6例人类免疫缺陷病毒抗体阳性患儿检测结果分析

目的了解患儿人类免疫缺陷病毒(HIV)的感染情况,分析其感染途径,探讨儿童对HIV的免疫应答。方法对患儿血清采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和明胶凝集试验(PA)进行抗-HIV(1/2)初筛检测,以蛋白免疫印迹法(WB)确认。采集患儿全血用流式细胞仪进行全血细胞分析。结果 6例患儿均为HIV-1抗体阳性。结论年龄大一些的儿童其抗-HIV免疫应答与成年人相似。而婴儿CD4+细胞水平大于500个/μL即可能发生获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。     

对五种国产核酸筛查试剂检测HIV-1RNA效果的初步评价

目的 对5种国产HBV/HCV/HIV-1核酸筛查试剂(A、B1、B2、C和D)检测HIV-1 RNA的能力进行初步评价.方法 从我国不同地区收集60份HIV-1感染者样品(包含1份HIV-1感染窗口期样品)及540份HIV阴性样品,将60份HIV-1感染者样品随机分布于540份HIV阴性样品中,按照合并检测模式(pool模式)对该600份样品进行检测,将每种试剂检测结果为阳性的pool分别按说明书进一步拆分和/或鉴别试验.结果 A、B1、B2和C四种试剂检测HIV-1RNA的效果较强,其阴性和阳性符合率均为100%;D试剂则较差,其中2份HIV-1感染者样品(基因型分别为BC和B/B′,HIV-1 RNA含量分别为9.70×102 copies/ml和5.20×103 copies/ml)分别处于2个pool中,该2个pool经D试剂检测,均为HIV-1 RNA阴性.对检测结果为阳性的35个pool进行拆分检测时,D试剂检测1份HIV-1感染者样品(B/B′亚型、HIV-1 RNA含量为1.09×103 copies/ml)为HIV-1 RNA阴性,3份HIV-1 RNA阴性样品为HIV-1 RNA阳性.对于1份HIV-1感染窗口期样品,5种试剂均检测为HIV-1 RNA阳性.结论 A、B1、B2和C四种试剂均有较高的一致性,但D试剂具有一定的假阳性和漏检,应进一步提高质量.     

HIV-Ⅰ/Ⅱ型抗体双抗原夹心乳胶免疫层析测定方法的建立及应用

艾滋病 (AIDS)是由人免疫缺陷病毒 (HIV)引起的一种后天性免疫缺陷性疾病 ,发现于 1 981年。为有效控制 HIV传播 ,必然要求 HIV检测试剂具有较高的灵敏度、特异性和稳定性。本文研究并成功建立了检测 HIV- / 抗体的双抗原夹心乳胶免疫层析法 ,这是一种简便、快速、可靠、经济的HIV抗体检测方法 ,现报告如下。材料与方法1　材料　有色乳胶颗粒、硝酸纤维微孔滤膜 NC(孔径 5μm)、HIV- / 基因重组抗原和兔抗 -HIV由美国 BANGS公司提供。玻璃纤维膜、渗滤装置及吸水滤纸由中外合资艾康生物技术 (杭州 )有限公司生产。2　乳胶标…     

免疫层析法在HIV(1/2)抗体检测中的应用

卫生部要求 HIV初筛实验室必须备有两种不同实验原理的试剂 ,对可疑结果进行复检。国内已经推广使用 ELISA双抗原夹心法检测 HIV(1 / 2 )抗体 ,笔者发现初筛复检用免疫层析法检测 HIV(1 / 2 )抗体 ,具有较高的准确性。为了进一步验证其结果 ,与 ELISA双抗原夹心法进行比较 ,实验结果如下。1　材料和方法1 .1　血清标本　 HIV(1 / 2 )抗体阳性血清 45份 ,分别由丽珠、华美试剂公司提供 ,本院住院患者血清标本 2 0 0 0份。1 .2　试剂　免疫层析法 :批号 2 0 0 30 81 8,美国雅培制药有限公司产品 ,HIV(1 / 2 )快速检测试剂 ;ELISA…     

