→T)2条，另2条染色体突变性质不清。检出率达85.7%。对2例高危胎儿用了产前诊断，基因型分别为ⅣS-Ⅱ-654/A和CD41-42/A，建议继续妊娠，经产后取材验证，结果与产前诊断一致。结论：提示河南省β地贫基因突变的种类与频率和我国南方诸省基本相同；应用本文设计的方法可对90%以上中国人β地贫快速作出基因诊断和产前诊断。     

血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测对地中海贫血患者的诊断价值分析

目的:血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测对地中海贫血患者的诊断价值分析.方法:针对2017年9月～2019年3月某院收治的1856例地中海贫血患者,按照数字表法均分为使用血红蛋白电泳检测的参照组和使用血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测的观察组各928例,比较两组的血红蛋白指标、地中海贫血检出率.结果:检测后,参照组的血...     

河南省8个家系β地中海贫血基因突变类型检验

目的　探讨河南省β地中海贫血 (β地贫 )基因突变类型及其基因诊断方法。方法　综合应用MOEA及巢式PCR等新技术 ,设计了针对中国人β地贫最常见的 5种基因突变的检测方法。 结果　完成了河南籍 8个家系成员的基因筛查诊断 ,14条β地贫阳性染色体的检测结果为IVS -Ⅱ -65 4(C→T) 5条 ,CD41-4 2 (-TTCT) 3条 ,TATAbox -2 8/-2 92条 ,CD17(A→T) 2条 ,另 2条染色体突变性质不清。检出率达 85 7%。对 2例高危胎儿作了产前诊断 ,基因型分别为IVS -Ⅱ -65 4/A和CD41-4 2 /A ,建议继续妊娠 ,经产后取材验证 ,结果与产前诊断一致。结论　提示河南省β地贫基因突变的种类与频率和我国南方诸省基本相同 ;应用本文设计的方法可对 90 %以上中国人 β地贫快速作出基因诊断和产前诊断     

1031例广州市育龄人群地中海贫血基因诊断分析

目的了解广州市育龄人群中地中海贫血基因突变类型和频率,为优生优育提供参考和指导。方法采用血液学初步筛查地中海贫血高危人群,高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）鉴别地贫亚型,GAP-PCR和反向斑点杂交技术（Reversedotblot,RDB）诊断d、13地贫基因。结果1249例初筛阳性受检者确诊为地贫1031例,其中α地贫700例,阳性率为7．80％;β地贫288例,阳性率为3．21％;α复合β地贫43例,阳性率为0．48％。结论广州市地中海贫血发生率较高,以——WEA和CD41～42基因型最常见,其α、β地贫基因型分布符合广东省的基本特点,对育龄人群进行地贫筛查和基因诊断对提高当地人口素质有重要意义。     

湛江地区478例儿童地中海贫血基因检测及结果分析

目的了解湛江地区儿童地中海贫血发生情况、基因类型及其频率,通过相应的措施,以减少中、重型地中海贫血患儿的出生。方法采用PCR+膜杂交法对478位受检者分别进行α-地中海贫血及β-地中海贫血基因检测。结果 478位受检者经过基因检测确诊为地中海贫血280例,其中α-地中海贫血159例,β-地中海贫血107例,α-地中海贫血复合β-地中海贫血14例,还发现一例有巴氏综合征(胎儿水肿)。159例α-地中海贫血患者共检测出185个含有6种常见α-地中海贫血等位基因,携带率为38.70%,以-SEA基因为最多共111个,携带率为23.22%,构成比占60.00%。其次是-α~(3.7)和-α~(4.2)构成比分别为19.47%、9.73%。107例β-地中海贫血患者共检测出115个含有10种常见β-地中海贫血等位基因,携带率为24.06%,其中β~(41-42)基因45例,携带率为9.41%,构成比占39.13%。其次是β~(654)、β~(28)和β~(17)构成比分别为26.96%、13.04%、9.56%。结论基因检测技术可精准的检测出儿童地中海贫血的类型,初步了解了湛江地区儿童地中海贫血的基因突变普,为地中海贫血的诊断提供了科学的依据,更是促进了湛江地区地中海贫血的防治工作,对提高湛江地区得到人口质量有着重大的经济和社会效益。     

