Pax9——牙齿发育中的关键调控基因

在牙齿发育过程中,Pax9基因局限且持续表达于间充质中,是间充质而非上皮组织的重要调控基因,可作为牙源性间充质的标志物,其表达受限则可导致牙胚的凋亡;它还是使牙胚蕾状期间充质细胞获得牙齿形成诱导能力的基因及缺牙区和切、磨牙区之间最早的差异性表达物。     

Pax9——牙齿发育中的关键调控基因

在牙齿发育过程中，Pax9基因且持续表达于间充质中，是间充质而非上皮组织的重要调控基因，可牙源性间充质的标志物，其表达受限制可导致牙胚的凋亡；它还是使牙胚蕾状期间充细胞获得牙齿形成诱导能力的基因及缺牙区和切、磨牙区之间最早的差异性表达物。     

钟状期牙胚来源的猪牙乳头细胞培养

目的 观察新生猪牙胚的发育情况并培养猪牙乳头细胞,对传代细胞的生物学特性进行研究.方法 选择3日龄新生猪,分离牙胚,通过组织学、免疫组化等研究牙胚的发育情况.分离牙乳头组织,酶消化法培养牙乳头细胞并鉴定;观察细胞生长特性,通过牙本质涎蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色比较体内外细胞的生物学性状.结果 新生猪磨牙尚未萌出,其中第二磨牙为典型的钟状期牙胚.分离培养的牙乳头细胞在体外生长良好,经鉴定细胞来源于间充质组织,免疫组化表明,牙本质涎蛋白和Ⅰ型胶原表达阳性,Ⅲ型胶原表达阴性.结论 新生猪可以提供处于钟状期的牙胚,通过酶消化法可成功培养猪牙乳头细胞,第3代细胞的生物学特性与体内细胞有一定相似性,可用于进一步深入研究.     

MACF1参与小鼠牙乳头细胞成牙本质细胞向分化的研究

目的:探究MACF1在小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化中的作用.方法:免疫组化检测MACF1在不同发育时期小鼠磨牙胚中的表达情况.建立小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化的模型,使用RT-qPCR和Western Blot检测MACF1在此过程的表达.使用MACF siRNA抑制MACF1的表达,检测其对小鼠牙乳头细胞...     

牙乳头细胞体外培养研究

在牙齿发育形成过程中,由神经嵴细胞迁移分化而来的牙乳头细胞,作为牙胚发育过程中唯一具有分化为成牙本质细胞的间充质细胞群体,扮演着重要的调节作用,受到口腔医学研究者的高度重视。由于体内原位研究的困难性,许多学者通过体外培养的方法来弥补这一缺憾。现将有关牙乳头细胞体外培养研究的资料综述回顾如下。１　牙乳头细胞培养类型和方法文献报告的牙乳头细胞体外培养主要有两种类型,一种是单层细胞培养,一种是组织器官培养。Ｋｏｌｌａｒ［１］在１９７２年就报道成功地进行了牙乳头细胞的单层培养,但未对细胞的表型特征进行描…     

微小RNA-1895参与小鼠牙乳头细胞成牙本质向分化的研究

目的:研究微小RNA(miRNA,miR)-1895在小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化过程中的功能.方法:建立小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化的模型,检测miR-1895在此过程中的表达.使用生物信息学分析miR-1895在Klf4 mRNA中的结合位点.向细胞内转染miR-1895 inhibitor,利用Wes...     

小鼠帽状期和钟状早期磨牙牙胚差异表达基因的初探

目的筛选小鼠帽状期(E14.5)和钟状早期(E18.5)磨牙牙胚的差异表达基因。方法分离小鼠E14.5和E18.5磨牙牙胚,采用基因芯片技术检测相关的差异表达基因。结果共得到76条差异表达基因,上调基因71条,下调基因5条。结论 E18.5磨牙牙胚,调控细胞代谢、分化、极性形成酶类,调控免疫应答相关基因,转录、翻译相关基因,信号通路的信号分子、受体以及应激反应相关基因等功能的基因表达都显著上调,而细胞凋亡相关基因、氨基酸代谢激酶等的表达下调。     