应用BED-CEIA方法估算陕西省2011年三类高危人群HIV-1新发感染率

目的 估计陕西省2011年男男性行为者、吸毒者和性病门诊男性就诊者三类高危人群的艾滋病病毒(HIV)新发感染情况.方法 使用酶联免疫试验(ELISA)和蛋白免疫印迹试验(WB)对陕西省2011年4～7月内15个哨点所监测到的800例男男性行为者、2 400例吸毒者和2 800例性病门诊男性就诊者进行HIV-1抗体筛查和确证,再应用BED HIV-1捕获酶联免疫测定法(BED HIV-1 capture enzyme immunoassay,BED-CEIA)检测出其中的新发感染样品,从而估算其HIV-1新发感染率.结果 陕西省2011年男男性行为者、吸毒者和性病门诊男性就诊者的HIV-1新发感染率分别为4.42％(2.19％～6.66％),0和0.39％(0.05％～0.73％).结论 陕西省男男性行为者HIV-1新发感染率较高,吸毒者和性病门诊男性就诊者的HIV-1新发感染率相对比较低.     

核酸检测技术(NAT)在献血者人类免疫缺陷病毒筛查中的应用

目的应用核酸扩增检测(Nucleic Acid Amplification Testing,NAT)技术对人类免疫缺陷病毒(human im-munodeficiency virus,HIV)酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)合格的献血者血液标本进行核酸检测,探讨NAT技术对缩短ELISA检测HIV感染"窗口期"的作用。方法对献血者血液标本进行HIV抗原抗体、乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、梅毒螺旋体抗体2遍ELISA检测,将检测结果合格的血液标本进行核酸检测。结果在177229例ELISA检测合格的献血者标本中发现HBV DNA阳性献血者24例,HIV-1RNA阳性献血者1例,未发现HCV RNA阳性献血者。对HIV-1RNA阳性献血者追踪调查并在献血后的d4、d11、d16、d37采样检测,d4病毒载量由献血时的4.61×102copy/ml上升至5.10×104copy/ml,P24抗原和抗体仍为阴性;d11P24抗原检测阳性,HIV抗体检测仍为阴性。d16HIV抗体检测结果阳性,免疫印迹法(Western blot,WB)确证试验结果为HIV抗体不确定;d37WB确证试验结果为HIV-1抗体阳性。结论 HIV-1RNA阳性献血者,经追踪调查及对不同时间采集的标本采用各种方法学检测,证实该献血者为HIV感染早期ELISA法漏检的"窗口期"献血者。因此,NAT检测技术比ELISA检测能更进一步地缩短HIV检测的"窗口期"。     

从免疫复合物中分离P24抗原早期诊断HIV-I型感染

人免疫缺陷病毒(HIV)抗原血症与HIV相关疾病有关,预测标志对监测抗病毒治疗极为有用.本文作者报导,应用两种方法分离血浆标本中免疫复合物以及HIV-1 P24抗原检测.     

液相芯片法验证蛋白质免疫印迹试验检测HIV-1结果的敏感性和特异性

目的初步分析采用液相芯片法研制人类免疫缺陷病毒(HIV)-1检测试剂的可行性。方法采用液相芯片技术用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测HIV-1阳性和阴性的标本;用HIV-1的gp120、gp41、p24抗原分别包被不同编号的免疫磁珠,与生物素化二抗、亲和素化荧光染料PE组成液相芯片检测系统,对标本进行检测分析。结果 55份标本经Western Blot法确认阳性样本检测符合率为100%;76份经酶联免疫吸附试验(ELISA)初检和复检阴性的标本检测HIV-1gp120、HIV-1gp41、HIV-1p24抗原均为阴性;86份经ELISA法检测初检和复检为阳性而Western Blot法确认为阴性的样本,其HIV-1gp120、HIV-1gp41、HIV-1p24单片段检测均为阴性。液相芯片法检测HIV-1抗体的敏感度和特异度均为100%。结论采用液相芯片技术组成的HIV-1抗体检测系统,其敏感度和特异度均优于ELISA法检测。     