产前基因诊断预测地中海贫血胎儿的价值分析

目的：探讨产前基因诊断预测地中海贫血胎儿的价值。方法选取本院2010年1月~2013年12月65例父母为地中海贫血基因携带的胎儿为受试对象,均抽取羊水给予产前基因诊断,引产或分娩后留取脐带血检验诊断准确性。结果65例风险胎儿中诊断为地中海贫血者48例,其中--SEA/--SEA型10例,-αSEA/αα和CD41-42/CD41-42各3例,-α3.7/αα、-αα1/αα、CD41-42/-α3.7和-α4.2/αα各检出2例,CD41-42/(-CTTT)型检出19例,-28(A→G)型检出5例。48例产前基因诊断为地中海贫血胎儿中,引产率为26.8%,分娩率为73.2%,其中--SEA/--SEA型的10例胎儿引产8例,分娩2例;-αSEA/αα和CD41-42/CD41-42均引产2例,分娩1例;CD41-42/-α3.7均引产;剩余胎儿均成功分娩;所有胎儿脐带血检测结果与产前羊水基因检测结果一致。结论对地中海贫血携带夫妇孕育的高风险胎儿予以产前基因检测,准确率较高,对优生优育等具有积极意义,值得临床推广。     

应用MLPA分析技术快速产前诊断21-三体综合征

目的探讨应用MLPA技术快速产前诊断21一三体综合征的可行性。方法对181例羊水样本进行MLPA实验及羊水细胞染色体G显带核型分析,将MLPA实验结果与染色体核型分析结果进行比较。结果180例羊水样本均应用MLPA技术一次检测成功,1例样本因DNA浓度问题需二次检测,羊水标本MLPA检测的24h检出率达到99．4％。从样本中检测出4例染色体异常（3例2l一三体,1例X单体）,检测结果与羊水细胞培养染色体G显带核型分析结果一致。结论羊水MLPA分析技术可用于快速产前诊断21-三体综合征。     

广东省东莞地区地中海贫血产前筛查及产前诊断体系的建立

目的 减少东莞地区中重症α和β地中海贫血儿的出生率,提高出生人口素质.方法 采用红细胞平均体积测定对2 218例育龄夫妇进行地中海贫血的筛查,并用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)技术及随机双盲试验(RDB)法分别对α及β地中海贫血进行基因诊断.结果 检出地中海贫血277例,发生率12.49％.α地中海贫血220例,基因携带率为9.92％;其中:--SEA/αα198例,-α3.7/αα11例,-α4.2/αα7例.检出β地中海贫血57例,基因携带率为2.57％.检出β基因突变类型依次为CD41/42(-TTCT) 27例,IVS2nt-654(C→T)14例,CD17(A→T)10例,-28(A→G)4例,TATAbox29(A→G)1例,CD71/72(+A)1例.对42对夫妇均为地中海贫血携带者的胎儿进行产前诊断,3例为Bart水肿胎终止妊娠,7例为β地中海贫血纯合子而终止妊娠.结论 通过产前筛查地中海贫血及基因诊断,可确诊重症患儿并及时终止妊娠.建立切实可行的人群筛查-高风险夫妇产前诊断-选择性流产体系,可有效避免重症患儿的出生,对提高人口素质具有重要意义.     

KRAS基因突变直接测序检测方法的建立

目的 建立一种适用于临床的KRAS基因直接测序突变检测方法.方法 以KRAS基因12、13密码子为突变检测靶位点设计特异性扩增、测序引物,以已知12、13密码子野生型、突变型样品分别做为阴、阳性对照品,建立KRAS基因突变直接测序检测方法,并行方法学评估.结果 成功建立了KRAS基因突变直接测序检测方法,该方法检测灵敏度达3.9 ng/μl,重复性良好.检测17例结直肠癌样品,突变率为23.5％.结论 本研究成功建立了可用于临床样品检测的KRAS基因突变直接测序检测方法.     