新生大鼠牙乳头细胞的体外培养和矿化特征

目的：观察体外培养的新生大鼠牙乳头细胞的生物学特征。方法：体外培养出生1d大鼠磨牙牙乳头细胞，进行组织学染色，透射扫描电镜观察。结果：体外培养的新生大鼠牙乳头细胞能形成细胞克隆，第3代细胞在含2mmol／L β-甘油磷酸钠、50mg／L抗坏血酸、10^-8moL/L地塞米松的培养液中培养7～8d后可呈现复层生长，培养14～16d后细胞结节中出现矿化，茜素红染色呈阳性反应；透射电镜观察细胞内出现大量含有致密小体的基质小泡样超微结构。结论：发育阶段较早的大鼠牙乳头细胞具有增殖和矿化能力。     

牙齿发育相关基因ADAM28在人牙乳头细胞中的定位分布研究

目的探讨牙齿发育相关基因金属蛋白酶解离素28(a disintegrin and metalloproteinase28,ADAM28)在人牙乳头细胞(human dental papilla cells,HDPC)中的定位分布及作用。方法应用基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ADAM28,通过细胞培养、基因转染HDPC后,采用免疫荧光、RT-PCR及Western blot检测ADAM28在HDPC中的表达分布。结果成功构建并鉴定ADAM28真核质粒,瞬时转染HDPC72h后,HDPC的胞质和胞膜上均表达ADAM28蛋白,而两对照组均无表达。结论ADAM28在HDPC内能被正确地翻译、表达,可能作为一种胞质蛋白调控着牙源性间充质细胞的增殖和分化。     

涎腺肿瘤中Pax9基因的表达及其意义

目的:检测正常涎腺组织及涎腺肿瘤中转录因子Pax9的表达。方法:采用免疫组化SABC法,研究Pax9在正常涎腺组织、多形性腺瘤、腺淋巴瘤、基底细胞腺瘤、粘液表皮样癌和腺样囊性癌共48例中的表达情况。结果:除1例多形性腺瘤外,其余组织均表达Pax9。正常涎腺的腺泡细胞和导管内衬细胞、多形性腺瘤的上皮细胞、腺淋巴瘤的肿瘤上皮细胞和基底细胞腺瘤中Pax9弱阳性表达,差异没有显著性;而在增殖活跃的细胞如正常涎腺导管的基底细胞和恶性肿瘤细胞(粘液表皮样癌、腺样囊性癌)中表达增强,恶性肿瘤中Pax9的强阳性表达率明显增高,与正常和良性肿瘤相比具有显著差异(P<0.05)。结论:Pax9在涎腺肿瘤尤其是恶性肿瘤的发生过程中发挥重要的作用。     

促红细胞生成素对人牙髓细胞增殖和成骨分化的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的人牙髓细胞（hDPCs）增殖和成骨分化的影响。方法：体外培养鉴定人牙髓细胞。使用 EPO 对在成骨诱导培养基中培养的牙髓细胞进行刺激,CCK-8检测 EPO 对牙髓细胞增殖的影响;20 U ／ml EPO 培养 hDPCs 7 d 和14 d,采用碱性磷酸酶活性（ALP）检测和茜素红染色观察 EPO 对牙髓细胞矿化的影响;利用 Real-time PCR 检测加入 EPO 后牙髓细胞成牙本质向分化相关基因的表达情况。结果：EPO 以时间和剂量依赖性方式促进牙髓细胞的增殖;20 U ／ml 的 EPO 后作用,牙髓细胞碱性磷酸酶活性显著提高（P ＜0．05）,钙结节形成明显增多;成牙本质向分化相关基因 DSPP、OCN、OSTERIX、RUNX2的表达明显上调（P ＜0．05）。结论：EPO 能促进人牙髓细胞的增殖和分化。     