我国237例未接受抗病毒治疗的HIV/AIDS患者中原发性基因型耐药监测和病毒亚型分析

目的 分析237例HIV/AIDS患者中原发性耐药的发生率和病毒亚型分布情况.方法 从河南、云南、上海等20个地区采集237例未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者血浆HIV-1进行基因测序,通过病毒亚型分析软件REGA HIV-1 Subtyping Tool确定测序样本的HIV-1亚型,并与斯坦福大学HIV耐药数据库比对确定测序样本HIV-1耐药相关突变位点.采用b-DNA方法检测患者血浆病毒载量,采用流式细胞仪检测CD4+ T淋巴细胞计数.结果 237例未接受抗病毒治疗的HIV/AIDS患者感染的HIV-1毒株分布为A1、B、C、CRF01-AE、CRF02-AG、CRY7-BC、CRF08-BC、CRF12-BF、G等9个不同亚型,可能的感染时间分布在1990-2006年.237例患者中仅有3例分别对核苷类逆转录酶抑制剂高度耐药、蛋白酶类抑制剂低度耐药和非核苷类逆转录酶抑制剂高度耐药,原发性耐药的发生率为1.3%(3/237).结论我国部分地区未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者中HIV-1原发性基因型耐药的发生比例处于较低水平,病毒亚型分布在9个亚型.     

浙江省HIV抗体盲样质控考核结果分析及不同品牌分析灵敏度比较

目的调查医疗机构选用不同方法学检测抗HIV抗体的能力情况,比较不同品牌和方法学对抗HIV抗体和抗原的分析灵敏度。方法定制6个不同浓度的抗HIV-1抗体标准物质,对218家实验室开展盲样质控考核,统计医院满分率、项目脱靶率和方法学脱靶率。采用3种不同稀释液对定制标准物质倍比稀释,获得低浓度抗HIV-1抗体和HIV-p24抗原标准物质,对考核中的6款化学发光品牌和3款ELISA品牌进行分析灵敏度的比较以及稀释液的影响比较。结果医院满分率为95.9%(209/218),抗HIV-1抗体项目脱靶率为1.8%,均为假阴性脱靶。ELISA、化学发光法(CLIA)和胶体金法(GICA)的脱靶率分别为0、13.3%和40.0%。在抗HIV-1抗体浓度为1 NCU/m L时3款CLIA品牌不能检出,1款CLIA品牌不能检出2 NCU/m L的抗体浓度。2款GICA品牌不能检出12 NCU/m L的抗体浓度。3、4代ELISA和3代CLIA品牌对抗HIV-1抗体检测的分析灵敏度优于部分4代CLIA品牌,而4代CLIA品牌对HIV-p24抗原的分析灵敏度显著高于4代ELISA。不同稀释液对检测结果影响存在显著差异,但不影响定性结果判断。结论 GICA检测抗HIV抗体存在较高的漏检风险。4代CLIA对HIV抗原检测分析灵敏度较高,但对抗HIV抗体检测的分析灵敏度相对弱于ELISA和3代试剂。稀释液的差异不是免疫定性分析的主要影响因素。     

浙江省抗HIV抗体盲样质控考核结果分析及不同品牌分析灵敏度比较

目的调查医疗机构选用不同方法学检测抗HIV抗体的能力情况,比较不同品牌和方法学对抗HIV抗体和抗原的分析灵敏度。方法定制6个不同浓度的抗HIV-1抗体标准物质,对218家实验室开展盲样质控考核,统计医院满分率、项目脱靶率和方法学脱靶率。采用3种不同稀释液对定制标准物质倍比稀释,获得低浓度抗HIV-1抗体和HIV-p24抗原标准物质,对考核中的6款化学发光品牌和3款ELISA品牌进行分析灵敏度的比较以及稀释液的影响比较。结果医院满分率为95.9%(209/218),抗HIV-1抗体项目脱靶率为1.8%,均为假阴性脱靶。ELISA、化学发光法(CLIA)和胶体金法(GICA)的脱靶率分别为0、13.3%和40.0%。在抗HIV-1抗体浓度为1 NCU/m L时3款CLIA品牌不能检出,1款CLIA品牌不能检出2 NCU/m L的抗体浓度。2款GICA品牌不能检出12 NCU/m L的抗体浓度。3、4代ELISA和3代CLIA品牌对抗HIV-1抗体检测的分析灵敏度优于部分4代CLIA品牌,而4代CLIA品牌对HIV-p24抗原的分析灵敏度显著高于4代ELISA。不同稀释液对检测结果影响存在显著差异,但不影响定性结果判断。结论 GICA检测抗HIV抗体存在较高的漏检风险。4代CLIA对HIV抗原检测分析灵敏度较高,但对抗HIV抗体检测的分析灵敏度相对弱于ELISA和3代试剂。稀释液的差异不是免疫定性分析的主要影响因素。     