EGFR基因突变直接测序检测方法的建立

目的 建立一种适用于临床表皮生长因子受体（EGFR）基因直接测序突变检测方法.方法 以EGFR基因突变热点19、21外显子为突变检测靶位点设计特异性扩增、测序引物,以已知19、21外显子野生型、突变型样品分别做为阴、阳性对照品,建立EGFR基因突变直接测序检测方法,进行方法学评估.结果 成功建立了EGFR基因突变直接测序检测方法,该方法检测灵敏度为4.7 ng/μl,重复性良好.检测30例结非小细胞肺癌样品,突变率为26.7％.结论 本研究建立了可用于临床样品检测的EGFR基因突变直接测序检测方法.     

不孕不育患者地中海贫血基因分布特征及HbA、HbA2、MCV、MCH参数分析

目的 了解不孕不育患者地中海贫血(地贫)基因携带情况和分布特征,分析红细胞参数在地贫诊断中的应用价值.方法 对受检者进行血常规、血红蛋白电泳和地贫基因检测(PCR+膜杂交法),同时设置本院同期体检健康者作为对照组,分析受检者不同类型地贫基因携带情况和分布特征,分析不同类型地贫基因携带者HbA、HbA2、MCV、MCH的变化情况.结果 3 106例受检者中,共检出α和β地贫基因携带者299例,占比9.63％,其中α地贫196例,β地贫102例,复合型地贫1例,最常见类型为--SEA/α α、CD41-42(-TCTr)和IVS-2-654(C→T).血红蛋白电泳检测结果显示,α地贫、β地贫及健康对照组HbA含量分别为(97.75±0.19)％、(94.07±0.25)％和(97.15±0.13)％,与健康对照组相比,差异均有统计学意义;HbA2含量分别为(2.25±0.21)％、(5.09±0.33)％和(2.85±0.14)％,与健康对照组相比,差异均有统计学意义.血常规检测结果显示,α地贫、β地贫及健康对照组MCV分别为(73.56±5.35) fl、(64.68±3.18)n和(87.47±4.29) fl,与健康对照组相比,差异均有统计学意义;MCH含量分别为(23.37±1.53) pg、(20.42±1.27) pg和(30.25±2.04) pg,与健康对照组相比,差异均有统计学意义.结论 不孕不育患者地贫基因携带占比9.63％,最常见类型为--SEA/αα、CD41-42(-TCTr)和IVS-2-654(C→T);在不同类型地贫携带者中,HbA、HbA2、MCV、MCH均有不同程度变化,可在一定程度上作为地贫的筛查指标.     

血液学检查在产前地贫筛查中的作用

目的0探讨常规血液学检查在孕妇进行地中海贫血（地贫）产前筛查中的作用。方法选择2011年10月至2012年9月在我院接受产前筛查的2443例孕妇作为研究对象。血常规、血清铁和血红蛋白电泳检查作为孕妇的常规产检项目,孕妇的配偶同时作血常规检查,对筛查阳性病例做基因诊断检查。结果血红蛋白电泳检测发现HbA,异常孕妇629例,进一步对其进行基因检测,发现夫妻同表型者59例,夫妻同基因型54例,共确诊地贫胎儿52例（0L一地贫24例、B一地贫28例）,其中重型地贫胎儿5例（0L一地贫2例,B一地贫3例）。629例HbA：异常的孕妇红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）、红细胞平均体积（MCV）均明显低于正常水平（P〈0．05）,红细胞分布宽度（RDW）明显高于正常水平（P〈0．05）。结论血常规红细胞参数和血红蛋白电泳等血液学检查在地贫产前筛查中有一定的作用。     

Absence of large intragenic rearrangements in the DPYD gene in a large cohort of colorectal cancer patients treated with 5-FU-based chemotherapy

AIMS

To study the relationship between the toxicity associated with a 5-FU-based therapy and the presence of (i) the large intragenic rearrangements in the DPYD gene and (ii) the IVS14+1G>A mutation.

METHODS

We used the multiplex ligation-dependent probe amplification technique (MLPA) to study genomic DNA from 234 colorectal cancer patients treated with 5-FU-based chemotherapy.

RESULTS

We did not detect any deletion/duplication in the DPYD gene. The presence of the IVS14+1G>A mutation was also excluded.

CONCLUSIONS

Neither the large genomic rearrangements in the DPYD gene nor the IVS14+1G>A mutation play a significant role in the development of serious toxicity associated with a 5-FU containing regimen.