正常年轻恒牙发育过程中牙髓免疫活性细胞的动态研究

目的：研究人完全萌出但尚未发育完成的前磨牙牙髓组织中牙髓树突状细胞(pulpal dendritic cells,PDCs),T、B淋巴细胞,血管内皮细胞的变化特点,以探明年轻恒牙发育过程中牙髓局部免疫防御状态的改变。方法：按根尖孔的闭合状态分为大喇叭组,小喇叭组和闭合组,应用SP免疫组化法分别标记上述细胞,并对前两种细胞进行双标免疫组化染色。结果：（１）大喇叭组ＨＬＡ－ＤＲ^ 细胞数多于小喇叭组及闭合性。（2）3组HLA－DR^ 血管表达率相比较差异无显著性（P＞0．05）;（3）3组CD45RO^T细胞比较差异无显著性（P＞0．05）;（4）双标免疫组化染色显示,HLA－DR^＋PDCs和CD45RO^＋T细胞几乎很少接触。两者的相关性分析结果尚不能认为两者间有直线相关关系。结论：PDCs在人正常发育性牙髓组织中随年龄增加而逐渐减少,其他免疫活性细胞与此进程无明显相关。     

转录因子Nanog过表达对人牙髓细胞增殖及多向分化能力的影响

目的探讨过表达多能相关转录因子Nanog对人牙髓细胞增殖及多向分化能力的影响。 方法构建过表达Nanog的慢病毒载体质粒pSIN-EF2-Nanog-IRES-GFP-puro,采用psPAX和pMD2.G慢病毒包装系统转入293T细胞进行病毒液的生产和收取,转染生长良好的第3代人牙髓细胞,构建稳定过表达Nanog的人牙髓细胞株,以空载体转染的细胞为对照组,对细胞进行成脂及成牙本质诱导。采用BrdU法检测细胞的增殖情况,检测多能性转录因子Oct4和Sox2的表达,以及细胞成脂、成牙本质分化能力。采用单因素方差分析数据。 结果成功构建Nanog过表达的人牙髓细胞株;BrdU法检测结果显示,Nanog过表达组比对照组细胞增殖能力强（F = 90.421,P = 0.000）。过表达组Oct4、Sox2 mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组（F_{Oct4 mRNA} = 71.649,P_{Oct4 mRNA}=0.000;F_{Sox2 mRNA} = 106.278,P_{Sox2 mRNA} = 0.000;F_Oct4蛋白 = 41.632,P_Oct4蛋白 = 0.002;F_Sox2蛋白 = 38.962,P_Sox2蛋白 = 0.002）。在矿化诱导条件下,Nanog过表达组DSPP、DMP1和OCN表达量、矿化结节产生量高于对照组（F_DSPP = 15.261,P_DSPP<0.05;F_DMP1 = 16.235,P_DMP1<0.05;F_OCN = 17.019,P_OCN<0.05）;成脂诱导21 d后,Nanog过表达组LPL和PPARγ2表达量及脂质产生高于对照组（F_LPL = 15.542,P_LPL<0.05;F_PPARγ2 = 10.437,P_PPARγ2<0.05）。 结论过表达Nanog能提高人牙髓细胞增殖能力,促进多能性转录因子Oct4、Sox2的表达,增强细胞多向分化能力。     

人牙髓细胞与牙周韧带细胞多向分化能力的比较

目的 比较人牙髓细胞(dental pulp cells,DPC)和牙周韧带细胞(periodontal ligamentcells,PDLC)的多向分化能力,揭示其干细胞成分特征,为开展干细胞介导的生物牙根再生奠定实验基础.方法 酶消化法分离培养人DPC和PDLC,流式细胞术检测STRO-1的表达.诱导细胞成牙本质及成骨分化、成脂分化和成软骨分化,von Kossa染色、抗骨钙素(osteocalcin,OCN)和牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)免疫组化染色、油红O染色、阿新蓝染色、抗Ⅱ型胶原免疫组化染色以及实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等检测DPC和PDLC的多向分化.结果 DPC和PDLC体外呈克隆样生长,STRO-1阳性率分别是(16.5%±4.2%)和(11.6%±1.1%).100%的DPC和83.3%的PDLC样本可多向分化.细胞诱导分化后,OCN、牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)、过氧化物酶体激活物增生受体2(peroxisomal proliferator activated receptorgamma 2,PPARγ2)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)和Ⅱ型胶原mRNA表达上调,与诱导前相比差异均有统计学意义(P<0.001),DPC和PDLC间OCN和PPARγ2基因上调倍数的差异有统计学意义(P<0.001).结论 人DPC和PDLC的间充质干细胞比例和多向分化能力相似.