HIV窗口期患者1例

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的以免疫功能障碍为特征的传染性疾病,传播途径主要为性传播、血液传播和母婴传播[1].目前对于艾滋病的诊断主要依据实验室检测,包括 HIV 抗体检测、HIV抗原抗体联合检测、免疫印迹试验(WB )、重组/线性免疫印迹试验(RIBA/LIA)及核酸检测等.由于医学界至今仍无针对艾滋病的有效疫苗及特效药物,早发现、早治疗便成为控制传染源的关键[2].为了进一步保障血液安全,2010 年起我国各血液中心便陆续开始对献血者进行核酸检测,不断有报道单独 HIV 核酸阳性的献血者被检出[3],有效地降低了 HIV 经血传播的风险.为了进一步减少医院内感染,陆军军医大学附属第一医院(以下简称本院)对输血、手术及有高危行为特定患者行 HIV-1 型核酸检测.现将本院发现的 1 例 HIV抗原抗体检测呈阴性而核酸检测呈阳性的病例情况报道如下.     

免疫印迹法HIV-1抗体检测结果不确定者的转归分析

目的 探讨HIV-1抗体确证试验(免疫印迹法)检测结果为不确定的患者的转归特点。方法 选取HIV-1抗体免疫印迹法检测结果为不确定的患者75例,收集其一般资料、初筛试验[酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体硒法]的检测结果、免疫印迹法带型及随访后的转归情况。结果 75例患者中有53例完成随访,随访时间为10～721 d。男性、女性之间随访后转阳率差异有统计学意义(P<0.05)。53例HIV-1抗体检测结果为不确定的随访患者中,2种初筛试验均阳性45例,与随访后确证结果的阳性符合率为100%。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,ELISA S/CO值判定HIV-1抗体不确定样本为阳性的曲线下面积(AUC)为0.969,最佳临界值为4.995,敏感性为84.8%,特异性为100.0%。随着ELISA S/CO值的增大,免疫印迹法带型更复杂,HIV-1抗体不确定样本的转阳率逐渐升高。免疫印迹法env带gp41和gag带p66、p51的出现率均随随访时间的延长而升高。结论 免疫印迹法HIV-1抗体检测的不确定结果可通过胶体硒法、ELISA S/CO值和免疫印迹法条带的分析来协助判...     

尿液HIV-1抗体EIA-PRC法检测的临床应用

目的 对尿液HIV-1抗体EIA试剂盒进行特异性与敏感性的评价。方法 收集尿液标本进行HIV-1尿液EIA—PRC法检测，对比血液标本进行HIV(1 2)抗体EIA初筛检查(双抗原夹心法)。结果 在5000例所调查的正常人群中，有54例尿液HIV-1初检为阳性(54／5000)，复检为阴性结果。对48例AIDS患者的尿液标本进行尿液HIV-1检查，结果均为阳性(48／48)。结论 对尿液行HIV-1抗体的初筛检测，标本易得，且无创伤性，既减少了HIV交叉感染和传播的风险，又适宜于大批量的人群监测与普查工作．值得推广应用．     

云南省德宏和昆明地区高效抗逆转录病毒治疗后HIV-1流行毒株pol区基因变异分析

目的 调查云南省德宏和昆明两个地区HIV-1流行毒株pol区基因在接受HAART后的变异情况.方法 选择接受HAART 1年以上血浆HIV-1病毒载量＞1 000拷贝/ml的139例HIV/AIDS患者,提取血浆中HIV-1 RNA,采用RT-nested-PCR扩增HIV-1的pol区基因蛋白酶(PR)和逆转录酶(RT)基因片段,测定DNA序列.经拼接整理后与美国斯坦福大学网站提供的HIV耐药数据库(Stanford HIV Drug Resistance Database)进行比对,分析耐药突变位点,采用MEGA 4.1构建系统进化树以确定HIV的亚型,结合HIV/AIDS患者流行病学资料进行综合分析.结果 昆明地区患者HIV以T215F/NY/I、M41L/M和T69G/N/I/S/A/D突变较多,突变率分别为39%(24/62)、27%(17/62)和27%(17/62),高于德宏地区患者HIV的相应突变率[分别为16%(11/69)、13%(9/69)和9%(6/69)],差异有统计学意义(x2值分别为8.646、4.242和7.909,P均＜0.05).德宏地区HIV-1流行毒株pol区基因亚型主要为CRF01_AE亚型为32%(22/69)、C亚型为25%(17/69)、B亚型19%(13/69).而昆明地区主要是08_BC亚型60%(37/62)、CRF01_AE亚型21%(13/62)和07_BC亚型15%(9/62).结论 云南省德宏、昆明两地区HIV-1流行毒株pol区基因PR、RT基因突变频率存在部分差异,昆明地区T215F/N/Y/I、M41L/M和T69G/N/I/S/A/D突变率高于德宏地区.两地共检出HIV-1流行毒株pol区基因CRF01_AE、B、C、BC、08_BC和07_BC共6种基因亚型.

Abstract：

Objective To investigate the variations in the pol region of HIV-1 strain in treatment failed patients in Yunnan province's Dehong prefecture and Kunming. Methods Blood samples were collected from 139 patients who experienced treatment failure ( HAART treatment ＞ 1 years and HIV-1 RNA Viral load ＞ 1 000 copies/ml). HIV-1 RNA was extracted from plasma, and nested-PCR was performed for amplification of PR and RT genes on the HIV-1 pol region. The PCR products were then sequenced and submitted to Stanford HIV Drug Resistance Database for comparison. The evolution tree was built up with MEGA 4. 1 system, combined with patients' demographics. Results The most prevalent mutation in Kunming patients were T215F/N/Y/I, M41L/M, and T69G/N/I/S/A/D, the mutation rates were 39%(24/62), 27% (17/62) and 27% (17/62) , respectively, which were higher than the corresponding mutations in the Dehong prefecture [16% ( 11/69), 13% (9/69) and 9% (6/69)]. The rate differences were statistically significant ( x2 = 8.646, 4.242 and 7. 909, all P ＜ 0.05 ). The most common HIV-1 pol region subtype in the Dehong patients were CRF01_AE subtype (32%, 22/69), followed by C subtype (25% ,17/69), and B subtype ( 19%, 13/69). Major subtypes in Kunming patients were 08_BC (60%,37/62 ), CRF01_AE subtype(21% , 13/62 ) and 07_BC ( 15% ,9/62). Conclusions Partial differences of the point mutations of the HIV-1 strain pol region and frequency of their occurrences exist among Dehong and Kunming patients, HIV-1 strains in Dehong prefecture for the NNRTIs mutations at the T215 Y/N/T, M41L and T69G/N/I/S/A/D are significantly higher than those in Kunming. Six isoforms are found respectively:CRF01_AE, B, C, BC, 08_BC and 07_BC from the epidemic strains of HIV-1 pol region subtype in Dehong and Kunming areas.     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型gag、env、rev mRNA检测

目的动态检测人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)基因gag、env、rev mRNA水平.方法将插入有HIV-1竞争模板的pSPI质粒DNA转化入感受态菌STBL-2,进行扩增.以T7 RNA聚合酶体外转录出HIV-1 mRNA竞争模板.用3对引物对HIV-1 RNA标本进行定量竞争聚合酶链反应(QC-RT-PCR), 检测HIV-1 gag、env、rev mRNA 水平.结果 HIV-1 ⅢB感染的标本中,HIV-1 gag、env和rev mRNA的水平分别为36 000拷贝/μl,9 800拷贝/μl和9 100拷贝/μl.此方法可动态定量检测HIV-1 gag、env、rev mRNA水平.结论该方法简便易行,费用低廉,适用于实验室HIV致病机理、药物筛选和病毒复制状况的研究.     

来自人免疫缺陷病毒阳性供血的静脉注射免疫球蛋白的制备和特性

由大于400CD~-_4/μl 细胞和高滴度抗HIV-1P24蛋白抗体的HIV-1阳性血浆制得一种纯度为99%的静脉注射免疫球蛋白(超免疫球蛋白,HIVIG)。HIVIG 具有抗P24、糖蛋白41(gp41)和gp 120的高滴度抗体,以及类属特异性活力,能结合gp120的各种环形结构域。HIVIG 抑制合胞体的形成;在其低浓度条件下,它促进注射的外周血液单核细胞中HIV-1的生成;反之,则抑制HIV-1的生成。HIVIG 对类属特异性抗体依赖于抗HIV 感染靶细胞的细胞毒性。该血浆能在6～28个月内保持稳定的抗体滴度,CD~+_4细胞每月以1.0%速度减少,按1g/kg 给2只未感染的血清阴性幼黑猩猩注射HIVIG,通过阴性细胞培养、IgG 对HIV 蛋白的免疫应答及多聚酶链反应的测定,表明其有很好的耐受性。HIV-1P24     

艾滋病与HIV的职业暴露后防护

艾滋病即获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Vires，HIV)引起的一种严重的传染病。HIV病毒是一种RNA(核糖核酸)逆转录病毒，属慢病毒(Lentivirinae)。HIV主要型别为HIV-1和HIV-2，我国艾滋病大多由HIV-1引起。     

164例HIV-1感染者梅毒RPR出现生物学假阳性情况分析

目的 了解性病门诊人类免疫缺陷病毒1亚型(HIV-1)感染者梅毒快速血浆反应素试验(RPR)出现生物学假阳性(BFP)情况。方法 收集该院性病门诊中已确诊HIV-1感染者,采用梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS-IgG)、RPR进行检测,对RPR出现BFP的HIV-1感染者,根据抗病毒治疗情况分成已治疗和未治疗两组,检测病毒载量及CD4⁺T细胞检测并进行比对,观察抗病毒治疗情况对RPR出现BFP有无影响,1年后随访检测RPR,分析RPR出现BFP的临床转归情况。结果 2 146例已确诊HIV-1感染者中RPR出现BFP的有164例;4 072例HIV抗体阴性者中RPR出现BFP的有22例,HIV-1感染者和HIV阴性者BFP发生率差异有统计学意义(P<0.01)。164例RPR出现BFP的患者中未进行抗病毒治疗140例,病毒载量基线HIV RNA 3.50(1.48～6.15)lg copies/mL,CD4⁺T细胞计数344.50(239.75～480.25)mm³;已进行抗病毒治疗24例,未检测到HIV R...     

不同人类免疫缺陷病毒2型检测方法的比较研究

目的通过随访调查16例人类免疫缺陷病毒2型（HIV-2）可疑感染者，初步评价HIV一2的几种检测方法。方法从贵州省采集既往经HIV-1／2免疫印迹（WB）试验检测出现HIV-2指示带的16份受检者的全血样品，进行HIV-2抗体和核酸检测。血浆中的抗体用HIV-1／2ELISA初筛一复检，其中阳性样品再分别用HIV-1／2线性免疫试验（LIA）和HIV-2WB检测。外周血单核细胞（PBMC）中的前病毒DNA用HIV-2巢式PCR检测。结果16份血浆样品经HIV-1／2ELISA筛查均为HIV抗体阳性；用HIV-1／2 LIA检测，全部为HIV-1抗体阳性，15份为HIV-2抗体阴性、1份不确定；用HIV-2WB检测，有3份为HIV-2抗体阳性、13份不确定。由于这批样品的采样时间距首次检测至少1年以上，可以排除窗口期感染，上述检测结果不确定的受检者均可判为HIV-2抗体阴性。此外，用巢式PCR检测所有PBMC样品均为HIV一2核酸阴性。结论16例受检者全部为HIV-1而非HIV-2感染，HIV-1／2uA的抗体检测结果与HIV-2核酸检测结果基本相符，而HIV-2WB则产生了大量的不确定甚至假阳性结果。